El potencial de los péptidos antimicrobianos (PAMs) como alternativa a las terapias convencionale... more El potencial de los péptidos antimicrobianos (PAMs) como alternativa a las terapias convencionales es bien reconocido. El conocimiento de las propiedades biológicas y biofísicas de los PAMs es, por lo tanto, clave para comprender su modo de acción. El objetivo de este trabajo fue la identificación de PAMs de la piel de la rana patagónica Pleurodema somuncurense y la caracterización de su mecanismo de acción mediante el estudio de la interacción y actividad permeabilizante con membranas modelo. Se extrajo el ARN total a partir de la piel de un ejemplar de P. somuncurense y se obtuvo el ADNc utilizando primers específicos. Los productos de PCR se purificaron, transfectaron y clonaron en células competentes. Los plásmidos resultantes se purificaron y se evaluaron los tamaños de los insertos, seleccionando 11 para ser secuenciados. Se dedujo la secuencia aminoacídica de los prepro-péptidos identificados. Mediante el análisis in-sílico se seleccionaron 8 péptidos maduros, los cuales fueronsintetizados por química F-moc y purificados por RP-HPLC. Se evaluó la actividad antimicrobiana contra cepas Escherichia coli y Staphyloccocus aureus ATCC. Actualmente se está analizando la capacidad de permeabilizar membranas de extracto lipídico total de E. coli y de lisarlas mediante el estudio de laliberación de carboxifluoresceína (CF) atrapada en el interior de liposomas unilamelares grandes (LUVs) y permeación de vesículas unilamelares gigantes (GUVs). La formación de agregados de vesículas seanalizó por dispersión dinámica de luz (DLS) y nefelometría.De los 8 péptidos estudiados, dos inhibieron el crecimiento de E. coli (CIM=600-500 µg/mL) y uno inhibió tanto el crecimiento de E.coli (CIM=250-125 µg/ml) como el de S. aureus (CIM=500-250 µg/mL). Este último fue el que produjo mayor aumento de la señal de fluorescencia de CF y el análisis de la dispersiónmostró un gran aumento de la intensidad más allá de los 250 µg/mL, comparado con los otros péptidos analizados de menor CIM. Estos resultados preliminares indicarían que no hay una correlación directa entre la ruptura de bicapas lipídicas y la actividad antimicrobiana.A partir de los análisis del comportamiento de éstos péptidos frente a sistemas modelos y del análisis de sus secuencias nos proponemos caracterizar el Mecanismo de acción de los mismos a fin de evaluar posibles modificaciones químicas que mejoren su performance.Fil: Cancelarich, Natalia Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico. Instituto Patagónico de Ciencias Sociales y Humanas; ArgentinaFil: Perez, Luis Orlando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico. Instituto Patagónico de Ciencias Sociales y Humanas; ArgentinaFil: Moreira, Carneiro Daniel. Universidade do Brasília; BrasilFil: Barbosa, Eder Alves. No especifíca;Fil: Aguilar, Silvana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico. Instituto Patagónico para el Estudio de los Ecosistemas Continentales; ArgentinaFil: Basso, Nestor Guillermo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico; ArgentinaFil: Souza A. Leite, José Roberto. Universidade do Brasília; BrasilFil: Fanani, Maria Laura. No especifíca;Fil: Wilke, Natalia. No especifíca;Fil: Marani, Mariela Mirta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico. Instituto Patagónico para el Estudio de los Ecosistemas Continentales; ArgentinaVIII Jornadas de Posgrado y II Jornadas de Ciencia y TecnologíaCórdobaArgentinaUniversidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias QuímicasSecretaria de Ciencia y Tecnologí
The nanoscience is the discipline that explains the behavior of systems at nanoscopicscale. The l... more The nanoscience is the discipline that explains the behavior of systems at nanoscopicscale. The liposomes were one of the first nanostructures developed which were rapidlyapplied in different areas. These systems are structures formed by self-closingphospholipid bilayers in aqueous solutions. The strategies used for their developmenthave leaded them to reach a place of preponderance in drug delivery systems design.For analyzing the properties of liposomes, physicochemical concepts such as thoseused to describe liquid crystals, must be used. Owing to their amphiphilic nature, thephospholipids form aggregates giving an auspicious framework for the interaction withhydrophilic and lipophilic substances. These properties encouraged the emergence ofinnumerable modifications and thus, different types of liposomes have already beenreported since seventies to present. The main strategies have been focused on increasingtheir time of permanence in blood circulation and on decreasing their removal by the cellsof the mononuclear phagocyte system (MPS) in liver and spleen. For reaching this aimtheir size was reduced and their membrane fluidity was modified using cholesterol and sphingomyelins. However, one of the most successful strategies was the development ofPEGylated liposomes which have been named ?stealth liposomes.?Therefore, this book chapter is addressed to a comprehensive revision of thebibliography regarding to the emergence of liposomes and the first steps in their design,the type of systems (components and structures), their classification and properties.Their experimental physicochemical stability and also theoretical, using DLVOtheory, was analyzed. Furthermore, this text reviews some of the desired properties ofliposomes: the loading and the release of drugs, and their relationship with cells whichcan be mediated or not by receptors among other properties.The lipids, sterols, drugs or other different types of molecules which are able tointeract with the liposome membranes can be studied by biophysics techniques becausethey modify the self-organization at the air-water interface and the states of thesesystems. Therefore, this point is discussed in a separate section of this chapter.Finally, some approaches about the use of liposomes in the biomedicine field andapproved commercial formulations are revised. Additionally, some proposed perspectivesbased on their capability to carry molecules, such as silencing RNA (siRNA), which is astrategy used in pharmacoepigenetics therapy, are shown.Fil: Benedini, Luciano Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Química del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Química. Instituto de Química del Sur; ArgentinaFil: Andrés, Nancy Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Química del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Química. Instituto de Química del Sur; ArgentinaFil: Fanani, Maria Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentin
Hypothesis Amphotericin B (AmB) is a highly effective antimicrobial, with broad antimycotic and a... more Hypothesis Amphotericin B (AmB) is a highly effective antimicrobial, with broad antimycotic and antiparasitic effect. However, AmB poor water-solubilisation and aggregation tendency limits its use for topical applications. We studied the capacity of nanostructures formed by alkyl esters of L-ascorbic acid (ASCn) to solubilise AmB and tested the relationship between the prevalence of the monomeric form of AmB and its effectiveness as antimicrobial agent. Experiments We developed self-assembled nanostructures formed by the commercial compound, palmitoyl ascorbic acid, as well as the shorter chained myristoyl and lauroyl ascorbic acid. AmB loaded ASCn nanostructures were studied by a combination of spectroscopic techniques, together with particle analysis, differential scanning calorimetry, microbiological tests, and Langmuir monolayer visualisation. Findings We found no direct relation between the antimicrobial capacity and the prevalence of the monomeric form of the drug. However, the later was related to chemical stability and colloidal robustness. Nanostructures formed by ASC16 in its anionic state provide an appropriate environment for AmB in its monomeric form, maintaining its antimicrobial capacity. Langmuir film visualisation supports spectrophotometric evidence, indicating that ASC16 allows the in-plane solubilisation of AmB. Coagels formed by ASC16 appear as promising for carrying AmB for dermal delivery.
In this revision work, we emphasize the close relationship between the action of phospholipases a... more In this revision work, we emphasize the close relationship between the action of phospholipases and the modulation of membrane curvature and curvature stress resulting from this activity. The alteration of the tridimensional structure of membranes upon the action of phospholipases is analyzed based on studies on model lipid membranes. The transient unbalance of both compositional and physical membrane properties between the hemilayers upon phospholipase activity lead to curvature tension and the catalysis of several membrane-related processes. Several proteins’ membrane-bound and soluble forms are susceptible to regulation by the curvature stress induced by phospholipase action, which has important consequences in cell signaling. Additionally, the modulation of membrane fusion by phospholipase products regulates membrane dynamics in several cellular scenarios. We commented on vesicle fusion in the Golgi-endoplasmic system, synaptic vesicle fusion to the plasma membrane, viral membra...
Demixing of components has long been described in model membranes. It is a consequence of non-ide... more Demixing of components has long been described in model membranes. It is a consequence of non-ideal lateral interactions between membrane components, and it causes the presence of segregated phases, forming patches (domains) of different properties, thus introducing heterogeneity into the membrane. In the present review we first describe the processes through which domains are generated, how they grow, and why they are rounded, striped or fractal-like, as well as why they get distributed forming defined patterns. Next, we focus on the effect of an additive on a lipid mixture, which usually induces shifts in demixing points, thus stabilizing or destabilizing the phase-segregated state. Results found for different model membranes are summarized, detailing the ways in which phase segregation and the generated patterns may be modulated. We focus on which are, from our viewpoint, the most relevant regulating factors affecting the surface texture observed in model membranes. This article ...
VIII Jornadas de Posgrado y II Jornadas de Ciencia y Tecnología, 2018
El potencial de los péptidos antimicrobianos (PAMs) como alternativa a las terapias convencionale... more El potencial de los péptidos antimicrobianos (PAMs) como alternativa a las terapias convencionales es bien reconocido. El conocimiento de las propiedades biológicas y biofísicas de los PAMs es, por lo tanto, clave para comprender su modo de acción. El objetivo de este trabajo fue la identificación de PAMs de la piel de la rana patagónica Pleurodema somuncurense y la caracterización de su mecanismo de acción mediante el estudio de la interacción y actividad permeabilizante con membranas modelo. Se extrajo el ARN total a partir de la piel de un ejemplar de P. somuncurense y se obtuvo el ADNc utilizando primers específicos. Los productos de PCR se purificaron, transfectaron y clonaron en células competentes. Los plásmidos resultantes se purificaron y se evaluaron los tamaños de los insertos, seleccionando 11 para ser secuenciados. Se dedujo la secuencia aminoacídica de los prepro-péptidos identificados. Mediante el análisis in-sílico se seleccionaron 8 péptidos maduros, los cuales fueronsintetizados por química F-moc y purificados por RP-HPLC. Se evaluó la actividad antimicrobiana contra cepas Escherichia coli y Staphyloccocus aureus ATCC. Actualmente se está analizando la capacidad de permeabilizar membranas de extracto lipídico total de E. coli y de lisarlas mediante el estudio de laliberación de carboxifluoresceína (CF) atrapada en el interior de liposomas unilamelares grandes (LUVs) y permeación de vesículas unilamelares gigantes (GUVs). La formación de agregados de vesículas seanalizó por dispersión dinámica de luz (DLS) y nefelometría.De los 8 péptidos estudiados, dos inhibieron el crecimiento de E. coli (CIM=600-500 µg/mL) y uno inhibió tanto el crecimiento de E.coli (CIM=250-125 µg/ml) como el de S. aureus (CIM=500-250 µg/mL). Este último fue el que produjo mayor aumento de la señal de fluorescencia de CF y el análisis de la dispersiónmostró un gran aumento de la intensidad más allá de los 250 µg/mL, comparado con los otros péptidos analizados de menor CIM. Estos resultados preliminares indicarían que no hay una correlación directa entre la ruptura de bicapas lipídicas y la actividad antimicrobiana.A partir de los análisis del comportamiento de éstos péptidos frente a sistemas modelos y del análisis de sus secuencias nos proponemos caracterizar el Mecanismo de acción de los mismos a fin de evaluar posibles modificaciones químicas que mejoren su performance.Fil: Cancelarich, Natalia Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico. Instituto Patagónico de Ciencias Sociales y Humanas; ArgentinaFil: Perez, Luis Orlando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico. Instituto Patagónico de Ciencias Sociales y Humanas; ArgentinaFil: Moreira, Carneiro Daniel. Universidade do Brasília; BrasilFil: Barbosa, Eder Alves. No especifíca;Fil: Aguilar, Silvana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico. Instituto Patagónico para el Estudio de los Ecosistemas Continentales; ArgentinaFil: Basso, Nestor Guillermo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico; ArgentinaFil: Souza A. Leite, José Roberto. Universidade do Brasília; BrasilFil: Fanani, Maria Laura. No especifíca;Fil: Wilke, Natalia. No especifíca;Fil: Marani, Mariela Mirta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico. Instituto Patagónico para el Estudio de los Ecosistemas Continentales; ArgentinaVIII Jornadas de Posgrado y II Jornadas de Ciencia y TecnologíaCórdobaArgentinaUniversidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias QuímicasSecretaria de Ciencia y Tecnologí
Nanotechnology is a very promising technological tool to combat health problems associated with t... more Nanotechnology is a very promising technological tool to combat health problems associated with the loss of effectiveness of currently used antibiotics. Previously, we developed a formulation consisting of a chitosan and tween 80-decorated alginate nanocarrier that encapsulates rifampicin and the antioxidant ascorbic acid (RIF/ASC), intended for the treatment of respiratory intracellular infections. Here, we investigated the effects of RIF/ASC-loaded NPs on the respiratory mucus and the pulmonary surfactant. In addition, we evaluated their cytotoxicity for lung cells in vitro, and their biodistribution on rat lungs in vivo after their intratracheal administration. Findings herein demonstrated that RIF/ASC-loaded NPs display a favorable lung biocompatibility profile and a uniform distribution throughout lung lobules. RIF/ASC-loaded NPs were mainly uptaken by lung macrophages, their primary target. In summary, findings show that our novel designed RIF/ASC NPs could be a suitable system for antibiotic lung administration with promising perspectives for the treatment of pulmonary intracellular infections.
El potencial de los péptidos antimicrobianos (PAMs) como alternativa a las terapias convencionale... more El potencial de los péptidos antimicrobianos (PAMs) como alternativa a las terapias convencionales es bien reconocido. El conocimiento de las propiedades biológicas y biofísicas de los PAMs es, por lo tanto, clave para comprender su modo de acción. El objetivo de este trabajo fue la identificación de PAMs de la piel de la rana patagónica Pleurodema somuncurense y la caracterización de su mecanismo de acción mediante el estudio de la interacción y actividad permeabilizante con membranas modelo. Se extrajo el ARN total a partir de la piel de un ejemplar de P. somuncurense y se obtuvo el ADNc utilizando primers específicos. Los productos de PCR se purificaron, transfectaron y clonaron en células competentes. Los plásmidos resultantes se purificaron y se evaluaron los tamaños de los insertos, seleccionando 11 para ser secuenciados. Se dedujo la secuencia aminoacídica de los prepro-péptidos identificados. Mediante el análisis in-sílico se seleccionaron 8 péptidos maduros, los cuales fueronsintetizados por química F-moc y purificados por RP-HPLC. Se evaluó la actividad antimicrobiana contra cepas Escherichia coli y Staphyloccocus aureus ATCC. Actualmente se está analizando la capacidad de permeabilizar membranas de extracto lipídico total de E. coli y de lisarlas mediante el estudio de laliberación de carboxifluoresceína (CF) atrapada en el interior de liposomas unilamelares grandes (LUVs) y permeación de vesículas unilamelares gigantes (GUVs). La formación de agregados de vesículas seanalizó por dispersión dinámica de luz (DLS) y nefelometría.De los 8 péptidos estudiados, dos inhibieron el crecimiento de E. coli (CIM=600-500 µg/mL) y uno inhibió tanto el crecimiento de E.coli (CIM=250-125 µg/ml) como el de S. aureus (CIM=500-250 µg/mL). Este último fue el que produjo mayor aumento de la señal de fluorescencia de CF y el análisis de la dispersiónmostró un gran aumento de la intensidad más allá de los 250 µg/mL, comparado con los otros péptidos analizados de menor CIM. Estos resultados preliminares indicarían que no hay una correlación directa entre la ruptura de bicapas lipídicas y la actividad antimicrobiana.A partir de los análisis del comportamiento de éstos péptidos frente a sistemas modelos y del análisis de sus secuencias nos proponemos caracterizar el Mecanismo de acción de los mismos a fin de evaluar posibles modificaciones químicas que mejoren su performance.Fil: Cancelarich, Natalia Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico. Instituto Patagónico de Ciencias Sociales y Humanas; ArgentinaFil: Perez, Luis Orlando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico. Instituto Patagónico de Ciencias Sociales y Humanas; ArgentinaFil: Moreira, Carneiro Daniel. Universidade do Brasília; BrasilFil: Barbosa, Eder Alves. No especifíca;Fil: Aguilar, Silvana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico. Instituto Patagónico para el Estudio de los Ecosistemas Continentales; ArgentinaFil: Basso, Nestor Guillermo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico; ArgentinaFil: Souza A. Leite, José Roberto. Universidade do Brasília; BrasilFil: Fanani, Maria Laura. No especifíca;Fil: Wilke, Natalia. No especifíca;Fil: Marani, Mariela Mirta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico. Instituto Patagónico para el Estudio de los Ecosistemas Continentales; ArgentinaVIII Jornadas de Posgrado y II Jornadas de Ciencia y TecnologíaCórdobaArgentinaUniversidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias QuímicasSecretaria de Ciencia y Tecnologí
The nanoscience is the discipline that explains the behavior of systems at nanoscopicscale. The l... more The nanoscience is the discipline that explains the behavior of systems at nanoscopicscale. The liposomes were one of the first nanostructures developed which were rapidlyapplied in different areas. These systems are structures formed by self-closingphospholipid bilayers in aqueous solutions. The strategies used for their developmenthave leaded them to reach a place of preponderance in drug delivery systems design.For analyzing the properties of liposomes, physicochemical concepts such as thoseused to describe liquid crystals, must be used. Owing to their amphiphilic nature, thephospholipids form aggregates giving an auspicious framework for the interaction withhydrophilic and lipophilic substances. These properties encouraged the emergence ofinnumerable modifications and thus, different types of liposomes have already beenreported since seventies to present. The main strategies have been focused on increasingtheir time of permanence in blood circulation and on decreasing their removal by the cellsof the mononuclear phagocyte system (MPS) in liver and spleen. For reaching this aimtheir size was reduced and their membrane fluidity was modified using cholesterol and sphingomyelins. However, one of the most successful strategies was the development ofPEGylated liposomes which have been named ?stealth liposomes.?Therefore, this book chapter is addressed to a comprehensive revision of thebibliography regarding to the emergence of liposomes and the first steps in their design,the type of systems (components and structures), their classification and properties.Their experimental physicochemical stability and also theoretical, using DLVOtheory, was analyzed. Furthermore, this text reviews some of the desired properties ofliposomes: the loading and the release of drugs, and their relationship with cells whichcan be mediated or not by receptors among other properties.The lipids, sterols, drugs or other different types of molecules which are able tointeract with the liposome membranes can be studied by biophysics techniques becausethey modify the self-organization at the air-water interface and the states of thesesystems. Therefore, this point is discussed in a separate section of this chapter.Finally, some approaches about the use of liposomes in the biomedicine field andapproved commercial formulations are revised. Additionally, some proposed perspectivesbased on their capability to carry molecules, such as silencing RNA (siRNA), which is astrategy used in pharmacoepigenetics therapy, are shown.Fil: Benedini, Luciano Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Química del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Química. Instituto de Química del Sur; ArgentinaFil: Andrés, Nancy Carolina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Bahía Blanca. Instituto de Química del Sur. Universidad Nacional del Sur. Departamento de Química. Instituto de Química del Sur; ArgentinaFil: Fanani, Maria Laura. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Córdoba. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba. Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Químicas. Centro de Investigaciones en Química Biológica de Córdoba; Argentin
Hypothesis Amphotericin B (AmB) is a highly effective antimicrobial, with broad antimycotic and a... more Hypothesis Amphotericin B (AmB) is a highly effective antimicrobial, with broad antimycotic and antiparasitic effect. However, AmB poor water-solubilisation and aggregation tendency limits its use for topical applications. We studied the capacity of nanostructures formed by alkyl esters of L-ascorbic acid (ASCn) to solubilise AmB and tested the relationship between the prevalence of the monomeric form of AmB and its effectiveness as antimicrobial agent. Experiments We developed self-assembled nanostructures formed by the commercial compound, palmitoyl ascorbic acid, as well as the shorter chained myristoyl and lauroyl ascorbic acid. AmB loaded ASCn nanostructures were studied by a combination of spectroscopic techniques, together with particle analysis, differential scanning calorimetry, microbiological tests, and Langmuir monolayer visualisation. Findings We found no direct relation between the antimicrobial capacity and the prevalence of the monomeric form of the drug. However, the later was related to chemical stability and colloidal robustness. Nanostructures formed by ASC16 in its anionic state provide an appropriate environment for AmB in its monomeric form, maintaining its antimicrobial capacity. Langmuir film visualisation supports spectrophotometric evidence, indicating that ASC16 allows the in-plane solubilisation of AmB. Coagels formed by ASC16 appear as promising for carrying AmB for dermal delivery.
In this revision work, we emphasize the close relationship between the action of phospholipases a... more In this revision work, we emphasize the close relationship between the action of phospholipases and the modulation of membrane curvature and curvature stress resulting from this activity. The alteration of the tridimensional structure of membranes upon the action of phospholipases is analyzed based on studies on model lipid membranes. The transient unbalance of both compositional and physical membrane properties between the hemilayers upon phospholipase activity lead to curvature tension and the catalysis of several membrane-related processes. Several proteins’ membrane-bound and soluble forms are susceptible to regulation by the curvature stress induced by phospholipase action, which has important consequences in cell signaling. Additionally, the modulation of membrane fusion by phospholipase products regulates membrane dynamics in several cellular scenarios. We commented on vesicle fusion in the Golgi-endoplasmic system, synaptic vesicle fusion to the plasma membrane, viral membra...
Demixing of components has long been described in model membranes. It is a consequence of non-ide... more Demixing of components has long been described in model membranes. It is a consequence of non-ideal lateral interactions between membrane components, and it causes the presence of segregated phases, forming patches (domains) of different properties, thus introducing heterogeneity into the membrane. In the present review we first describe the processes through which domains are generated, how they grow, and why they are rounded, striped or fractal-like, as well as why they get distributed forming defined patterns. Next, we focus on the effect of an additive on a lipid mixture, which usually induces shifts in demixing points, thus stabilizing or destabilizing the phase-segregated state. Results found for different model membranes are summarized, detailing the ways in which phase segregation and the generated patterns may be modulated. We focus on which are, from our viewpoint, the most relevant regulating factors affecting the surface texture observed in model membranes. This article ...
VIII Jornadas de Posgrado y II Jornadas de Ciencia y Tecnología, 2018
El potencial de los péptidos antimicrobianos (PAMs) como alternativa a las terapias convencionale... more El potencial de los péptidos antimicrobianos (PAMs) como alternativa a las terapias convencionales es bien reconocido. El conocimiento de las propiedades biológicas y biofísicas de los PAMs es, por lo tanto, clave para comprender su modo de acción. El objetivo de este trabajo fue la identificación de PAMs de la piel de la rana patagónica Pleurodema somuncurense y la caracterización de su mecanismo de acción mediante el estudio de la interacción y actividad permeabilizante con membranas modelo. Se extrajo el ARN total a partir de la piel de un ejemplar de P. somuncurense y se obtuvo el ADNc utilizando primers específicos. Los productos de PCR se purificaron, transfectaron y clonaron en células competentes. Los plásmidos resultantes se purificaron y se evaluaron los tamaños de los insertos, seleccionando 11 para ser secuenciados. Se dedujo la secuencia aminoacídica de los prepro-péptidos identificados. Mediante el análisis in-sílico se seleccionaron 8 péptidos maduros, los cuales fueronsintetizados por química F-moc y purificados por RP-HPLC. Se evaluó la actividad antimicrobiana contra cepas Escherichia coli y Staphyloccocus aureus ATCC. Actualmente se está analizando la capacidad de permeabilizar membranas de extracto lipídico total de E. coli y de lisarlas mediante el estudio de laliberación de carboxifluoresceína (CF) atrapada en el interior de liposomas unilamelares grandes (LUVs) y permeación de vesículas unilamelares gigantes (GUVs). La formación de agregados de vesículas seanalizó por dispersión dinámica de luz (DLS) y nefelometría.De los 8 péptidos estudiados, dos inhibieron el crecimiento de E. coli (CIM=600-500 µg/mL) y uno inhibió tanto el crecimiento de E.coli (CIM=250-125 µg/ml) como el de S. aureus (CIM=500-250 µg/mL). Este último fue el que produjo mayor aumento de la señal de fluorescencia de CF y el análisis de la dispersiónmostró un gran aumento de la intensidad más allá de los 250 µg/mL, comparado con los otros péptidos analizados de menor CIM. Estos resultados preliminares indicarían que no hay una correlación directa entre la ruptura de bicapas lipídicas y la actividad antimicrobiana.A partir de los análisis del comportamiento de éstos péptidos frente a sistemas modelos y del análisis de sus secuencias nos proponemos caracterizar el Mecanismo de acción de los mismos a fin de evaluar posibles modificaciones químicas que mejoren su performance.Fil: Cancelarich, Natalia Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico. Instituto Patagónico de Ciencias Sociales y Humanas; ArgentinaFil: Perez, Luis Orlando. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico. Instituto Patagónico de Ciencias Sociales y Humanas; ArgentinaFil: Moreira, Carneiro Daniel. Universidade do Brasília; BrasilFil: Barbosa, Eder Alves. No especifíca;Fil: Aguilar, Silvana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico. Instituto Patagónico para el Estudio de los Ecosistemas Continentales; ArgentinaFil: Basso, Nestor Guillermo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico; ArgentinaFil: Souza A. Leite, José Roberto. Universidade do Brasília; BrasilFil: Fanani, Maria Laura. No especifíca;Fil: Wilke, Natalia. No especifíca;Fil: Marani, Mariela Mirta. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Centro Nacional Patagónico. Instituto Patagónico para el Estudio de los Ecosistemas Continentales; ArgentinaVIII Jornadas de Posgrado y II Jornadas de Ciencia y TecnologíaCórdobaArgentinaUniversidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias QuímicasSecretaria de Ciencia y Tecnologí
Nanotechnology is a very promising technological tool to combat health problems associated with t... more Nanotechnology is a very promising technological tool to combat health problems associated with the loss of effectiveness of currently used antibiotics. Previously, we developed a formulation consisting of a chitosan and tween 80-decorated alginate nanocarrier that encapsulates rifampicin and the antioxidant ascorbic acid (RIF/ASC), intended for the treatment of respiratory intracellular infections. Here, we investigated the effects of RIF/ASC-loaded NPs on the respiratory mucus and the pulmonary surfactant. In addition, we evaluated their cytotoxicity for lung cells in vitro, and their biodistribution on rat lungs in vivo after their intratracheal administration. Findings herein demonstrated that RIF/ASC-loaded NPs display a favorable lung biocompatibility profile and a uniform distribution throughout lung lobules. RIF/ASC-loaded NPs were mainly uptaken by lung macrophages, their primary target. In summary, findings show that our novel designed RIF/ASC NPs could be a suitable system for antibiotic lung administration with promising perspectives for the treatment of pulmonary intracellular infections.
Uploads
Papers by Maria Laura Fanani