Criação e manutenção de linhagens transgênicas

Resumo

A introdução de novas ferramentas de edição de genoma, como ZFNs, TALENs e, mais recentemente, o sistema CRISPR/Cas9, expandiu as possibilidades de manipulação genética em diferentes modelos animais, incluindo o zebrafish. Ao contrário da maioria dos outros vertebrados, o zebrafish é bastante apropriado para experimentos de alto rendimento, já que eles podem produzir 200 a 300 ovos fertilizados por semana e se desenvolvem rápidamente. Esse modelo é excelente para estudos de doenças genéticas principalmente pela possibilidade de identificar genes funcionalmente importantes. Uma das principais vantagens deste modelo está relacionada ao seu genoma inteiramente sequenciado e que apresenta ao redor de 70% dos seus genes homólogos a humanos. A técnica de CRISPR/Cas9 permite a geração de knockouts com alta eficência na F0, sendo necessário em cada etapa o acompanhamento e triagem dos animais. Após a deteção de mutações na F0, esses animais serão cruzados e genotipados para gerar a progênie F1, com mutaçoes na linha germinativa. E se for necessária uma mutação homozigótica, a progênie F2 deve ser gerada, cultivada e genotipada, a fim de identificar peixes heterozigotos portadores da mesma mutação que devem ser cruzados para atingir a progênie F3. Todo processo de obtenção de linhagem transgênica leva tempo e deve ser acompanhada de perto para garantir o sucesso da técnica. Gostaríamos de utilizar a técnica de CRISPR/Cas9 em diferentes projetos individuais, para obter zebrafish com mutações em genes específicos que gerem por exemplo: animais leucêmicos, animais deficientes em proteinas relacionadas a lesão renal, modulação epigenética, etc. Pretendemos estudar o impacto dessas mutações em aspectos metabólicos e imunológicos de tais doenças.