Instrucciones de Uso

Aldosterone RIA
(CT)
Radioinmunoensayo para la determiacin cuantitativa de Aldlosterona
en suero humano y orina.

MG13051
100
2-8C

I B L

I N T E R N A T I O N A L

Flughafenstrasse 52a
D-22335 Hamburg, Germany

Phone: +49 (0)40-53 28 91-0

Fax: +49 (0)40-53 28 91-11

G M B H

IBL@IBL-International.com
www.IBL-International.com

ESPAOL

5. ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES PARA EL

USUARIO

RADIOINMUNOANLISIS PARA LA DETERMINACIN CUANTITAVIA DE ALDOSTERONA EN

SUERO HUMANO Y ORINA
MG13051 - 100 determinaciones

Para uso diagnstico in vitro. Material radioactivo.

Esta prueba slo debe realizarla personal de laboratorio con
experiencia y de acuerdo con GLP.
Material radioactivo. Se recomienda evitar su administracin por
va interna o externa a seres humanos o animales.
La compra, solicitud, posesin y uso de este material radioactivo slo
se autoriza a mdicos, laboratorios clnicos u hospitales con el
propsito exclusivo de realizar pruebas clnicas y de laboratorio in vitro
que no conllevan la administracin del material por va interna o
externa, ni la exposicin de seres humanos o animales a sus
radiaciones. Su compra, solicitud, posesin, uso y transferencia estn
sujetos a las normativas de cada pas.
Caracteristicas fisicas 125I: se encventran al final

SLO PARA USO EN DIAGNSTICOS IN VITRO

1. APLICACIONES CLNICAS
La aldosterona es una hormona esteroidea con un peso molecular de
360 kda producida glomerular de la corteza suprarrenal.
El anlisis de la aldosterona tiene una gran importancia en el
<diagnstico del hiperaldosteronismo primario (sndrome de Conn), en
la denominada hipertensin esencial, en los cambios de presin
arterial inducidos por la administracin de cantidades anmalas de
determinados tipos de alimentos (regaliz) o medicamentos
(potasio/sodio), en nefrosis, etc.
Los niveles de aldosterona en sangre siguen un ritmo circadiano y
estn estrictamente relacionados con los estados de reposo o
ejercicio. Siendo necesario estudiar los niveles de aldosterona en la
sangre mediante pruebas dinmicas de estimulacin y supresin.

1.

Medidas de seguridad: Al manipular material radioactivo es

conveniente aplicar las siguientes medidas:
o
Guarde el material radioactivo en las zonas destinadas a
este fin.
o
No coma, beba, fume ni se maquille en zonas en las que se
manipulen materiales radioactivos.
o
No utilice la pipeta con la boca.
o
Utilice guantes para manipular materiales radioactivos y
lvese las manos cuando termine.
o
Cubra el rea de trabajo con papel secante desechable.
o
Limpie bien el lquido derramado de inmediato y deseche los
materiales contaminados de la misma forma que los
residuos radioactivos.
o
Si las normativas locales lo permiten, puede eliminar los
residuos radioactivos lquidos a travs del sistema municipal
de alcantarillado.

2.

RIESGOS QUMICOS de la azida sdica (NaN3): Algunos de los

reactivos incluidos en este kit contienen una concentracin de azida
sdica al <0,1% como conservante. Dado que la azida sdica puede
dar lugar a la formacin de azidas explosivas de cobre o plomo en las
tuberas, se recomienda eliminar los reactivos no radioactivos a travs
del desage mediante abundantes descargas de agua.
Frases de Riesgo
R 21/22 Nocivo en contacto con la piel y por ingestin
Frases de Seguridad
S-26 En caso de contacto con los ojos, lvense inmediata y
abundantemente con agua y acdase a un mdico.
S-28.1 En caso de contacto con la piel, lvese inmediata y
abundantemente con agua.
S-46 En caso de ingestin, acuda inmediatamente al mdico y
mustrele la etiqueta o el envase.

3.

MATERIAL CON POSIBLE RIESGO BIOLGICO: Este kit puede

contener algunos reactivos elaborados con suero o plasma
humano. El resultado obtenido con el mtodo de prueba aceptado
por la FDA (Organismo para el control de Alimentos y
Medicamentos de EE.UU.) demuestra que el plasma o suero
utilizado no es reactivo para anticuerpos HIV-1/2, HCV y HBsAg.
Dado que no existe ningn mtodo que garantice la total ausencia
de anticuerpos HIV-1/2, HCV y HbsAg, u otros agentes
infecciosos, es preciso aplicar el nivel de seguridad biolgica 2 al
manipular estos reactivos, de conformidad con las
recomendaciones relacionadas con las muestras de suero o
sangre humana potencialmente infecciosas del manual Biosafety
in Microbiological and Biomedical Laboratories (Seguridad
biolgica en laboratorios microbiolgicos y biomdicos), 3a
Edicin, 1993, publicado por los Centros de Control de
Enfermedades y el Instituto Nacional de la Salud.

2. PRINCIPIO DEL ANLISIS

El presente mtodo est basado en un radioinmunoanlisis (RIA)
competitivo. Durante la incubacin, la aldosterona de la
muestra/calibrador compite con la aldosterona marcada con el yodo
125 (trazador) por los lugares de unin especficos del antisuero que
recubre los tubos. La separacin se basa en el uso de tubos
recubiertos con anticuerpos, un las paredes de los tubos se
encuentran recubiertas de antisuero antialdosterona. Tras la
aspiracin, se mide la radiactividad de los tubos con un contador de
centelleo gamma. El grado de unin ser inversamente proporcional a
la concentracin hormonal de muestra/calibrador.

3. MATERIAL SUMINISTRADO
-

Reactivos suficentes para 100 determinaciones.

Almacene el kit y los reactivos a 2-8C.
La fecha de caducidad de cada reactivo se muestra en la
etiqueta.

1.

Trazador radiactivo: 1 vial (50 ml) de 125I-Aldosterona en tampn

fosfato. Contenido de radiactividad: 85 KBq. Conservante: NaN3
(<0,1%).

2.

Calibradores: 8 viales de aldosterona en suero humano.

Conservante: NaN3 (<0,1%). Liofilizado. Reconstituya el
calibrador cero con 3 ml de agua destilada y los calibradores 1-6
con 2 ml de agua destilada. Una vez reconstituido, congele el
control y los calibradores no usados en alicuotas a -20C. Para
conocer el valor exacto, consulte la hoja de datos de control de
calidad.

3.

Control: 1 vial de aldosterona en suero humano. Conservante:

NaN3 (<0,1%). Liofilizado. Reconstituir con 2 ml de agua
destilada. Una vez reconstituido, congele el control no usado en
alicuotas a 20C. Para conocer el valor exacto, co nsulte la hoja
de datos de control de calidad.

4.

Tubos recubiertos: 100 tubos recubiertos con anticuerpo

antialdosterona. Los tubos que no se usen debern almacenarse
a 2-8C protegidos de la humedad.

4. MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO

-

Tubos de ensayo de plstico

Gradillas de tubos de ensayo.
Micropipetas automticas ajustables con puntas desechables.
Mezclador vrtex.
Cilindro graduado.
Bomba de aspiracin o aparato de lavado automtico.
Contador de centelleo gamma.
Agua destilada.
Agitador orbital ajustable a 150 rpm.
cido clorhdrico.

6. RECOGIDA DE MUESTRAS
El anlisis puede realizarse en muestras de suero o de orina. Dado
que la aldosterona muestra un ritmo circadiano, se recomienda anotar
la hora de recogida de las muestras. Deben descartarse las muestras
de alto contenido lipico o hemolizadas. Mantenga las muestras a 2-8C
durante 1-2 das; para perodos ms largos se recomienda congelar
las muestras a -20C. Debe evitarse la congelacin y descongelacin
repetida
de
las
muestras.

ALDOSTERONE RIA (CT) / MG13051 / V12-14

Muestras de orina
Recogida muestras.
A un muestra de orina de 24 horas se le aade cido brico (10 g/l)
como conservante. Registrar el volumen de recogida de muestra y
almacenar la 2-8C durante 1-2 dias; para perodos ms prolongados
congelar a 20C.
Hidrlisis de orina:
1. Prepare tubos no recubiertos, uno para cada muestra de orina.
2. Pipetee 100 l de muestra de orina.
3. Aada 1 ml de cido clorhdrico 0,1 M en cada tubo.
4. Incube durante 15-20 horas a 30C.
5. Use 50 l de esta solucin para el anlisis.

Muestras de orina.
La concentracin leda en la curva de calibracin debe multiplicarse
por un factor 44 para obtener la concentracin de aldosterona en
pg/ml. Para expresar la concentracin de aldosterona en g/24h:
Concentracin (pg/ml) x 44 x Orina excretada (litros)
g/24h =

_________________________________________________________________

1000
EJEMPLO DE CLCULO
Los valores que se indican a continuacin son simplemente ilustrativos
y no deben emplearse en lugar de los datos experimentales.

7. PROCEDIMIENTO DE ANLISIS
Descripcin
-

Asegrese de que todas las muestras y los reactivos se

encuentran a temperatura ambiente antes de utilizarlos.
Antes de su uso, mezcle las muestras por inversin.
Se recomienda medir todos los calibradores por duplicado.

1.

Prepare tubos normales para la actividad total (T) y la unin

inespecfica (NSB), as como tubos con recubrimiento para el
calibrador cero (Bo), los calibradores (1-6), el control y las
muestras.
2. Pipetee 200 l de cada calibrador, control y muestra en cada
tubo.
2.a. Muestras de orina. Pipetee 50 l de muestra hidrolizada en
cada tubo y aada 150 l de calibrador cero.
3. Pipetee 200 l de calibrador cero en los tubos de unin
inespecfica (NSB).
4. Aada 500 l de trazador radiactivo en todos los tubos.
5. Mezcle manualmente los tubos de ensayo utilizando la gradilla.
No utilice vrtex.
6. Incubar :
Procedimiento A: 18-24 horas a temperatura ambiente; o bien
Procedimiento B: 3 horas a temperatura ambiente agitando
mediante agitador orbital reglado a 150 rpm.
7. Aspirar con cuidado la mezcla de incubacin de todos los tubos,
exceptuando los de actividad total, mediante una bomba de
aspiracin, o decantar secando los bordes de los tubos con papel
secante.
8. Mida la radiactividad de los tubos durante 1 minuto con un
contador gamma. Es recomendable controlar el ruido de fondo
del instrumento antes de realizar la determinacin. Para evitar
variaciones en la sensibilidad del sistema, el ruido de fondo debe
reducirse al mnimo o ajustarse debidamente.

Reactivo
Calibrador 0
Calibradores
Controles
Muestras
Trazador

Calibra
Activi
-dad
total

NSB

------------500 l

200 l
---------500 l

B/B0
(%)
100
85,4
76,1
63,6
42,1
29,9
18,4
58,3
77,4
51,0
40,8

Aldosterona
(pg/ml)
0
25
50
100
300
600
1500
133
45,5
191
323

9.VALORES DE REFERENCIA
Es recomendable que cada laboratorio determine su propio intervalo
de referencia. Los valores que se indican a continuacin son
meramente indicativos.
Aldosterona en suero:
- En reposo:
- En movimento:

10 - 160 pg/ml
35 - 300 pg/ml

9.1 Otro tipo de muestra::

Aldosterona en orina:

<18g/24h ( 95 percentil)

10.RENDIMIENTO DEL ANLISIS

ESQUEMA DEL ANLISIS

Tubos

Actividad total (T)

NSB
CAL 0
CAL 1
CAL 2
CAL 3
CAL 4
CAL 5
CAL 6
CONTROL
P1
P2
P3

Promedio
cpm
41999
154
19213
16439
14667
12268
8184
5844
3669
11263
14905
9869
7934

---200 l
------500 l

Control

Muestras

Mues-tras
de orina

------200 l
---500 l

---------200 l
500 l

150 l
------50 l
500 l

- Llevar a cabo la incubacin: 18 24 h Tambient e o 3 h Tambiente en

agitacin (150 rpm)
- Aspirar
- Recuento

8. CLCULO DE RESULTADOS
Trace la curva de calibracin sobre papel logit-log o semi-log, con las
concentraciones de calibracin en el eje x y el % de B/Bo respectivo
en el eje y.
Calcule el valor de B/Bo% de cada muestra y lea la concentracin por
interpolacin con la curva de calibracin para obtener la concentracin
de aldosterona en las muestras analizadas, expresada en pg/ml.

ESPECIFICIDAD
Con el presente mtodo se han mostrado las siguientes reacciones
cruzadas:
100%
con
aldosterona,
17,2%
con
3,5
tetrahidroaldosterona, 0,12% con 3,5 tetrahidroaldosterona, menos
del 0,017% con prednisolona, menos del 0,003% con cortisol,
corticosterona, cortisona, 11-desoxicortisol, 11-desoxicorticosterona,
17-hidroxiprogesterona, progesterona y menos del 0,0017% con
prednisona, testosterona y androstenediona.
El porcentaje de reactividad cruzada se calcula mediante la frmula de
Abraham: X/Y x 100, donde X e Y son el peso de la sustancia que se
somete a anlisis y el peso de la sustancia interferente, ambas
capaces de reducir la capacidad de unin en un 50%.
SENSIBILIDAD
Sensibilidad analtica
La sensibilidad se calcul a partir de la curva de calibracin y se
expres como dosis mnima con una diferencia significativa con
respecto al calibrador cero (valor promedio - 2 D. E.).
Esta dosis es de 1,4 pg/ml.
Sensibilidad funcional
La sensibilidad funcional del anlisis es el valor inferior que se mide
con una precisin de varianza mxima de un 20% entre anlisis. Para
la Aldosterone RIA (CT), este valor es de 25 pg/ml.
PRECISIN
La precisin se evalu sobre la variabilidad intra-analisis y interanalisis,
con
concentraciones
de
analito
distintas.

ALDOSTERONE RIA (CT) / MG13051 / V12-14

Intra-ensayo

11. BIBLIOGRAFA

Suero

Media

1
2
3

42,3
177
278

(pg/ml)

D.E.
5,8
6,7
14,8

C.V.
(%)
13,7
3,8
5,3

1-

20
20
20

2-

3Inter-ensayo
Suero

Media

1
2
3

38,2
169
284

(pg/ml)

D.E.
7,1
12,6
17,7

C.V.
(%)
18,6
7,5
6,2

4-

9
9
9

5-

6-

Exactitud
La precisin del mtodo ha sido comprobada mediante pruebas de
recuperacin y paralelismo.

7-

Prueba de recuperacin
Se analizaron muestras mezcladas con volmenes iguales de cada
calibrador.

8-

Adicin

Previsto
(pg/ml)
-

Medido
(pg/ml)
97,2

Recuperacin
(%)
-

S1 + CAL 0

48,6

41,6

85,6

S1 + CAL 1

61,1

69,4

113,6

S1 + CAL 2

73,6

88,8

120,7

S1 + CAL 3

98,6

121

122,7

S1 + CAL 4

199

249

125,1

S1 + CAL 5

349

455

130,4

S1 + CAL 6

799

933

116,8

142

S2 + CAL 0

71,0

68,4

96,3

S2 + CAL 1

83,5

83,4

99,9

S2 + CAL 2

96,0

96,9

100,9

S2 + CAL 3

121

137

113,2

S2 + CAL 4

221

244

110,4

S2 + CAL 5

371

431

116,2

821

952

116,0

S1

S2

S2 + CAL 6

Bizollon C.A. et al. Solid-phase radioimmunoassay of plasma

Aldosterone. Steroids, 1974, 23,809-21.
Malvano R. et al. Methodological simplifications in
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1976, 66,331-43.
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Aldosterone in normal subjects. Clin. Chim. Acta, 1978, 84,
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Young S.C. et al. Hypertensive complications in patients with
primary aldosteronism. Current therapeutic Research, 1991,
50, 317-25.

Prueba de paralelismo
Los sueros con una elevada concentracin de analito fueron
analizados a distintas diluciones con el calibrador cero.
Dilucin
S1 sin diluir
1/2
1/4
1/8
S2 sin diluir
1/2
1/4
1/8
1/16

Previsto
(pg/ml)
64,1
32,1
16,0
176
87,8
43,9
22,0

Medido
(pg/ml)
128
61,6
30,9
14,9
351
161
75
36,3
25

Recuperacin
(%)
96,1
96,3
78,4
91,5
85,4
82,7
113,6

Informacin disponible en la pgina web: www.IBL-International.com.

ALDOSTERONE RIA (CT) / MG13051 / V12-14

Symbols / Symbole / Symbles / Smbolos / Smbolos /

REF

Cat.-No.: / Kat.-Nr.: / No.- Cat.: / Cat.-No.: / N. Cat.: / N.Cat.: / -.:

LOT

Lot-No.: / Chargen-Bez.: / No. Lot: / Lot-No.: / Lote N.: / Lotto n.: / -:

Use by: / Verwendbar bis: / Utiliser : / Usado por: / Usar at: / Da utilizzare entro: /
:
No. of Tests: / Kitgre: / Nb. de Tests: / No. de Determ.: / N. de Testes: / Quantit dei tests: /
:

CONC
LYO
IVD

Concentrate / Konzentrat / Concentr / Concentrar / Concentrado / Concentrato /

Lyophilized / Lyophilisat / Lyophilis / Liofilizado / Liofilizado / Liofilizzato /
In Vitro Diagnostic Medical Device. / In-vitro-Diagnostikum. / Appareil Mdical pour Diagnostics In
Vitro. / Dispositivo Mdico para Diagnstico In Vitro. / Equipamento Mdico de Diagnstico In
Vitro. / Dispositivo Medico Diagnostico In vitro. / In-Vitro .
Evaluation kit. / Nur fr Leistungsbewertungszwecke. / Kit pour valuation. / Juego de Reactivos
para Evaluaci. / Kit de avaliao. / Kit di evaluazione. / .
Read instructions before use. / Arbeitsanleitung lesen. / Lire la fiche technique avant emploi. /
Lea las instrucciones antes de usar. / Ler as instrues antes de usar. / Leggere le istruzioni
prima delluso. / .
Keep away from heat or direct sun light. / Vor Hitze und direkter Sonneneinstrahlung schtzen. /
Garder labri de la chaleur et de toute exposition lumineuse. / Mantngase alejado del calor o la
luz solar directa. / Manter longe do calor ou luz solar directa. / Non esporre ai raggi solari. /
.
Store at: / Lagern bei: / Stocker : / Almacene a: / Armazenar a: / Conservare a: /
:
Manufacturer: / Hersteller: / Fabricant: / Productor: / Fabricante: / Fabbricante: / :
Caution! / Vorsicht! / Attention! / Precaucin! / Cuidado! / Attenzione! / !

Symbols of the kit components see MATERIALS SUPPLIED.

Die Symbole der Komponenten sind im Kapitel KOMPONENTEN DES KITS beschrieben.
Voir MATERIEL FOURNI pour les symbles des composants du kit.
Smbolos de los componentes del juego de reactivos, vea MATERIALES SUMINISTRADOS.
Para smbolos dos componentes do kit ver MATERIAIS FORNECIDOS.
Per i simboli dei componenti del kit si veda COMPONENTI DEL KIT.
.

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and results. Any modification of the test procedure or exchange or mixing of components of different lots could negatively affect the results. These
cases invalidate any claim for replacement. Regardless, in the event of any claim, the manufacturers liability is not to exceed the value of the test kit.
Any damage caused to the kit during transportation is not subject to the liability of the manufacturer

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