Manutenção de cepas e linhagens de Trypanosoma cruzi, Trypanosoma brucei e Leishmania amazonensis em cultivo in vitro

Resumo

Os objetivos da presente proposta envolvem o estudo de diferentes aspectos do metabolismo dos aminoácidos em Trypanosoma cruzi e, eventualmente, em Trypanosoma brucei e Leishmania amazonensis. Para isso, estamos gerando uma relevante quantidade de linhagens knockout totais ou parciais, linhagens com mutações pontuais, superexpressoras, e com genes marcados com diferentes etiquetas (tags) mediante a técnica de CRISPR/Cas9. Além disso, estamos inserindo em T. brucei vias metabólicas completas existentes em T. cruzi e não em T. brucei, o que nos está permitindo incursionar em uma área da biologia no estado da arte: a Biologia Sintética. Estas ferramentas têm se mostrado potentes para o estudo da biologia dos parasitas e da relação entre o metabolismo e os ambientes nos quais o parasita desenvolve seu ciclo de vida. Previsivelmente, a geração destas linhagens está produzindo um aumento na complexidade das atividades relativas à caracterização genotípica, cultura e preservação de parasitas in vitro. Os estudos que requerem o manejo organizado de uma grande variedade destas linhagens, por sua vez, representam um desafio aos seus executores. Além disso, os trabalhos em grande escala de geração de mutantes que estamos desenvolvendo exigem uma gestão aprimorada, utilizando bases de dados e descritores adequados. Para garantir o bom funcionamento do projeto e das condições adequadas de preservação das linhagens obtidas durante o projeto, o envolvimento de uma equipe técnica treinada é fundamental