TEMA 17. El ADN PORTADOR DE LA INFORMACIN GENTICA. REPLICACIN DEL ADN 1.LA MOLCULA PORTADORA DE LA INFORMACIN GENTICA.

Hoy da sabemos que la molcula portadora de la informacin que determina las caractersticas del individuo es el ADN. Esto se ha podido demostrar gracias al trabajo realizado por numerosos cientficos durante la primera mitad del siglo XX. La molcula de ADN fue descubierta en 1869 por el suizo Friedrich Miescher en el ncleo de las clulas y por ello la llamo nuclena, posteriormente se determino su carcter cido y se le denomino cido nucleico. En un principio se pensaba que eran las protenas y no el ADN, las molculas portadoras de la informacin gentica. La primera evidencia de que es el ADN la molcula portadora de la informacin gentica fue obtenida en 1928 por Frederick Griffith en el curso de unos experimentos realizados con la bacteria causante de la neumona (Streptococcus pneumoniae).Descubri que existan dos tipos de cepas distintas de bacterias: la cepa S que estn provistas de cpsula y son las causantes de la enfermedad, y la cepa R que no poseen cpsulas y son inocuas. Comprob lo siguiente: -Si se inoculan bacterias S a un ratn le producen la enfermedad y muere. -Si se inoculan bacterias R no le producen la enfermedad. -Si se inoculan bacterias S muertas por el calor el ratn no contraen la enfermedad. -Si se inoculan una mezcla de bacterias S muertas por el calor y bacterias R inocuas el ratn adquiere la enfermedad y muere. Esto le permiti concluir que las bacterias S muertas posean algo, a lo que denomino principio transformante que era captado por las bacterias R no virulentas y las transformaba en bacterias capsuladas y virulentas. En 1944 Avery y sus colaboradores demostraron que el principio transformante que converta a las bacterias R en virulentas era el ADN, puesto que esta capacidad desaparece cuando se agregan enzimas capaces de destruir el ADN. Con ello se demostr que el ADN es el material gentico de las bacterias. En 1952 Alfred Hershey y Martha Chase gracias a diversos experimentos realizados con el bacterifago T2, demostraron de forma concluyente que es el ADN y no las protenas el material gentico de todos los organismos. 2. DUPLICACION O REPLICACION DEL ADN. Es la capacidad que tiene la molcula de ADN de hacer copias exactas de s misma. Esto permite que la informacin gentica pase completa de la clula progenitora a las clulas hijas cuando esta se divide; por ello todas las clulas de un individuo tienen la misma informacin gentica (mismo ADN) y mantienen la misma identidad. La duplicacin ocurre en una etapa previa a la divisin celular, la fase S de la interfase. El proceso es similar en las clulas procariotas y en las eucariotas. Se propusieron tres hiptesis para explicar la replicacin del ADN: Hiptesis conservativa: Segn esta hiptesis una vez producida la duplicacin se forman dos molculas de ADN; una de ella tendra las dos cadenas de la molcula antigua y la otra tendra las dos hebras nuevas. Hiptesis dispersiva: Esta hiptesis dice que debido a su longitud, el ADN se fragmenta y cada fragmento se replica, reunindose despus de nuevo; por ello las 2 molculas de ADN tendran en sus cadenas fragmentos nuevos y viejos.

Hiptesis semiconservativa: Fue propuesta por Watson y Crick. Segn esta hiptesis las dos cadenas del ADN se separan y cada una de ellas acta como molde dirigiendo la sntesis de su complementaria, por lo que las dos nuevas molculas de ADN tendrn cada una de ellas una cadena de la molcula antigua y otra cadena de nueva sntesis. En 1958 Meselson y Stahl confirmaron experimentalmente, en Escherichia coli mediante marcaje radioactivo la hiptesis semiconservativa. 3. MECANISMO DE LA REPLICACIN La duplicacin o replicacin del ADN se basa en la complementariedad que debe existir entre las bases de las cadenas complementarias. El mecanismo es muy complejo y en l intervienen numerosas enzimas. Se pueden diferenciar tres etapas: iniciacin, sntesis de las nuevas hebras y correccin de errores. 3.1. Iniciacin En esta etapa se produce bsicamente el desenrrollamiento de la doble hlice del ADN y la separacin de las dos cadenas, cada una de las cuales servir como molde para sintetizar su complementaria. La replicacin se inicia en unos puntos concretos de la molcula del ADN, que tienen unas determinada secuencias de nucletidos, llamados orgenes de replicacin u ori C. En este proceso intervienen varias enzimas: -ADN-helicasa. Rompe los puentes de hidrgeno que unen a las bases complementarias y las dos cadenas se separan abrindose la doble hlice. -Girasas y topoisomerasas. Eliminan las tensiones que se producen en las zonas vecinas al producirse el desenrrollamiento y la separacin de las dos cadenas. -Protenas SSB o protenas de unin a cadena simple. Se unen a cada una de las cadenas una vez separadas e impiden que se vuelvan a enrollar. Los orgenes de replicacin dan lugar a unas estructuras denominadas burbujas de replicacin en las que las dos cadenas estn separadas; en los extremos de estas formaciones hay dos zonas con forma de Y llamadas horquillas de replicacin, en estas zonas las dos hebras estn separadas y cada una de ellas sirve de patrn para sintetizar la cadena complementaria. La replicacin del ADN es bidireccional, es decir a partir de los puntos denominados orgenes de replicacin el ADN se duplica en ambos sentidos. En procariotas se forma slo una burbuja de replicacin, mientras que en eucariotas debido a que la molcula de ADN es muy larga en cada molcula se forman muchas. 3.2. Sntesis de las nuevas cadenas de ADN En esta etapa lo que va a suceder es que una vez separadas las dos hebras del ADN, se toman como molde y se sintetizan otras dos cadenas complementarias a ellas. En este proceso intervienen varias enzimas: Las ADN-polimerasas (destacando la ADN-polimerasa III), estas enzimas realizan las siguientes funciones: -Recorren la hebra molde y reconocen los nucletidos que la forman. -Van uniendo los nucletidos para formar las nuevas hebras teniendo en cuenta su complementariedad con los nucletidos de las hebras patrn. -Los nucletidos que utiliza para sintetizar la nueva cadena son nucletidos trifosfatos, los cuales por hidrlisis liberan los dos grupos fosfato obteniendo de esta forma la energa necesaria para que el nucletido se una a la cadena de ADN en formacin.

-Estas enzimas slo son capaces de alargar una cadena ya iniciada, pero no de iniciarla por ello necesitan de un corto fragmento de unos 10 nucletidos de ARN, llamado cebador o primer que acta como iniciador. La sntesis de este cebador se realiza gracias a la accin de una enzima ARN-polimerasa llamada primasa, posteriormente este cebador se elimina por accin de la ADN-polimerasa I, que elimina el cebador y rellenara el hueco que deja. -Las ADN-polimerasas recorre la hebra molde en direccin 35 y slo son capaces de unir nucletidos en direccin 5'3'. Debido a que las dos cadenas del ADN son antiparalelas (una tiene direccin 5'3' y la otra 3'5') la sntesis de las dos hebras complementarias con ellas se produce de forma diferente: La sntesis de la cadena complementaria a la hebra molde que tiene sentido 3'5', crecer por accin de esta enzima de forma continua ya que lo hace en direccin 5'3'. A esta hebra se la denomina hebra conductora, se sintetiza ms rpida. La sntesis de la cadena complementaria a la hebra molde que tiene sentido 5'3', debera formarse en sentido 3'5' pero como la ADN-polimerasa no puede unir nucletidos en este sentido, crece de forma discontinua, mediante la sntesis de pequeos fragmentos de nucletidos que crecen en sentido 5'3' llamados fragmentos de Okazaki. Estos fragmentos posteriormente se unirn entre s, gracias a la accin de otra enzima llamada ligasa formndose la cadena complementaria a la hebra molde 53; a esta cadena se la llama hebra retardada porque se tarda ms en sintetizar ya que la enzima ADNpolimerasa debe esperar a que la horquilla de replicacin se abra lo suficiente para iniciar la sntesis. La sntesis de cada fragmento de Okazaki requiere un cebador, que posteriormente sern eliminados y se rellenan los huecos antes de que estos fragmentos se unan por accin de las ligasas. Una vez que se han sintetizado las dos hebras, cada una de ellas se enrolla helicoidalmente con la hebra que le ha servido de patrn formndose la doble hlice. 3.3.Correccin de errores Al producirse la replicacin a pesar del papel autocorrector de la ADN-polimerasa se pueden cometer errores, es decir se puede incorporar nucletidos no complementarios. A pesar de que el nmero de errores es muy bajo de 1 por cada 107 nucletidos, esto supondra 300 errores en cada duplicacin del ADN humano. Por ello existe un sistema multienzimtico postreplicativo capaz de corregir los errores cometidos por la ADNpolimerasa en el ADN sintetizado, haciendo que los errores desciendan a 1 por cada 1010 nucletidos. En este sistema participan las siguientes enzimas: -Una endonucleasa que detecta el nucletido mal emparejado y corta la cadena que lo posee. -Una exonucleasa que elimina el fragmento incorrecto. -Una ADN-polimerasa que regenera la secuencia correcta -Una ADN-ligasa que une el nuevo segmento al resto de la cadena. Si a pesar del alto grado de seguridad, aparecen errores que no llegan a reparase estos se perpetan y daran lugar a una mutacin, que no siempre son perjudiciales. 4.DIFERENCIAS EN LA REPLICACIN EN PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS La replicacin en procariotas y eucariotas es bastante parecida aunque presentan algunas diferencias, las principales son las siguientes: En los procariotas slo existe un origen de replicacin, mientras que en los eucariotas debido a la longitud de las molculas de ADN existen muchos orgenes de replicacin, en los que se inicia simultneamente la replicacin. Esto es as porque sino se tardara mucho tiempo en realizarse. A cada unidad de replicacin se le llama replicn

En los eucariotas el ADN esta asociado a histonas y durante la replicacin se tienen que sintetizar estas protenas. Se ha comprobado que las histonas originales forman nucleosomas con la molcula de ADN que lleva la hebra conductora, mientras que las nuevas histonas forman nuevos nucleosomas con la molcula de ADN que lleva la hebra retardada. En los procariotas existen tres ADN-polimerasas, mientras que en los eucariotas hay 5. En los eucariotas los fragmentos de Okazaki son ms pequeos (100-200 nucletidos) que en los procariotas (1000-2000).