Practica Electroforesis

Universidad Politcnica de Puebla
Ingeniera en Biotecnologa
Gentica Molecular
Practica 1 Electroforesis (mtodo casero)
Por:
Marco Antonio Mendoza Garca
Rivers Emmanuel Morales Salazar
5BP
Introduccin:
La electroforesis es una tcnica para la separacin de molculas segn la movilidad de estas en un

campo elctrico a travs de una matriz porosa, la cual finalmente las separa por tamaos
moleculares y carga elctrica, dependiendo de la tcnica que se use, el uso de la electroforesis para
separar protenas lo informo por primera vez en 1973 el bioqumico sueco Arne Tiselius. La tcnica
que el introdujo, fue una de las pocas tcnicas analticas poderosas disponibles en los primeros aos
de la qumica de protenas. Existe una gran variedad de mtodos.
Electroforesis de campo pulsante: mtodo empleado para separar una mezcla de molculas
grandes, tales como fragmentos de ADN o protenas, haciendo pasar una corriente elctrica a travs
de un gel que contiene las muestras que se desea separar.
Electroforesis capilar: muy extendido en los servicios de secuenciacin de ADN a gran escala en
donde la muestra se hace pasar a travs de un tubo largo.
Electroforesis en gel: separacin de varias molculas biolgicas bajo la influencia de un campo
elctrico, usando un polmero como alginato, agarosa o poliacrilamida.
Electroforesis en gel azarosa: permite separar molculas de ADN y ARN en funcin de su tamao,
la muestra se somete a la accin de un campo elctrico aplicado a un gel agarosa.
Electroforesis en gel de campo pulsante: separacin de molculas de ADN muy grandes (de 50
kpba varios mpb) alternando de forma pulsante la direccin de la corriente elctrica a travs del gel.
Electroforesis en gel gradiente trmico: separacin de ADN segn su movilidad, en condiciones
que favorecen progresivamente la desnaturalizacin por calor.
Electroforesis en gel de poliacrilamida: separacin de cidos nucleicos y protenas, atendiendo a
su tamao molculas, se basa en la migracin de molculas cargadas elctricamente a travs de un
matriz inerte.
Principio general
La electroforesis separa partculas en base al movimiento incluido por un campo elctrico. El
campo elctrico resulta en la aplicacin de una fuerza sobre las partculas que es proporcional a su
carga o potencial de superficie. La fuerza resultante induce una velocidad diferente en las distintas
macromolculas. En otras palaras si se aplica un campo elctrico durante un perodo de tiempo dado
a travs de una matriz que contiene una mezcla de macromolculas con diferentes potenciales de
superficie, las molculas estarn en diferentes lugares al detener el campo.
Tipos de electroforesis
Existen dos modalidades de electroforesis:
Electroforesis libre
El campo elctrico se aplica a disoluciones o suspensiones.
Electroforesis zonal
Es una de las tcnicas ms utilizadas en bioqumica y biologa molecular por su elevada
resolucin. El campo elctrico se aplica a un medio o soporte estabilizante y la muestra se
deposita en una reducida zona del mismo.
Objetivos:
Construir una cmara de electroforesis casera

Preparar una solucin buffer de corrida y el soporte solido
Observar el fundamento de la electroforesis
Materiales y mtodos:
Materiales
Eliminador de corriente (9 a 12 volts)
Matraz Erlenmeyer 250ml
Jeringa
Parafilm o papel cera
Tijeras o cutter
Papel aluminio
Cinta de aislar
Tapa de plstico
reactivos
Agua embotellada
Agar bacteriolgico
Vinagre
Glicerina
Bicarbonato de sodio
Cloruro de sodio
Azul de metileno
Metodologa:
Preparacin del buffer de corrida
Se pesaron 15gr de bicarbonato de sodio, 1.25gr de sal y se diluyeron en un matraz aforado de
500ml, se y posteriormente se le adicionaron 2.5ml de vinagre, se agito para obtener la solucin
buffer.
Construccin de la cmara de electroforesis

Se tom un topper de plstico que tuvo la funcin de una cmara, y en el cual se colocaron los
cables (polo positivo y polo negativo) de un eliminador de corriente en los dos extremos de la
cmara, asegurndolos con silicn para que quedaran firmes en el recipiente.
Se construy una peineta de forma que encajara correctamente en un recipiente ms pequeo en el
cual se arm el gel.
Preparacin del soporte solido
Se prepar el gel a una concentracin del 2% p/v de grenetina, utilizando 50ml del buffer de corrida
agregndolos en un vaso de pp., posteriormente se calent hasta que la solucin quedo homognea.
Se dej enfriar y se agreg en un contenedor pequeo, se coloc la peineta, la cual nos permiti
dejar huecos en el gel (pequeas perforaciones) en donde se cargaron las muestras.
Corrida de la prueba
Una vez gelificado el soporte solido se retir con cuidado la peineta y se sac el gel del contenedor,
se transfiri a la cmara de electroforesis construida.
Se cubri el gel con el buffer de corrida. Se tomaron tres gotas de cada muestra y se colocaron en el
parafilm y se mesclo con una gota de colorante, una vez mezcladas se volvi a tomar y colocar en
los huecos del gel.
Por ltimo se conect el eliminador de corriente y se observ el movimiento del colorante del gel, el
cual se dej desplazar por 15 minutos o hasta observarse movimiento de hasta 1/3 del gel.
Resultados:
Como resultados se obtuvo la construccin de una cmara de electroforesis y se realiz una prueba
para determinar el funcionamiento de la misma y lograr observar el principio de la electroforesis.
Imagen 1: Cmara de Electroforesis
Discusin de resultados:
Los resultados en esta prctica se vieron limitados debido a distintos factores, uno de los principales
fue la realizacin del soporte solido ya que despus de haber gelificado fue un tanto difcil extraerlo
del molde, esto fue a que el molde no tena la forma adecuada adems de que el gel se adherido a
las paredes del gel, y al intentarlo extraer se rompi, esto nos hiso suponer que la concentracin de
grenetina fue baja y adems que el molde debi llevar una base antiadherente. Otro factor que
afecto para obtener un resultado satisfactorio fue que en la cmara que se logr realizar la prueba
los polos se haban invertido por lo que no se logro observar un movimiento de las molculas del
colorante.
Conclusin:
Se logr construir una cmara de electroforesis utilizando materiales de uso comn como lo son
toppers, un cargador de celular sin usar, y tapas de plstico. As tambin se logr realizar la
preparacin de la solucin buffer de corrida y el soporte slido para realizar la electroforesis, y con
ello observar el fundamento de la electroforesis poniendo en prctica una corrida con colorante.
Bibliografa:
1. Jacqueline Kroschwitz, ed., Encyclopedia of chemical technology. 4th ed., John wiley &
Sons, 1994, p. 356
2. Alan Townshend, ed., enciclopedia of Analytical Science, vol. 2, Harcourt Brace and
Company, 1995, p. 1041.
3. Jorgenson, J. W. Analytical Chem, 1986, 58, 7, 743A

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La electroforesis es una tcnica para la separacin de molculas segn la movilidad de estas en un

Construir una cmara de electroforesis casera

Observar el fundamento de la electroforesis

Construccin de la cmara de electroforesis

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3. Jorgenson, J. W. Analytical Chem, 1986, 58, 7, 743A

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