DEDICATORIA

Dedicado a mis compaeras del curso

para que tenga un conocimiento ms
amplio del uso de la cromatografa en la
industria alimentara

INTRODUCCION
En esta practica se pretenden identificar los componentes de una disolucin. Esta
puede estar formada por tres compuestos, naftaleno, veratrol o acetanilida, siendo las
cantidades de cada compuesto desconocidas para nosotros siendo la mezcla
completamente aleatoria. Para ello el mtodo a utilizar ser la cromatografa. Con este
mtodo experimental podremos separar los componentes de una disolucin
desconocida para luego compararlos con diferentes disoluciones patrn. La tcnica a
utilizar no se corresponde de manera especifica con su nombre, puesto que no
apreciaremos ninguna diferencia de color entre los diferentes componentes. El nombre
de la tcnica deriva de los primeros ensayos en los que se separaron pigmentos de
plantas como la clorofila, los cuales tienen colores definidos. Estos primeros pasos los
dio el botnico ruso de origen italiano Mijail Tswett cuando separo diversos pigmentos
de las plantas.
La tcnica se basa en la velocidad de desplazamiento diferencial de los solutos al ser
arrastrados por una fase mvil sobre una estacionaria que puede ser slida o liquida.
Esta diferencia ser la que nos permita tanto identificar cuantos componentes tiene una
disolucin como separarlos.

FUNDAMENTO TEORICO
La cromatografa es la tcnica que separa una mezcla de solutos basada en la
velocidad de desplazamiento diferencial de los mismos que se establece al ser
arrastrados por una fase mvil (liquida o gaseosa) a travs de un lecho cromatogrfico
que contiene la fase estacionaria, la cual puede ser slida o lquida.
Hay que indicar que el nombre de la tcnica es incorrecto, ya que no consiste en
escribir con colores. Este nombre proviene de la primera experiencia cromatogrfica
realizada, la cual se utilizo para separar pigmentos coloreados de plantas. La
cromatografa fue descubierta por el botnico ruso de origen italiano Mijail Tswett en
1903. Tswett separo los pigmentos de las plantas (clorofila) vertiendo extracto de hojas
verde en ter de petrleo sobre una columna de carbonato de calcio en polvo en el
interior de una probeta. No obstante, no existen datos sobre la utilizacin de esta
tcnica hasta 1930 cuando khun y Lederer separaron tambin pigmentos de las plantas
usando como adsorbentes almina y carbonato de calcio. Fue a partir de ah cuando se
inicio el verdadero desarrollo de la cromatografia .

HISTORIA
El botnico ruso Mijal Tswett (Mikhail Semenovich Tswett, 1872-1919) emple por
primera vez en 1906 el trmino "cromatografa" (que proviene del griego y
que significan respectivamente chroma "color" y graphos "escribir").
A comienzos del ao 1903, Mijail Tsvet us columnas de adsorcin de lquidos para
separar pigmentos vegetales (por ejemplo, clorofilas). Las disoluciones se hacan pasar
a travs de una columna de vidrio rellena de carbonato de calcio, que finamente
dividido de un material poroso que interacciona de forma diferente con los
componentes de la mezcla, de forma que stos se separaban en distintas bandas
coloreadas a lo largo de la columna.
Los primeros equipos de cromatografa de gases aparecieron en el mercado a mediados
del siglo XX. A su vez, la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC) comenz a
desarrollarse en los aos 1960, aumentando su importancia en las dcadas siguientes,
hasta convertirse en la tcnica cromatogrfica ms empleada. Sin embargo esto se ir
modificando con el paso de los aos.
El botnico ruso Mijail Tswett estableci las ventajas de la tcnica, adopto la
terminologa y defini los procedimientos experimentales bsicos para esta tcnica, se
considera que es el Padre de la Cromatografa. En los aos 30 y 40 empez su
desarrollo y aplicacin en diferentes procedimientos de experimentacin.

PRINCIPIOS
La palabra Cromatografa significa EscribirenColores, porque cuando fue
desarrollada los componentes separados eran colorantes. Se define como una tcnica o
mtodo fsico de separacin basado en las diferentes velocidades con que se mueven los
solutos disueltos en un disolvente llamado eluente (fase mvil) a travs de un medio
estacionario o fijo. Los componentes a separar se distribuyen entre la fase estacionaria
y la fase mvil o fluido que pasa a travs o a lo largo de la fase estacionaria.
Como los componentes de la mezcla presentan diferente tendencia a permanecer en
cualquiera de las fases, la separacin se da por el movimiento de la fase mvil en
relacin con la estacionaria y de la distribucin de las sustancias entre las dos fases.
Las molculas que "prefieren disolverse" en la fase mvil sern eludas ms rpido que
las que son preferencialmente solubles en la fase estacionaria y que tienden a quedar
retenidas.
En resumen se fundamenta en la separacin entre la fase estacionaria slida o liquida y
la fase mvil liquida o gaseosa
Los fenmenos rectores del proceso de retencin y separacin son la adsorcin y la
absorcin. El primero queda delimitado a la superficie interfacial es decir se refiere a
la fijacin o retencin de la sustancia entre la superficie de las dos fases; se relaciona
con fuerzas qumicas y fsicas que dependen de la naturaleza de la sustancia
absorbida, temperatura, naturaleza del absorbente y concentracin. El segundo
fenmeno determina la retencin de una especie qumica por parte de una masa y
depende de la tendencia que tiene sta a formar mezcla o reaccionar qumicamente con
la misma.

CROMATOGRAFIA
La cromatografa puede definirse como una tcnica que separa una mezcla de solutos
basada en la velocidad de desplazamiento diferencial de los mismos que se establece al
ser arrastrados por una fase mvil (lquida o gaseosa) a travs de un lecho
cromatogrfico que contiene la fase estacionaria, la cual puede ser lquida o slida.
Las propiedades de los componentes de una mezcla determinan su movilidad entre s y
con respecto a la fase mvil. La base de la separacin cromatogrfica ser, por tanto,
la diferencia en la migracin de los mismos.
La cromatografa es un conjunto de tcnicas basadas en el principio de retencin
selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla,
permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes.
Las tcnicas cromatogrficas son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase mvil
que consiste en un fluido (gas, lquido o fluido supercrtico) que arrastra a la muestra a
travs de una fase estacionaria que se trata de un slido o un lquido fijado en un
slido.
Los componentes de la mezcla interaccionan en distinta forma con la fase estacionaria
y con la fase mvil. De este modo, los componentes atraviesan la fase estacionaria a
distintas velocidades y se van separando. Despus de que los componentes hayan
pasado por la fase estacionaria, separndose, pasan por un detector que genera una
seal que puede depender de la concentracin y del tipo de compuesto.
CLASIFICACIN DE LA CROMATOGRAFA
Existen muchas maneras de clasificar los mtodos cromatogrficos, segn su fase
mvil se clasifica en Cromatografa de gases que puede ser a travs de dos sistemas,
gas- lquido y gas-slido y Cromatografa lquida donde el eluente es un lquido y
puede ser lquido-liquido, liquido-slido. Por el mecanismo de retencin-separacin, es
decir el tipo de equilibrio implicado en la transferencia de los solutos entre las fases se
encuentra la Cromatografa de reparto, de adsorcin y de exclusin. Segn la forma de
contacto entre las fases se denomina de columna o superficie plana.
Tambin se puede clasificar teniendo en cuenta la fase estacionaria, la
dimensionalidad, escala fsica y gradientes.

Cromatografa plana. La fase estacionaria se sita sobre una placa plana o

sobre un papel. Las principales tcnicas son:
o Cromatografa en papel
o Cromatografa en capa fina
Cromatografa en columna. La fase estacionaria se sita dentro de una
columna. Segn el fluido empleado como fase mvil se distinguen:
o Cromatografa de lquidos
o Cromatografa de gases
o Cromatografa de fluidos supercrticos

La cromatografa de gases es til para gases o para compuestos relativamente

voltiles, lo que incluye a numerosos compuestos orgnicos. En el caso de compuestos

no voltiles se recurre a procesos denominados de "derivatizacin", a fin de

convertirlos en otros compuestos que se volatilizen en las condiciones de anlisis.
Dentro de la cromatografa lquida destaca la cromatografa lquida de alta resolucin
(HPLC, del ingls High Performance Liquid Chromatography), que es la tcnica
cromatogrfica ms empleada en la actualidad, normalmente en su modalidad de fase
reversa, en la que la fase estacionaria tiene caracter no polar, y la fase mvil carcter
polar (generalmente agua o mezclas con elevada proporcin de la misma, o de otros
disolvente polares, como por ejemplo metanol). El nombre de "reversa" viene dado
porque tradicionalmente la fase estacionaria estaba compuesta de slice o almina, de
carcter polar, y por tanto la fase mvil eran disolvente orgnicos poco polares.
Una serie eluotrpica, es un rango de sustancias de diferentes polaridades que actan
como fase mvil y que permiten observar un mejor desplazamiento sobre una fase
estacionaria.
Tcnicas cromatogrficas
Segn el dispositivo utilizado para conseguir el contacto entre la fase mvil y la
estacionaria, se distinguen dos tcnicas:
Columna

Se usa un tubo cilndrico

Plana: El soporte es una placa plana o los

intersticios de un papel

Capa fina
Papel (particin)

Tipos de cromatografa
Naturaleza de fase
estacionaria
Naturaleza de
fase
estacionaria

Slido

Adsorcin
Exclusin
Cambio inico
Afinidad

Naturaleza de
fase mvil

Lquido

Particin

Liquido

Lquido-lquido ((particin)
Lquido-slido)adsorcin,
cambio inico, exclusin,
Afinidad.

Gas

Gas-lquido (CGL)
Gas-slido (CGS)

CROMATOGRAFA EN COLUMNA.
Se utilizan columnas de vidrio rellenas de Almina (Al2O3), Slica u Oxido de
Magnesio. La fase estacionaria esta constituida por un slido poroso, el cual queda
soportado en el interior de una columna generalmente fabricada en plstico o vidrio.
La fase mvil se encuentra formada por la solucin que lentamente va atravesando la
fase estacionaria.
La solucin que sale al final de la columna se reemplaza constantemente por nueva
solucin que se suministra desde un contenedor por la parte superior de la columna.
La migracin de las sustancias de la mezcla a travs de la columna se encuentra
retardada en diferente grado por las interacciones diferenciales que cada una de ellas
pueda ejercer con la fase estacionaria. Las sustancias se separan gradualmente
formando bandas dentro de la banda total, la separacin, y por tanto la resolucin,
aumenta con la longitud de la columna. La banda individual de cada sustancia puede
ensancharse con el tiempo debido a procesos difusinales, disminuyendo por tanto la
resolucin.

CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

Por este mtodo se pueden analizar mezclas de aminocidos. La muestra para anlisis
se aplica por medio de un tubo capilar en la superficie de una capa fina adsorbente en
forma de banda, punto o mancha y es adsorbida en la superficie por la accin de
fuerzas electrostticas (Fuerzas de Van der. Waals, puentes de hidrogeno, efectos
inductivos, etc). Los adsorbentes ms utilizados son gel de silica, alumina, tierra
silcea, celulosa y poliamidas.
Como soportes del adsorbente se utilizan laminas o placas de vidrio, plsticas o
metlicas, algunas placas tienen indicador de fluorescencia : f254 f366.
La placa seca se coloca en el tanque cromatogrfico o cmara, en el cual debe
encontrarse saturado el eluente (Fase Mvil lquida).
El eluente ascender o desplazara por capilaridad en la placa y arrastrar los
componentes a lo largo de sta produciendo manchas que representan a los

componentes, la separacin se da por migracin diferencial, es decir que la fase mvil

arrastra a las substancias apolares y aquellas ms polares son retenidas por la fase
estacionaria dando lugar a la separacin.
Posteriormente se evapora el eluente y la placa se analiza por medio de mtodos
qumicos en el que por inmersin o rociado se obtienen derivados coloreados o
fluorescentes (Adicin de Ninhidrina a aminas, cido sulfrico para carbonizar
compuestos orgnicos, etc), o por medio de mtodos fsicos pticos utilizando radiacin
UV
o
luz
visible.
El anlisis es de tipo cualitativo, semicuantitativo o cuantitativo. En el primero se
hacen comparaciones visuales de color e intensidad y propiedades UV entre otras. En
el semicuantitativo se observa dimetro y comparacin visual e intensidad del color de
la mancha contra manchas patrones de concentracin conocida. Y en la forma
cuantitativa se pueden realizar medidas de transmisin a travs de la sustancia y
medidas de emisin o medida de luz reflejada desde la sustancia, y espectrofotometra
por fluorescencia.

CROMATOGRAFA EN PAPEL.
El proceso es bsicamente el mismo, solo que se usan tiras de papel cromatogrfico en
el tanque cromatogrfico.

CROMATOGRAFA EN COLUMNA
Se utilizan columnas de vidrio rellenas de Almina (Al2O3), Slica u Oxido de
Magnesio. La fase estacionaria esta constituida por un slido poroso, el cual queda
soportado en el interior de una columna generalmente fabricada en plstico o vidrio.
La fase mvil se encuentra formada por la solucin que lentamente va atravesando la
fase estacionaria.
La solucin que sale al final de la columna se reemplaza constantemente por nueva
solucin que se suministra desde un contenedor por la parte superior de la columna.
La migracin de las sustancias de la mezcla a travs de la columna se encuentra
retardada en diferente grado por las interacciones diferenciales que cada una de ellas
pueda ejercer con la fase estacionaria.
Las sustancias se separan gradualmente formando bandas dentro de la banda total, la
separacin, y por tanto la resolucin, aumenta con la longitud de la columna.
La banda individual de cada sustancia puede ensancharse con el tiempo debido a
procesos difusinales, disminuyendo por tanto la resolucin.

CROMATOGRAFA DE GASES.
Se utiliza para la separacin de sustancias gaseosas. La Fase Mvil es un Gas
(llamado Gas Portador) y la Fase Estacionaria puede ser un slido (Cromatografa
Gas-Slido) o una Pelcula de lquido de alto punto de ebullicin (Generalmente
Polietiln-Glicol o Silicn) recubriendo un slido inerte (Cromatografa Gas-Lquido).
El cromatgrafo de gases esta constituido normalmente por un suministro y una
entrada del gas portador, un puerto de inyeccin, una columna normalmente localizada
en el interior de una cmara termostatizada (horno), un detector y un sistema
computarizado para analizar, registrar e imprimir el cromatgrama.

La muestra se introduce a travs del sistema de inyeccin dentro de la columna que es

el sitio donde ocurre la separacin. La columna de aluminio, acero inoxidable, vidrio o
tefln contiene la fase estacionaria slida o lquida y esta sujeta a la superficie por un
soporte que es generalmente de slice.
La fase mvil o gas portador transporta los componentes de la muestra a travs de la
columna, por esta razn debe ser inerte para evitar interacciones con la muestra o la
fase estacionaria, y ser capaz de minimizar la difusin gaseosa.
Al final de la columna existe el detector que permite la deteccin y cuantificacin de las
sustancias, midiendo conductividad trmica y electronegatividad de las sustancias
eludas. Se produce una seal tipo elctrico, que posteriormente se amplifica por un
registrador grafico o un integrador permitiendo indicar el momento en que salen de la
columna los componentes. La salida de la sustancia se registra en un cromatgrama
en forma de picos y se determinan medidas como la altura y el rea del pico.

CROMATOGRAFA LIQUIDA DE ALTA EFICIENCIA O RENDIMIENTO (HPLC)

Es una Cromatografa de alta presin es decir se aplica el flujo a presin (entre 1500
a 2200 psi). El tamao de partcula es entre 3 y 10 micras, la longitud de la columna es
entre 5 y 25 cm. y requiere de equipo sofisticado. Se pueden analizar muestras
proteicas.
La reduccin del tiempo en que la sustancia se encuentra en el interior de la columna,
limita el ensanchamiento por difusin de las bandas, aumentando por tanto la
resolucin.
El sistema HPLC requiere una mezcladora de solventes, un inyector, y una bomba que
inyecte el lquido a la columna. Generalmente las columnas de slica requieren alta
presin para que el flujo de lquido sea adecuado, la mezcladora se requiere para

variar la proporcin de solvente en la fase mvil y el inyector permite la aplicacin de

la muestra.
A la salida de la columna se coloca un detector generalmente de absorcin
ultravioleta o de fluorescencia y si se desea recuperar las molculas que eluyen de la
columna, se requiere un colector.
En los sistemas modernos el anlisis de la informacin obtenida se realizan mediante
una computadora acoplada al equipo; lo que permite estandarizar la cromatografa,
identificar la naturaleza los picos eludos y cuantificar su contenido. Los picos se
relacionan segn su "tiempo de retencin" con estndares, que permiten identificar los
aminocidos presentes en la mezcla. La cantidad relativa de cada uno de ellos se
determina calculando el rea la curva del pico correspondiente.

CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIO INICO

La Fase Estacionaria es una resina de intercambio inico que contiene grupos
cargados, teniendo la propiedad de separar especies ionizadas (Cationes o Aniones); la
Fase Mvil es generalmente una solucin amortiguadora de pH. En protenas la
cromatografa de intercambio inico se basa en las diferencias en signo y magnitud de
la carga elctrica neta de las protenas a un valor de pH determinado. La afinidad de
cada protena a los grupos cargados de la columna esta influenciada por el pH y por la
concentracin de iones en solucin (concentracin salina) que compiten con la
protena en la interaccin con la matriz. La separacin de la protena de la matriz
cargada puede obtenerse gradualmente cambiando el pH y/o la concentracin salina
de la fase mvil, de tal forma que se genere un gradiente de concentracin.

CROMATOGRAFA POR PERMEABILIDAD EN GEL

Es til para la separacin de protenas. La Cromatografa de exclusin molecular,
tambin llamada de filtracin en gel, separa en funcin de su tamao. La matriz de la
columna esta formada por un polmero entrecruzado con poros de tamaos
determinados. Las protenas de mayor tamao migran ms deprisa a lo largo de la
columna que las de pequeo tamao, debido a que son demasiado grandes para
introducirse en los poros de las bolas de polmero y por tanto siguen una ruta ms
corta y directa a lo largo de la longitud de la columna. Las protenas de menor tamao,
entran en los poros y su marcha a lo largo de la columna es ms lenta.

CROMATOGRAFA DE AFINIDAD
La Cromatografa de Afinidad permite la separacin de mezclas proteicas por su
afinidad o capacidad de unin a un determinado ligando. En este caso, las protenas
que se retienen en la columna son aquellas que se unen especficamente a un ligando

que previamente se ha unido covalentemente a la matriz de la columna. Despus de que

las protenas que no se unen al ligando son lavadas o eluidas a travs de la columna, la
protena de inters que ha quedado retenida en la columna se eluye o libera mediante el
empleo de una solucin que contiene bien ligando libre u otro compuesto que rompa la
interaccin entre el ligando y la protena.

Cromatografa de afinidad
Se trata de un tipo especial de cromatografa de adsorcin slido-lquido en la que
la sustancia de naturaleza bioqumica (anticuerpos, cofactores, inhibidores
enzimticos, lectinas y otras molculas) denominadas ligandos de afinidad y enlazados
qumicamente en soportes slidos adecuados, retienen a los solutos (analitos), tambin
de naturaleza bioqumica, de manera reversible y selectiva. Las separaciones se basan
en el acoplamiento llave-cerradura tpico de la biologa molecular.
Fundamento de la cromatografa de afinidad
En la figura se muestra de forma esquemtica el fundamento de las separaciones
mediante cromatografa de afinidad. Un volumen no excesivamente grande de muestra
de naturaleza biolgica se introduce en la columna que contienen un soporte
polimrico inerte que retienen a la sustancia activa enlazado covalentemente y que se
denomina ligando de afinidad. Slo existe interaccin especfica entre este ligando y un
soluto-analito (protena) de la muestra insertada que queda retenido (adsorbido). Se
procede a la elucin de los dems componentes de la muestra mediante una primera
fase mvil que no influye en el acoplamiento. A continuacin se introduce una nueva
fase movil que desactiva el acoplamiento por alteracin reversible de los sitios activos
del inhibidor-ligando, del soluto (protena) o de ambos; generalmente se utiliza un
cambio de pH que modifica las caractersticas de los sitios activos; se eluye as el
soluto de inters. Una vez finalizada la separacin, se procede a la regeneracin de la
columna, lo que generalmente se hace mediante el empleo de la primera fase mvil y
constituye una etapa rpida.
La cromatografa de afinidad tiene una serie de caractersticas generales que la
distinguen de otros tipos de cromatografa lquidas

Alta selectividad en el mecanismo de retencin

Campo de aplicacin restringido
Separacin de un solo soluto analito
Empleo de sistema de baja presin
Columnas cortas de escasa eficacia cromatogrfica
Ligandos de afinidad

Son las molculas bioqumicas que se encuentran ancladas qumicamente sobre el

soporte slido inerte, y son las responsables de la adsorcin especfica de los solutosanalitos. Pueden considerarse dos clasificaciones de los mismos: Segn su naturaleza,
pueden ser macromolculas biolgicas o bien moleculas de bajo peso molecular de
biomolculas pequeas o macromolculas bioqumicas, respectivamente. Y segn su
actuacin. Que se fundamenta en la selectividad en la retencin que condiciona las
caractersticas de la cromatografa de afinidad; se distinguen dos grandes grupos:
Ligandos especficos , como los anticuerpos , que se enlazan reversiblemente a un solo
soluto, y los ligandos generales enlazados con un determinado grupo de compuestos
bioqumicos, como las lectinas y nucletidos.

Esquema de un cromatograma de afinidad.

Soportes
El material sobre cuya superficie activada se establece el enlace covalente con el
ligando de afinidad. Debe poseer propiedades como tener una gran superficie, tamao
del grano controlable, porosidad controlable, carcter suficientemente hidroflico para
evitar adsorciones no especficas de protenas u otras molculas, estabilidad mecnica,
en especial para trabajar a alta presin. El material utilizado generalmente para el
soporte son geles orgnicos derivados de los polisacridos como la agarosa
(sepharosa), polmeros de acrilamida, fractogel TSK y slices CPG.
Inmovilizacin de ligandos
La inmovilizacin de los ligandos de afinidad es un proceso complejo que en cada caso
tiene connotaciones especficas.
El general, los ligandos de afinidad se inmovilizan mediante el establecimiento de
enlaces qumicos covalente con el soporte slido activado y un grupo reactivo del
ligando que est lo ms lejos posible de la zona activa de bioadsorcin.
El objetivo de la inmovilizacin consiste en obtener una capa estable y densa del
ligando bioqumico que conserve su actividad especfica con plenitud.
La inmovizacin del ligando de afinidad se realiza en general mediante dos etapas
secuenciales:
- Activacin del soporte, que consiste en el ataque qumico con diferentes reactivos de
la superficie de los soportes antes mencionados, que se caracterizan por poseer grupos
hidroxilos superficiales. De la gran variedad de procedimientos el ms comn es el
ataque con bromuro de ciangeno sobre la matriz de polisacrido. Segn el pito de
matriz se originan grupos diferentes: steres cianato en agarosa e imidocarbonatos en
dextranos, segn reacciones uno o dos grupos hidroxilos de la matriz. Esta etapa
produce en un disolvente orgnico o en mezclas con agua. Luego sigue el anclaje
qumico del ligando que se da mediante la reaccin de grupos amino del mismo,
fundamentalmente con el soporte activado.

Metodos de elusin
Segn la naturaleza de los ligandos de afinidad y la de los solutos-analitos, y teniendo
en cuanta la forma de eliminar los solutos de la columna, cave distinguir los
procedimientos generales de elucin como:
Elucin bioespecfica: La fase mvil desplazante contiene a un modificador
(generalmente llamado inhibidor) que en realidad se trata de un ligando de afinidad no
ligado de bajo peso molecular que interacciona con el sitio activo de la macromolcula
biolgica que puede ser soluto-analito o bien el ligando de afinidad para solutos de
bajo peso molecular, producindose en todos los casos una elucin por desplazamiento
o competencia entre los componentes de bajo peso molecular ligados o no, con el sitio
activo de la macromolcula biolgica ligada o libre. Se distinguen 2 tipos de elucin
bioespecfica la normal y la invertida.
La elucin normal se basa en la interaccin inhibidor-analito, que es la situacin ms
frecuente. El analito es una biosustancia macromolecular que es retenida por un
ligando de afinidad de bajo peso molecular, y eluida con un inhibidor que es tambin
de bajo peso molecular y que tiene preferencia por el sitio activo del analito, por lo que
es retirada del slido y eluida. Ejemplo, la purificacin de la lectina.
La elucin invertida, se basa en la interaccin inhibidor-ligando de afinidad. El cual
es una biomacromolcula que retienen especficamente el analito.
La presencia del inhibidor en la fase mvil provoca un desplazamiento anlogo al
anterior y se eluye el analito. Se usa lectina para purificar glucoprotena.
En la elucin no bioespecfica, la fase mvil provoca la denaturacin del ligando
inmovilizado, del soluto-analito o de ambos mediante el cambio suave y reversible de
los correspondientes sitios activo, de tal manera que se interrumpe la adsorcin
bioespecfica mediante eliminacin de una o varias de las causas que la provocan.

BIBLIOGRAFIA:

Linda Amrica Serrano Falcon. Apuntes qumica cromatografa [En lnea]

Sitio de estudiantes y docentes universitarios Copyright 1999-2001
<http://www.lafacu.com/apuntes/quimica/cromatografia/default/.htm.

Victoria Kennedy. RN, A,D.AM editorial. Definicin de cromatografa [En

lnea] Actualizado 13 agosto 3003. .>[Consulta: 14 agosto.2003
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/arrticle/002325.htm
http://www.ub.es/biodel/wbc/tecnicas/cromatografia.htm

Servicios tcnicos de Investigacin. Cromatografa de alto rendimiento. [En

lnea] Universidad de Alicante. Ultima actualizacin 1 oct 1996
<http://www.ua.es/es/investigacin/sti/cliq.htm .>[Consulta: 9 agosto.2003