Determinacion de Proteinas PDF
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MTODOS
DE
DETERMINACIN.
MTODOS DE
EVALUACIN DE CALIDAD
CURSO: ANLISIS DE PAI
INDICE
Consideraciones generales
Cuantificacin de protenas
Determinacin de la calidad de las protenas.
CONSIDERACIONES GENERALES
Componentes abundantes en las clulas.
Importantes
para funciones biolgicas y
estructura de las clulas.
Las protenas estn formadas por 20 aminocidos en configuracin L.
Los aminocidos estn compuestos por C, H, N,
O, S.
Los aminocidos se caracterizan por poseer:
CONSIDERACIONES GENERALES
Elemento mas abundante: N (13.4 - 19.1%).
Clasificacin:
Composicin
Estructura
Funcin biolgica
Solubilidad
Calor
cidos
Bases
Disolventes orgnicos
Detergentes
Algunas vitaminas
Alcaloides
cido rico
Urea
Iones de amonio
Lpidos
Carbohidratos
CONTENIDO PROTEICO
EN LOS ALIMENTOS
MTODOS DE DETERMINACIN DE
PROTENAS
Mtodo
de Kjeldahl
Mtodo de Biuret
Mtodo de Lowry
Mtodo del cido bicinconnico (bca)
Mtodo de absorcin UV a 280nm
Mtodo de adhesin de colorante
Mtodo de Bradford
Mtodo de la ninhidrina
Mtodo turbidimtrico
MTODO KJELDAHL
Fundamento:
Protenas y otros componentes son digeridos con cido
sulfrico en presencia de catalizadores.
Contenido total de nitrgeno orgnico es transformado a
sulfato de amonio.
El digerido se neutraliza con lcali y se destila sobre una
solucin de cido brico.
Aniones borato formados se titulan con cido valorado, el
cul a su vez se convierte en nitrgeno.
Resultado: nitrgeno bruto.
MTODO KJELDAHL
Preparacin de la muestra:
DIGESTIN
cido Sulfrico
PROTENA
(NH4)2 SO4
Calor, catalizador
MODIFICACIONES EN LA DIGESTIN
REACCIONES DE LA NEUTRALIZACIN Y LA
DESTILACIN
NH3+ H3BO3
(cido brico)
REACCIONES DE LA TITULACIN
MODIFICACIONES EN LA TITULACIN
CLCULOS
N HCl = Normalidad del HCl en moles /1000 mL
Vol. cido corregido = mL de cido estndar para
la muestra) (mL de cido estndar para el
blanco)
14 = peso atmico del nitrgeno
FACTOR
Se utiliza un factor de conversin de % de N a % de
protena cruda.
La mayora de las protenas contienen 16% de N
El factor de conversin es:
6.25100 16 6.25
% Pr oteina % Nx 6.25
%N
% Pr oteina
0.16
%N2 protena
Factor
16.0
6.25
15.7
18.0
17.51
17.15
6.38
5.7
5.71
5.83
OTROS MTODOS
http://www.youtube.com/watch?v=xubq3xOssWU
MTODO DE LOWRY
Fundamento
Combina la reaccin de biuret con la reduccin
del reactivo de fenol folin-ciocalteau (cido
fosfomolbdico-fosfotngstico) por los residuos de
tirosina y triptofano de las protenas.
El color azuloso desarrollado es ledo a 750nm
(alta sensibilidad para una concentracin
protica baja) o a 500nm (alta sensibilidad para
una concentracin protica alta)
Fundamento
MTODO DE ABSORCIN EN
ULTRAVIOLETA A 280NM
Fundamento
MTODO DE ABSORCIN EN
ULTRAVIOLETA A 280NM
Fundamento
MTODO DE ABSORCIN EN
ULTRAVIOLETA A 280NM
Mtodo rpido y relativamente sensible (varias veces
ms sensible que el mtodo de Biuret)
No existe interferencia del sulfato de amonio y otras
sales buffer
Mtodo no destructivo
Utilizado en deteccin post-columna de las protenas
MTODOS DE DETERMINACIN DE
PROTENAS POR ADHESIN DE UN
COLORANTE
Fundamento
MTODO DE BRADFORD
Fundamento
MTODO DE LA NINHIDRINA
Fundamento
EVALUACIN DE LA CALIDAD DE
PROTENA
NECESIDADES NUTRICIONALES
indispensables
(nutricionalmente
Condicionalmente indispensables
Nitrgeno no especfico necesario para la sntesis de
los aminocidos dispensables (no esenciales) y otros
compuestos nitrogenados de importancia11.
EL MEJORAMIENTO DE LA CALIDAD DE
UNA PROTENA
PROTENAS COMPLEMENTARIAS
Consumiendo
completa(s)
cantidades
suficientes
de
protena(s)
BIODISPONIBIBLIDAD DE PROTEINAS
Contenido en
alimentaria
aminocidos
de
Digestibilidad
Requerimientos de aminocidos:
la
protena
VALOR BIOLGICO
PDCAAS
o
o
Determinacin de la digestibilidad
Clculo del PDCAAS:
CLCULO
Protena de
Digestibilidad*
Patrn de
soja aislada*
(AA X 97%)
referencia
(mg/g protena) (mg/g protena) (mg/g protena)
26
25.2
19
49
47.5
28
82
79.5
66
63
61.1
58
PDCAAS
1.3
1.7
1.2
1.1
26
25.2
25
1.0
90
38
13
50
87.3
36.9
12.6
48.5
63
1.4
34
1.1
11
1.1
35
1.4
PDCAAS = 1.0
CLCULO
1.00*
Casein
1.00
Egg White
1.00
Pea Flour
0.69
0.68
0.63
0.40
Whole Wheat
0.00
0.10
0.20
0.30
0.40
0.50
0.60
0.70
0.80
PDCAAS
* Values for SUPRO Brand Isolated Soy Protein provided by Protein
Technologies International as determined through actual analysis.
Protein Quality Evaluation, Report of the Joint FAO/WHO Expert Consultation.
Rome: FAO Food and Nutrition Paper No. 51, 1991.
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