NORMA TCNICA

COLOMBIANA

NTC
5698-1
2009-08-19

MICROBIOLOGA DE ALIMENTOS Y ALIMENTOS

PARA ANIMALES. METODO HORIZONTAL PARA
LA ENUMERACIN DE MOHOS Y LEVADURAS.
PARTE 1: TCNICA DE RECUENTO DE
COLONIAS EN PRODUCTOS CON ACTIVIDAD
ACUOSA (Aw) SUPERIOR A 0,95

E:

MICROBIOLOGY OF FOOD AND ANIMAL FEEDING

STUFFS - WITH HORIZONTAL METHOD FOR THE
ENUMERATION OF YEASTS AND MOULDS. PART 1:
COLONY COUNT TECHNIQUE IN PRODUCTS WATER
ACTIVITY GREATER THAN 0,95.

CORRESPONDENCIA:

esta norma es idntica (IDT) con respecto

a su documento de referencia, la norma
ISO 21527-1:2008.

DESCRIPTORES:

microbiologa de alimentos; mtodo

horizontal; enumeracin de levaduras;
enumeracin de mohos; recuento de
colonias.

I.C.S.: 07.100.30
Editada por el Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin (ICONTEC)
Apartado 14237 Bogot, D.C. - Tel. (571) 6078888 - Fax (571) 2221435

Prohibida su reproduccin

Editada 2009-09-01

PRLOGO

El Instituto Colombiano de Normas Tcnicas y Certificacin, ICONTEC, es el organismo

nacional de normalizacin, segn el Decreto 2269 de 1993.
ICONTEC es una entidad de carcter privado, sin nimo de lucro, cuya Misin es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y proteccin al consumidor. Colabora con el
sector gubernamental y apoya al sector privado del pas, para lograr ventajas competitivas en
los mercados interno y externo.
La representacin de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalizacin Tcnica
est garantizada por los Comits Tcnicos y el perodo de Consulta Pblica, este ltimo
caracterizado por la participacin del pblico en general.
La NTC 5698-1 fue ratificada por el Consejo Directivo de 2009-08-19.
Esta norma est sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.
A continuacin se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a
travs de su participacin en el Comit Tcnico 25 Microbiologa.
3 M COLOMBIA
ALIMENTOS POLAR COLOMBIA S.A.
ALPINA PRODUCTOS ALIMENTICIOS S.A.
ANNAR DIAGNSTICA IMPORT LTDA.
ARCHIVO DE BOGOT ALCALDA
MAYOR DE BOGOT
ASBIOQUIM LTDA.
BIANLISIS
BIOCONTROL LTDA.
BIOQUILAB LTDA.
BIOTRENDS LABORATORIOS LTDA.
CALIDAD INDUSTRIAL LTDA.
CARULLA VIVERO S.A.
CONGELAGRO S.A.
CASA LUKER S.A.
CREPES & WAFFLES S.A.
CONGELAGRO
CORPOLAC - CORPOICA
ECOKAPKA
ENZIPN LABORATORIO S.A.
INDUSTRIAS ALIMENTICIAS ZEN S.A.
INDUSTRIA PRODUCTORA DE ACEITES
RENOVABLES
INSTITUTO DE GENTICA UNIVERSIDAD
NACIONAL DE COLOMBIA

IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA.

KOYOMAD S.A.
LABCONTROL E.U.
LABFARVE

LABORATORIO
DE
FARMACOLOGA VEGETAL
LABORATORIOS ERMA S.A.
LABORATORIOS GRAM
LABORATORIOS MICROLAB LTDA.
LABORATORIO SFC LTDA.
MERCADEO DE ALIMENTOS DE COLOMBIA
S.A.
MICROBILOGOS ASOCIADOS
NULAB LTDA.
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
PURIFICACIN Y ANLISIS DE FLUIDOS
LTDA.
QUALA S.A.
SECRETARA DISTRITAL DE SALUD DE
BOGOT
SUIZO S.A.
UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
VECOL S.A.
VILASECA LTDA.
VITROFARMA S.A.

Adems de las anteriores, en Consulta Pblica el Proyecto se puso a consideracin de las

siguientes empresas:

ACEGRASAS S.A.
ACUAGYR S.A. E.S.P.
ALGARRA S.A.
ALIMENTOS CRNICOS S.A. PLANTA SUIZO
AQUALAB
AREPAS DOA ALEJA
ASEBIOL
ASINAL
ASOCIACIN COLOMBIANA DE CIENCIA
Y TECNOLOGA COSMTICA ACCYTEC
ASOCIACIN
COLOMBIANA
DE
MICROBIOLOGA
BAVARIA S.A.
BECTON DICKINSON DE COLOMBIA
LTDA.
CERVECERA LEONA S.A.
COLOMBINA S.A.
CORPORACIN PARA EL AVANCE DE LA
MICROBIOLOGA Y LA MICROSCOPIA
-MICROSDUPONT QUALICON

EMPRESA
DE
ACUEDUCTO
Y
ALCANTARILLADO DE BOGOT E.S.P.
FBRICA
DE
ESPECIAS
Y
CONDIMENTOS EL REY S.A.
FRUGAL S.A.
INSTITUTO DE GENTICA UNIVERSIDAD
NACIONAL DE COLOMBIA
JOHNSONDIVERSEY
KLIK S.A
LABORATORIO A.B.B.A
LABORATORIO
DE
GENTICA
Y
BIOLOGA MOLECULAR
LA CAMPIA
MULTIDIMENSIONALES S.A.
NESTL DE COLOMBIA S.A.
QUIK LTDA.
ROCHE DIAGNOSTICS
SERVICIOS DE LABORATORIO CLNICO
LTDA.
UNIVERSIDAD MANUELA BELTRN

ICONTEC cuenta con un Centro de Informacin que pone a disposicin de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales y otros documentos relacionados.
DIRECCIN DE NORMALIZACIN

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 5698-1

CONTENIDO

Pgina
INTRODUCCIN......................................................................................................................1

1.

ALCANCE ....................................................................................................................2

2.

REFERENCIAS NORMATIVAS ...................................................................................2

3.

TRMINOS Y DEFINICIONES .....................................................................................2

4.

PRINCIPIO....................................................................................................................3

5.

DILUYENTE Y MEDIO DE CULTIVO...........................................................................3

5.1

DILUYENTE..................................................................................................................3

5.2

MEDIO DE CULTIVO ...................................................................................................4

6.

EQUIPO Y MATERIAL DE VIDRIO..............................................................................6

7.

MUESTREO..................................................................................................................6

8.

PREPARACIN DE LA MUESTRA DE ENSAYO.......................................................7

9.

PROCEDIMIENTO........................................................................................................7

9.1

PORCIN DE ENSAYO, SUSPENSIN INICIAL Y DILUCIONES .............................7

9.2

INOCULACIN E INCUBACIN .................................................................................7

9.3

RECUENTO Y SELECCIN DE LAS COLONIAS PARA LA CONFIRMACIN ........8

10.

EXPRESIN DE RESULTADOS Y LMITES DE CONFIANZA...................................8

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 5698-1

Pgina

11.

INFORME DE ENSAYO ...............................................................................................8

BIBLIOGRAFA......................................................................................................................10

DOCUMENTO DE REFERENCIA..........................................................................................11

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 5698-1

MICROBIOLOGA DE ALIMENTOS Y ALIMENTOS PARA ANIMALES.

MTODO HORIZONTAL PARA LA ENUMERACIN DE MOHOS Y LEVADURAS
PARTE 1: TCNICA DE RECUENTO DE COLONIAS EN PRODUCTOS CON
ACTIVIDAD ACUOSA (Aw) SUPERIOR A 0,95

Esta norma consta de las siguientes partes, bajo el ttulo general de Microbiologa de alimentos
y productos de alimentacin animal. Mtodo horizontal para la enumeracin de mohos y
levaduras :
-

Parte 1: Tcnica de recuento de colonias en productos con actividad acuosa (Aw)

superior a 0,95.

Parte 2: Tcnica de recuento de colonias en productos con actividad acuosa (Aw)

inferior o igual a 0,95.

INTRODUCCIN
Debido a la gran variedad de alimentos y productos para alimentacin, las aplicaciones del
mtodo horizontal que se especifica en esta parte de la norma y en la NTC 5698-2 pueden no
ser adecuadas para determinados productos. En este caso, se pueden utilizar mtodos
diferentes especficos para estos productos, si es absolutamente necesario por razones
tcnicas justificadas. Sin embargo, se debe hacer todo el esfuerzo para aplicar el mtodo
horizontal que se especifica en esta parte de la norma y en la NTC 5698-2 , en la medida de lo
posible.
ADVERTENCIA
Es esencial que la enumeracin de los mohos se realice con el mximo cuidado para proteger
al operario y evitar la contaminacin de la atmsfera con las esporas de mohos.

1 de 11

NORMA TCNICA COLOMBIANA

1.

NTC 5698-1

ALCANCE

La NTC 5698-1 especifica un mtodo horizontal para la enumeracin de levaduras y mohos

viables en productos destinados para consumo humano o alimentacin de animales, que tienen
una actividad de agua superior a 0,95 (huevos, carne, productos lcteos (excepto la leche en
polvo), frutas, verduras, pastas frescas, etc.), por medio de la tcnica de recuento de colonias a
una temperatura de 25 C 1 C (referencias [1] y [2]).
Esta parte de NTC no permite la enumeracin de las esporas de mohos, ni la identificacin de
la flora de hongos, el examen de los alimentos para determinar micotoxinas tampoco est
dentro del alcance de esta norma. El mtodo que se especifica en esta parte no es adecuado
para la enumeracin de hongos resistentes al calor, como el Byssochlamys fulva o
Byssochlamys nivea, en frutas y verduras enlatadas o embotelladas.

2.

REFRENCIAS NORMATIVAS

Los siguientes documentos normativos referenciados son indispensables para la aplicacin de

este documento normativo. Para referencias fechadas, se aplica nicamente la edicin citada.
Para referencias no fechadas, se aplica la ltima edicin del documento normativo referenciado
(incluida cualquier correccin).
NTC 4491 (todas las partes), Microbiologa de alimentos y alimentos para animales.
preparacin de muestras para ensayo, suspensin inicial y diluciones decimales para anlisis
microbiolgico. Parte 1: Reglas generales para la preparacin de la suspensin inicial y de
diluciones decimales.
NTC 4092 Microbiologa de alimentos y de alimentos para animales. reglas generales para el
anlisis microbiolgico.
NTC 5698-2, Microbiologa de alimentos y productos de alimentacin animal. Mtodo horizontal
para la enumeracin de levaduras y mohos. Parte 2: Tcnica de Recuento de colonias en
productos con Actividad Acuosa (Aw) inferior o igual a 0,95.
GTC 171, Microbiologa de alimentos y alimentos para animales. Gua para la preparacin y
produccin de medios de cultivo. Gua general para los ensayos de desempeo de medios de
cultivo.
ISO 8261, Milk and Milk Products. General Guidance for the Preparation of Test Samples, Initial
Suspensions and Decimal Dilutions for Microbiological Examinations.

3.

TRMINOS Y DEFINICIONES

Para los propsitos de este documento, se aplican los siguientes trminos y definiciones.
NOTA
Existen algunas formas intermedias y la distincin entre una levadura (vase el numeral 3.1) y un moho
(vase el numeral 3.2) puede ser arbitraria.

3.1 Levadura. Microorganismo aerbico mesoflico que, a 25 C usando un medio de agar

micolgico bajo las condiciones descritas en esta NTC, desarrolla colonias (vase el numeral 3.4)
redondas brillantes o mate sobre la superficie del medio, que usualmente tienen un contorno regular y
una superficie ms o menos convexa.
2

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NOTA

NTC 5698-1

Las levaduras dentro, en lugar de sobre un medio, desarrollan colonias redondas, lenticulares.

3.2
Moho. Microorganismo filamentoso aerbico mesoflico que, sobre la superficie de un
medio de agar micolgico bajo las condiciones que se describen en esta NTC, usualmente
desarrolla grmenes/propgulas de proliferacin planas o esponjosas (vase el numeral 3.3) o
colonias (vase el numeral 3.4) con estructuras con color fructferas o que forman esporas.
NOTA

3.3

Los mohos dentro, en lugar de sobre un medio, pueden desarrollar colonias redondas, lenticulares.

Propgula. Germen. Entidad viable capaz de crecer en un medio nutritivo.

EJEMPLO Clulas vegetativas, grupos de clulas, esporas, cmulos de esporas o una porcin de micelio de
hongos.

[NTC 3650-6]
3.4 Colonia. Acumulacin visible localizada de masa microbiana, desarrollada sobre o dentro
de un medio nutritivo slido a partir de una partcula viable.
[NTC 3650-6]

4.

PRINCIPIO

4.1
Se preparan placas inoculadas en su superficie utilizando un medio de cultivo selectivo
especfico. Dependiendo de la cantidad esperada de colonias, se utiliza una cantidad
especfica de la muestra (si el producto es lquido), una suspensin inicial (en el caso de otros
productos) o diluciones decimales de la muestra/suspensin.
Se pueden preparar placas adicionales bajo las mismas condiciones, utilizando diluciones
decimales de la muestra de ensayo o de la suspensin inicial.
4.2
Las placas se incuban despus de forma aerbica a 25 C 1 C durante 5 d. Si es
necesario, las placas de agar se dejan en reposo en luz natural difusa durante 1 d a 2 d.
4.3
Las colonias/propgulas se cuentan posteriormente, y si as se requiere (para
diferenciar las colonias de levaduras de las colonias de bacterias) se confirma la identidad de
las colonias dudosas mediante examen con microscopio.
4.4
Se calcula el nmero de levaduras y de mohos por gramo o por mililitro de muestra a
partir del nmero de colonias/propgulas/grmenes que se obtuvieron sobre las placas
seleccionadas en niveles de dilucin que producen colonias contables. Si es necesario, los
mohos y las levaduras se cuentan independientemente.

5.

DILUYENTE Y MEDIO DE CULTIVO

Con respecto a la prctica actual de laboratorio, vase la NTC 4491(todas las partes).
5.1

DILUYENTE

5.1.1

Generalidades

Vase la NTC 4491 (todas las partes), ISO 861 y las normas especficas que tratan de los
productos en cuestin.
3

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 5698-1

NOTA
Es posible adicionar agentes tensoactivos como poli(oxietileno)sorbatitan monooleato1) sdico [0,05 %
(concentracin de masa)] a los diluyentes para reducir la formacin de grumos de esporas de mohos y conidias
(referencia [2]).
Excepto para la preparacin especfica de la muestra de ensayo, se recomienda utilizar como diluyente caldo de
agua de peptona al 0,1 % (concentracin de masa).

5.1.2

Composicin del caldo de agua de peptona al 0,1 % (concentracin de masa)

Productos de la digestin enzimtica de tejidos animales o vegetales
Agua

5.1.3

1,0 g
1 000 ml

Preparacin del caldo de agua de peptona al 0,1% (concentracin de masa)

Disuelva los componentes en agua, mediante calentamiento, si es necesario.

Si es necesario, ajuste el pH de manera que, despus de la esterilizacin, est en 7,0 0,2 a
25 C.
5.2

MEDIO DE CULTIVO

5.2.1

Agar de Dicloran rosa de bengala y cloranfenicol (DRBC) (referencias [3] y [4])

5.2.1.1 Composicin
Producto de la digestin enzimtica de tejidos animales y vegetales
D -Glucosa (C6H12O6)
Dihidrogeno fosfato de potasio (KH2PO4)
Sulfato de magnesio (MgSO4 H2O)
Dicloran (2,6-dicloro-4-nitroanilina)
Rosa de bengala
Agar
Cloranfenicol
Agua, destilada o desionizada
a
Dependiendo de la resistencia de gel del agar.

5,0 g
10,0 g
1,0 g
0,5 g
0,002 g
0,025 g
12 g a 15 g a
0,1 g
1 000 ml

NOTA Teniendo en cuenta la legislacin nacional vigente se puede considerar la utilizacin de medios de cultivo
de la GTC 125; para reportar segn las indicaciones de esta Norma Tcnica Colombiana se debe utilizar el medio de
cultivo referenciado en el mismo.

5.2.1.2 Preparacin
5.2.1.2.1 Generalidades
Elabore una suspensin en agua de todos los ingredientes, excepto el cloranfenicol, y lleva a
ebullicin hasta disolverlos completamente. Si es necesario, ajuste el pH (vase el numeral 6.4)
de modo que despus de la esterilizacin est en 5,6 0,2 a 25 C.
Agregue 10 ml de una solucin al 1 % (concentracin de masa) de cloranfenicol en etanol y
mezcle. Dispense el medio en cantidades en recipientes (6.5) con capacidad adecuada.
Esterilice llevando a autoclave a 121 C durante 15 min.

1)

Tween 80 es un ejemplo de un producto adecuado disponible en el comercio. Esta informacin se brinda

para conveniencia de los usuarios de esta norma y no constituye una aprobacin de este producto por parte
de ISO.

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NTC 5698-1

Enfre inmediatamente el medio en un bao de agua (6.3) conservado a una temperatura entre
44 C y 47 C. Enfre hasta alcanzar temperatura inferior a 50 C y dispense en cantidades de
15 ml en cajas de Petri estriles (vase el numeral 6.6).
Permita que el medio se solidifique y, si es necesario, seque la superficie de las placas tal
como se describe en NTC 4092 y GTC 171 (todas las partes).
Utilice inmediatamente o almacene en un lugar oscuro, segn la GTC 171 (todas las partes)
hasta que se necesite.
PRECAUCIN evite la exposicin del medio a la luz ya que los productos de la ruptura citotxica pueden dar
como resultado una subestimacin de la micoflora en las muestras.

5.2.1.2.2 Adicin opcional de clortetraciclina hidroclrica

Cuando el exceso de crecimiento bacteriano puede ser un problema (por ejemplo en carnes
crudas), se recomienda cloranfenicol (50 mg/l) y clortetraciclina (50 mg/l). En este caso,
prepare el medio bsico tal como se describe arriba, solamente con 50 mg de cloranfenicol,
dispnselo en cantidades de 100 ml y esterilice. Prepar tambin una solucin al 0,1%
(concentracin de masa) de clortetraciclina hidroclrica en agua (relativamente inestable en
solucin, se debe preparar fresco) y esterilice mediante filtracin. Justo antes de la utilizacin,
adicione 5 ml de esta solucin, en forma asptica, a 100 ml del medio bsico y vierta en las
placas. No se recomienda la gentamicina ya que se ha reportado que causa inhibicin de
algunas especies de levaduras.
5.2.1.2.3 Adicin opcional de elementos traza
Para que los mohos exhiban su morfologa total, en particular algunos pigmentos que
normalmente producen, necesitan de elementos traza que pueden no estar presentes en el
agar DRBC. Para identificar los mohos en este medio, adicione la siguiente solucin de
elementos traza en 1 ml por litro de medio, antes de llevar al autoclave: ZnSO4 7H2O 1g;
CuSO4 5H2O 0,5 g; agua destilada o desionizada 100 ml (referencia [1]).
5.2.1.2.4 Adicin opcional de Tergitol2)
Con el fin de evitar el exceso de crecimiento de Mucorales sobre las placas de agar, se
recomienda la adicin de Tergitol (1 ml/l) al medio de cultivo.
5.2.1.3 Ensayo de desempeo para el aseguramiento de la calidad del medio de cultivo
5.2.1.3.1 Generalidades
El agar DRBC es un medio slido. La productividad y la selectividad se deben someter a
ensayo de acuerdo con la GTC 171 segn las siguientes especificaciones
5.2.1.3.2 Productividad
Incubacin:
Cepas:

2)

5 d a 25 C 1 C
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763
Candida albicans ATCC 10231
Aspergillus niger ATCC 16404

Ejemplo de un producto disponible en el comercio. Esta informacin se suministra para conveniencia de los
usuarios de esta norma y no constituye una aprobacin del producto por parte de ICONTEC .

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NTC 5698-1

Mucor racemosus ATCC 42647

o cepas registradas como
colecciones de hongos.
Medio de referencia:
Mtodo de control:
Criterios:
Reaccin caracterstica:

equivalentes

en

otras

Lote del medio SDA (agar de dextrosa Sabouraud) ya validado.

Cuantitativo
Relacin de productividad, PR 0,5
Colonias/propgulas/grmenes caractersticos de acuerdo
con cada especie.

5.2.1.3.3 Selectividad
Incubacin:
Cepas:

5 d a 25 C 1 C
Escherichia coli ATCC 24922 o
Bacillus subtilis ATCC 6633
o cepas registradas como equivalentes en otras colecciones de
bacterias.

Mtodo de control:
Criterios:

Cualitativo
Inhibicin total

6.

EQUIPO Y MATERIAL DE VIDRIO

El equipo desechable es una alternativa aceptable para el

siempre que tenga las especificaciones correctas.

material de vidrio reutilizable,

Equipo comn de laboratorio de microbiologa (vase la NTC 4092) y, en particular, el siguiente:

6.1

Incubadora, con capacidad para funcionar a 25 C 1 C.

6.2
Pipeta o micropipeta de descarga total, estriles, con capacidad nominal de 1 ml y
graduadas en divisiones de 0,1 ml.
6.3

Bao de agua, o equipo similar, con capacidad de funcionar entre 44 C y 47 C.

6.4

pHmetro, con exactitud de 0,1 unidades de pH a 25 C.

6.5
Frascos, matraces y tubos, para ebullicin y almacenamiento del medio de cultivo y
para hacer las diluciones.
6.6

Cajas de Petri, estriles, de vidrio o plstico, con un dimetro de 90 mm a 100 mm.

6.7
Microscopio, para diferenciar las levaduras de las clulas bacterianas (campo
luminoso, amplificacin de 250 veces a 1 000 veces).
6.8
Esparcidores, de vidrio o plstico (dimetro inferior a 2 mm y longitud de 80 mm). Es
recomendable que el dimetro no exceda 2 mm con el fin de minimizar la cantidad de muestra
que se adhiere a ellos al final del procedimiento de esparcido.

7.

MUESTREO

Es recomendable enviar al laboratorio una muestra representativa. Dicha muestra no debe

haber sufrido daos ni cambios durante el transporte ni el almacenamiento. La muestra de
6

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 5698-1

laboratorio no debe estar congelada.

El muestreo no es parte del mtodo que se especifica en esta NTC. El muestreo debera
llevarse a cabo de acuerdo con la norma especfica, adecuada al producto en cuestin. Si no
existe norma especfica, se recomienda que las partes involucradas lleguen a un acuerdo sobre
este tema.

8.

PREPARACIN DE LA MUESTRA DE ENSAYO

Prepare la muestra de ensayo segn la NTC 4491(todas las partes), NTC 4092 y la norma
especfica que trate del producto en cuestin. Si no existe norma especfica, se recomienda
que las partes involucradas lleguen a un acuerdo sobre este tema.

9.

PROCEDIMIENTO

9.1

PORCIN DE ENSAYO, SUSPENSIN INICIAL Y DILUCIONES

Prepare la porcin de ensayo, la suspensin inicial (dilucin primaria) y las diluciones

adicionales segn NTC 4491 (todas las partes de la NTC 4092 y la norma especfica que trate
del producto en cuestin.
Excepto para la preparacin especfica de la muestra de ensayo, se recomienda usar caldo de
agua de peptona al 0,1 % (vase el numeral 5.1.3) como diluyente. Utilice un homogenizador
peristltico de preferencia a un mezclador o un agitador.
Debido a la rpida sedimentacin de las esporas en la pipeta o micropipeta, Agite la
suspensin inicial y las diluciones con el fin de evitar la sedimentacin de partculas que
contenga microorganismos.
9.2

INOCULACIN E INCUBACIN

9.2.1 Sobre una placa de agar DRBC (vase el numeral 5.2.1), utilizando una pipeta o
micropipeta estril (vase el numeral 6.2), transfiera 0,1 ml de la muestra de ensayo, si es
lquida, o 0,1 ml de la suspensin inicial, en el caso de otros productos (vase el numeral 8).
Sobre una segunda placa de agar DRBC, utilizando una pipeta o micropipeta estril, transfiera
0,1 ml de la primera dilucin decimal (10-1) (producto lquido) o 0,1 ml de la dilucin de 10-2
(otros productos).
Para facilitar la enumeracin de poblaciones bajas de levaduras y mohos, sobre tres de las
cajas se pueden dispersar volmenes de hasta 0,3 ml de una dilucin de 10-1 de la muestra, o
de la muestra de ensayo, si es lquida.
Repita estas operaciones con diluciones posteriores utilizando una pipeta o micropipeta estril
para cada dilucin decimal.
NOTA

Si se sospecha la presencia de mohos de crecimiento rpido, utilice la norma ISO 21527-2[6].

9.2.2 Disperse el lquido sobre la superficie de la placa de agar con un esparcidor estril
(vase el numeral 6.8) hasta que el lquido se absorba por completo en el medio.
Tambin se puede utilizar la inoculacin de las placas mediante el mtodo de vertido en placa,
pero en este caso la equivalencia de los resultados se debe convalidar en comparacin a la
7

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 5698-1

inoculacin sobre la superficie, y la discriminacin y diferenciacin de mohos y levaduras no

son admisibles. El mtodo de esparcido sobre la superficie puede dar enumeraciones
superiores. La tcnica de esparcido de la placa facilita la exposicin mxima de las clulas al
oxgeno atmosfrico y evita el riesgo de desactivacin trmica de las propgulas de hongos.
Los resultados pueden depender del tipo de hongos.
9.2.3 Incube aerbicamente en posicin invertida las placas preparadas (vanse los numerales
9.2.2 y 6.1) a 25 C 1 C durante 5 d. Si es necesario, deje las placas de agar en reposo en
luz natural difusa durante los 2 primeros das.
Se recomienda incubar las cajas (vase el numeral 6.6) en una bolsa plstica abierta con el fin
de no contaminar la incubadora en el caso de diseminacin de los mohos fuera de las cajas.
9.3

RECUENTO Y SELECCIN DE LAS COLONIAS PARA LA CONFIRMACIN

Seleccione y cuente las cajas que tienen menos de 150 colonias/propagulas/grmenes. Si el

crecimiento rpido de los mohos causa problemas, realizar conteo a los 2 d y luego a los 5 d.
NOTA 1 Los mtodos de enumeracin para levaduras y, en especial para los mohos, son imprecisos dado que
consisten en una mezcla de micelio y esporas sexuales y asexuales. Las cantidades de unidades formadoras de
colonias dependen del grado de fragmentacin del micelio y de la proporcin de esporas capaces de crecer en el
medio en la placa.
NOTA 2 A menudo se presenta la no linealidad de los recuentos de las placas que contienen la dilucin, es decir,
las diluciones de 10 veces de la muestra con frecuencia no dan como resultado reducciones de 10 veces en los
nmeros de colonias recuperadas del medio en la placa. Esto se ha atribuido a la fragmentacin del micelio y a la
ruptura de los cmulos de esporas durante la dilucin adems de la inhibicin competitiva cuando hay un gran
nmero de colonias sobre las placas.
PRECAUCIN las esporas de los mohos se dispersan en el aire con gran facilidad. Manipule las cajas de Petri
con cuidado para evitar el desarrollo de colonias satlites que ocasionaran una sobreestimacin de la poblacin en
la muestra.

Si es necesario, realice un examen (vase el numeral 6.9) con microscopio (vase el numeral 6.7)
con el fin de diferenciar entre clulas de levaduras o de mohos y bacterias provenientes de las
colonias.
Cuente las colonias de levaduras y las colonias/propgulas de mohos independientemente, si
es necesario.
Para la identificacin de levaduras y mohos, seleccione reas de crecimiento de hongos y
retrelas para examen con microscopio o realice la inoculacin en un medio adecuado de
aislamiento o de identificacin.

10.

EXPRESIN DE RESULTADOS Y LMITES DE CONFIANZA

Registre las colonias de levaduras y las colonias/propgulas de mohos independientemente, si

es necesario. Vase la NTC 4092

11.

INFORME DE ENSAYO

El informe de ensayo debe incluir por lo menos la siguiente informacin:

a)

toda la informacin necesaria para la identificacin completa de la muestra,

8

NORMA TCNICA COLOMBIANA

NTC 5698-1

b)

el mtodo de muestreo utilizado, si se conoce;

c)

el mtodo de ensayo utilizado, con referencia a esta NTC;

d)

todos los detalles operativos que no se especifican en esta norma o que se consideran
opcionales, junto con los detalles de todos los incidentes que hayan podido tener
influencia en los resultados de ensayo,

e)

resultados de ensayo obtenidos.

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BIBLIOGRAFA

[1]

Bell, C., Neaves, P., Williams, A.P. Food Microbiology and Laboratory Practice.
Blackwell, Oxford, 2005. 324 p.

[2]

Beuchat, L.R. Media for Detecting and Enumerating Yeasts and Moulds. In: Corry,
J.E.L., Curtis, G.D.W., Baird, R.M., Editors. Handbook of Culture Media for Food
Microbiology, pp. 369-386. Elsevier, Amsterdam, 2003. (Progress in Industrial
Microbiology, Vol 37).

[3]

Beuchat, L.R., Frndberg, E., Deak, T., Alzamora, S.M., Chen, J., Guerrero, A.S.,
Lpez-Malo, A., Ohlsson, I., Olsen, M., Peinado, J.M., Schenurer, J., De Siloniz, M.I.,
Tornai-Lehoczki, J. (2001) Performance of Mycological Media in Enumerating
Desiccated Food Spoilage Yeasts: An Interlaboratory study. Int. J. Food Microbiol. 2001,
70, pp 8-96.

[4]

King Jr., A.D., Hocking, A.d., Pitt, J.I. (1979) Dichloran-Rose Bengal Medium for
Enumeration and Isolation of Moulds from Foods. Appl. Environ. Microbiol. 1979, 37, pp.
959-964.

[5]

ISO 6107-6:2004, Water Quality. Vocabulary. Part 6.

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NTC 5698-1

DOCUMENTO DE REFERENCIA
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION. Microbiology of Food and
Animal Feedings Stuffs. Horizontal Method for the Enumeration of Yeasts and Moulds. Part 1:
Colony Count Technique in Products with Water Activity Greater than 0,95. Gneva: ISO, 2004,
8 p (ISO 21527-1:2008 (E).

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