Control Interno en El Laboratorio de Microbiología

ELABORACIN DE UNA GUA PARA
EL ESTABLECIMIENTO DEL CONTROL

DE CALIDAD INTERNO EN LOS
LABORATORIOS DE MICROBIOLOGA
DE ALIMENTOS DE LA RED
NACIONAL DE LABORATORIOS DE
ANLISIS DE ALIMENTOS DE CUBA
ALGUNOS ELEMENTOS Y SUGERENCIAS A
TENER EN CUENTA PARA EL CONTROL INTERNO
rC. Claudio Rodrguez Martnez (claudio@biocen
Control interno
- Control de las condiciones de trabajo: proporciona
informacin sobre la esterilidad de los medios y materiales
auxiliares utilizados y en general, sobre las buenas prcticas
en la realizacin de los ensayos. Deben existir criterios para
la desviacin permitida.
- Control de la precisin: muestras naturales sin
Ensayos
inocular y/o muestras naturales inoculadas
cuantitativos
:
- Control de recuperacin
Ensayos
cualitativos:
-El control de calidad interno debe incluir

actividades que garanticen un adecuado
control del mtodo a niveles bajos de
contaminacin (ej. lmite de deteccin)
Estas actividades de control de calidad deben realizarse en

la medida de lo posible con muestras naturales tanto
ES DE ERRORES EN EL LABORATORIO DE MICROBIO

TCNICAS
Distribucin
de
los
microorganismos en la muestra
Volumen, masa de muestra
Equipos
(balanzas,
baos,
pipetas, incubadoras)
medida de masa y volumen
Mtodos
auxiliares
de
preparacin de las muestras
(mezcla, dilucin, etc.)
Parmetros de incubacin
Condiciones en el laboratorio
(T, W, corrientes de aire,
contaminacin, etc)
Lectura e interpretacin de los
resultados
Medios de cultivo, reactivos,
HUMANAS
Identificacin o
enumeracin de
las placas
Interpretacin de
los datos
Clculos de los
resultados
Registro de los
resultados
Incumplimiento de
buenas prcticas
VIGILANCIA DE SUPERFICIES
Cortar esponjas de celulosa (cartn absorbente u
otro material esterilizables) en piezas de 1 x 5 x 5
cm, ponerlas en bolsas individuales de papel y
esterilizarlas en autoclave.
Humedecer una pieza con 10 mL de diluyente y
frotar vigorosamente
1 m2 de la zona
seleccionada, sujetndola con una pinza o un
guante esterilizado.
Colocarla en una bolsa plstica esterilizada (ej. de
un digestor peristltico), agregar 100 mL de
diluyente, aplicar un masaje vigoroso a la esponja
durante 1 minuto y dejar 20-30 minutos.
Transferir dos alcuotas de 1 mL a sendas placas de
Petri y volcar 15 mL de agar para recuento fundido
y enfriado a 45-50 0C.
CONTROL AMBIENTAL
Las placas de agar para recuento se dejan al
ambiente del laboratorio destapadas durante
15 minutos. Colocar las tapas e incubar a 30
0
C.
Contar el nmero de colonias.
Ms de 15 colonias por placa indica que la
calidad del aire es inapropiada.
AGAR PARA RECUENTO: Triptona 5 g, extracto de
levadura 2,5 g, glucosa 1 g, agar 15 g, agua 1
litro, pH 7. Esterilizar a 120 0C durante 15
minutos.
VERIFICACIN DE MUESTRAS
Un laboratorio de referencia prepara las muestras
homogneas con niveles tericamente iguales de
microorganismos
(SE
PROPONE
UN
LABORATORIO ACREDITADO).
Siempre que sea posible, se eligen cinco o diez
unidades del mismo producto segn el plan de
muestreo. Se mezclan y toman muestras de cada
una de estas unidades con cucharas o cuchillos
estriles.
Los resultados cuali- o cuantitativos se envan al
laboratorio de procedencia para su evaluacin
estadstica.
Los datos se analizan estadsticamente y los
resultados del mtodo se expresan en trminos de
exactitud, reproducibilidad o repetibilidad.
VERIFICACIN DE LA INCUBADORA
El termmetro de inmersin parcial, con un
intervalo de graduacin de 0,10C, debe estar
inserto en un tubo con agua cuya boca estar
sellada con masilla para evitar la evaporacin.
Comprobar la indicacin del equipo con la del
termmetro.
Todos los termmetros deben calibrarse una vez al
ao.
VERIFICACIN
DE LA ESTUFA U HORNO DE
ESTERILIZACIN
Se emplea para la mayora del material de vidrio.
Peridicamente se hace un control de esterilidad
del material de vidrio tratado.
VERIFICACIN DEL BAO CON CONTROL DE

TEMPERATURA
La temperatura se suele controlar despus de un
perodo de estabilizacin de 3 horas, con un
termmetro de inmersin total cuyo intervalo de
graduacin es de 0,10C.
Generalmente se utiliza a 44,5 - 45,50C, rango en
el cual un cultivo de Escherichia coli incubado
durante 24 h produce gas y el de Enterobacter
aerogenes no lo forma en el medio EC.
MEDIO EC: (triptona 20 g, lactosa 5 g, sales biliares 1,5 g, fosfato
dipotsico 4 g, fosfato monopotsico 1,5 g, cloruro de sodio 5 g).
MANEJO Y VERIFICACIN DEL pH METRO

Cuando se transfieren de una solucin a otra, se
deben enjuagar con la segunda solucin y con agua
desmineralizada al terminar el trabajo.
El procedimiento de almacenamiento depende del
tipo de electrodo (los de vidrio deben colocarse en
una solucin reguladora neutra, para los de
referencia se usa una solucin de cloruro de potasio
0,1 M).
Los pHmetros se controlan antes de cada uso con
soluciones reguladoras de pH 4,0, 7,0 y 10,0.
Hay que dejar que las muestras y soluciones
alcancen la misma temperatura antes de efectuar
las mediciones.
Deber limpiarse la punta con cido clorhdrico 0,1
M, luego con solucin de EDTA, terminando con
VERIFICACIN DE LA EFICACIA DE LMPARA UV

GERMICIDA
Preparar con el diluyente, una suspensin de un
cultivo de
E. aerogenes de 24 h en agar
nutriente, que tenga una densidad
ptica igual a la del tubo 1 de Mac Farland (aprox. 3
x108 ufc / mL)
Llevar 1 mL de la suspensin (10-1) a un tubo con 9
mL de diluyente, mezclar bien (10-2) y repetir la
operacin para obtener sucesivamente otras
diluciones hasta 10-5.
Luego diluir al .
Sembrar 0,1 mL de la ltima dilucin en la superficie
de cada placa de agar para recuento.
Exponer una placa destapada a la luz ultravioleta y
otra a la luz fluorescente, durante 5 minutos. Colocar
0
VERIFICACIN
FILTROS
DEL
RENDIMIENTO
DE
LOS
Se expone al aire una placa de agar para recuento

durante 1 h y despus de la incubacin
prcticamente no debe haber colonias.
Si tres ensayos sucesivos indican la presencia de
contaminacin, se considera que la campana
funciona deficientemente y se recurrir al servicio
tcnico especializado.
DETERMINACION
DE
RESIDUOS
BACTERIOSTTICOS
A. Lavar 6 placas de Petri con el procedimiento habitual
del laboratorio.
B. Lavar 6 placas de Petri con el mismo procedimiento y
enjuagarlas doce veces con agua destilada.
C. Lavar otras 6 placas pero no enjuagarlas.
Esterilizar las placas por el procedimiento habitual.
Preparar una suspensin de un cultivo de E.
aerogenes, hacer diluciones decimales hasta 10-6 y
luego diluir al .
Colocar en cada placa 1 mL de la ltima dilucin,
volcar 15 mL de agar para recuento fundido y
enfriado a 450C y mezclar cuidadosamente por
desplazamiento horizontal.
Incubar las placas a 350C durante 48 h.
VERIFICACIN DEL LAVADO DE LA CRISTALERA

Como los residuos cidos o alcalinos pueden
permanecer el el material de vidrio despus del
lavado, se verifica el pH de algunos objetos con el
indicador azul de bromotimol (azul de bromotimol
0,1 g, hidrxido de sodio 0,01 N 16 mL, agua
destilada 250 mL) que es amarillo a pH 6,5, azul a
7,3 y verde en el intervalo.
VERIFICACIN DE LA IDONEIDAD DEL AGUA

Preparar la solucin concentrada del medio mnimo con
agua recin obtenida en el destilador.
Recoger unos 200 mL del agua desconocida y 200 mL de
agua de control.
Colocar en un frasco 20 mL de agua de control y 10 mL de
solucin, y en otro 20 mL del agua desconocida y 10 mL
de solucin. Esterilizar a 120 0C durante 15 minutos.
Preparar una dilucin 10-6 de un cultivo de E. aerogenes.
Sembrar 1 mL en cada frasco e incubar a 350C durante 24
h.
Hacer diluciones decimales sucesivas de cada frasco y
sembrar 0,1 mL en sendas placas de agar para recuento.
Incubar a 350C durante 24 h.
Contar las colonias.
Si la relacin recuento agua desconocida/ recuento control
es < 0,8 - se encuentran sustancias inhibidoras en el
agua, si es de 0,8 a 1,2 - no hay inhibidores presentes, si
es > 1,2 - se hallan fuentes estimuladoras del crecimiento.
MEDIO MNIMO CONCENTRADO. Citrato de sodio dihidrato 0,58 g, sulfato
VERIFICACIN DEL DESEMPEO DEL PERSONAL

Preparar un medio de cultivo por el especialista de mayor
nivel y rigor y en paralelo otros tcnicos preparan el medio
con el mismo lote o ingredientes. Se compara el
desempeo de ambos medios inoculando un m.o.
Se preparan placas de un medio y se inoculan en un rango
contable (10 100 UFC/placa) y se cuentan las colonias
por varios tcnicos en un momento determinado. Cada
placa vuelve a ser contada a intervalos cortos de 5 10
minutos por los mismos tcnicos.
A partir de una suspensin estandarizada del mismo tubo
de un m.o. varios tcnicos preparan las diluciones,
siembran y hacen el recuento y se comparan los
recuentos.
EXIGENCIAS
PARA
EL
MANUAL
DE
PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS NORMALIZADOS
Autoridad. Debe ser recopilado por un profesional con
experiencia prctica en los mtodos.
Factibilidad. Debe ser claro, conciso y explcito en la
descripcin de los procedimientos, numerando las
etapas.
Actualizacin. Debe ser formalmente revisado todos
los aos y corregido si es necesario.
Disponibilidad. Debe estar al alcance de todos los
analistas del laboratorio, los que deben apegarse a las
reglas.

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EL ESTABLECIMIENTO DEL CONTROL

rC. Claudio Rodrguez Martnez (claudio@biocen

-El control de calidad interno debe incluir

Estas actividades de control de calidad deben realizarse en

ES DE ERRORES EN EL LABORATORIO DE MICROBIO

VERIFICACIN DEL BAO CON CONTROL DE

MANEJO Y VERIFICACIN DEL pH METRO

VERIFICACIN DE LA EFICACIA DE LMPARA UV

Se expone al aire una placa de agar para recuento

VERIFICACIN DEL LAVADO DE LA CRISTALERA

VERIFICACIN DE LA IDONEIDAD DEL AGUA

VERIFICACIN DEL DESEMPEO DEL PERSONAL

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