INSTITUTO POLITCNICO NACIONAL

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

Oxidacin de Azufre y de ion

Ferroso por Bacterias
Quimiolitotrficas.

Equipo 8
Seccin 2
6QM1
Alumnos:
Aurelio Lomeli
Jeanette
Garnica Vergara
Carlos Eduardo
Gonzlez Judd Pablo
Miguel
Lpez Villalva
Eduardo
Terroba Escalante
Paulina

Rubro
Hiptesis y diseo
experimental
Objetivos
Registro de datos
Manejo de datos
Discusin de
resultados
Conclusiones
Bibliografa
Total

Profres.
QBP. Odilia Garca Aquino
QBP. Susana Alfaro Aguilar
16 de Abril de 2013

Valo Calificaci
r
n
3%
1%
3%
4%
5%
3%
1%

Prctica. Oxidacin de azufre y de ion ferroso por bacterias quimiolitotrficas.

Hiptesis
Dado que Thiobacillus thiooxidans es una bacteria quimiolitotrfica oxidante del azufre
(sulfuro oxidante) que transforma el azufre en cido sulfrico, y que crece mejor en un
medio acido (pH 2.0-6.0) [1].
Si se coloca a Thiobacillus thiooxidans en un medio donde hay 500 mg de azufre como
sustrato, y condiciones de agitacin que favorezcan el contacto bacteria-azufre-oxgeno
ENTONCES se encontrar tras un periodo de incubacin que una parte de ese azufre
elemental ha sido transformado en cido sulfrico (detectable como acidez titulable y
sulfatos precipitables)
Por el contrario en un medio incubado estacionariamente donde no se vea favorecido el
contacto bacteria-azufre-oxgeno, se encontrarn pocas cantidades de productos
oxidados del azufre.
Diseo experimental.
Se determin la oxidacin de azufre y del in ferroso por bacterias quimiolitotrficas,
inoculando tres medios de cultivo con diferentes fuentes de energa, en condiciones de
agitacin y en cultivos estacionarios, comparndolos con los testigos correspondientes,
los cuales no contenan el inoculo de las bacterias quimiolitotrficas, ya que la oxidacin o
productos que se obtuvieran serian por la oxidacin abitica de los compuestos. Se
determin el azufre residual para que, indirectamente, el clculo del azufre utilizado por un
cultivo de bacteria quimiolitotrfa Thiobacillus thiooxidans as como su acidez, ya que se
sabe que en el ciclo de estas bacterias, existe produccin de sulfatos y sulfitos [1], que en
medio acuoso dar cido sulfrico y la determinacin de azufre a sulfatos, en un medio
que contena azufre elemental como fuente de energa.
Se determin el tiosulfato residual de la bacteria quimiolitotrfa Thiobacillus thioparus en
un medio que contena tiosulfato de fierro como fuente de energa, as como la acidez
titulable y el pH.
Se determin la oxidacin del in ferroso en un medio de cultivo que estaba inoculado
con la bacteria quimiolitotrfa Thiobacillus ferrooxidans, y el cual tena como fuente de
energa sulfato ferroso.
Todos los cultivos se compararon con los testigos correspondientes, los cuales no
contenan el inoculo de la bacteria correspondiente, igualmente se encontraban en
condiciones de agitacin, as como estacionarios.
Los fundamentos de las determinaciones realizadas fueron:
ACIDEZ TITULABLE (Formacin de cido sulfrico por actividad bacteriana) Mtodo:
valoracin cido-base (reaccin de neutralizacin). Se basa en la titulacin del cido, en
este caso H2SO4, presente en la muestra, utilizando una solucin valorada de NaOH,
hasta alcanzar el equilibrio qumico de la reaccin. El punto final de la neutralizacin

estequiomtrica se pone de manifiesto con el cambio en la coloracin de la fenolftalena al

pH ms cercano al punto de equivalencia. [2].
DETERMINACIN DE AZUFRE DE SULFATOS.- Mtodo: reaccin de precipitacin. La
formacin de BaSO4 (precipitado), es una prueba comn en la determinacin del in
sulfato (SO4=). El mtodo consiste en la generacin de un precipitado mediante la
siguiente reaccin:
SO4= + BaCl2 BaSO4 (pp) + 2ClEl precipitado es adems insoluble en la presencia de HCl, lo que favorece la separacin
del in SO4=, si en la muestra se encuentra CO3=, PO4=, CrO4= o anlogos. . {2].
TIOSULFATO RESIDUAL.- Mtodo: Yodimetra (mtodo directo). Este mtodo utiliza
como agente oxidante una solucin valorada de yodo, pudindose entonces titular el in
tiosulfato presente en la muestra, mediante la siguiente reaccin:
I2 + S2O3= 2I- + S4O6=
El punto final de la reaccin se detecta utilizando una solucin acuosa de almidn (amilosa). La cadena helicoidal de -amilosa absorbe el primer volumen de yodo en
exceso, por lo que la solucin se torna de color azul [2].
DETERMINACIN DEL IN FERROSO.- Mtodo: de Zimmermann-Reinhardt
-permanganometra-. Requisitos: la titulacin debe llevarse a cabo en fro, para evitar la
oxidacin del in ferroso en condiciones atmosfricas. La valoracin con KMnO 4 debe ser
lenta y la adicin de cada gota de valorante es seguida de una agitacin intensa. [2]
Esto mediante los reactivos siguientes:
H2SO4 (acondicionamiento del medio).- produce la reduccin de Mn 7+ a Mn2+. La cantidad
debe ser tal que se evite la reduccin parcial. [3]
MnO4 MnO2
o bien que haya incertidumbre en el punto final.
H3PO4.- forma un complejo (Fe (PO4)2=) con el in frrico, presente en la muestra, que
permite la deteccin del punto final. Al eliminar el in frrico, aumenta el poder reductor
del ferroso, coadyuvando su oxidacin total por la accin de MnO4. [2]
MnO4.- bloquea el poder de oxidacin del hierro sobre Cl-.
La reaccin en la titulacin es la siguiente:
5Fe2+ + MnO4- + 8H+ Mn2+ + 5Fe3+ +

4H2O

DETERMINACIN DE pH.- Se utiliz un potencimetro.

El electrodo de vidrio se basa en una propiedad singular de una fina membrana de un
vidrio especial, que hace que se establezca un potencial a travs de la membrana cuando
ambos lados de la misma se hallan en contacto con disoluciones en las que las

concentraciones de iones hidrgeno son diferentes. Durante su utilizacin, todo el

electrodo se sumerge en la disolucin de pH desconocido y as la membrana se halla en
contacto con dos disoluciones, una de pH conocido y otro desconocido. La disposicin es
tal que la diferencia de potencial medida por el voltmetro se debe solamente a la
diferencia de las concentraciones de ion hidrgeno en las dos disoluciones. [2]
Objetivo general.
Cuantificar los productos procedentes del metabolismo de los microorganismos
quimiolittrofos.
Determinar si existe alguna diferencia en la actividad metablica de los
microorganismos quimiolittrofos al colocarlos en condiciones de alta aireacin y
superficie de contacto (cultivo agitado) y un cultivo estacionario.
Objetivos particulares.

Comprobar que Thiobacillus thiooxidans oxida al azufre a sulfatos y acidifica el

medio por la formacin de cido sulfrico.

Analizar la oxidacin del tiosulfato por Thiobacillus thioparus a travs de la

acidificacin del medio.

Estudiar la necesidad de Thiobacillus ferrooxidans de un medio cido para la

oxidacin del in ferroso a in frrico, y que estas condiciones favorecen su
desarrollo.

Corroborar la necesidad de las bacterias quimiolitotrficas de oxgeno como ltimo

aceptor de electrones para su crecimiento.

Registro de datos
Microorganism
os cultivados

Cultivos

Agitados
Estacionario
Con inoculo
Sin inoculo
Con inoculo
Thiobacillus thiooxidans
Medio de cultivo A
1.- Azufre residual
a) mg de papel
0.8411
0.8373
0.8408
b) mg de papel + muestra
1.3623
1.3389
1.3372
2.- Acidez titulable
a) Volumen total
40
42
45
(mL)
b) Gasto de NaOH/alcuota (mL)
7.05
1.35
1.6
3.- Azufre de sulfato formado
a) Alcuota para
0.2
1
1
determinacin
(mL)
b) Absorbancia obtenida
0.393
0
0.037
4.- pH
1.7
4.3
3.6
Thiobacillus thioparus
Medio de cultivo B
1.- Tiosulfato residual
a) Volumen total
44
43.5
43.5
(mL)
b) Gasto de yodo/alcuota
0.1
11.5
1.2
2.- Acidez titulable
a) Gasto de
8.6
1.8
3
NaOH/alcuota
(mL)
3.- pH
1.21
5.24
2.11
Thiobacillus ferrooxidans
Medio de cultivo C
1.- In ferroso
a) Volumen total
45
40
44
(mL)

Sin inoculo

0.8548
1.3627
40
1.5
1
0
4.7
39
13.4
1.8
5.74
48

b) Gasto de KMnO4
3.1
15.5
9.2
15.7
2.- pH
1.37
1.94
1.83
1.8
Tabla 1. Determinacin indirecta del crecimiento de bacterias quimiolitotrfos en
condiciones de agitacin y estacionarias.

Thiobacillus thiooxidans Medio de cultivo A

1.- Azufre utilizado (mg)

Se obtiene mediante un mtodo gravimtrico, obteniendo las diferencias entre los pesos
de los papeles y el peso de los papeles despus del filtrado.
Utilizando los datos obtenidos se tiene que:
Cultivos

mg de papel
mg de papel +
muestra
mg de azufre
(diferencia)

Agitados
Con
Sin
inoculo
inoculo
841.1
837.3

Estacionario
Con
Sin
inoculo
inoculo
840.8
854.8

1362.3

1338.9

1337.2

1362.7

521.2

501.6

496.4

507.9

Los mg de azufre utilizado se calculan al restar los mg de azufre de los cultivos sin inoculo
a los mg de azufre con inoculo. Para los tratamientos en agitacin e tiene que:

mg de azufre utilizado=mg de azufre ( c /i)mg de azufre (s /i)

mg de azufre utilizado=512.1501.6
mg de azufre utilizado=10.5
Para los tratamientos estacionarios se obtiene que:

mg de azufre utilizado=496.4507.9
mg de azufre utili zado=11.5=0
2.- H2SO4 formado (mg)
Los mg de H2SO4 formados se determinaron por medio de una titulacin cido base, por lo
que el clculo de mg de H2SO4 se obtiene con la siguiente frmula:

mg H 2 SO 4=
Donde:

V T N NaOH Gatsto de NaOHPmeq H SO

Alcuota
2

VT = Volumen total obtenido

N NaOH= normalidad del hidrxido de sodio (0.1 N)
Gasto de NaOH= mL de NaOH utilizados para la titulacin
Pmeq= Peso miliequivalente del H2SO4 = 46
Alcuota= alcuota de muestra titulada
Para el tratamiento agitado con inoculo se tiene:

mg H 2 SO 4=

400.17.0546
5

mg H 2 SO 4=259.44
Se obtienen los siguientes resultados de todos los tratamientos:
Cultivos
Agitados
Con
Sin
inoculo
inoculo
259.44
52.164

mg de H2SO4

Estacionario
Con
Sin
inoculo
inoculo
66.24
55.2

Para obtener los mg de H2SO4 formado se debe de tomar en cuenta los mg de H 2SO4
formados en los tratamientos sin inoculo. Para el tratamiento con agitacin se tiene:

mg H 2 SO 4 formados=mg H 2 SO 4 con onoculomg H 2 SO 4 sin inoculo

mg H 2 SO 4=259.4452.164
mg H 2 SO 4=207.276
Para el tratamiento en condiciones estacionarias se obtiene:

mg H 2 SO 4=66.2455.2
mg H 2 SO 4=11.04
Los resultados se presentan en la siguiente tabla:

Agitados
mg de H2SO4
formados
3.- Azufre de sulfato formado (mg)

207.76

Cultivos
Estacionario
11.04

La determinacin de S de SO4 se llevo a cabo mediante la obtencin de valores de

absorbancia, obteniendo las concentraciones mediante la realizacin de una curva tipo de
S de SO4.

Valores para la realizacin de la curva tipo de S de SO4:

g de S de
SO4
0
24
72
120
168
192
216
240

Absorbancia a 445
nm
0
0.012
0.123
0.215
0.28
0.33
0.382
0.458

0.5
0.45
0.4
0.35
0.3
Absorbancia a 445 nm

f(x) = 0x - 0.02

0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0

50

100

150

g de S de SO4

Fig.1 Curva tipo de S de SO42+

De la curva tipo se obtiene la siguiente ecuacin:

y=0.0019 x0.0166
De esta ecuacin se despeja x:

200

250

x=

y+ 0.0166
0.0019

Donde
x = g de S de SO4
y= absorbancia obtenida.
Para el tratamiento en agitacin con inoculo se tiene que:

g de S de SO4=

0.393+0.0166
0.0019

g de S de SO 4=215.57
Para este tratamiento se debe de tomar en cuenta que la alcuota tomada fue de 0.2 mL
por lo que al resultado de g de S de SO 4 se debe de multiplicar por el inverso de la
alcuota. Para el tratamiento en agitacin y con inoculo se obtiene:

g de S de SO 4=

215.571
0.2
g de S de SO 4=1077.85
mg de S de SO 4=1.077

Para el tratamiento en condiciones estacionarias con inoculo se tiene que:

g de S de SO 4=

0.037+ 0.0166
0.0019

g de S de SO 4=28.21
mg de S de SO 4=0.02821
Para los tratamientos sin inoculo de ambas condiciones (agitados y estacionarios) el valor
de absorbancia obtenida es igual a 0, por lo que las concentraciones de g de S de SO 4
es igual a 0.
Los resultados se presentan en la siguiente tabla:

Agitados
S de SO4 formado
(mg)

1.077

Thiobacillus thioparus Medio de cultivo B

Cultivos
Estacionario
0.02821

1.- Tiosulfato residual.

Los mg de tiosulfato residual se determino mediante una titulacin, por lo que el clculo
de mg de tiosulfato residual se obtiene con la siguiente frmula:

mg S 2 O3=

V T NGatsto de sol de IPmeq S O

Alcuota
2

Donde:
VT = Volumen total obtenido
N = normalidad de la solucin de yodo (0.01 N)
Gasto de la sol. de yodo= mL de sol. de yodo utilizados para la titulacin
Pmeq= Peso miliequivalente del S2O3= 112
Alcuota= alcuota de muestra titulada (5 mL)
Para el tratamiento con inoculo agitado se tiene:

mg S 2 O3=

440.010.1112
5

mg S 2 O3=0.9856

Se obtienen los siguientes resultados de todos los tratamientos:

Cultivos
Agitados
Con
Sin
inoculo
inoculo
mg de Tiosulfato
residual

0.9856

112.056

Estacionario
Con
Sin
inoculo
inoculo
11.69

117.06

Para obtener los mg de tiosulfato oxidado se debe de tener en cuenta que los medios se
prepararon con Na2S2O3, por lo que se debe de calcular un factor gravimtrico que nos
permita el calcular solamente el tiosulfato oxidado.
Para el clculo del factor gravimtrico se debe de tomar en cuenta la forma de
preparacin del medio. Se disolvieron 5 g de Na 2S2O3 en 1 L de agua, y cada matraz
contena 50 mL de esta solucin, por lo tanto:
5 g Na2S2O3 ---------- 1000 mL
X g Na2S2O3 -------- 50 mL
X g = 0.25 g de Na2S2O3
Se utilizan los pesos moleculares de Na2S2O3 y de S2O3 para poder calcular el contenido
neto de S2O3.

P. M. Na2S2O3 = 158 g/mol

P. M. S2O3 = 112 g/mol
Si se tienen 0.25 g de Na2S2O3 con un peso molecular de 158 g/mol, cuantos gramos se
tienen de S2O3 si su peso molecular es de 112 g/mol:
0.25 g Na2S2O3 ---------- 158 g/mol
x g S2O3 ---------- 112 g/ mol
x g = 0.177 g de S2O3
x g = 177 mg de 2O3
Para calcular la cantidad de tiosulfato oxidado de cada tratamiento se debe de obtener la
diferencia entre el tiosulfato inicial en cada tratamiento y el tiosulfato residual de cada
tratamiento.
Para el tratamiento agitado con inoculo se tiene:

mg S 2 O3 oxidado=mg S 2 O3 inicialmg S2 O 3 residual

mg S 2 O3 oxidado=1770.9856
mg S 2 O3 oxidado=176.01

Se obtienen los siguientes resultados de todos los tratamientos:

Cultivos

mg de Tiosulfato
oxidado

Agitados
Con
Sin
inoculo
inoculo

Estacionario
Con
Sin
inoculo
inoculo

176.01

165.31

64.94

59.94

Para obtener los mg de tiosulfato oxidado se debe de tomar en cuenta los mg de tiosulfato
oxidado en los tratamientos sin inoculo. Para el tratamiento con agitacin se tiene:

mg S 2 O3 oxidado=mg S 2 O3 con inoculomg S2 O3 sin inoculo

mg S 2 O3 oxidado=176.0164.94
mg S 2 O3 oxidado=111.07
Para el tratamiento en condiciones estacionarias se obtiene:

mg S 2 O3 oxidado=165.3159.94

mg S 2 O3 oxidado=105.37
Los resultados se presentan en la siguiente tabla:

Agitados
mg de Tiosulfato
oxidado

Cultivos
Estacionario

111.07

105.37

2.- H2SO4 formado (mg)

Los mg de H2SO4 formados se determinaron por medio de una titulacin cido base, por lo
que el clculo de mg de H2SO4 se obtiene con la siguiente frmula:

mg H 2 SO 4=

V T N NaOH Gatsto de NaOHPmeq H SO

2

Alcuota

Donde:
VT = Volumen total obtenido
N NaOH= normalidad del hidrxido de sodio (0.1 N)
Gasto de NaOH= mL de NaOH utilizados para la titulacin
Pmeq= Peso miliequivalente del H2SO4 = 46
Alcuota= alcuota de muestra titulada

Para el tratamiento agitado con inoculo se tiene:

mg H 2 SO 4=

440.18.646
5

mg H 2 SO 4=348.128
Se obtienen los siguientes resultados de todos los tratamientos:
Cultivos

mg de H2SO4

Agitados
Con
Sin
inoculo
inoculo
348.128
72.036

Estacionario
Con
Sin
inoculo
inoculo
120.06
64.584

Para obtener los mg de H2SO4 formado se debe de tomar en cuenta los mg de H 2SO4
formados en los tratamientos sin inoculo. Para el tratamiento con agitacin se tiene:

mg H 2 SO 4 formados=mg H 2 SO 4 con inoculomg H 2 SO 4 sin inoculo

mg H 2 SO 4=348.12872.036
mg H 2 SO 4=276.092
Para el tratamiento en condiciones estacionarias se obtiene:

mg H 2 SO 4=120.0664.584
mg H 2 SO 4=55.476
Los resultados se presentan en la siguiente tabla:
Cultivos
Estacionario

Agitados
mg de H2SO4
formados

276.092

55.476

Thiobacillus ferrooxidans Medio de cultivo C

1.- In frrico.
Los mg de in frrico formado se determino mediante una titulacin con KMnO 4, por lo
que el clculo de mg de in frrico se obtiene con la siguiente frmula:

mg Fe=

V TN KMnO Gatsto de KMn O4Pmeq KMnO

Alcuota
4

Donde:
VT = Volumen total obtenido
NKMnO4 = normalidad del KMnO4 (0.1N)
Gasto de KMnO4= mL de KMnO4 utilizados para la titulacin
Pmeq= Peso miliequivalente del Fe= 56
Alcuota= alcuota de muestra titulada (10 mL)
Para el tratamiento con inoculo agitado se tiene:

mg Fe=

450.13.156
10

mg Fe=78.12
Se obtienen los siguientes resultados de todos los tratamientos:
Cultivos
Agitados

Estacionario

Con
inoculo
78.12

mg de Fe

Sin
inoculo
347.2

Con
inoculo
226.688

Sin
inoculo
422.016

Para obtener los mg de Fe formado se debe de tener en cuenta que los medios se
prepararon con FeSO4*7H2O, por lo que se debe de calcular un factor gravimtrico que
nos permita el calcular solamente el ion Fe.
Para el clculo del factor gravimtrico se debe de tomar en cuenta la forma de
preparacin del medio. Se disolvieron 42 g de FeSO4*7H2O en 1 L de agua, y cada matraz
contena 50 mL de esta solucin, por lo tanto:
42 g FeSO4*7H2O ---------- 1000 mL
X g FeSO4*7H2O -------- 50 mL
X g = 2.1 g de FeSO4*7H2O
Se utilizan los pesos moleculares de FeSO4*7H2O y de Fe para poder calcular el contenido
neto de Fe.
P. M. FeSO4*7H2O = 278 g/mol
P. M. Fe= 56 g/mol
Si se tienen 2.1 g de FeSO 4*7H2O con un peso molecular de 278 g/mol, cuantos gramos
se tienen de Fe si su peso molecular es de 55 g/mol:
2.1 g FeSO4*7H2O ---------- 278 g/mol
x g Fe ---------- 56 g/ mol
x g = 0.423 g de Fe
x g = 423 mg de Fe
Para calcular la cantidad de Fe de cada tratamiento se debe de obtener la diferencia entre
el Fe inicial en cada tratamiento y el Fe residual de cada tratamiento.
Para el tratamiento agitado con inoculo se tiene:

mg Fe formado=mgFe inicialmg Fe residual

mg Fe formado=42378.12
mg Fe formado=344.88
Se obtienen los siguientes resultados de todos los tratamientos:

mg de Fe formado

Cultivos
Agitados
Estacionario
Con
Sin
Con
Sin
inoculo
inoculo
inoculo
inoculo
344.88
78.5
196.312
0.984

Para obtener los mg de Fe formado se debe de tomar en cuenta los mg de Fe formado en

los tratamientos sin inoculo. Para el tratamiento con agitacin se tiene:

mg Fe formado=mgFe coninoculomg Fe sin inoculo

mg Fe formado=344.8878.5
mg Fe formado=266.38
Para el tratamiento en condiciones estacionarias se obtiene:

mg Fe formado=196.3120.984
mg Fe formado=195.328
Los resultados se presentan en la siguiente tabla:

mg de Fe formado

Agitados
266.38

Cultivos
Estacionario
195.328

Se muestran los datos de todos los clculos en la siguiente tabla:

Tabla 3. Productos oxidados y sustratos consumidos por bacterias quimiolitotrfas
en diferentes condiciones de cultivo.
Cultivos
Resultados obtenidos
Agitados
Estacionario
Cultivo de Thiobacillus thiooxidans en azufre elemental
(medio A)
1.- Azufre Utilizado (mg)
10.5
0
2.- H2SO4 formado (mg)
207.76
11.04
3.- S deSO4 formado (mg)
1.077
0.028
4.- pH
1.7-4.3
3.6-4.7
Cultivo de Thiobacillus thioparus en tiosulfato (medio B)
1.- Tiosalfato oxidado (mg)
111.07
105.37
2.- H2SO4 formado (mg)
276.09
55.47
3.- pH
1.21-5.24
2.11-5.74
Cultivo de Thiobacillus ferrooxidans en in ferroso (medio
C)
1.- In frrico formado (mg)
266.38
195.32
2.- pH
1.37-1.94
1.83.1.8

Discusin de resultados.

La variable analizada en los experimentos es la agitacin de uno de los medios y el hecho

de que el otro estuviera en condiciones estacionarias. El microorganismo utilizado y las
dems condiciones de cultivo, adems del medio utilizado fue el mismo.
Lo que se realiz fue determinar indirectamente el crecimiento de los microorganismos
quimiolittrofos mediante la estimacin de los sustratos residuales o de los productos
oxidados.
Se montaron de igual forma matraces de los medios estacionarios y agitados pero sin
inoculo, esto con el fin de obtener la cantidad de productos oxidados solo por los
microorganismos, ya que la oxidacin abitica de las formas de azufre reducido puede
ocurrir en forma espontnea pero es un proceso muy lento. [11]
Por lo cual se resto la cantidad de productos oxidados y sustratos residuales obtenidos en
los matraces sin inoculo a los inoculados en tratamientos iguales, es decir: agitados o
estacionarios.
Se determin el crecimiento de Thiobacillus thiooxidans, el cual es un microorganismo
quimiolitotrfo, perteneciente a las bacterias oxidadoras del azufre, por lo tanto va a
utilizar al azufre elemental que estaba en el medio como un donador de electrones,
oxidndolo hasta sulfatos, estos sulfatos al ionizarse se transforman en cido sulfrico. [3]

Tambin es importante sealar que este microorganismo es auttrofo y aerobio estricto

por lo que utiliza como fuente nica de carbono al CO2 y utiliza al O2 como aceptor final de
electrones. [4]
El medio A en donde se inoculo a este microorganismo, es un medio mineral, adicionado
de azufre elemental (como donador de electrones) y tiene un pH inicial de 4.5 para
favorecer el desarrollo de este microorganismo acidoflico, que se desarrolla mejor en
medios con pH de 2-6. [4] [11]
De acuerdo con los resultados obtenidos, se observ que como productos formados
tenemos la presencia de cido sulfrico, el cual baja el pH del medio de uno inicial 4.5, a
1.7 en el caso del medio en condiciones de agitacin y pH de 3.6 estacionario. Esta
disminucin demuestra efectivamente el crecimiento de este microorganismo. Al igual que
la produccin de S de SO42+.
Obtuvimos valores de azufre utilizado de cero al realizar los clculos, esto no quiere decir
que el experimento haya estado mal, que el medio o el microorganismos estuvieran mal,
estos resultados se debieron a que al inocular los matraces con el microorganismo se
coloc una alcuota, para lo cual sta fue tomada del medio en donde se haba crecido a
Thiobacillus thiooxidans, ya que no fue conveniente filtrar el medio para tratar de retirar la
mayor cantidad de azufre que se encontrara, debido a que muchos microorganismos se
encuentran adheridos a las partculas de azufre y el inoculo hubiera sido menor. Por lo
cual el azufre residual al final del experimento fue mayor que la cantidad de azufre
colocada, debido a que en la alcuota que se utiliz para inocular los matraces, no solo iba
el microorganismo, sino tambin trazas de azufre.

Adems de que la tcnica empleada para obtener el azufre residual, que fue gravimtrica,
no es especfica, es decir, los resultados estn influidos por varios factores, como lo
pueden ser: la sensibilidad de la balanza analtica, el hecho de haber filtrado totalmente el
azufre residual, etc.
Adems existe otro factor, el hecho de que las partculas de azufre lleguen a tener una
capa de hidratacin que proporcione un mayor peso a estas. [10]
Para el medio B, evaluamos el crecimiento de otra bacteria quimiolitotrfa, pero que en
este caso no puede utilizar al azufre elemental como fuente de energa sino al tiosulfato. [6]
Esta bacteria es Thiobacillus thioparus, el cual al igual que el anterior es
quimiolitoauttrofo obligado y este no crece a pH cidos. [6]
El medio b, es de igual forma un medio mineral, adicionado de tiosulfato de sodio como
fuente de energa y tiene un pH de 6.5-7 para promover el desarrollo de este
microorganismo.
De igual forma Thiobacillus thioparus transforma el tiosulfato a sulfatos, los cuales al
ionizarse se transforman en cido sulfrico. [5]
Produciendo as que el pH del medio disminuya, se observa de acuerdo a los resultados
que eso est ocurriendo en mayor proporcin en el medio en condiciones agitadas a
diferencia del estacionario.
Adems de que el tiosulfato oxidado por accin microbiana es mayor igualmente en el
medio agitado que en el estacionario.
Este mayor desarrollo de bacterias quimiolitotrfas en ambos casos, tanto con
Thiobacillus thiooxidans como Thiobacillus thioparus se debe a que al estar el cultivo en
agitacin, se favorece la solubilizacin de gases como O2 y CO2 en el medio. Y al ser
estas bacterias autotrficas y aerobias se favorece su desarrollo al estar constantemente
entrando este tipo de gases al sistema. [7]
Otra causa por la que hay un mayor crecimiento en el medio agitado que en el medio no
agitado, es el contacto que tiene estas bacterias con las fuentes de energa, recordando el
azufre elemental es insoluble en agua y tiende a precipitar. [8]
Por lo cual en los medios estacionarios, el contacto entre las bacterias y su fuente de
energa era menor que el contacto que se daba en un medio en el cual constantemente se
estaba mezclando todo el contenido.
Para evaluar el crecimiento de Thiobacillus ferrooxidans, el cual de igual manera es un
quimiolitoautotrfo aerobio obligado, que puede oxidar tanto azufre elemental a sulfatos,
como Fe2+ a Fe3+, es acidoflico y crece a pH de 2. [11]
El medio C, es un medio mineral, adicionado de FeSO 4 (el Fe2+ sirve como fuente de
energa para el microorganismo anteriormente descrito).
De acuerdo con los resultados, tericamente se tendra que observar solo la oxidacin del
ion ferroso a frrico, pero se est observando una ligera disminucin en cuanto al valor
del pH del medio en el caso del medio en agitacin, esto se debe a que al estar en
agitacin, parte del CO2 que se est solubilizando en el medio, est reaccionando con el
agua para formar H2CO3, mediante la siguiente reaccin. [9]

De igual forma que en los experimentos anteriores se observa mayor cantidad de ion
frrico formado en el caso del cultivo en agitacin al cultivo estacionario debido a los
factores antes mencionado.
Los microorganismos quimiolitotrfos pueden mantenerse en el planeta gracias a la
capacidad que tiene de oxidar compuestos inorgnicos, los cuales son los ms
abundantes en la superficie terrestre y poderlos utilizar como fuente de energa, siendo
que hay muy pocos microorganismos que puedan realizar esta transformacin debido al
tipo de metabolismo que tienen. Adems de no depender de una fuente de compuestos
preformados para utilizarlos como fuente de carbono. [11]

Conclusiones.
La cantidad de productos oxidados y metabolitos solubles en el medio, generados
a partir del metabolismo de los organismos quimiolittrofos son directamente
proporcionales al crecimiento de dichos microorganismos (biomasa).
La agitacin favorece la aireacin y la superficie de contacto de los
microorganismos con las partculas minerales.
En condiciones de agitacin los microorganismos quimiolittrofos empleados
produjeron mayor cantidad de metabolitos solubles en el medio.
El metabolismo de Thiobacillus thiooxidans y Thiobacillus thioparus produce la
acidificacin del medio de cultivo al llevar a cabo la oxidacin de un compuesto
mineral.
Los microorganismos quimiolittrofos utilizados utilizan como donador de
electrones el CO2 y como aceptor final de electrones el O2.

Bibliografa.

[1] Cook, Thomas M. (1964) Growth of Thiobacillus thiooxidans in shaken culture. J.

Bacteriol. 88:620623.
[2] UNAM (2001), Diccionario enciclopdico de hidrologa y ciencias afines, pp. 260
[3] Curtis, H. 2000. Biologa. Editorial Mdica Panamericana. 7Edicin. Espaa. Pg. 471
[4] De la Lanza, G. et al. Diccionario de hidrologa y ciencias afines. Editorial P y V. Pg.
260.
[5] Blasxo, M. Microbiologa del suelo. Editorial Instituto Interamericano de Ciencias
Agrcolas. Costa Rica. Pg. 183.
[6] Atlas, R., Bartha, R. Ecologa microbiana y microbiologa ambiental. Editorial Pearson
Addison Wesley. 4 Edicin. Madrid. 2002. Pg. 422-433.
[7] Hernndez, A. 2003. Microbiologa industrial. Editorial EUNED. Costa Rica. Pg. 44.
[8] Valcarcl, M. 2000. Principles of Analytic Chemistry. Editorial Springer. Espaa. Pg.
101.
[9] Christen, H. 1977. Qumica general. Editorial Revert. Espaa. Pg. 31.
[10] Gennaro, A. 2000. Remington. Farmacia. Editorial Mdica Panamericana. 2Edicin.
Pg. 346
[11] Sylvia, D., P. Hartel.2005. Principles and Aplications of soli microbiology. Editorial
Pearson Prentice Hall. 2Edicin. EUA. Pg. 136, 158.