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Red de Revistas Cientficas de Amrica Latina, el Caribe, Espaa y Portugal
Sistema de Informacin Cientfica
Carren-Snchez, Rodolfo; Marroqun-Segura, Rubn; Mora-Guevara, Jos Luis Alfredo; Valadez-Snchez,
Carlos Salvador; Flores-Cabrera, Yolanda; Flores-Pimentel, Maurilio; Hernndez-Abad, Vicente Jess
Estudio del extracto etanlico de Eryngium heterophyllum (hierba del sapo); para comprobar su actividad
hipoglucemiante y anti-inflamatoria
Revista Mexicana de Ciencias Farmacuticas, vol. 44, nm. 2, abril-junio, 2013, pp. 41-45
Asociacin Farmacutica Mexicana, A.C.
Distrito Federal, Mxico
Cmo citar? Nmero completo Ms informacin del artculo Pgina de la revista
Revista Mexicana de Ciencias Farmacuticas,
ISSN (Versin impresa): 1870-0195
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Asociacin Farmacutica Mexicana, A.C.
Mxico
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Proyecto acadmico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto
41
REVISTA
MEXICANA
DE CIENCIAS FARMACUTICAS
Rodolfo Carren-Snchez, Rubn Marroqun-Segura, Jos Luis Alfredo Mora-Guevara,
Carlos Salvador Valadez-Snchez, Yolanda Flores-Cabrera, Maurilio Flores-Pimentel,
Vicente Jess Hernndez-Abad
Laboratorio 1 PA UMIEZ, Facultad de Estudios Superiores Zaragoza, UNAM
Resumen
Este estudio tuvo como objetivos realizar un ensayo agudo de toxicidad as como evaluar la supuesta actividad
anti-infamatoria, e hipoglucemiante del extracto etanlico de Eryngium heterophyllum, tambin se midieron los niveles
sricos de nitritos y ceruloplasmina. Resultados. El extracto etanlico de Eryngium heterophyllum no mostr efectos
txicos visibles en el modelo de intoxicacin aguda en ratones. Tampoco mostr efecto anti-infamatorio en el modelo
agudo ni en el crnico, no se observaron diferencias en los niveles de ceruloplasmina, ni en la concentracin de nitritos.
Este extracto no mostr ningn efecto como hipoglucemiante. Conclusin: el extracto etanlico de Eryngium
heterophyllum no debe recomendarse para su uso en diabetes ni en procesos infamatorios como es la artritis reumatoide.
Abstract
The aim of this study was to assess an acute toxicity assay, as well as the alleged anti-infammatory and hypoglycemiant
activities of an ethanolic extract of Eryngium heterophyllum. Serum levels of Nitrites and ceruloplasmin were quantifed
too. Results. Ethanolic extract not showed any visible signs of intoxication, nor lost weight in animals after 7 days of
treatment. This extract no showed any anti-infammatory activity, in the acute and chronic models assessed. The ethanolic
extract had not hypoglycemiant activity and no diferences were observed in the ceruloplasmin levels or nitrite
concentration, in daily administration during a week of this extract, in the statistical analysis also showed no diferences
between the treatment groups. Conclusion. This ethanolic extract of Eryngium heterophyllum should not be
recommended for use in diabetes or infammatory processes such as rheumatoid arthritis.
Trabajo cientfico
Palabras clave: Eryngium heterophyllum (hierba del
sapo), antiinfamatorio, hipoglucemiante.
Key words: Eryngium heterophyllum (grass toad),
anti-infammatory, hypoglycemic treatment.
Correspondencia:
Dr. Jos Luis Alfredo Mora Guevara
Laboratorio 1 planta alta edificio UMIEZ
Facultad de Estudios Superiores Zaragoza
Universidad Nacional Autnoma de Mxico
Batalla 5 de Mayo s/n esq. Fuerte de Loreto, Col. Ejrcito
de Oriente, C.P. 09230, Delegacin Iztapalapa,
Mxico, D.F.
Tel. 56230762
Fecha de recepcin: 12 de noviembre de 2012
Fecha de recepcin de modifcaciones: 16 de abril de 2013
Fecha de aceptacin: 10 de junio de 2013
Estudio del extracto etanlico de Eryngium heterophyllum
(hierba del sapo); para comprobar su actividad
hipoglucemiante y anti-inflamatoria
Study of ethanolic extract of Eryngium heterophyllum (herb frog). To make sure its
hypoglycemic and anti-infammatory activity
42
Rev Mex Cienc Farm 44 (2) 2013
Introduccin
En Mxico las plantas medicinales han sido parte importante de
la historia desde antes de la colonia, las plantas se han usado
como medicina alternativa transmitiendo el conocimiento de
generacin en generacin como parte de las tradiciones
heredadas.
1,2
Existen personas que dominan el conocimiento
emprico de las plantas medicinales, otros slo las
comercializan desconociendo sus propiedades y efectos. Dos
especies de plantas de la misma familia pueden tener una gran
similitud fisionmica, lo cual no significa que se puedan usar
para tratar las mismas enfermedades o incluso una de ellas
puede ser txica. Por otro lado los nombres comunes asignados
para una misma planta varan segn la regin y la posologa es
al gusto de los que consumen estos productos y frecuentemente
se presentan en los hospitales casos de intoxicaciones atribuidas
al mal uso de las plantas medicinales, fundamentalmente
debidas a la autoprescripcin, desconocimiento de las especies
y abuso de la dosis; el uso indiscriminado se debe a la creencia
de que lo natural es sinnimo de inocuidad.
3
La hierba del sapo
(Eryngium heterophyllum), es una planta muy conocida
empricamente, se le atribuyen propiedades teraputicas, en el
tratamiento de diabetes, artritis, e hipercolesterolemia entre
otras, Estudios recientes de la hierba del sapo sobre la actividad
hipocolesterolmica, reportan que el extracto acuoso a una
dosis de 100 mg/kg disminuy el colesterol
4
en un 9%. La
posologa emprica recomendada es consumirla en su estado
natural, la parte area de la planta se pulveriza y se hierve en
agua, esta infusin se suministra de acuerdo al padecimiento.
Otra forma es la que se realiza por laboratorios especializados,
la parte area de la planta se pulveriza y se extrae con alcohol
etlico (sin calentamiento para que no pierda sus principios
activos. sic) se obtiene el extracto, mismo que es envasado sin
ninguna otra sustancia. No est publicado ningn estudio sobre
la actividad hipoglucemiante y anti-inflamatoria de la hierba del
sapo, por lo que consideramos necesario que se realizaran
estudios sistemticos para evaluar de manera tangible si esas
actividades estn presentes en la planta, debido a que slo
existen testimonios de esa supuesta actividad, ya que la planta
se vende en Mxico para tratar diabetes y artritis reumatoide.
5,6
Este estudio tuvo como fin el evaluar la toxicidad, actividad
hipoglucemiante y anti-inflamatoria del extracto etanlico de
Eryngium heterophyllum (hierba del sapo).
Material y mtodos
Se usaron ratones machos de 253 g de peso para este estudio.
Los animales se alimentaron con Rodent Lab Chow 5001.
Agribrands Purina (Mxico) y agua ad libitum. El cuidado de
los animales y el manejo de las tcnicas se llevaron de acuerdo
a La Gua Para el Uso y Cuidado de los Animales de
Laboratorio de la Norma Oficial Mexicana
(NOM-062-Z00-1999), la cual es equivalente a la European
Community Guidelines (EEC Directive of 1986; 86/609/EEC).
Los animales se dejaron en ayuno de 16 h antes de su uso para
todos los ensayos.
Planta. La planta fue colectada en el Valle de Zaragoza, estado
de Chihuahua Mxico, en el mes de septiembre. La planta fue
clasificada y autenticada por el Dr. Robert Bye y la M en C
Edelmira Linarez, del Instituto de Biologa de la UNAM. Las
ramas de la planta se dejaron secar, se molieron y se extrajeron
con etanol, despus se elimino el disolvente usando un
evaporador rotatorio con presin reducida. El producto
obtenido se guardo en refrigeracin con atmosfera inerte (N
2
)
hasta su uso.

Ensayo de Toxicidad. Ensayo agudo. El extracto etanlico de
la planta Eryngium heterophyllum se administr a 10 ratones en
una dosis nica de 100 mg/Kg de peso en un volumen de 0.2
mL/30g. Se uso una sonda oral (Animal feeding needles, 20G,
X 1-11/2 Poper and Sons, Inc. Newhyde Park, NJ, USA). Los
animales se observaron diariamente durante 7 das para
identificar efectos txicos como: muertes, diarrea, salivacin,
irritabilidad, prdida de peso, ataxia, anestesia, etc. El grupo
control negativo slo recibi solucin salina fisiolgica. Al final
del ensayo los animales se pesaron, se anestesiaron en cmara
de ter y se sangraron a blanco por incisin axilar, los sueros
obtenidos se congelaron a -20 C hasta su uso. Los hgados,
riones y bazos se extrajeron e inmediatamente se pesaron en
una balanza analtica y se calcularon los pesos relativos de
acuerdo a la siguiente frmula: peso relativo del rgano = (peso
del rgano/peso del animal) X 100.
Ensayo para evaluar la actividad hipoglucemiante. Se sigui
la metodologa de Marroquin-Segura et al.
7
Se usaron 4 grupos
de ratones de 6 animales cada grupo, a los cuales se les
administr con una sonda gstrica: 0.2 mL de solucin salina
(testigo negativo), tolbutamida (40 mg/Kg de peso),
glibenclamida (0.8 mg/kg de peso) y 100 mg/kg de peso del
extracto etanlico de la planta Eryngium heterophyllum, en un
volumen aproximado de 0.2 mL. A los ratones se les indujo una
hiperglucemia temporal administrando subcutneamente
glucosa al 50% (2 g de glucosa/kg) al inicio del ensayo y a los
60 minutos. Se tomaron muestras de sangre de la parte distal de
la cola y mediante un glucmetro (one touch, Johnson y
Johnson) se midi la concentracin de glucosa. A los tiempos 0,
60, 120 y 180 minutos.
Ensayos para evaluar la actividad anti-inflamatoria. Los
ensayos para evaluar la actividad anti-inflamatoria en las fases
aguda y crnica se realizaron de acuerdo a la metodologa de
43
REVISTA
MEXICANA
DE CIENCIAS FARMACUTICAS
Marroquin-Segura R et al.
8
Para la fase aguda se usaron tres
grupos de 6 animales cada grupo. Un grupo recibi por sonda
gstrica 0.2 mL de solucin salina (testigo negativo), un grupo
testigo positivo que recibi 10 mg/kg de peso de indometacina
(Aspen Port Elizabeth (Pty) Ltd Port Elizabeth, Sudfrica) y
100 mg/kg de peso, del extracto etanlico de la planta Eryngium
heterophyllum. 1 h despus se administro 50 L de carragenina
al 1% (Sigma Chemical Company. cat. C3889) en el cojinete
plantar. Se midi con un micrmetro (0.01mm Scala), el grosor
de la pata a los tiempos 0, 1h, 2h, 3h, 4 h y 5 h. Para el ensayo
crnico se formaron 3 grupos de 6 animales cada uno y se les
coloc un pellet de algodn de 10 mg bajo la piel en la regin
escapular, los animales recibieron diariamente mediante sonda
gstrica, durante 7 das: el grupo testigo negativo 0.2 mL de
solucin salina, el grupo testigo positivo hidrocortisona 15
mg/kg (JANSSEN-CILAG), al grupo de prueba 50 mg/kg de
peso del extracto de Eryngium heterophyllum. Al final del
ensayo los animales se anestesiaron en cmara de ter y se
sangraron hasta blanco, se extrajeron los pellets, se dejaron
secar a 37 C y se pesaron en una balanza analtica. Los sueros
se separaron y se determin ceruloplasmina y nitritos como una
medida indirecta de la generacin de xido ntrico, tambin se
calcularon los ndices (pesos relativos), hepticos, esplnicos y
renales.
Determinacin de la ceruloplasmina (CP). Los valores se
obtuvieron mediante inmunodifusin radial (RID). El suero anti
ceruloplasmina de ratn de conejo se obtuvo inmunizando
Conejos Nueva Zelanda con CP purificada de ratn de acuerdo
al mtodo de Ehrenwald et al.
9
La pureza de la ceruloplasmina
se estableci mediante SDS-PAGE se inmunizaron los Conejos,
se sangraron al da 45 y la IgG anti CP fue obtenida mediante
DEAE Celulosa. La especificidad de la IgG anti CP fue
evaluada por imunoelectroforesis donde dos bandas paralelas
aparecieron en la regin globulina que corresponden a la CPI
and CPII. Las placas para RID se prepararon con 2.0 mL
agarosa (Beckton Dickinson) al 1% fundida in PBS, enfriada a
45 C, se le adicion 150 L suero de conejo anti CP de ratn.
La mezcla se vaci en placas de 35 mm Falcon. La CP de ratn
fue usada como estndar (25, 50, 75 y 100 mg/dL) en un
volumen de 5 L. Los dimetros de los estndares y las
muestras se midieron a las 48 hs. Los dimetros de las muestras
se interpolaron en la curva de calibracin. El anlisis
intra-ensayo para CP srica mostr un coeficiente de variacin
menor al 5%.
Determinacin de nitritos. Se cuantificaron usando la reaccin
de Griess.
10
100 L de la muestra de suero se diluy 4 veces con
agua destilada y se desproteiniz con 20 L de sulfato de cinc
(300 g/L). Se centrifug a 10,000 rpm durante 5 minutos a
temperatura ambiente, Los sobrenadantes se vaciaron en un
tubo el cual se preparo previamente con cadmio plateado con
cobre para reducir
11
los NO
3
- in NO
2
-. La reaccin de reduccin
se realiz durante 1 h. Los tubos se centrifugaron a 5,000 rpm
durante 5 minutos. Se tomaron 200 L de las muestras y se
colocaron en un tubo con 700 L de agua destilada y se les
adicion 50 L of sulfanilamida y 50 L de
N-(1-naftil)-etilendiamina, se adicion y se dejo a temperatura
ambiente por 10 minutos, los tubos se leyeron a 540 nm en un
espectrofotmetro Jenway 6305 uv/vis.
Anlisis estadstico. Los resultados se analizaron usando el
paquete estadstico SPSS para ambientes Windows ver 21
realizando prueba de t de Student y ANOVA, manejando un
nivel de significancia
12
al 0.05.
Resultados
No se observaron signos de intoxicacin como son: prdida de
peso, salivacin, ataxia, convulsiones etc. en los ratones del
ensayo de toxicidad aguda, con el extracto etanlico de
Eryngium heterophyllum, despus de 7 das de observacin, no
se encontr alteraciones en rganos, determinados por los peso
relativo de los rganos (ndices de rganos); la determinacin
de ceruloplasmina y nitritos no mostraron diferencias entre los
animales en el modelo de intoxicacin y el grupo control (datos
no mostrados).
Tabla 1. Prueba de tolerancia a la glucosa en ratones sanos.
Los valores son las medias de los grupos error estndar, n= 6 de todos
los grupos. aP= 0.002 tolbutamida vs testigo y aP= 0.001 tolbutamida
vs extracto etanlico. bP= 0.017 glibenclamida vs testigo y bP= 0.012
glibenclamida vs extracto etanlico.
Tabla 2. Efecto anti-inflamatorio del extracto etanlico de
Eryngium heterophyllum en el edema del cojinete plantar de
ratn inducido por carragenina durante 5 horas.
Los valores estn en mm y representan las medias los errores
estndar, n=6 en cada grupo. *P<0.05 indometacina vs testigo y
extracto etanlico.
Grupos
Testigo
Tolbutamida
Glibenclamida
Extracto
etanlico
0 min
36.621.37
356.27
34.61.72
32.61.60
60 min
16921.3
877.73
14522.4
13624.9
120 min
20624.1
11822.2
123.810.7
18639
180 min
1016.55
46.65.25a
60.34.08b
102.614.6
Grupo
testigo
indometacina
Extracto
etanlico.
0 min
2.450.05
2.320.04
2.400.49
60 min
3.390.10
2.450.13*
3.290.06
120 min
3.960.09
2.520.04*
4.00.06
180 min
4.440.182
3.030.021*
4.23 0.14
240 min
4.21 0.27
3.220.169*
4.190.103
300 min
4.190.03
3.340.04*
4.03010
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Rev Mex Cienc Farm 44 (2) 2013
Linares ME, Bye AR, Flores B. Plantas medicinales de
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Watson RR, Preedy RV. Botanical medicine in clinical
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1.
2.
3.
Tabla 3. Efecto del extracto etanlico de Eryngium heterophyllum
sobre la formacin de granuloma.
Los valores estn en gramos y representan las medias el error
estndar *P=0.003 hidrocortisona vs salina y *P=0.002 hidrocortisona
vs extracto etanlico de Eryngium heterophyllum.
Tabla 4. ndices renales, hepticos y esplnicos despus de 7 das
de administracin del extracto etanlico.
Los valores estn en gramos y representan las medias los errores
estndar. *P=0.001 hidrocortisona vs salina y extracto etanlico de
Eryngium heterophyllum.
No se observaron diferencias estadsticas significativas entre los
grupos en relacin a la concentracin de nitritos y niveles de
ceruloplasmina (datos no mostrados).
Discusin
La pcima que actualmente se est vendiendo, es un extracto
etanlico,
13
razn por la cual se utiliz un extracto etanlico de
Eryngium heterophyllum el cual no tiene efecto txico en el
modelo de intoxicacin aguda. No se observaron signos de
dao, como son prdida de peso, salivacin, convulsiones,
ataxia, etc. Tampoco los ndices de rganos, de los animales
tratados con la administracin diaria durante 7 das con 100
mg/kg de peso del extracto etanlico de Eryngium
heterophyllum, mostraron diferencias estadsticas al final del
ensayo, comparados con los ndices del grupo control. Estos
resultados nos sugieren que cuando menos en los rganos
estudiados no encontramos signos de dao; no se encontr
diferencia estadstica significativa entre el grupo control y el
grupo de ensayo de intoxicacin en los niveles de
ceruloplasmina, que es una protena de fase aguda, los nitritos
que son la forma estable del xido ntrico tampoco mostr
diferencias entre el grupo control y el grupo tratado.
En el ensayo hipoglucemiante a los 180 minutos de la curva de
tolerancia a la glucosa, se alcanzan los niveles basales del
ayuno, slo con la glibenclamida y con la tolbutamida, no se
observ efecto alguno del extracto etanlico de Eryngium
heterophyllum (Tabla 1). El extracto etanlico de Eryngium
heterophyllum, no tiene efecto en la disminucin del edema
inducido por carragenina (Tabla 2).
El extracto etanlico de Eryngium heterophyllum tampoco
mostr efecto sobre el granuloma inducido con pellet de
algodn (Tabla 3). Con base a los resultados obtenidos de los
ensayos de actividad anti-inflamatoria tanto en el modelo agudo
como en el crnico, podemos decir que el extracto de la planta
no tiene ni efecto anti-inflamatorio ni pro-inflamatorio cuando
menos a la dosis usada. La administracin diaria de la
hidrocortisona, usada como control positivo en la inflamacin
crnica, induce una disminucin en el ndice esplnico en los
ratones que recibieron diariamente 15 mg/kg de peso, esto es
debido a que la hidrocortisona induce apoptosis en linfocitos
14

(Tabla 4).
Conclusiones
En el ensayo de intoxicacin agudo usando el extracto etanlico
de la planta no mostro efecto txico a la dosis experimentada,
tampoco tiene efecto alguno como anti-inflamatorio e
hipoglucemiante en los modelos experimentales probados.
Consideramos que es necesario legislar en esta materia, debido
a que los pacientes con diabetes y artritis usan estos productos
como tratamiento alterno para curar sus males y stos productos
no tienen efecto alguno y lo que es peor abandonan los
tratamientos ortodoxos, que han pasado por un control estricto
en cuanto a su efectividad.
Agradecimientos
A la DGAPA, UNAM por el apoyo otorgado al Proyecto
PAPIME PE-203613.
Agradecemos la valiosa ayuda en la clasificacin y aportacin
de la hierba del sapo a la M. en C. Edelmira Linarez Mazari y al
Dr. Robert Bye Boettler, del Instituto de Biologa de la UNAM.
Referencias
Grupo
testigo
Hidrocortisona
Extracto
etanlico.
Peso seco del pellet
0.02050.001
0.01360.004*
0.02770.0017
Porcentaje de Inhibicin
-
66.34
-
Grupo
testigo
hidrocortisona
Extracto
etanlico.
ndices
hepticos
5.2620.208
5.8880.190
5.7740.210
ndices
renales
1.35080.060
1.3390.057
1.4020.036
ndices
esplnicos.
0.5570.032
0.2580.022*
0.4440.055
45
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