UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

Facultad de Ciencias Biolgicas Departamento de Microbiologa y Parasitologa

Efecto patognico de larvas de Anisakis en Mesocricetus auratus hamster

Br. KELLYN MYLUSKA GOMEZ CASTRO

Informe de Trabajo de investigacin para obtener el ttulo de: BILOGO MICROBILOGO

TRUJILLO PER 2008

DEDICATORIA

A Dios, por ser fuente de inspiracin en m vida. A mis padres: Dante y Betty con amor y eterna gratitud por su invalorable entrega y dedicacin en mi formacin.

A mis hermanas: Liam y Sujey Por su apoyo, confianza, f y optimismo en la realizacin de mis ideales.

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

Dr. VICTOR CARLOS SABANA GAMARRA Rector

Dr. JUAN MURO MOREY Vice-Rector Acadmico

Dr. FELIX CASTILLO VIERA Profesor Secretario General

Ms.C MANUEL RODRIGUEZ LACHERRE Jefe de la Oficina de Registro Tcnico

ii

AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

Dr. JOSE MOSTACERO LEON Decano de la Facultad de Ciencias Biolgicas

Dr. FREDY MEJIA COICO Secretario de la Facultad

Ms.C. MARCO SALAZAR CASTILLO Director de la Escuela Acadmica Profesional de Microbiologa y Parasitologa

Ms.C. BERTHA SORIANO BERNILLA Jefe del Departamento de Microbiologa y Parasitologa

iii

PRESENTACIN

Seores Miembros del Jurado Examinador:

En cumplimiento con las disposiciones reglamentarias vigentes de la Escuela Acadmico Profesional de Microbiologa y Parasitologa de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra consideracin y criterio el presente informe de Trabajo de investigacin titulado: Efecto patognico de
larvas de Anisakis en Mesocricetus auratus hamster, realizado en el Laboratorio de

Parasitologa de la Escuela de Microbiologa y Parasitologa de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad de Nacional de Trujillo, con lo cual cumplo con uno de los requisitos indispensables para obtener el Ttulo Profesional de BilogoMicrobilogo.

Trujillo, Septiembre del 2008.

___________________________ Br. Kellyn Myluska Gmez Castro

iv

MIEMBROS DEL JURADO

______________________________ Dr. Hermes Mario Escalante Aorga PRESIDENTE

______________________________ Ms. C. Csar Agusto Jara Campos SECRETARIO

______________________________ Dra. Judith Roldan Rodrguez VOCAL

INDICE
Pag. Dedicatoria....i Autoridades de la Universidad Nacional Trujillo..ii Autoridades de la Facultad de Ciencias Biologicas..iii Presentacin...iv Miembros del Jurado.v Resumen
Introduccin.... Material y Mtodo....... Resultados ...... Discusin........................ Conclusiones... Referencia Bibliogrficas............... Anexos

RESUMEN
Se determin el efecto patognico producido por larvas de Anisakis en 8 ejemplares de Mesocricetus auratus hmster, infectados experimentalmente. Se

obtuvieron 104 larvas de Anisakis de 748 vsceras de Trachurus picturatus murphyi

por va oral a Mesocricetus auratus. Posteriormente los animales infectados fueron muertos con sobredosis de Halatal (1 ml), siendo necropsiados a las 12, 24, 48 y 96 horas despus de la inoculacin. Para evaluar los efectos patolgicos en vsceras y en tejidos lesionados de los animales de experimentacin, fueron fijados en formol al 10%, para preparar los cortes histopatolgicos se colorearon con hematoxilina-eosina. Se encontr que el 15% de las larvas administradas se enquistan en los tejidos a nivel de estomago e intestino del Mesocricetus auratus, a las 48 y 96 horas respectivamente, causndoles hemorragias, e infiltracin inflamatoria leves y severas. El estudio histopatolgico en Mesocricetus auratus hmster, permiti evidenciar que las lesiones ocasionadas a nivel de estomago e intestino delgado, fueron producidas por larvas de Anisakis, como se verifico en la identificacin y caracterizacin morfolgica de la larva.

Palabras Claves: Anisakis, Mesocricetus auratus

INTRODUCCION
Los peces constituyen parte del alimento del hombre en todo el mundo, siendo indispensable en su dieta debido a su alto valor nutritivo, debido a que es fcilmente digerible y es un buen proveedor de protenas, minerales y vitaminas en sus diferentes formas de preparacin(Narro,2001); sin embargo, se ha sealado que muchas especies de peces estn parasitadas, sirviendo de huspedes definitivos o intermediarios de una serie de protozoos, helmintos, o artrpodos que producen alteraciones negativas en la textura y presentacin, pudiendo disminuir su productividad y comercializacin debido a estos problemas(Narro, 2001). El conocimiento de aspectos patolgicos de helmintos presentes en especies marinas de inters comercial de consumo directo que afectan la salud humana es importante para determinar la magnitud de la infeccin y proponer medidas de control. Entre estos patgenos estn las larvas de nemtodes Anisakis simplex, Anisakis physeteris y Pseudoterranova decipiens que ocasionan una zoonosis parasitaria denominada anisakidosis.(Cabrera et al, 2002) La presencia de formas parasitarias est influida por muchos factores que puede ir desde el tamao del pez (al ser estos parsitos acumulativos, a mayor tamao del pez, existe mayor probabilidad de encontrar larvas de parsitos), hasta cambios en la ecologa marina como temperatura, luz, disminucin de huspedes intermediarios, hbitat, etc. (Prez, I. 1999). Se encontraron larvas de Anisakis en vsceras de Trachurus picturatus murphyi jurel de quien se sabe que es pez de vida pelgica, viven en aguas libres, mar adentro y se alimenta de peces pequeos, lo cual explicara la presencia de formas larvarias.(Ibelice,1999) En el ciclo biolgico de estos parsitos, los hospedadores definitivos son mamferos marinos (ballenas, delfines y lobos marinos) que eliminan los huevos de los nemtodes con sus heces en el mar. El primer hospedero intermediario es un coppodo o un crustceo eufusido, el segundo es un pez planctfago. El parsito completa el ciclo cuando llega al estmago del hospedero definitivo. El hombre se infecta accidentalmente al ingerir un plato crudo como el sushi, sashimi y cebiche contaminado con la larva 3 sta se

localiza en la superficie visceral o se enquista en la musculatura de un pez carnvoro (hospedero paratnico) que se parasita al ingerir a un pez planctfago infectado (Ishikura H,1992). En el hombre el parsito, no logra desarrollar hasta la forma adulta y solo muda hasta el estadio L4. La parasitacin del hombre por la larva viva se conoce como anisakiasis, dando lugar a sintomatologa digestiva principalmente, describindose tambin casos raros de invasin de otros rganos como pulmn, hgado, bazo, pncreas, etc. Tambin han sido descritos cuadros de alergia a Anisakis simplex IgE mediadas: reacciones por antgenos termoestables del parsito que se desarrollan a pesar de que el pescado se consuma cocinado o congelado y una parasitacin aguda digestiva con sntomas alrgicos llamada anisakiasis gastro-alrgica. Los cambios patolgicos generados en el tracto gastrointestinal humano durante la infestacin con este parsito son el resultado combinado de: La accin traumtica directa causada por la larva durante la invasin tisular y la interaccin compleja entre el sistema inmunitario del hospedador y el conjunto de sustancias liberadas o contenidas en el parsito.(Laffon et al,2000) El diagnstico en la fase aguda se realiza por endoscopia y el tratamiento consiste en retirar la larva con una pinza; el diagnstico en la etapa crnica se lleva a cabo por medio de una biopsia para buscar restos de la larva o por serologa y el tratamiento mediante la reseccin de la lesin (Ishikura H,1992). En la forma gastro-alrgica, el diagnstico se basa en determinar la historia de haber padecido el cuadro despus de la ingesta del pescado, presentar prueba cutnea positiva, detectar anticuerpos especficos (IgE) contra A. simplex mediante prick test y ausencia de reaccin a las protenas del pescado (Audicana Mt,2002). En la costa peruana, el primer estudio experimental de patogenicidad fue la demostracin de la invasin gstrica de Felis silvestris forma catus (gato) por larvas de A. simplex aisladas de peces de la costa norte. En la mucosa gstrica de dos felinos se observaron necrosis del epitelio glandular y reaccin inflamatoria constituida principalmente por polimorfonucleares, neutrfilos e histiocitos (Escalante y Murga,1987). Posteriormente se demostr, por primera vez en el neotrpico, la patogenicidad de las

larvas L3 de A. physeteris en Canis familiaris (perro), las larvas fueron aisladas de Scomber japonicus (caballa) procedentes de las costas de Ica (costa central); las lesiones fueron compatibles con anisakidosis gstrica aguda humana (Cabrera,1997). Tambin se ha estudiado la invasin del estmago y pncreas de Mesocricetus auratus (hamster) por larvas L3 de Anisakis sp., recuperadas de (jurel), (caballa) y (merluza); del mismo modo, se demostraron lesiones en el estmago, intestino, mesenterio y vejiga urinaria en C. familiaris (perro) (Narro,2001), pero los autores tampoco han identificado las larvas; por ello, existe la posibilidad de haber inoculado simultneamente A. simplex y A. physeteris. El perro y el gato podran ser buenos modelos biolgicos debido a la posibilidad de que se encuentren infectados naturalmente en la costa peruana; En el Per, la importancia de Anisakis y su efecto patognico es escasamente conocida, es por ello que el presente trabajo esta orientado a comprobar el efecto patognico de larvas de Anisakis en Mesocricetus auratus hmster infectados experimentalmente.

II.

MATERIAL Y METODO

A. MATERIALES 1. MATERIAL BIOLGICO Seis especimenes de Mesocricetus auratus hmster, adquiridos en el mercado Mayorista de la ciudad Trujillo, del departamento de La Libertad. 104 larvas de tipo de Anisakis, obtenidas de las vsceras de 748 ejemplares de Trachurus picturatus murphyi jurel.

REACTIVOS

Solucin Fisiolgica al 0.9% Halatal (50ml) Formol 10%

B. METODO 1. OBTENCION Y SELECCIN DEL MATERIAL BIOLOGICO 1.1 DE LA ESPECIE ANIMAL Para el estudio realizado los especmenes de Mesocricetus auratus hmster fueron adquiridos del mercado Mayorista de la ciudad Trujillo, del departamento de La Libertad, para lo cual se tuvo en consideracin los siguientes criterios:

Mesocricetus auratus : Especimenes machos adultos jvenes, aparentemente sanos. Alimentacin controlada, para evitar posibles infecciones naturales.

1.2 OBTENCION DE LARVAS DE Anisakis 1.2.1 Obtencin de las vsceras de los peces. Las vsceras fueron obtenidas de Trachurus picturatus murphyi jurel grande y mediano. Los peces procedieron de la zona sur del ocano pacifico (Chile) y fueron adquiridos en el Mercado

Mayorista de Trujillo durante los meses de agosto y septiembre del 2008.(Anexo 1)

2. TRATAMIENTO DE LA MUESTRA 2.1 DE LA ESPECIE ANIMAL Una vez obtenidos los animales de experimentacin, se trasladaron al Laboratorio de Parasitologa de la Universidad Nacional de Trujillo, los cuales fueron seleccionados aleatoriamente en dos grupos, respectivamente:

Mesocricetus auratus : Grupo Problema: 4 mamferos de experimentacin. Grupo Testigo: 2 mamferos de experimentacin.

Los grupos de experimentacin se mantuvieron en jaulas separadas durante el proceso de investigacin, donde recibieron alimentacin balanceada .

2.2 DE LAS LARVAS DE Anisakis 2.2.1 Transporte Una vez recolectadas las vsceras de Trachurus picturatus murphyi jurel (Fig.N14), fueron colocadas en bolsas plsticas apropiadas para la recoleccin las cuales fueron rotuladas, y transportadas inmediatamente en una caja de tecnoport al laboratorio de Parasitologa de la Universidad Nacional de Trujillo para los respectivos anlisis.

1.2.2

Deteccin y recoleccin de las larvas Las vsceras de los peces fueron analizadas individualmente observndolo directamente o con la ayuda de una lupa el peritoneo, cavidad abdominal y la superficie de las vsceras .Las larvas

ubicadas (Fig.N 15) fueron extradas con la ayuda de pinzas evitando lesionarlas. Las larvas fueron seleccionadas bajo los siguientes criterios: Larvas enquistadas en los tejitos del husped Morfologa larvaria

1.2.3

Mantenimiento de las larvas Las larvas de Anisakis sp. encontradas en las vsceras de Trachurus
picturatus murphyi jurel fueron puestas en placas Petri con solucin

salina fisiolgica (S.S.F.) al 0.9%, para su mantenimiento en refrigeracin por espacio de un da(Fig.N16). En su mayora presentaron una cubierta fibrosa. 1.2.4 Identificacin de las larvas Parte de las larvas recolectadas fueron fijadas con formol-actico al 10% y aclaradas con lactofenol de Langeron (Fig.N20), e identificadas de acuerdo a sus caractersticas morfolgicas las

cuales fueron comparadas con las informaciones otorgadas por Narro,H. (2001) y Cabrera y col. (1994).

2.3 Inoculacin de larvas experimentalmente

Los especimenes del grupo problema en Mesocricetus auratus

se les

administro 10 larvas de Anisakis sp. (Fig.N18). Para recuperar las larvas inoculadas, los animales fueron anestesiados con una sobredosis de 1ml de halatal inoculado por va intraperitoneal, luego los Mesocricetus auratus y Felis catus fueron necropsiados a las 12, 24, 48 y 96. horas,

respectivamente.

2.4 Determinacin del efecto patognico Luego de sacrificados los animales de experimentacin, para la

determinacin de la migracin y del efecto patognico de las larvas de Anisakis sp. , se examino macroscpicamente la cavidad interna del tubo digestivo, el peritoneo visceral y parietal y la superficie de las vsceras, de cada animal, tratando de localizar las posibles lesiones y verificando la presencia de hipertrofia, hemorragias, o la presencia de larvas, los rganos ms afectados fueron separados y depositados en frascos con formol al 10% , para su posterior estudio anatomopatolgico.

2.5 Determinaciones histopatolgicas Para el estudio microscpico, cada pieza (yeyuno, estomago) extradas quirrgicamente fue sometida a deshidratacin en alcoholes, embebidos e incluidos en parafina, para realizar los cortes histopatolgicos de 4 a 5 m de espesor. Los cortes fueron coloreados con la tcnica convencional de

hematoxilina-eosina (Anexo 4), en los cuales fueron detectadas las alteraciones anatomopatolgicas del tejido daado. Las lecturas de las lminas histolgicas se realizo a simple ciego y estuvo a cargo de un patlogo del Departamento de Patologa del Hospital Regional de Trujillo.

III.

RESULTADOS

En la Tabla 1 y Fig. N 1 se presenta que las larvas administradas penetraron los tejidos a nivel de estomago e intestino del Mesocricetus auratus, a las 48 y 96 horas respectivamente, causndoles hemorragias, edemas y infiltracin inflamatoria aguda y crnica. En los gatos no se encontraron larvas inoculadas, ni ninguna lesin macroscpica. En las Fig.N 2 muestra la observacin estereoscpica de la Larva de Anisakis sp. libre en el estomago del Mesocricetus auratus , a las 48 horas de haber sido inoculadas. En la Fig.N 3 y 4 se muestra la Larva de Anisakis sp en el yeyuno y en el estomago del Mesocricetus auratus a las 96 horas de haber sido inoculadas. En el Tabla 2 se presentan las caractersticas histopatolgicas de lesiones en mucosa gastrointestinal de Mesocricetus auratus a las 48 y 96 horas de ser inoculados experimentalmente con larvas de Anisakis sp., as como las estructuras donde fueron localizadas las larvas.

TABLA 1: Nmero de larvas de Anisakis sp. encontradas invadiendo tejidos de Felis catus y

Mesocricetus auratus y las estructuras de ubicacin de las larvas.

N de larvas encontradas por mamfero * Periodo de infeccin (horas) Mesocricetus auratus Estructuras de ubicacin de las larvas

12

24

48

Pared del estomago

96

Pared del estomago y del Yeyuno

TOTAL

Slo dos de los ejemplares de Mesocricetus auratus examinados al trmino de los

correspondientes periodos de infeccin se encontr parasitado con larvas de Anisakis.

Estmago

96 96

Duodeno

48 48

96

Yeyuno

96

Fig. N 1: Pictograma que muestra la ubicacin de las larvas de Anisakis por periodo de infeccin. = en Mesocricetus auratus, los nmeros indican el periodo

de infeccin en horas, los nmeros iguales corresponden a los hallazgos en un solo mamfero.

Fig. N 2: Observacin estereoscpica de Larva de Anisakis sp. libre en el estomago del Mesocricetus auratus (48 horas). Aum..40x

Fig. N3: Observacin estereoscpica de Larva de Anisakis sp. en el yeyuno del

Mesocricetus auratus (96 horas). Aum..40x

Fig. N 4: Observacin estereoscpica de Larva de Anisakis sp. enrollada en el estomago del Mesocricetus auratus (96 horas). Aum..40x

Tabla 2: Caractersticas histopatolgicas de lesiones en mucosa gastrointestinal de Mesocricetus auratus a las 48 y 96 horas de ser inoculados experimentalmente con larvas de Anisakis sp.
Tiempo de exposici n (horas) Testigo Problema Mesocricetu s auratus Problema Mesocricetu s auratus Leyenda: PMN: Polimorfonucleares MN: Mononucleares ( - ) : Ausente ( + ) : Leve ( ++ ) : Moderado ( +++ ): Severa 96 ++ ++ ++ +++ ++ +++ ++ 48 + + + ++ ++ 96 INFLAMACION INFILTRADO HIPEREMIA PMN MN GASTRICA INTESTINAL GASTRICA INTESTINAL LESION EPITELIAL ULCERACION

Muestras

Fig. N5: Vista microscpica de corte trasversal de la mucosa gstrica normal (TESTIGO) de Mesocricetus auratus a las 48 horas. Aum. 10 X.

Fig. N 6: Vista microscpica de corte trasversal de la mucosa gstrica del Mesocricetus auratus a las 48 horas,se muestra: a = proceso inflamatorio moderado con infiltracin de PMN y MN (linfocitos) Aum. 10 X.

Fig. N 7: Vista microscpica de corte trasversal de la mucosa gstrica del Mesocricetus auratus a las 48 horas, se muestra : a = erosiones superficiales , b = Ulcera gstrica benigna Aum. 10x

Fig. N 8: Vista microscpica de corte trasversal de la mucosa gstrica del Mesocricetus auratus a las 48 horas, se muestra : a = Mltiples erosiones superficiales . Aum. 10 X.

Fig. N 9: Vista microscpica de corte trasversal de la mucosa gstrica normal (TESTIGO) de Mesocricetus auratus a las 96 horas. Aum. 10 X.

Fig. N 10: Vista microscpica de corte trasversal de la mucosa gstrica del Mesocricetus auratus a las 96 horas, se muestra : a = mucosa gastroesofagica -erosionada , b = ulcera gstrica severa Aum. 10 X.

Fig. N 11: Vista microscpica de corte trasversal de la mucosa gstrica del Mesocricetus auratus a las 96 horas, se muestra: a = Ulcera gstrica y hemorragias Aum.10x

Fig. N 12: Vista microscpica de corte trasversal de la mucosa intestinal normal (TESTIGO) de Mesocricetus auratus a las 96 horas. Aum. 10 X.

Fig. N 13: Vista microscpica de corte trasversal de la mucosa del intestino delgado del Mesocricetus auratus a las 96 horas, se muestra: a = erosin mltiple b = Ulcera moderada Aum. 10x.

IV. DISCUSION La ausencia o presencia de signos clnicos en algunos animales de experimentacin, infectados con larvas de Anisakis podra deberse al dao causado en la pared intestinal y a la misma sensibilidad del husped. Es por ello que en el presente trabajo solo se llegaron a encontrar larvas en Mesocricetus auratus y no en Felis catus, esto puede deberse a que las larvas inoculadas no hayan pertenecido al estado larvario infectivo. Tambin se puede deberse a que la larva discurra a lo largo del tubo digestivo sin que produzcan algn problema puesto que no estn adaptadas a organismo seleccionado, eliminndose con la defecacin. La capacidad invasora y penetradora de las larvas concuerda con los hallazgos hechos por otros autores; tales como Narro (2001), quien registr haber observado la penetracin de la mucosa, submucosa, serosa hasta el peritoneo e invasin a otros rganos por parte de las larvas. Narro (2001) El estudio histopatolgico de las lesiones encontradas concuerdan con los resultados encontrados por otros autores (Murga,1988;Narro,2001) quienes reportan que la penetracin de las larvas ocasionan en el tejido circundante una respuesta inflamatoria con presencia de linfocitos polimorfonucleares, linfocitos cuya fase puede ser aguda y luego evolucionar a crnica lo cual depender del grado y tiempo de la lesin. Siendo estas las manifestaciones ms comunes para este tipo de infeccin en animales de experimentacin. En los especimenes de Mesocricetus auratus del grupo testigo se mostraron microscpicamente una mucosa gstrica con leves cambios inflamatorios superficiales, es decir una superficie con un epitelio cilndrico simple superficial y glandular de aspecto normal, en donde se evidenci la integridad de la mucosa gstrica como resultado de un equilibrio entre los factores agresivos y defensivos de la mucosa. En el Tabla 2 del grupo problema, muestra que el Mesocricetus auratus

evaluado a las 96 horas de la inoculacin, presento microscpicamente infiltracin de polimorfonucleares(PMN) y mononucleares(MN), hiperemia, gastritis aguda severa, erosin gstrica multifocal, duodenitis crnica moderada a severa multifocal.

La inflamacin observada por la presencia de PMN y MN constituyen una respuesta fisiolgica a la agresin celular causada posiblemente por las larvas de Anisakis dado a que se ha determinado que las larvas se proteasas y hialuronidasas para fijarse a la mucosa gastroinstestinal, la unin del parasito a la mucosa se debe a una enzima colagenoltica producida en el esfago y que factores locales, como lesiones previas a la mucosa, alteraciones de la motilidad gastrointestinal y pH del medio, influyen tanto en la capacidad de fijacin como en la penetracin de la larva(Lpez et al,2000;Ortega.E,2000) Las alteraciones de los vasos sanguneos, observadas microscpicamente facilitaran el transporte de leucocitos principalmente PMN provenientes de la sangre con la finalidad de fagocitar productos como protenas y tejido necrtico originados por las larvas de Anisakis. La hiperemia observada microscpicamente a nivel de la mucosa gstrica del Mesocricetus auratus es debido a la liberacin de sustancias qumicas en los sitios lesionados a causa del poder gastrolesivo que mostraban las larvas de Anisakis, tales sustancias qumicas como histamina, bradicina y serotonina estimularan una vasodilatacin de arteriolas, esfnteres pre capilares y venulas, incrementando la permeabilidad microvascular y disminuyendo el liquido intravascular. En la Tabla 2 el grupo problema de Mesocricetus auratus evaluado a las 48 horas de su inoculacin present microscpicamente infiltracin polimorfonucleares y mononuclares leve, hiperemia leve, lesin epitelial leve, esto se debera al periodo de exposicin que este ejemplar experiment y a la viabilidad que presentaron las larvas de Anisakis despus de ser inoculadas

CONCLUSIONES Las larvas de Anisakis sp. inoculadas experimentalmente a Mesocricetus auratus provocaron en el tejido reacciones inflamatorias leves y moderadas, hiperemia leve y moderada y lesiones de la mucosa gastrointestinal.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1.

IBELICE PREZ, AMANDA CHVEZ Y EVA CASAS. Laboratorio de Parasitologa. Apdo. 41-0068 Lima Per. Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Revista de Investigaciones Veterinarias del Per Vol. 10, N 1 Enero-Julio 1999 ISHIKURA H, KIKUCHI K, NAGASAWA K, et al. Anisakidae and anisakidosis. Prog Clin Parasitol 1992; 3:43-102. ALONSO-GMEZ A, LPEZ-SERRANO MaC, MORENO AA, y col. Diagnstico clnico y manejo. Controversia en el diagnstico de la alergia a Anisakis simplex. Alergol Inmunol Clin 2001; 16 (Num Extra. 2):41-45. AUDICANA MT, ANSOTEGUI IJ, FERNNDEZ DE CORRES L, KENNEDY MW. Anisakis simplex: dangerous dead and live?.Trends Parasitol 2002; 18:2025. BUTT AA, ALDRIDGE KE, SANDERS CV. Infections related to the ingestion of seafood. Part II: parasitic infections and food safety. Lancet Infect Dis 2004; 4:294300. ESCALANTE H, MURGA S. Desarrollo in vitro de larvas de Anisakis simplex a partir de huevos no embrionados. En: Tresierra AAE, editor. Anales I Congreso Nacional de Biologa Pesquera; 1984 1984 Jun 28Jul 01; Trujillo, Per. Trujillo: Colegio de Bilogos Regional del Norte; 1985. p. 154-155. ESCALANTE H, MURGA S. Cultivo in vitro de larvas de Anisakis sp. que parasitan a Trachurus symmetricus murphyii jurel. En: Tresierra AAE, editor. Anales I Congreso Nacional de Biologa Pesquera; 1984 Jun 28Jul 01; Trujillo, Per. Trujillo:Colegio de Bilogos Regional del Norte; 1985. p. 151-152. ESCALANTE AH, MURGA SN. Efecto de las larvas de Anisakis en la pared gstrica de Felis catus. Resmenes de Trabajos Cientficos del 10mo Congreso Latinoamericano de Microbiologa y 7mo Congreso Peruano de Microbiologa y Parasitologa; 1987 Jun 14-19; Trujillo, Per. Trujillo: Asociacin de Microbiologa de Trujillo, Asociacin Peruana de Microbiologa, Asociacin Latinoamericana de Microbiologa; 1987. p. 29. CABRERA R, TANTALEN M, CHAVERA A. Patogenicidad de las larvas de Anisakis physeteris inoculadas experimentalmente en Canis familiaris. Parasitol al da 1997; 21:14-19.

2. 3.

4.

5.

6.

7.

8.

9.

10. NARRO AH, ESCALANTE H, JARA CA, DAZ-LIMAY E. Alteraciones histolgicas en Canis familiaris y Mesocricetus auratus infectados por larvas de Anisakis sp. obtenidas de Trachurus picturatus murphyi, Scomber japonicus y Merluccius gayi peruanus. Libro de Resmenes 5to Congreso Peruano de

Parasitologa; 2002 Oct 2-5; Trujillo, Per. Trujillo: Asociacin Peruana de Parasitologa, Universidad Nacional de Trujillo; 2002. p. 59. 11. TORRES P. Anisakiasis en un gato domstico de Valdivia, Chile. Zbl Vet med b 1982; 29:313-316. 12. VAN WAEREBEEK K, REYES JC, READ AJ, MCKINNON JS. Preliminary observations of bottlenose dolphins from the Pacific coast of South America. In: Leatherwood S, Reeves RR. editores. The Bottlenose dolphin. San Diego: Academic Press; 1990. p. 143-154. 13. TANTALEN VM, HUIZA FA. Nematode larvae with medical importance found in sea fish from the peruvian shore, with two records of human infections. Rev Per Med Trop., UNMSM, 1993; 7:61-65. 14. CABRERA R, LUNA-PINEDA M, SUREZ-OGNIO L. Nuevo caso de infeccin humana por una larva de Pseudoterranova decipiens (Nematoda, Anisakidae) en el Per. Rev Gastroenterol Per 2003; 23:217-220. 15. BARRIGA J, SALAZAR F, BARRIGA E. Anisakiasis: presentacin de un caso y revisin de la literatura. Rev Gastroenterol Peru 1999; 19:317-323. 16. CABRERA R, SUREZ-OGNIO L. Probable emergencia de anisakiosis por Anisakis physeteris durante el fenmeno El Nio 1997-1998 en la costa peruana. Parasitol latinoam 2002; 57:166-170. 17. ESTRELLA AC, GUEVARA-CARRASCO R, PALACIOS LJ. Informe estadstico de los recursos hidrobiolgicos de la pesca artesanal por especies, artes, caletas y meses durante el primer trimestre de 1998. Inf Inst Mar Per 1998; (139):1-229. 18. CABRERA CR. Algunas consideraciones sobre la presencia de larvas de Anisakis en peces marinos. Rev Per Med Trop., UNMSM, 1994; 8(1-2):95-96. 19. MCCARTY J, MOORE TA. Emerging helminth zoonoses. Int J Parasitol 2000; 30:1351-1360. 20. OLDFIELD ECIII. Emerging foodborne pathogens: keeping your patients and your families safe. Rev Gastroenterol Disord 2001; 1:177-186. 21. CHIN J, editor. Manual para el control de las enfermedades transmisibles. 17ma ed. Washington DC.: Organizacin Pamericana de la Salud, Organizacin Mundial de la Salud; 2001. Publicacin Cientfica y Tcnica 581. 22. LAFFON-LEAL SM, VIDAL-MARTNEZ VM, ARJONA-TORRES G. Cebiche- a potencial source of human anisakiasis in Mxico?. J Helminthol 2000; 74:151-154.

23. MERCADO R, TORRES P, MAIRA J. Human case of gastric infection by a fourth larval stage of Pseudoterranova decipiens (Nematoda, Anisakidae). Rev Sade Pblica 1997; 31:178-181. 24. MERCADO R, TORRES P, MUOZ V, APT W. Human infection by Pseudoterranova decipiens (Nematoda, Anisakidae) in Chile: report of seven cases. Mem Inst Oswaldo Cruz 2001; 96:653-655. 25. CABRERA CR. Helmintos intestinales en el Per: anlisis de la prevalencia (19812001). Lima: Ministerio de Salud. Oficina General de Epidemiologa; 2003. Serie de Informes Tcnicos de Investigacin Epidemiolgica 039. 26. PREZ I, CHVEZ A, CASAS E. Presencia de formas parasitarias en peces comerciales del mar peruano. Rev Inv Vet Per 1999; 10:34-38. 27. COSTA H, BRAVO F, VALDEZ L, y col. Paniculitis nodular migratoria eosinoflica en el Per (gnathostomiasis humana). Informe de once casos, posibles causas y revisin de la literatura. Fol Dermatol 2001; 12(2):21-35. 28. CABRERA CR, TANTALEN VM. Algunos helmintos de Scomber japonicus caballa de la reserva nacional de Paracas. Biotempo 1995; 2:85-86. 29. LLERENA C, CHVEZ A, CASAS E. Presencia de larvas Anisakidae y otros parsitos en peces de consumo humano. Resmenes IV Congreso Peruano de Parasitologa; 2000 Set 22-24; Lima, Per. Lima: Sociedad Peruana de Parasitologa; 2000. p. 231. 30. CABRERA R, SUREZ-OGNIO L, MARTNEZ R, y col. Larvas de Anisakis physeteris y otros helmintos en Coryphaena hippurus perico comercializados en el Mercado Pesquero de Ventanilla, Callao, Per.Rev peru biol 2002; 9:23-28. 31. SARMIENTO L, TANTALEN M, HUIZA A. Nemtodos parsitos del hombre y de los animales en el Per. Rev peru parasitol 1999; 14: 9-65. 32. MARTNEZ R, HUAMN A, AMAROTO T, y col. Helmintos parsitos de peces de la costa de Pisco-Ica. Parte II. Resmenes de la 10ma Reunin Cientfica del Instituto de Ciencias Biolgicas Antonio Raymondi (ICBAR); 2001 Abr 25 27; Lima, Per. Lima: Universidad Nacional Mayor de San Marcos; 2001. p. 46. 33. SAMILLN D, ROMERO J, RENGIFO A, y col. Fauna parasitaria de algunos peces marinos de inters comercial. Resmenes de la 12da Reunin Cientfica del Instituto de Ciencias Biolgicas Antonio Raymondi (ICBAR); 2003 Abr 23 25; Lima, Per. Lima: Universidad Nacional Mayor de San Marcos; 2003. p. 54. 34. TANTALEN VM. La presencia de larvas de Anisakis sp. en algunos peces comerciales del mar peruano. Rev Per Med Trop UNMSM 1972; 1:38-43.

35. SMITH JW, WOOTTEN R. Anisakis and Anisakiasis. Adv Parasitol 1978; 16:93163. 36. TANTALEN VM, HUIZA FA. Sinopsis de los parsitos de peces marinos de la costa peruana. Biotempo 1994; 1:53-101. 37. JARA CA. Prevalencia e intensidad de parasitismo por helmintos en cuatro especies de peces de la zona norte del mar peruano. Rev Peru Parasitol 1998; 13: 76-83. 38. LUQUE JL. Formas larvarias de helmintos parsitos en especies marinas del Per. Parasitol al da 1991; 15: 43-48. 39. DOMNGUEZ-ORTEGA J, MARTNEZ-CCERA C. Guidelines in pathology induced by Anisakis simplex. Alergol Inmunol Clin 2000; 15:267-272. 40. WHARTON DA, AALDERS O. The response of Anisakis larvae to freezing. J Helminthol 2002; 76:363-386. 41. LOPEZ, S.G. Alonzo,A, Moreno,A,Doshm y J, Juanes.2000.Anisakiasis gastroalrgica hipersensibilidad inmediata debido a parasitacin por Anisakis simplex.Sociedad Espaola de Alergologa e inmunologa Clnica 15(4):230-236

ANEXOS

ANEXO N1: DE LA RECOLECCION DE LAS MUESTRAS: VISCERAS DE JUREL Y LA OBTENCION DE LARVAS DE Anisakis sp.

Fig. N14: Visceras de Trachurus picturatus murphyi jurel procedentes del mercado Mayorista de la ciudad de Trujillo

Fig. N15: Observacin macroscpica de Larva de Anisakis en el vsceras de Trachurus

Fig. N16: Observacin macroscpica de larvas de Anisakis sp. obtenidas de vsceras de Trachurus picturatus murphyi jurel

ANEXO N 2: INOCULACION DE LARVAS de Anisakis sp. a Felis catus gato domestico y Mesocricetus auratus hamster

Fig. N17: Inoculacin de larvas ANEXOS N3: de Anisakis sp. en Felis catus gato domestico IDENTIFICACION

Fig. N18: Inoculacin de larvas de Anisakis sp. en Mesocricetus auratus

MORFOLOGICA DE LAS LARVAS DE Anisakis sp. RECUPERADAS DE

Fig. Fig. N19: N20: Tubo Tubo digestivo digestivo e intestinos e intestinos dede Felis Mesocricetus catus auratus domestico hamster Mesocricetusgato auratus

Fig. N 21: Observacin estereoscpica de Larva de Anisakis sp. desenrollada en el estomago del Mesocricetus auratus (96 horas).Aum.40

Mucr n Cd . Ventrculo
Esofgico

Cr.

Esfag o

Fig. N 22: Observacin estereoscpica de Larva de Anisakis sp.Aum.10x Diagrama N1: Estudio morfolgico de la Larva de Anisakis sp.

C d. Cr .

Poro excreto r Boca Diente

Fig. N 23: Observacin microscpica de Larva de Anisakis que muestra el extremo craneal , donde se encuentra el: poro excretor, boca y diente

Espina cuticular

Mucr n

Poro genital Cd .
Fig. N 24: Observacin microscpica de Larva 3 de Anisakis sp. se muestra el extremo caudal (Cd), donde se encuentra: el poro genital, espina cuticular.

A simplex s.l. (Ventrculo

A physeteris s.l. (Ventrculo

A typica s.l.
(Ventrculo corto y

muy largo y final recto)

Fig.N25: Diferencias en la morfologa de Anisakis simplex, A.Physeteris y A.Typica ANEXO N4: COLORACION DE CORTES HISTOLOGICOS DE MUCOSA GASTROINTESTINAL EN Mesocricetus auratus inoculados con larvas de Anisakis

Anisakis simplex puede producir una reaccin

alrgica grave, que se presenta entre cinco y 26 horas despus de la ingesta, usualmente a las cinco horas19. Las formas de presentacin de esta parasitosis son gstrica (95,6%), intestinal (4%) y extra-intestinal (0,4%). La presentacin clnica ms frecuente es una gastritis aguda, caracterizada por un dolor epigstrico intenso y repentino, asociado a nuseas y vmitos. El dolor se inicia entre una y 12 horas despus de la ingesta, con rangos de hasta 14 das. Si se realiza una endoscopia precozmente se puede visualizar la larva en la mucosa gstrica, generalmente viva y parcialmente introducida; si es realizada posteriormente, se va a encontrar erosin de la mucosa, placas inflamatorias con presencia de eosinfilos y granulomas; en estos casos se recupera la larva en forma parcial20-22. A veces se producen accesos de tos con eliminacin del ejemplar, sin otros sntomas acompaantes. Ocasionalmente puede eliminarse por deposiciones. La larva muere en el transcurso de siete meses. La respuesta alrgica de