Tesis Quimica PDF

UNIVERSIDAD DE GRANADA
Facultad de Ciencias
Departamento de Ingeniera Qumica
Tesis Doctoral:
BIODEGRADACIN Y TOXICIDAD DE TENSIOACTIVOS
COMERCIALES
Realizada por
Manuela Mara Lechuga Villena
Dirigida por
Da. Encarnacin Jurado Alameda,
D. Mercedes Fernndez Serrano
y D. Josefa Nez Olea
del Departamento de Ingeniera Qumica
Granada, Octubre 2005.
BIODEGRADACIN Y TOXICIDAD DE TENSIOACTIVOS COMERCIALES

Memoria que presenta la Ingeniera Qumica Manuela Mara Lechuga Villena para aspirar
al Grado de Doctor en Ingeniera Qumica.
Granada, Octubre 2005.
Fdo. Manuela Mara Lechuga Villena

Da ENCARNACIN JURADO ALAMEDA, Catedrtica de Ingeniera Qumica y
Directora del Departamento del mismo nombre:
CERTIFICA: Que el presente trabajo sobre Biodegradacin y Toxicidad de
Tensioactivos Comerciales ha sido realizado en este Departamento bajo la direccin de la
Dra. Encarnacin Jurado Alameda, la Dra. Mercedes Fernndez Serrano y la Dra. Josefa
Nez Olea, por la Ingeniera Qumica Manuela Lechuga Villena para aspirar el grado de
Doctor en Ingeniera Qumica.
Fdo. Encarnacin Jurado Alameda

LOS DIRECTORES DE LA TESIS
Fdo. Encarnacin Jurado Alameda
Fdo. Mercedes Fernndez Serrano
Catedrtica de Ingeniera Qumica
Profesora Titular de Ingeniera Qumica
Fdo. Josefa Nez Olea

Profesora Asociada de Ingeniera Qumica
Lo que sabemos es una gota de agua,

Lo que ignoramos es el ocano
A. Einstein
A mis padres,
Manuel y Magdalena
Agradecimientos
Mi ms sincero agradecimiento:
A la Dra. Encarnacin Jurado Alameda, a la Dra. Mercedes Fernndez Serrano y
a la Dra. Josefa Nez Olea, por su enorme inters y dedicacin que han sido
imprescindibles para la realizacin de este trabajo. En especial a la Dra. Encarnacin por
confiar en m cuando yo no me consideraba capaz de hacer este trabajo.
A mis compaeros Deisi, Miguel, Nadia, Alejandro y Juanfra, por ayudarme
tanto y animarme siempre, sin ellos el camino no hubiera sido fcil.
Al resto de miembros del Departamento de Ingeniera Qumica de la Universidad
de Granada, por su disponibilidad y amabilidad en todo momento, en especial al Dr.
Rafael Bailn Moreno por su enorme entusiasmo y por hacerme ver la ciencia y el mundo
de los detergentes como algo apasionante, al Dr. Fernanado Camacho Rubio por su gran
aportacin en la discusin de resultados, y a Rosa Fuentes y Antonio Carmona por
resolverme tantos problemas.
A todos los miembros del Departamento de Ingeniera Qumica, Tecnologa de
los Alimentos y Tecnologas del Medio Ambiente de la Universidad de Cdiz, por
animarme a escribir las primeras palabras de esta tesis y por prestarme tan buenas ideas,
en especial a Migue por ayudarme tanto, y a Moha, Marta, lvaro, Carlos, Mara,
Josepor su enorme acogida. Siempre les deber a ellos una parte de esta tesis.
A mi familia, por su cario y apoyo en todos los momentos, en especial a mis
padres a quienes debo este trabajo por su inmenso esfuerzo, por su dedicacin y por no
desanimarse nunca conmigo, y a mi hermana Magda y mi segundo hermano Fran,
referencias y apoyo siempre en la distancia.
A mis amigos, por estar a mi lado y por entenderme siempre: a Patri por
ofrecerme su gran amistad y por comprenderme en este camino que vivimos juntas, a
Estela y Susana por transmitirme tanta alegra, a Trini, a Nuria, a Mara, a Patri, a Pepe
por comprender lo importante que era este trabajo para mi.
A Manuel por su enorme paciencia, por su inmensa ilusin en que este trabajo
saliese adelante y por confiar tanto en m. Gracias por no dejarme tirar nunca la toalla, por
ser mi apoyo siempre, por compartir conmigo cada esfuerzo y por recordarme cada da el
privilegio de hacer esta tesis. Otra parte de ella es tuya.
Y gracias a Dios por darme la vida y tantas cosas buenas que he recibido a lo
largo de estos aos, por tener la oportunidad de hacer este trabajo y por hacerme ver que lo
importante son las cosas sencillas de la vida. En este trabajo tambin lo he descubierto.
SUMARIO
RESUMEN ........................................................................................................................... 1
1. OBJETIVOS...11
2. INTRODUCCIN ......................................................................................................... 19
2.1. ANTECEDENTES HISTRICOS DE LOS DETERGENTES............................. 21
2.2. EVOLUCIN Y TENDENCIA EN LA UTILIZACIN DE TENSIOACTIVOS
INDUSTRIALES ............................................................................................................... 24
2.3. AGENTES TENSIOACTIVOS................................................................................. 28
2.3.1. PRINCIPALES FAMILIAS DE TENSIOACTIVOS ........................................... 29
2.3.1.1. Alcoholes grasos etoxilados ........................................................................... 30
2.3.1.2. Nonilfenoles polietoxilados............................................................................ 32
2.3.1.3. Alquilpoliglucsidos....................................................................................... 35
2.3.1.4. Lineal alquilbenceno sulfonatos (LAS).......................................................... 39
2.3.2. PROPIEDADES Y APLICACIONES DE LOS AGENTES TENSIOACTIVOS 40
2.3.3. IMPLICACIONES AMBIENTALES ................................................................... 47
2.3.4. NIVELES DE TENSIOACTIVOS EN AGUAS SUPERFICIALES.................... 50
2.4. BIODEGRADACIN. CONCEPTO Y EVALUACIN ....................................... 51
2.4.1. EVALUACIN DE LA BIODEGRADABILIDAD ............................................ 55
2.4.1.1. Ensayos de biodegradacin ............................................................................ 55
2.4.1.2. Tcnicas analticas para el seguimiento de la biodegradacin ....................... 63
2.4.2. VARIABLES QUE INFLUYEN EN LA BIODEGRADACIN......................... 66
2.4.3. MODELOS CINTICOS DE BIODEGRADACIN .......................................... 70
2.4.3.1. Introduccin.................................................................................................... 70
2.4.3.2. Modelo cintico de primer orden.................................................................... 72
2.4.3.3. Cinticas de Monod, co-metabolismo y segundo orden................................. 74
2.4.3.4. Eleccin del modelo cintico ms adecuado para un conjunto de datos de
biodegradacin ............................................................................................................ 78
2.4.3.5. Modelo cintico de Quiroga-Sales ................................................................. 83
2.4.3.6. Modelo cintico de Romero ........................................................................... 86
2.4.4. RUTAS DE BIODEGRADACIN ...................................................................... 90
2.4.4.2. Nonilfenoles polietoxilados............................................................................ 93
2.4.4.3. Alquilpoliglucsidos....................................................................................... 95
2.4.4.4. Lineal alquilbenceno sulfonatos ..................................................................... 96
2.4.5. RELACIN ENTRE ESTRUCTURA Y BIODEGRADABILIDAD .................. 98
2.4.5.2. Nonilfenoles Polietoxilados.......................................................................... 100
2.4.5.3. Alquilpoliglucsidos..................................................................................... 101
2.4.5.4. Lineal alquilbenceno sulfonatos ................................................................... 101
2.5. TOXICIDAD............................................................................................................. 103
I
2.5.1. INTRODUCCIN .............................................................................................. 103

2.5.2. RELACIN ENTRE ESTRUCTURA Y TOXICIDAD .................................... 104
2.6. LEGISLACIN SOBRE TENSIOACTIVOS....................................................... 107
2.6.1. LEGISLACIN EN EL MBITO EUROPEO .................................................. 108
2.6.2. LEGISLACIN EN EL MBITO ESTATAL................................................... 112
2.6.3. LEGISLACIN EN EL MBITO DE LA COMUNIDAD AUTNOMA
ANDALUZA................................................................................................................. 114
3. MATERIALES Y MTODOS................................................................................... 115
3.1. TENSIOACTIVOS UTILIZADOS ........................................................................ 117
3.2. DISEO EXPERIMENTAL................................................................................... 119
3.2.1. ENSAYOS DE BIODEGRADACIN............................................................... 119
3.2.2. TOXICIDAD DE TENSIOACTIVOS................................................................ 122
3.2.3. TOXICIDAD DURANTE EL PROCESO DE BIODEGRADACIN .............. 122
3.3. MTODOS DE ENSAYO DE LA BIODEGRADABILIDAD ............................ 123
3.3.1. ENSAYO ESTTICO (ENSAYO DE SELECCIN) ....................................... 123
3.3.1.1. Fundamento del mtodo ............................................................................... 124
3.3.1.2. Reactivos y disoluciones .............................................................................. 125
3.3.1.3. Equipos......................................................................................................... 127
3.3.1.4. Preparacin de las muestras ......................................................................... 128
3.3.1.5. Procedimiento y condiciones de operacin.................................................. 129
3.3.1.6. Seguimiento de la biodegradacin ............................................................... 131
3.3.2. ENSAYO DINMICO (ENSAYO DE COMPROBACIN)............................ 132
3.3.2.3. Equipos......................................................................................................... 134
3.3.2.4. Puesta en marcha de la instalacin............................................................... 137
3.3.2.5. Procedimiento y condiciones de operacin.................................................. 138
3.3.2.6. Seguimiento de la biodegradacin ............................................................... 139
3.3.3. ENSAYO POR EL MTODO RESPIROMTRICO ........................................ 141
3.3.3.3. Equipos......................................................................................................... 142
3.3.3.4. Procedimiento............................................................................................... 143
3.3.3.5. Toma de datos y expresin de los resultados ............................................... 144
3.3.4. ENSAYO POR EL MTODO DE LA BOTELLA CERRADA........................ 145
3.3.4.3. Equipos......................................................................................................... 146
3.3.4.4. Procedimiento............................................................................................... 146
3.3.4.5. Toma de datos y expresin de los resultados ............................................... 146
3.4. MTODOS DE ANLISIS ..................................................................................... 147
3.4.1. ANLISIS DE TENSIOACTIVOS.................................................................... 147
3.4.1.1. Mtodo simplificado de anlisis para determinacin de sustancias activas al
azul de metileno (MBAS) ......................................................................................... 147
3.4.1.2. Mtodo de Wickbold con el Reactivo de Dragendorff ................................ 148
II
3.4.1.3. Mtodo colorimtrico del yodo-yoduro........................................................ 155

3.4.1.4. Mtodo del carbono orgnico total (TOC) ................................................... 157
3.4.1.5. Demanda biolgica de oxgeno (DBO) ........................................................ 162
3.4.1.6. Oxgeno disuelto........................................................................................... 164
3.4.2. RECUENTO DE LA BIOMASA........................................................................ 164
3.4.2.1. Fundamento .................................................................................................. 164
3.4.2.3. Equipos ......................................................................................................... 165
3.4.2.4. Procedimiento............................................................................................... 165
3.4.3. PARMETROS DE CONTROL ........................................................................ 166
3.4.3.1. Determinacin de slidos en suspensin ...................................................... 166
3.4.3.2. Demanda qumica de oxgeno (DQO) .......................................................... 167
3.4.4. DETERMINACIN DE LOS PARMETROS DE CALIDAD DE UN
MTODO ANALTICO ............................................................................................... 169
3.5. DETERMINACIN DE LA TOXICIDAD ........................................................... 171
3.5.1. FUNDAMENTO ................................................................................................. 171
3.5.2. REACTIVOS Y DISOLUCIONES..................................................................... 172
3.5.3. EQUIPOS ............................................................................................................ 172
3.5.3.1. LUMIStox..................................................................................................... 172
3.5.3.2. Unidad de incubacin ................................................................................... 172
3.5.4. PROCEDIMIENTO............................................................................................. 172
3.5.5. EVALUACIN ................................................................................................... 174
3.5.5.2. Determinacin de los valores de EC ............................................................ 176
3.5.5.3. Determinacin de la toxicidad durante el proceso de biodegradacin ......... 176
3.6. PROTOCOLO DE LIMPIEZA .............................................................................. 177
4. RESULTADOS ............................................................................................................ 179
4.1. BIODEGRADABILIDAD DE TENSIOACTIVOS............................................... 181
4.1.1. BIODEGRADABILIDAD DE ALCOHOLES GRASOS ETOXILADOS ........ 181
4.1.2. BIODEGRADABILIDAD DEL NONILFENOL POLIETOXILADO .............. 192
4.1.3. BIODEGRADABILIDAD DE ALQUILPOLIGLUCSIDOS.......................... 194
4.1.4. BIODEGRADABILIDAD DEL LAS ................................................................. 201
4.1.5. BIODEGRADABILIDAD DE MEZCLAS DE ALCOHOLES GRASOS
ETOXILADOS Y ALQUILPOLIGLUCSIDOS........................................................ 202
4.2. TOXICIDAD DE TENSIOACTIVOS .................................................................... 203
4.3. TOXICIDAD DE TENSIOACTIVOS DURANTE EL PROCESO DE
BIODEGRADACIN ..................................................................................................... 217
5. DISCUSIN DE RESULTADOS .............................................................................. 233
5.1. DESARROLLO DE MTODOS DE ANLISIS PARA EL ESTUDIO DE LA
BIODEGRADABILIDAD PRIMARIA......................................................................... 235
5.1.1. MTODO SIMPLIFICADO DE ANLISIS PARA LA DETERMINACIN DE
TENSIOACTIVOS ANINICOS (MBAS).................................................................. 235
5.1.1.1. Parmetros de calidad del mtodo analtico ................................................. 240
III
5.1.2. MTODOS DE ANLISIS PARA DETERMINACIN DE ALCOHOLES

GRASOS ETOXILADOS............................................................................................. 246
5.1.2.1. Mtodo colorimtrico del yodo-yoduro ....................................................... 246
5.1.2.2. Mtodo de Wickbold con el Reactivo de Dragendorff ................................ 251
5.1.2.3. Comparacin de mtodos de anlisis para alcoholes grasos etoxilados....... 257
5.1.2.4. Aplicacin de los mtodos de anlisis para mezclas tensioactivas de AGE y
APG........................................................................................................................... 259
5.2. BIODEGRADACIN DE ALCOHOLES GRASOS ETOXILADOS................ 264
5.2.1. INFLUENCIA DEL GRADO DE ETOXILACIN Y LA LONGITUD DE LA
CADENA CARBONADA SOBRE LA BIODEGRADABILIDAD PRIMARIA ....... 265
5.2.2. INFLUENCIA DE LA CONCENTRACIN DE TENSIOACTIVO EN EL
PROCESO DE BIODEGRADACIN ......................................................................... 270
5.2.3.
PARMETROS
CARACTERSTICOS
DEL
PROCESO
DE
BIODEGRADACIN................................................................................................... 272
5.2.4. CRECIMIENTO DE LA BIOMASA DURANTE EL PROCESO DE
BIODEGRADACIN................................................................................................... 280
5.2.5. PARMETROS CARACTERSTICOS DE LAS CURVAS DE CRECIMIENTO
....................................................................................................................................... 286
5.2.6. ESTUDIO CINTICO DE LA BIODEGRADACIN PRIMARIA DE LOS AGE
....................................................................................................................................... 289
5.2.6.1. Modelos cinticos para la biodegradacin de un sustrato que no soporta el
crecimiento de los microorganismos......................................................................... 289
5.2.6.2. Modelos cinticos para la biodegradacin de un sustrato que soporta el
crecimiento de los microorganismos......................................................................... 301
5.2.6.3. Modelos para la biodegradacin de sustratos que inhiben el crecimiento de
microorganismos ....................................................................................................... 319
5.3. BIODEGRADACIN DEL NONILFENOL POLIETOXILADO...................... 323
5.3.2. ESTUDIO CINTICO DE LA BIODEGRADACIN PRIMARIA DEL NPEO
....................................................................................................................................... 328
5.4. BIODEGRADACIN DE TENSIOACTIVOS DURANTE EL ENSAYO
DINMICO ..................................................................................................................... 334
5.4.1. PUESTA EN MARCHA DE LA INSTALACIN ............................................ 334
5.5. BIODEGRADACIN DE ALQUILPOLIGLUCSIDOS .................................. 341
5.5.1. BIODEGRADACIN DE APG POR EL MTODO DE LA BOTELLA
CERRADA.................................................................................................................... 343
BIODEGRADACIN................................................................................................... 348
5.5.3. BIODEGRADACIN DE APG POR EL MTODO MANOMTRICO
RESPIROMTRICO .................................................................................................... 354
5.6. BIODEGRADACIN DEL LAS............................................................................ 365
5.6.1. ESTUDIO CINTICO DE LA BIODEGRADACIN PRIMARIA DEL LAS 369
5.7. COMPARACIN DE LA BIODEGRADABILIDAD Y CRECIMIENTO DE
MICROORGANISMOS DE LOS TENSIOACTIVOS ANALIZADOS ................... 381
5.8. BIODEGRADACIN DE MEZCLAS DE AGE Y APG ..................................... 385
IV

BIODEGRADACIN CONJUNTA DE AGE Y APG ................................................ 388
5.8.2. ESTUDIO CINTICO DE LA BIODEGRADACIN PRIMARIA DE
MEZCLAS DE AGE Y APG ........................................................................................ 392
5.9. TOXICIDAD DE TENSIOACTIVOS .................................................................... 395
5.9.1. DETERMINACIN DE LOS VALORES DE EC20 y EC50............................... 396
BIODEGRADACIN ..................................................................................................... 406
6. CONCLUSIONES ....................................................................................................... 413
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS .......................................................................... 419
LISTA DE TABLAS........................................................................................................ 439
LISTA DE FIGURAS...................................................................................................... 449
NOMENCLATURA ........................................................................................................ 457
VI
TESIS DOCTORAL
RESUMEN
RESUMEN
El futuro de la produccin y consumo de detergentes durante los prximos aos va
a estar fuertemente condicionado por factores ecolgicos y energticos fundamentalmente.
Al producto tensioactivo se le exigen una serie de condiciones ptimas de comportamiento
en cuanto a precio, accin a baja temperatura (ahorro energtico), mximo rendimiento
para distintas superficies y suciedades, no toxicidad, no irritabilidad, no alteracin del
medio ambiente, desarrollo de la funcin en tiempo corto, etc. Todo esto hace que la
formulacin de detergentes requiera el concurso de una investigacin fundamental y
aplicada muy intensa.
Dentro del sector de los detergentes, existe un subsector no suficientemente
conocido que fabrica y vende productos especiales para la aplicacin en la industria,
colectividades, restauracin y hostelera. La formulacin de estos productos presenta
caractersticas especficas, ya que son normalmente utilizados por aplicadores
profesionales. Este mercado representa un 10% del conjunto del sector, pero teniendo en
cuenta los crecientes requisitos en materia de higiene y la evolucin de un turismo de
mayor calidad en el caso de restauracin y hostelera, existen fundadas esperanzas de
crecimiento de este sector, mucho mayor que en el resto de sectores de detergentes y
jabones (Maceda, 1995).
Los detergentes industriales son productos altamente contaminantes, debido a su
especial composicin qumica, provocando un efecto sobre las aguas residuales bastante
intenso si se tiene en cuenta la cantidad vertida y la frecuencia con que se vierten. Esto
puede ocasionar problemas de eutrofizacin y problemas graves para la salud como niveles
elevados de cloro, que pueden producir compuestos clorados de naturaleza no bien
conocida, algunos posiblemente de carcter txico y/o carcinognico o los posibles efectos
a largo plazo de los detergentes sobre el organismo humano, que aunque no son
suficientemente conocidos, se le atribuyen diversas acciones dermatolgicas, neurolgicas,
cardiolgicas, etc.
En cuanto a la formulacin tpica de los detergentes lquidos industriales
utilizados, podemos decir que combinan la accin qumica causada por su alta alcalinidad
y efecto oxidante con la accin tensioactiva y con la accin mecnica del flujo de lquido.
Para ello incorporan los siguientes compuestos (Davidsohn, 1987; Falbe, 1987):
TESIS DOCTORAL
RESUMEN
i) Hidrxido potsico o sdico en proporcin elevada (5-15 %). Su funcin consiste

en saponificar las grasas adheridas para su eliminacin y coadyuvar en la accin
tensioactiva mediante el jabn formado. Se prefiere usar KOH porque los jabones
potsicos son ms blandos y se adhieren menos que los sdicos, aunque por razones de
coste suele utilizarse extensamente NaOH. Otra de sus funciones es promover la
solubilidad por hidrlisis de sustancias insolubles (protenas, almidones) o coloreadas.
ii) Tensioactivos de baja espuma (0-2 %). Suelen ser tensioactivos no inicos, la
mayora son derivados polietilnicos o polipropilnicos de alquilfenoles, cidos grasos,
alcoholes y amidas (Schick, 1987; Rossen, 1989). No causan una disminucin importante
de la tensin superficial en la interfase agua/aire por lo que producen poca espuma y no
interfieren en la accin mecnica.
iii) Reforzadores (0-10%) del grupo de los fosfatos (pirofosfato tetrasdico-TSPP,
tripolifosfato sdico-STP, pirofosfato tetrapotsico-TKPP, trimetafosfato sdico o
trisdico o tripotsico), que empiezan a ser sustituidos por citrato sdico por su mejor
efecto secuestrante y solubilidad. Su funcin es compleja y variada: se utilizan por su
capacidad para controlar la dureza del agua y regular la alcalinidad final del producto, por
su accin como tampones y su capacidad defloculante.
iv) Agentes secuestrantes o quelantes respecto a cationes metlicos, como son cido
nitrilotriactico (NTA) (0-15 %) o EDTA sdico (0-5 %).
v) Silicato sdico (0-20 %), de efecto protector (anticorrosivo) de las superficies
metlicas y de porcelana por formacin de monocapas.
vi) Fosfonatos (0-2%) de accin redispersante de la suciedad una vez eliminada.
vii) Cloro (hipoclorito sdico o dicloroisocianurato sdico) (0-5 %) de efecto
oxidante y blanqueante.
viii) Polmeros acrlicos (0-5 %) de accin dispersante.
ix) Colorantes y agua (c. s.).
Estos detergentes tienen efectos secundarios nocivos entre los que destacaremos los
siguientes (Falbe, 1987; Tadros, 1993):
TESIS DOCTORAL
RESUMEN
a) Efectos medioambientales:
- Elevada alcalinidad de las aguas residuales (pH superior a 12) causada por
la sosa o potasa.
- Altos niveles de fosforo que causan problemas de eutrofizacin en las
aguas.
- Formacin de espumas indeseables (contenidos admisibles < 0.3 mg/L de
tensioactivo (Marn, 1995), que se estabilizan con la presencia de sales
minerales disueltas, partculas finamente divididas, protenas etc.
- La presencia de detergentes en las aguas interfiere el poder depurador de
las aguas ya que disminuyen la absorcin de oxgeno de la atmsfera
b) Poder corrosivo:
- El contenido en sosa o potasa tambin puede causar ataque qumico sobre
las piezas de las mquinas de lavado y erosionar las superficies a limpiar,
creando microespacios libres donde pueden proliferar bacterias u otros
microorganismos.
c) Efectos sobre la salud:
- Si son sustituidos los fosfatos por otros secuestrantes como el NTA o
EDTA no se evita el problema de la eutrofizacin y existe un problema
aadido, los iones pesados como plomo o mercurio son tambin
secuestrados y solubilizados. Los iones no pueden ser retirados del ciclo del
agua precipitndolos junto con los lodos en las plantas de tratamiento. Estos
iones entraran a formar parte del ciclo del agua y al ser ingeridos son
txicos y al atravesar la barrera placentaria pueden ocasionar problemas
mutagnicos.
- Niveles elevados de cloro y de compuestos de adicin clorados de
naturaleza no bien conocida, algunos posiblemente de carcter txico y/o
carcinognico.
- Problemas de accidentes de carcter grave si son ingeridos de forma
involuntaria por la excesiva alcalinidad de estos detergentes.
TESIS DOCTORAL
RESUMEN
- Los efectos a largo plazo de los detergentes sobre el organismo humano,

no son suficientemente conocidos, pero se le atribuyen diversas acciones
dermatolgicas, neurolgicas, cadiolgicas etc. (Llopis y col. 1987)
Resolver todos estos problemas mediante la formulacin de un detergente que sea

capaz de trabajar en medios menos agresivos y que consiga una alta eficacia de lavado es
actualmente un reto en el campo de las empresas que se dedican a la fabricacin y
comercializacin de este tipo de detergentes, y seran muy bien acogidos tanto por los
consumidores como por las empresas que fabrican la maquinaria especfica y necesaria en
el proceso de lavado.
En la presente tesis doctoral se ha analizado y evaluado la biodegradabilidad y
toxicidad de diferentes tensioactivos no inicos comerciales: alcoholes grasos etoxilados
(AGE) con diferentes grados de etoxilacin, alquilpoliglucsidos (APG) y Nonilfenol
polietoxilado (NPEO) adems del tensioactivo aninico lineal alquilbenceno sulfonato
(LAS), ampliamente utilizado en formulaciones comerciales, con objeto de comparacin.
Simultneamente al proceso de biodegradacin se ha analizado el crecimiento de
microorganismos, evaluando las unidades formadoras de colonias as como la toxicidad de
los productos de degradacin generados durante este proceso.
Este anlisis permitir decidir sobre la inclusin de un determinado tensioactivo en
una formulacin especfica atendiendo a criterios medioambientales.
Para el estudio de la biodegradabilidad de tensioactivos no inicos etoxilados se ha
seguido la NORMA UNE 55-844-91, poniendo a punto y aplicando un procedimiento de
anlisis simplificado, basado en la formacin de un complejo coloreado entre el
tensioactivo no inico y el reactivo yodo-yoduro. La bondad del mtodo analtico ha
resultado dependiente del nmero de moles de xido de etileno del tensioactivo, ya que
tanto el lmite de deteccin como la sensibilidad del mtodo disminuyen con el nmero de
moles de xido de etileno del tensioactivo ensayado. Este mtodo puede ser aplicado para
el estudio de la biodegradacin de tensioactivos no inicos cuyo grado de etoxilacin sea
mayor de cinco en el rango de concentraciones de 0 a 5 mg/L, rango de inters en el
estudio de biodegradabilidad en aguas residuales.
Adems se ha comprobado que la presencia de tensioactivos alquilpoliglucsidos
no interfiere de forma importante en la medida de alcoholes grasos etoxilados por lo que el
4
TESIS DOCTORAL
RESUMEN
mtodo colorimtrico del yodo-yoduro puede utilizarse para el seguimiento de la

biodegradabilidad de mezclas de alcoholes grasos etoxilados y alquilpoliglucsidos.
Para la estimacin de tensioactivos aninicos se propone una simplificacin del
mtodo normalizado especificado por la norma UNE EN 903. Dicha simplificacin implica
la extraccin del par inico formado entre el tensioactivo y el azul de metileno en una sola
etapa, desplazando el equilibrio de transferencia del par inico hacia la fase orgnica
(cloroformo) y aumentando la relacin volumen de fase orgnica/volumen de muestra
ensayada en el proceso de extraccin. El procedimiento propuesto elimina las etapas de
filtracin necesarias en el mtodo oficial. Cuando se ha aplicado a la determinacin del
LAS los resultados ptimos han sido para una relacin volumen de fase orgnica/volumen
de muestra de 5/4, alcanzndose un lmite de deteccin de 0.22 mg/L y un lmite de
cuantificacin de 0.73 mg/L para este tensioactivo.
Obtenidos los perfiles de biodegradacin para los tensioactivos alcoholes grasos
etoxilados, nonilfenol polietoxilado y LAS, se han definido parmetros caractersticos del
proceso de biodegradacin: tiempo de latencia, biodegradabilidad, tiempo de vida media,
velocidad media de biodegradacin y concentracin residual de tensioactivo. Estos
parmetros se modifican con la concentracin de tensioactivo ensayada, indicando que a
medida que aumenta la concentracin de tensioactivo se produce una disminucin de la
velocidad del proceso de biodegradacin, un aumento del tiempo de vida media, una
disminucin de la biodegradabilidad y un aumento de la concentracin residual de
tensioactivo.
Tambin se ha cuantificado la velocidad media de biodegradacin, VM. Para AGE
resulta aumentar con el nmero de moles de xido de etileno del tensioactivo y el peso
molecular de ste, siendo este efecto ms acusado para concentraciones mayores de 25
mg/L. Este hecho se confirma con los perfiles de crecimiento de microorganismos, donde
se observa una mayor concentracin de unidades formadoras de colonias (UFC) cuando es
mayor el nmero de moles de xido de etileno del tensioactivo.
A partir de las curvas de crecimiento de microorganismos, se han definido y
evaluado parmetros caractersticos durante el proceso de biodegradacin: la velocidad
especfica de crecimiento (k), el nmero mximo de unidades formadoras de colonias
(UFC/ml,
max)
y el rendimiento de produccin de biomasa por gramo de tensioactivo
tratado (Yap). Estos parmetros han servido para establecer que el modelo cintico que
TESIS DOCTORAL
RESUMEN
explica la biodegradacin de los tensioactivos ensayados, alcoholes grasos etoxilados,

nonilfenol polietoxilado y LAS son aquellos que soportan el crecimiento de
microorganismos.
Segn estos modelos, la cintica de biodegradacin de tensioactivos alcoholes
grasos etoxilados, nonilfenol polietoxilado y LAS puede ser explicada por modelos que
soportan el crecimiento de microorganismos suponiendo Monod y una concentracin de
tensioactivo residual y teniendo en cuenta la ecuacin de Gaden para establecer la relacin
entre la disminucin de la concentracin de sustrato y el crecimiento de microorganismos,
segn la ecuacin:
0 xm 1 exp
x=
( xm + 0 ) t
xm exp m ( xm + 0 ) t + 0
S
Este modelo puede ser aplicado hasta concentraciones de 25 mg/L para alcoholes
grasos etoxilados y nonilfenol polietoxilado, y hasta 50 mg/L para el LAS.
La aplicacin del modelo cintico para los tensioactivos que han sido evaluados
utilizando el ensayo esttico (Screening Test, OEDC, 1976) ha permitido determinar los
parmetros cinticos caractersticos, velocidad especfica de crecimiento mxima m y la
constante de saturacin KS, parmetros necesarios para el diseo de sistemas de
biodegradacin para estos productos en estaciones depuradoras y que han permitido la
comparacin de todos los tensioactivos ensayados.
Los parmetros caractersticos obtenidos de los modelos han sido los que aparecen
en la siguiente tabla:
TESIS DOCTORAL
RESUMEN
FINDET 1214N/23
S0, mg/L
5
15
20
25
m, h-1
0.027
0.027
0.027
0.016
KS, mg/L
1.009
1.009
1.009
1.265
FINDET 1618A/18
S0, mg/L
5
25
m, h-1
0.023
0.014
KS, mg/L
0.201
1.877
FINDET 1214N/16
S0, mg/L
5
25
m, h-1
0.030
0.008
KS, mg/L
0.156
2.920
FINDET 1618A/23
S0, mg/L
5
m, h-1
0.017
KS, mg/L
0.257
FINDET 10/18
S0, mg/L
5
m, h-1
0.010
KS, mg/L
0.415
FINDET 10/15
S0, mg/L
5
m, h-1
0.018
KS, mg/L
0.275
NPEO
S0, mg/L m, h-1
5
0.1346
25
0.0127
KS, mg/L
1.780
1.780
LAS
S0, mg/L
5
25
50
m, h-1
0.054
0.054
0.054
KS, mg/L
4.171
4.171
4.171
Este modelo no es aplicable para concentraciones de tensioactivo elevadas (50

mg/L para los AGE y NPEO). A estas concentraciones se produce una inhibicin de los
microorganismos, siendo necesario evaluar una constante de inhibicin, Ki, que ha
resultado ser mayor para los tensioactivos de mayor peso molecular y mayor grado de
etoxilacin. Su clculo se ha realizado aplicando el modelo de Andrews:
TESIS DOCTORAL
RESUMEN
x ( + x )
0 + x
S
ln m 0
+ (1 + i ( xm + 0 ) ) ln
i x = mt
xm + 0 0 ( xm x)
Las constantes de inhibicin encontradas han sido:
FINDET 1214N/23
S0, mg/L
Ki, mg/L
50
1515.15
FINDET 1618A/18
S0, mg/L
Ki, mg/L
50
2500.00
FINDET 1214N/16
S0, mg/L
Ki, mg/L
50
71.32
NPEO
S0, mg/L
Ki, mg/L
50
125.00
La biodegradacin de los tensioactivos alquilpoliglucsidos ha sido realizada

aplicando los mtodos de la botella cerrada (301 D OEDC, 1993b) y el mtodo
respiromtrico (301 F OEDC, 1993b) evaluando la DBO. El estudio de los perfiles de
biodegradacin ha permitido la evaluacin de la biodegradabilidad de estos tensioactivos
determinando la velocidad especfica de crecimiento , la constante de mineralizacin Kmin
y la constante de saturacin KS. La comparacin de la biodegradacin de los tensioactivos
alquilpoliglucsidos y el alcohol graso etoxilado Findet 1618A/18 ha determinado que el
porcentaje de mineralizacin alcanzado y la velocidad especfica de crecimiento de
microorganismos sigue la secuencia GCP 215 > Findet 1618A/18 > GCP 600 > GCP
650.
TESIS DOCTORAL
RESUMEN
La determinacin de la velocidad especfica de crecimiento mxima obtenida m

para los tensiactivos AGE, NPEO y LAS aplicando el modelo cintico de Monod, y
admitiendo la clasificacin de biodegradabilidad segn Blok (Blok, 1996), evaluada por el
mtodo respiromtrico y tomando como referencia el tensioactivo Findet 1618A/18 que se
ha analizado mediante los dos procedimientos, ensayo esttico y mtodo respiromtrico,
ha determinado que los tensioactivos alcoholes grasos etoxilados Findet 1214N/23, Findet
1214N/16 con mayor grado de etoxilacin, el NPEO y el LAS pueden considerarse
fcilmente biodegradables, mientras que el Findet 1618A/23, Findet 10/18 y Findet 10/15
son tensioactivos de biodegradabilidad inherente igual que los tensioactivos GCP 600 y
GCP 650.
Para determinar la toxicidad de todos los tensioactivos se ha utilizado el ensayo
Lumistox, que utiliza las bacterias marinas luminiscentes de la cepa Vibrio fischeri como
microorganismo de prueba. Los resultados muestran que de los alcoholes grasos etoxilados
ensayados el ms txico es el Findet 1214N/16, al presentar el menor valor de EC50, 1.25
mg/L, pues se trata de la concentracin de tensioactivo que produce una inhibicin de la
bioluminiscencia de las bacterias del 50%. De los alquilpoliglucsidos el GCP 650 es el
ms txico con un valor de EC50 de 13.81 mg/L. El menos txico de los tensioactivos
ensayados ha sido el Nonilfenol polietoxilado con 9.5 moles de xido de etileno con una
EC50 de 160.6 mg/L.
La toxicidad de los alcoholes grasos etoxilados depende de la estructura del
tensioactivo disminuyendo sta con el tamao de la cadena carbonada y etoxilada.
Tambin se ha establecido una correlacin entre la toxicidad y el balance hidrfilo-lipfilo
de los tensioactivos (HLB) y el peso molecular (PM), encontrndose que disminuye la
toxicidad con el aumento de ambos parmetros.
Tambin se ha medido la toxicidad durante el proceso de biodegradacin. En los
ensayos realizados con AGE y APG se ha obtenido una disminucin importante de la
toxicidad con el tiempo de biodegradacin, siendo el nivel prcticamente nulo despus de
los 10 das del ensayo para AGE y despus de los 7 das para APG. Para el tensioactivo
LAS no se produce una disminucin de la toxicidad durante los primeros 10 das del
ensayo a concentraciones elevadas de tensioactivo (50 mg/L). El comportamiento del
tensioactivo nonilfenol polietoxilado, de menor toxicidad, es diferente ya que experimenta
un aumento de la toxicidad durante el proceso de biodegradacin a todas las
concentraciones ensayadas, lo que permite afirmar que los metabolitos producidos durante
9
TESIS DOCTORAL
RESUMEN
el proceso de biodegradacin presentan una toxicidad superior a la del tensioactivo de

partida.
10
1. OBJETIVOS
TESIS DOCTORAL
OBJETIVOS
La Industria de detergentes y productos de limpieza en Espaa supone una

facturacin total de ms de 1620 millones de euros al ao, que genera miles de puestos de
trabajo y que produce un tonelaje anual estimado de 1.8 millones de toneladas segn datos
suministrados por la A.D.T.A. (Asociacin de fabricantes de Detergentes Tensioactivos y
Afines) (Closa, 1997). Se trata por tanto de una actividad industrial de gran volumen con
una amplia diversificacin de productos y con un importante impacto en la actividad
econmica del conjunto de la Industria Qumica.
Los objetivos de la presente Tesis Doctoral se enmarcan dentro de los proyectos de
investigacin Formulaciones de detergentes lquidos especficos para el sector industrial
agroalimentario y hostelera (1FD97-0931), Preparaciones enzimticas para la
degradacin de residuos alimentarios (PB98-1293) y Formulaciones especficas de
detergentes biodegradables de base enzimtica (Plan Andaluz de investigacin 20022003), dentro de los grupos de investigacin de la Junta de Andaluca Tensioactivos,
enzimas y emulsiones e Ingeniera de interfases y tecnologa bioqumica.
Estos proyectos estn dirigidos a desarrollar posibles formulaciones de detergentes
lquidos industriales especficas para diferentes suciedades alimentarias, que sean eficaces
en el lavado y en las que se eviten o atenen los efectos nocivos medioambientales y
sanitarios derivados del vertido de estos productos. Asimismo se pretende una reduccin
de los costes energticos mediante la disminucin de la temperatura de lavado con dichas
formulaciones.
Los agentes qumicos mas empleados en la industria para la limpieza, as como las
amenazas o peligros que puede originar su uso y vertido a la red fluvial son los que se
indican en la siguiente tabla:
13
TESIS DOCTORAL
OBJETIVOS
Agentes qumicos empleados para limpieza en la industria

Sustancia
Amenaza /Peligro
lcalis y cidos
Hidrxido potsico
Irritante
Hidrxido sdico
Origina corrosin
cido fosfrico
Irritante/Origina corrosin
cido ntrico
Irritante/Necrosante/Origina corrosin
cido clorhdrico
Problemas respiratorios/ Irritante/Corrosivo
Acido amidosulfnico
Irritante
Secuestrantes
Trifosfato y difosfato sdico
Eutrfico /Secuestra metales pesados
cido Nitrilo triactico
Eutrfico/ Secuestra metales pesados
Tensioactivos
Alquilbenzol-sulfonato
Aninicos
Alquilsulfato
Espumas/Biodegradabilidad
Alquiloxietilsulfato
Catinicos
No inicos
Trialquilbenzilamonio halogenado Incompatibilidad con aninicos/presencia de

Alquilpiridiohalogenado
cloro/biodegradabilidad
Alquilfenol oxietilenado
Productos txicos en la biodegradacin
Los detergentes industriales son productos altamente contaminantes debido a su

especial composicin qumica. Un ciclo de lavado normal en una mquina o proceso
industrial tiene una duracin corta, (entre 1 y 3 minutos en el caso de lavavajillas
industriales), seguido de un proceso de aclarado de unos 30 segundos. Este hecho es el
responsable de que estos productos sean los ms agresivos de todos los utilizados en
procesos de lavado. Su agresividad supera incluso a la de los desincrustantes y
desengrasantes.
Por otra parte, los consumidores cada vez elevan ms sus exigencias sobre la
calidad organolptica y microbiana de los alimentos, las disposiciones legales son cada vez
ms exigentes y los impuestos que deben soportar las industrias alimentarias sobre vertidos
de aguas residuales son cada vez mayores.
Resolver todos estos problemas mediante formulaciones detergentes que sean
capaces de trabajar en medios menos agresivos, que sean altamente biodegradables y que
14
TESIS DOCTORAL
OBJETIVOS
consigan una alta eficacia de lavado es actualmente un reto en el campo de las empresas
que se dedican a la fabricacin y comercializacin de este tipo de detergentes. Por todo ello
ltimamente se estn replanteando las formulaciones actuales y se buscan otras alternativas
mucho menos agresivas en s y con el medio ambiente y que a la vez sean suficientemente
eficaces tanto desde el punto de vista de la limpieza como de la desinfeccin, lo que
ahorrara importantes cantidades de dinero a la industria alimentaria ya que con un solo
paso se conseguira el objetivo previsto (Prevost, 1998).
No obstante, las ltimas tendencias que van imponiendo las empresas
multinacionales, y con ms incidencia Procter & Gamble, consisten en disminuir el pH,
tanto en detergentes slidos como en los lquidos. Los valores oscilan ahora entre 5
(netamente cido) hasta 11.5, con un valor medio de 9-9.5. Las ventajas son importantes:
tanto la mquina como los materiales que se lavan sufren un menor desgaste, sobre todo en
cuanto a la decoracin de vajillas. Los problemas de precipitacin de cal y magnesio
disminuyen e incluso se anulan (Brigitte, 1992; Sadlowski, 1994; Macbeath, 1994; You,
1994). Adems, es posible aadir un mayor nmero de aditivos que mejoran la detergencia,
pudindose conseguir frmulas cada vez ms eficaces y sofisticadas.
Las ltimas formulaciones desarrolladas, por tanto, debern cumplir una serie de
requisitos como son:
a)
Los
agentes
tensioactivos
deben
ser
renovables
biodegradables.
Fundamentalmente alcoholes grasos etoxilados y compuestos del grupo de los

alquilpoliglucsidos (obtenidos a partir de cidos grasos y glucosa) puesto que
producen metabolitos que no son txicos, ni cancergenos ni mutagnicos.
b) El pH de actuacin debe estar comprendido entre 7 y 9. Con ello se pretende
evitar: la precipitacin de carbonato clcico sobre las superficies a limpiar; la
toxicidad del detergente y sus efectos sanitarios nocivos, la corrosin de la mquina
de lavado y en consecuencia alargar su vida media.
c) Se debe reducir al mximo el contenido en compuestos nitrogenados y eliminar
totalmente los compuestos que contienen fsforo y potasio para evitar los
problemas de eutrofizacin de los vertidos acuosos.
d) No llevarn secuestrantes (NTA o EDTA). Estos secuestrantes complejan iones
pesados como el Hg y Pb, que no pueden posteriormente eliminarse en la
15
TESIS DOCTORAL
OBJETIVOS
depuracin de aguas residuales ocasionando problemas mutagnicos, ya que pueden

atravesar la pared placentaria.
e) Suprimir de la formulacin la presencia de cloro activo como elemento
oxidante/blanqueante ya que este elemento puede dar lugar a productos txicos con
efectos perniciosos para la salud.
f) Estos productos permitirn disminuir la temperatura de lavado, al ser su
formulacin de base enzimtica, y por tanto el consumo de energa, sin perjudicar
significativamente la accin limpiadora del detergente.
En la presente Tesis Doctoral como objetivo fundamental se pretende analizar y

evaluar la biodegradabilidad y toxicidad de diferentes tensioactivos no inicos
comerciales: alcoholes grasos etoxilados con diferentes grados de etoxilacin,
alquilpoliglucsidos, Nonilfenol polietoxilado adems del tensioactivo aninico LAS
ampliamente utilizado en formulaciones comerciales, con objeto de comparacin. As
como el desarrollo de una metodologa que sirva de comparacin y que permita seleccionar
un determinado tensioactivo con unas determinadas caractersticas de biodegradabilidad y
toxicidad.
Los objetivos concretos marcados han sido:
El desarrollo de procedimientos analticos simplificados y vlidos para el anlisis
de tensioactivos aninicos, y no inicos que nos permitan seguir fcilmente la cintica de
biodegradacin y su comparacin con los mtodos oficiales normalizados, el Mtodo
MBAS (UNE EN 903) para tensioactivos aninicos y el Mtodo de Wickbold (UNE 55725-87) para los no inicos del tipo alcoholes grasos.
El estudio de la biodegradabilidad de tensioactivos aplicando los mtodos oficiales:
ensayo esttico (Screening Test, OEDC, 1976), ensayo dinmico (Confirmatory Test,
OEDC, 1976), mtodo de la botella cerrada (301 D, OEDC, 1993b) y mtodo
respiromtrico (301 F, OEDC, 1993b).
El anlisis del crecimiento de microorganismos durante el proceso de
biodegradacin determinando las unidades formadoras de colonias en funcin del tiempo
de biodegradacin.
16
TESIS DOCTORAL
OBJETIVOS
El efecto que sobre la biodegradacin tiene la modificacin de la concentracin de

tensioactivo y la influencia de la estructura del tensioactivo ensayado.
El desarrollo de modelos cinticos que nos permitan determinar los parmetros
caractersticos para el diseo de sistemas de biodegradacin en estaciones depuradoras, m
velocidad de crecimiento especfica y Ks la constante de saturacin.
El estudio de la toxicidad de los distintos tensioactivos conforme a la Norma UNEEN ISO 11348-2, con el sistema de medicin LUMIStox suministrado por Dr. LANGE
basado en la inhibicin de la intensidad luminosa de la bacteria marina de la cepa Vibrio
fisheri NRRL-B-11177, y el anlisis de la influencia de la estructura del tensioactivo sobre
la toxicidad.
La evolucin de la toxicidad de los tensioactivos ensayados durante el proceso de
biodegradacin para detectar compuestos de biodegradacin txicos.
Y
finalmente
establecer
parmetros
caractersticos
de
los
perfiles
de
biodegradacin, crecimiento de microorganismos y modelos cinticos que sirvan de

comparacin entre los tensioactivos ensayados.
17
2. INTRODUCCIN
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
2.1. ANTECEDENTES HISTRICOS DE LOS DETERGENTES

Los jabones, adems de ser los tensioactivos de uso ms extendido en el mundo,
son probablemente uno de los compuestos qumicos ms antiguos desarrollados por el
hombre, las primeras referencias datan de los Sumerios, 3000 a.C., (Garca, 1986), donde
se habla de las propiedades curativas del azufre jabonoso. El jabn se empleaba tanto para
el lavado del algodn y el lino, como para combatir enfermedades de la piel.
En la segunda mitad del siglo VIII, el jabn pas de ser un artculo de lujo muy
caro a convertirse en un producto barato y de utilizacin generalizada en todas las clases
sociales, lo que permiti una extraordinaria mejora de las condiciones higinicas. Se lleg
a la afirmacin de un hecho trascendental: gracias al uso del jabn y su repercusin en la
higiene, se hizo posible el crecimiento exponencial de la poblacin de Europa debido a la
disminucin de las causas de mortalidad, (Snchez-Leal, 1995). Durante el siglo XIX la
esperanza de vida del hombre pas en Europa de los 30 a los 50 aos, lo que
evidentemente no slo se debi a una mayor higiene personal, sino tambin a los enormes
progresos mdicos en la lucha contra la enfermedad y en la proteccin para el contagio.
Esto fue debido a los excelentes trabajos de investigacin desarrollados por
Chevreul sobre la estructura de aceites y grasas. Pero sin duda fue Nicols Leblanc (1783),
quien brind a la humanidad la oportunidad de fabricar jabn a escala industrial y de crear
en cierta manera la Industria Qumica, al abrir las puertas a las mltiples aplicaciones del
carbonato sdico y, a la vez, a ese mundo fascinante de los productos tensioactivos y, en
un futuro no muy lejano, al de los detergentes.
Por otra parte, la posibilidad de blanquear el algodn, fibra de aspecto gris sucio,
con el descubrimiento de Tennant, por el que obtuvo cloruro de cal, permiti el desarrollo
de la industria textil y la fabricacin de telas teidas.
Durante los siglos XVIII y XIX, la industria se desarroll ampliamente
fabricndose diferentes productos, en barra, en polvo, etc. En Alemania, Henkel introdujo
en 1907 en el mercado, el primer detergente en polvo para lavadoras automticas Persil
con el incremento de la importancia de las fibras sintticas (celulosa, acetatos, etc...). La
demanda de detergentes fue ms exigente, solicitndose detergentes con propiedades
especiales y que fueran menos sensibles a la dureza del agua.
21
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Dos investigadores norteamericanos, Harkins y Langmuir, descubran casi

simultneamente en 1917 que exista una clase de sustancias sintticas equiparables a los
jabones y dotadas asimismo de la propiedad de acumularse preferentemente en las
superficies de las disoluciones y en una concentracin mayor que en el seno de stas. Se
explic el comportamiento de estas sustancias por su especial estructura molecular,
compuesta por un grupo polar, con afinidad por el agua, y con otro grupo apolar con
afinidad por las grasas. A estas sustancias se les dio el nombre de agentes de superficie y
ms tarde el de tensioactivos.
Tambin en 1917, el qumico Fritz Gnter de BASF consigui con xito la
alquilacin y la sulfonacin del naftaleno. Esto llev a conseguir una sustancia de alto
poder espumante con buenas propiedades de mojado, y fue el primer intento de conseguir
un sustituto del jabn, sin embargo, las cadenas cortas del alquilnaftaleno sulfonato no
conseguan el suficiente carcter tensioactivo.
En 1928, H. Bertsch y colaboradores, utilizando un alcohol graso como materia
prima, y mediante sulfatacin, consiguieron la primera sustancia detergente sinttica. El
paso siguiente era encontrar materias primas o realizar el proceso para que fuera
econmicamente viable. Se asociaron diferentes compaas y desarrollaron un
procedimiento para obtener alcoholes grasos de materias primas renovables. El
procedimiento fue la reduccin cataltica con hidrgeno, bajo alta presin de steres de
cidos grasos en alcoholes grasos.
La empresa Henkel en 1932 comercializ alcoholes oleico y esterico procedentes
del aceite del esperma de ballena, extendindolo al alcohol larico y mirstico (C12 y C14)
respectivamente por poseer mejores propiedades.
El primer detergente formulado con sulfatos de alcoholes grasos fue introducido en
el mercado por Henkel en Alemania en 1932 y por Procter & Gamble en USA en 1933.
Posteriormente, fueron apareciendo en el mercado otros productos semejantes.
Por necesidades de mayor volumen de produccin, aparecieron en el mercado los
alquilbencenos sulfonatos (ABS): el tetrapropilnbenceno sulfonato (TBS) que en 1950
satisfaca el 60% de la demanda de detergentes en el mercado mundial. Sin embargo, en
1960, fue reemplazado por los alquilbencenos sulfonatos de cadena lineal debido a que
eran ms biodegradables (Kreienfeld, 1997).
En la Tabla II. 1 se muestra el desarrollo histrico de los detergentes.
22
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Tabla II. 1.- Desarrollo histrico de los detergentes

POCA Y HECHOS CRONOLGICOS
OBSERVACIONES
ERA ANTES DE CRISTO

Ao 3000, en Sumeria
Ao 2500, en Mesopotania
Ao 1500, en Egipto
Ao 600
Tablilla sumeria de arcilla donde se habla de

azufre jabonoso
Placa de arcilla con descripcin de la
fabricacin de jabn (aceite + hierba
jabonosa)
Grabados y papiros. Descripcin (aceites
animales + vegetales + sales)
Introduccin en Europa
ERA CRISTIANA
Primera Generacin de Detergentes
Imperio Romano
Ao 800, Almonas, Andaluca
Ao 1000, Marsella y Venecia
Ao 1300, Fundacin de Gremios
Europeos
Ao 1791, Descubrimiento de LEBLANC
Ao 1799, Aportacin de TENNANT
Ao 1823, Trabajos de CHEVREUL
Extractos de cenizas + grasas para ungentos

Fabricacin con aceite de oliva y el lcalis
obtenido de las cenizas de combustin de los
almarjos (solancea de las marismas del
Guadalquivir)
Centros del negocio de fabricacin de jabn
perodo (siglos IX-XIV)
Desarrollo importante de la fabricacin de
jabn
Mtodo Leblanc para la preparacin del
carbonato sdico
Inicio de la Industria Qumica
Obtencin de cloruro de cal que permita
obtener Cl2 para blanqueamiento del algodn
Composicin de grasas y reacciones en
fabricacin de jabn
Inicio de nuevas industrias
Repercusin en el incremento exponencial de
la poblacin de Europa
Segunda Generacin de Detergentes

Ao 1917, Descubrimientos de
HARKINS Y LANGMUIR
Ao 1925, en Alemania despus de la 1
Guerra Mundial
Ao 1928, Hidrogenacin y posterior
sulfatacin del grupo carboxlico
Ao 1930, Condensacin de cidos grasos
Sustancias sintticas equiparables a los

jabones.
Tensioactividad
Alquilarilsulfonatos y butilnaftalensulfonatos
sdicos
No precipitan en aguas duras y actan en
medios cidos
Obtencin de alcoholes grasos sulfatados
Desarrollo de tensioactivos no inicos
Tercera Generacin de Detergentes

Perodo 1950-1980
Ao 2000- Actualidad
Fabricacin de Mersolatos
Desarrollo de los Builders
Principios de la Qumica-Fsica Interfacial
Desarrollo de Detergentes biodegradables
23
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
2.2. EVOLUCIN Y TENDENCIA EN LA UTILIZACIN DE TENSIOACTIVOS

INDUSTRIALES
En la dcada de los aos cincuenta el clsico jabn qued casi desplazado por los
detergentes sintticos, como consecuencia de las ventajas que estos ofrecan en el proceso
de limpieza (Dorado, 1996). El mayor problema que lleva asociado la utilizacin del jabn,
es la precipitacin en aguas duras. La presencia de cationes metlicos en disolucin,
principalmente Calcio y Magnesio, hacen perder al jabn sus propiedades limpiadoras por
la aparicin de un precipitado.
Este precipitado conlleva acciones negativas en el proceso de limpieza. Origina
depsitos o cercos en el producto a limpiar, resta brillo a los cabellos lavados en estas
condiciones, produce manchas amarillas sobre los tejidos una vez que han sido planchados,
adems de un largo etctera (Dorado, 1996).
Los detergentes sintticos actan sin problemas en las aguas duras, porque aunque
reaccionen con los cationes metlicos presentes en ellas, forman compuestos solubles
evitando las deposiciones. Adems, los detergentes actan a menores temperaturas
consiguiendo excelentes resultados.
En nuestros das al hablar de tensioactivos nos referimos, en principio, a un amplio
espectro de compuestos, aunque en realidad, el 80% de la demanda total mundial es hoy
cubierta por un grupo reducido de productos.
Actualmente, la demanda de tensioactivos est cubierta por menos de diez tipos,
siendo los alquilbenceno sulfonatos, (LABS), sulfatos de alcoholes grasos (FAS), los
sulfatos teres de alcoholes grasos (FAES), alcoholes grasos etoxilados (FAEO) y los
jabones, los que ocupan las principales posiciones.
Estos tensioactivos son utilizados en distintos segmentos del mercado para la
fabricacin de productos de consumo (detergentes y cosmticos) y para aplicaciones
industriales (alimentos, pinturas, fotografa, textiles, pieles, plsticos, etc.). En la Tabla II.
2 se muestra la evolucin y perspectiva de los tensioactivos ms utilizados (Bailn, 2003).
24
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Tabla II. 2.- Evolucin y perspectiva de los tensioactivos ms utilizados (Bailn, 2003)
JABONES
LABS
Alquilbenceno
sulfonatos
FAS
Sulfatos de
alcoholes grasos
FAES
Etersulfatos de
alcoholes grasos
FAEO
Alcoholes
grasos
etoxilados
En 1994, el consumo mundial total fue de 4.5 millones

Tm., 2 millones Tm. se utilizaron en detergentes, la
principal demanda se concentr en Asia y Sudamrica,
el resto 2.5 millones Tm. se dedica la fabricacin de
jabn de tocador.
Son los principales componentes de la industria de
detergentes, aunque en Latinoamrica y Asia, est
permitido el consumo de alquilbenceno sulfonatos de
cadena ramificada, en la mayora de los pases se
sustituyen, debido a que no son biodegradables, por los
alquilbenceno sulfonatos de cadena lineal.
Los sulfatos de alcoholes grasos, aumentan en
importancia,
especialmente
combinados
como
cosurfactantes en diferentes formulaciones, se espera
que sustituyan a los jabones en Asia, lo que
incrementara su consumo y utilizacin en un futuro
prximo.
Estn experimentando una velocidad de crecimiento
media en los ltimos aos del 4.5 %, se utilizan
fundamentalmente para la fabricacin de detergentes
lquidos, champs y geles de bao.
Experimentan un crecimiento medio anual del 4%, la
razn fundamental es la sustitucin de los alquilfenoles
etoxilados por motivos ecolgicos.
Las principales materias primas para la produccin de tensioactivos son aceites y

grasas, tanto animales como vegetales, y el petrleo. La produccin de aceites naturales y
grasas fue de 90 millones de toneladas en 1994 con un incremento del 3.7 % desde 1993.
Los alcoholes grasos y cidos grasos que se obtienen de fuentes naturales, tienen
una produccin ms elevada que su actual utilizacin, lo que supone un exceso de
produccin de estas materias primas. La produccin de glicerina, obtenida por hidrlisis de
las grasas, y utilizada en la fabricacin del jabn tiene una produccin constante en funcin
del tiempo, excepto en pases asiticos.
Los steres metlicos de cidos grasos, son exclusivamente obtenidos a partir de
alcoholes grasos naturales y la capacidad de produccin actual es de 1.2 millones de
25
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
toneladas con una demanda de 0.8 millones de toneladas. El incremento en la utilizacin de

tensioactivos como FAS, FAES y FAEO que se obtienen de materias primas naturales hace
pensar que en un futuro prximo sern los de mayor utilizacin con fines comerciales.
La evolucin del consumo de tensioactivos (excluidos los jabones) como materia
prima tal cual, en la ltima dcada (aos 1993 a 2003), es la que se muestra en la Figura II.
1. Del ao 1993 al 2002 se pasa de un valor de 222 millones de kg a 369 millones de kg,
con un incremento del 66% durante este perodo (INE, 2004). No obstante, durante el
perodo 1994-1997, el consumo disminuy hasta un valor de 207 millones de kg. Este
400
400
350
350
300
300
250
250
200
200
150
150
100
100
50
50
Consumo (Millones de
Euros)
Consumo (Millones de Kg)
descenso corresponde con una crisis econmica de esos aos.
0
0
1992 1994 1996 1998 2000 2002 2004
Ao
Consumo (Peso)
Consumo (Valor)
Figura II. 1. Consumo total de tensioactivos en Espaa en el perodo 1993-2003
La produccin mundial de tensioactivos ascenda a 17-19 millones de toneladas en

el ao 2000 (incluyendo jabones). Se prev una velocidad de crecimiento global del 3-4 %
anual y un 1.5-2% en la Unin Europea (Deleu, 2004). Esta velocidad de crecimiento de
tensioactivos est ntimamente unida con la demanda mundial de detergentes, ya que este
sector utiliza el 50% de la produccin de tensioactivos.
Si descomponemos el mercado espaol de los tensioactivos en aninicos,
catinicos, no inicos y otros, segn informa el INE, la evolucin de cada uno de estos
grupos es la que aparece en la Figura II. 2. En ella se observa un consumo oscilante de
tensioactivos aninicos, muy sensible a los ciclos econmicos, sin apenas incremento en
valores absolutos durante toda la dcada. Para el resto de tensioactivos el consumo
aumenta claramente, siendo ms acusado el efecto para los catinicos que para los no
26
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
inicos. Si tenemos en cuenta que los tensioactivos aninicos son la base lavante de la
mayor parte de los detergentes (textiles, lavavajillas manuales, limpiadores en general,
geles de bao, champes, etc.) y que los tensioactivos catinicos se aplican
fundamentalmente en suavizantes (tambin en pequeas cantidades en desinfectantes y en
champs acondicionadores), se puede afirmar que se consume ms tensioactivo en suavizar
que en lavar (Bailn, 2003).
Esto implicara una consecuencia que habra que tener muy en cuenta: los
tensioactivos catinicos, siendo biodegradables, son los ms difciles de biodegradar, por
lo que pueden ser previsibles los problemas medioambientales a medio y largo plazo si la
C o n su m o , M illo n es d e K g
tendencia contina as.

180
160
140
120
100
80
60
40
20
0
1992
1994
1996
1998
2000
2002
2004
Ao
Aninicos
Catinicos
No inicos
Otros
Figura II. 2. Evolucin del consumo de tensioactivos por tipos
Los tensioactivos actuales pueden proceder de fuentes petroqumicas o renovables

tales como aceites animales o vegetales o microorganismos, aunque hoy en da la mayora
de los tensioactivos proceden an de fuentes petroqumicas.
Sin embargo, en los ltimos aos se estn introduciendo en el mercado
biosurfactantes producidos por microorganismos y se estn desarrollando tensioactivos
basados en fuentes renovables tales como los alquilpoliglucsidos que estn basados en
carbohidratos (Deleu, 2004). La capacidad de produccin de estos tensioactivos en 1997
era de 60.000 toneladas, pero se espera que exista un incremento importante en las
prximas dcadas, ya que se utilizan ampliamente en diferentes sectores, pues son
27
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
biodegradables, no txicos, y tienen propiedades especiales respecto a otros tipos de

tensioactivos.
Actualmente son numerosas las investigaciones orientadas a la obtencin de nuevos
tensioactivos, la razn ms importante es que las principales clases de tensioactivos
tradicionales tales como los etoxilados o los alquilbenceno sulfonatos, a pesar de presentar
una excelente actuacin como tensioactivos, exhiben en algunos casos baja
bioegradabilidad y un alto potencial de toxicidad acutica. Por estas razones se prev un
importante incremento en las nuevas generaciones de detergentes incluso aunque
presentasen un mayor precio en el mercado, entre ellos los alquilpoliglucsidos son los
tensioactivos de mayor xito en este momento (Holmberg, 2001).
2.3. AGENTES TENSIOACTIVOS

Las sustancias que poseen la caracterstica de modificar las interacciones
interfaciales mediante la promocin de los fenmenos de adsorcin, son conocidas como
agentes de superficie o tensioactivos, y estn entre los productos ms usuales y utilizados
en la tecnologa qumica moderna. Sus reas de aplicacin son muy extensas, casi se podra
afirmar que cada aplicacin industrial tiene un tensioactivo idneo dada la gran
versatilidad de este tipo de molculas (Perales, 2001).
Tambin la naturaleza, anticipndose a nuestro propio ingenio, presenta variadas y
vitales aplicaciones de los agentes de superficie sin los cuales nuestro sistema biolgico no
podra funcionar, incluyendo las mismas membranas que contienen las clulas vivas.
Dos ejemplos de la accin de tensioactivos naturales, muy relacionadas con
aplicaciones actuales, son la accin de los cidos biliares en la emulsificacin y transporte
de la materia grasa en el proceso digestivo, y la accin de lubricantes pulmonares, que
hacen posible el mecanismo de intercambio de oxgeno y dixido de carbono entre los
pulmones y la sangre, ya que la transferencia de oxgeno slo es posible por la presencia de
los denominados tensioactivos pulmonares. Los recin nacidos prematuros, que no tienen
todava bien formados los pulmones, deben ser tratados de forma artificial con
tensioactivos para que sobrevivan (Hallman, 1993).
La estructura bsica de un tensioactivo puede esquematizarse de la siguiente
manera:
28
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
COO-
Parte hidrofbica
Parte hidroflica
Figura II. 3.- Estructura bsica de un tensioactivo (Dorado, 1996)
La parte hidrofbica es una cadena hidrocarbonada lineal o ramificada, mientras

que la parte hidroflica es un grupo inico o un grupo fuertemente polar.
2.3.1. PRINCIPALES FAMILIAS DE TENSIOACTIVOS

En una clasificacin genrica de los agentes tensioactivos puede decirse que existen
cuatro grandes grupos:
Tensioactivos aninicos: poseen grupos funcionales que se ionizan en

disolucin acuosa originando iones orgnicos con carga negativa y
responsables de la actividad superficial. Contienen comnmente grupos
solubles, sulfatos y sulfonatos de sodio. Son los ms utilizados en
formulaciones detergentes en polvo para lavado de ropa y en productos
lquidos para uso en lavavajillas.
Tensioactivos catinicos: poseen grupos funcionales que se ionizan en

disolucin acuosa originando iones orgnicos con carga positiva y
responsables de la actividad superficial. Son principalmente compuestos
cuaternarios de amonio. Presentan la ventaja de que son compatibles con los
tensioactivos no inicos y anfotricos y la desventaja de ser incompatibles
con los tensioactivos aninicos. Asimismo su capacidad detersiva y su
biodegradabilidad es baja y su coste econmico es ms elevado que el de los
tensioactivos aninicos y no inicos. Se suelen usar como agentes
emulsionantes a pH inferiores a 7, adems presentan propiedades
suavizantes y desinfectantes.
Tensioactivos no inicos: En disolucin acuosa no originan iones. Poseen

grupos funcionales con elevada afinidad por el agua, lo que los hace
29
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
solubles en sta. Algunos son productos de condensacin del xido de

etileno con materiales fenlicos o grasos. Son compatibles con todos los
tipos de tensioactivos. Constituyen un grupo de tensioactivos de amplia y
variada aplicacin. En general presentan bajo poder espumante y suelen ser
productos lquidos o pastosos.
Tensioactivos anfotricos: poseen grupos funcionales que pueden ionizarse

en disolucin acuosa confiriendo al compuesto el carcter de aninico o
catinico, segn las condiciones del medio. No se utilizan mucho como
materias primas para detergentes. Algunos proporcionan una excelente
espumacin y bajo nivel de irritabilidad cutnea y ocular, por lo que
resultan muy apropiados en las formulaciones de champ. Son compatibles
con todos los tipos de tensioactivos.
Se har mencin especial a cuatro tipos de tensioactivos por ser los utilizados en
este trabajo:
2.3.1.1. Alcoholes grasos etoxilados

Esta subfamilia de tensioactivos no inicos comprende a los derivados etoxilados
de los alcoholes grasos. La mayora de estos alcoholes grasos carecen de propiedades
tensioactivas debido a su insolubilidad en agua, por lo que se hacen reaccionar con
polioxietileno; esto les confiere el carcter hidroflico deseado. Los alcoholes grasos
etoxilados (AGE) se obtienen a partir de alcoholes derivados principalmente de aceite de
coco, de sebo o sintticos de cadena lineal, a los que se acopla un nivel dado de moles de
xido de etileno (OE). (Figura II. 4):
OH
CH2
CH2
Figura II. 4.- Estructura molecular de los alcoholes grasos etoxilados
30
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Hay que sealar que el valor n (nmero promedio de moles de xido de etileno)
que aparece en la estructura molecular no tiene por qu indicar la longitud de cadena
etoxilada del compuesto mayoritario, ya que, por ejemplo, una mezcla rica en molculas
con 2 OE y cadenas con 16 OE puede tomar como valor medio 9 OE, aunque apenas
existan realmente molculas con este nmero de unidades de xido de etileno.
Como resultado del mtodo de sntesis, los alcoholes grasos etoxilados estn
compuestos por una mezcla compleja de oligmeros, cuya longitud media est
comprendida entre 1 y 20 unidades etoxiladas. Esta distribucin de oligmeros
generalmente adopta una distribucin de Poisson (Swisher, 1987; Pilc, 1987) y afecta a las
propiedades fsico-qumicas, biodegradabilidad en el medio y a su uso final (Wang, 1993;
Ahel, 2000).
Los alcoholes grasos etoxilados de uso comercial tambin son complejas mezclas
de homlogos con un nmero par de tomos de carbono en la cadena alqulica
comprendido entre 12 y 18, son los llamados alcoholes etoxilados oleoqumicos y
representan un 40% de la produccin total de alcoholes etoxilados. Tambin existen los
oxo-alcoholes etoxilados procedentes de olefinas lineales o de tetrapropileno. Los oxoalcoholes lineales son mezclas de alcoholes lineales y alcoholes monoramificados con
cadenas alqulicas de 11 a 15 tomos de carbono, y que constituyen el 60% restante de la
produccin total de alcoholes etoxilados (Marcomini, 2000).
Una caracterstica peculiar de estos tensioactivos es que sus disoluciones en agua se
vuelven turbias al calentar y acaban precipitando. Esto se debe a que a altas temperaturas
el movimiento molecular rompe los hidratos. La temperatura a la que se alcanza la turbidez
(temperatura de enturbiamiento, CP) depende del grado de etoxilacin. Estas sustancias
pueden ser lquidos o slidos duros, dependiendo del grado de etoxilacin.
Los alcoholes grasos etoxilados se usan como emulsificantes O/W (aceite-agua) y
W/O (agua-aceite). Normalmente se usan mezclas de varios de ellos, ya que esto aumenta
su capacidad para estabilizar las emulsiones. Son buenos detergentes, pero su baja
formacin de espumas los hace, en principio, poco atractivos en fabricacin de geles o
champs y especialmente aptos para formulaciones de espuma controlada. Tambin se
usan como estabilizantes aquellos compuestos que presentan mayor HLB (balance
hidrfilo-lipfilo). Asimismo, son compuestos resistentes a la dureza del agua.
31
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
En cuanto a la facilidad de eliminacin de los alcoholes grasos etoxilados de las

aguas residuales, en principio estos pueden ser eliminados mediante los tradicionales
procesos biolgicos de tratamiento, o por procesos ms avanzados como son la
ozonizacin (Brambilla, 1993) y la adsorcin en carbn activo. Los alcoholes grasos
etoxilados lineales son degradados por hidrlisis del enlace ter, seguido de la oxidacin de
las dos porciones resultantes. La biodegradacin primaria puede llegar a alcanzar valores
superiores al 97% (Szymanski, 2000; Battersby, 2001), aunque la degradacin ltima
puede ser significativamente inferior.
2.3.1.2. Nonilfenoles polietoxilados

Los alquilfenoles polietoxilados (APEO) constituyen un grupo importante de
tensioactivos no inicos desde que fueron sintetizados por primera vez en 1940. En el
momento actual son los tensioactivos mas ampliamente utilizados a nivel industrial y los
terceros en el ranking para todos los tipos de aplicaciones, con un volumen anual de
produccin de 3.7.105 Tm (Raymond, 1996).
Se obtienen mediante reacciones de polimerizacin y condensacin con xido de
etileno en presencia de un catalizador bsico, normalmente un hidrxido alcalino. Su
estructura se compone de una cadena alqulica, lineal o ramificada, con un determinado
nmero de tomos de carbono, un anillo bencnico y una cadena etoxilada con n nmero
de unidades etoxiladas. Figura II. 5:
CH2
R
OH
CH2
n
Figura II. 5.- Estructura molecular de los APEO
Como es factible en estas estructuras moleculares variar la longitud del grupo

alquilo del fenol o de la cadena polietoxilada, se pueden obtener una amplia gama de
productos con distintos grados de solubilidad.
32
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Dentro de los alquilfenoles polietoxilados existen dos muy utilizados: el octilfenol

polietoxilado (OPEO) y el nonilfenol polietoxilado (NPEO). Los nonilfenoles
polietoxilados constituyen aproximadamente el 80% de la produccin, y los octifenoles
etoxilados el restante 20% aproximadamente (White, 1994). La produccin mundial de
nonilfenoles polietoxilados est alrededor de 7.105 Tm (Jonkers, 2004).
La estructura qumica de los NPEO est formada por una cadena alqulica
constituida por 9 tomos de carbono, un grupo aromtico y una cadena polietoxilada con
un nmero variable de unidades etoxiladas.
Como resultado del mtodo de sntesis, los NPEO son mezclas complejas de
oligmeros con distinta longitud de cadena etoxilada. Convencionalmente cada NPEO se
describe mediante el nmero medio de unidades etoxiladas, el cual puede variar entre 1 y
100 para diferentes formulaciones, estando generalmente comprendida entre 1 y 20
unidades.
De forma general, a medida que aumenta la longitud de la cadena etoxilada, su peso
especfico, viscosidad y solubilidad en agua tambin lo hacen, siendo los NPEO con un
nmero medio de unidades etoxiladas superior a 6 fcilmente solubles en agua.
Los NPEO han sido ampliamente utilizados durante ms de 40 aos en diferentes
aplicaciones y sectores industriales. Tradicionalmente se han empleado en formulaciones
detergentes, constituyendo la materia activa de los mismos debido a sus propiedades
tensioactivas. No obstante, tambin desempean un papel fundamental en la formulacin
de determinados productos utilizados en: industria textil, fabricacin de papel, pinturas,
resinas y revestimientos de proteccin, aceros, plaguicidas, proceso de recuperacin de
aceite, etc...
De forma general las ventajas e inconvenientes de los NPEO se resumen en la
Tabla II. 3:
33
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Tabla II. 3.- Ventajas e inconvenientes de los NPEO

VENTAJAS
Se emplean ventajosamente en
limpiadores generales.
Variando el nmero de moles de

OE se consiguen propiedades
muy diversas: baja o alta espuma,
solubilizante, dispersante,
emulsionante o detergente,
productos turbios o transparentes,
etc...
Apenas si tiene
incompatibilidades tcnicas.
Es muy flexible para formular.
Su relacin calidad/precio es
inmejorable.
INCONVENIENTES
Los NPEO son considerados como una

exohormona. Su presencia en el medio
ambiente parece que est correlacionada
con la disminucin de la calidad del
semen humano (Sonnenschein, 1998).
Se
sospecha
su
relacin
con
endometriosis en las mujeres y
desarreglos
hormonales
(Dominic,
2000).
Se considera biodegradable, pero los

metabolitos de biodegradacin son algo
ms txicos y persistentes que el
compuesto de partida (Yoshimura,
1986; Ahel, 1987; Marcomini, 2000).
La toxicidad de los NPEO para la vida

acutica es similar a la de otros
tensioactivos, pero los productos de
degradacin pueden tener efectos
adversos para el medio ambiente
acutico, especialmente el metabolito
Nonilfenol (NP) que puede ser 10 veces
ms txico que el NPEO de partida
(Scott, 2000).
Como resultado del amplio campo de aplicacin de los NPEO, su resistencia a la

biodegradacin a bajas temperaturas y la generacin de algunos metabolitos persistentes
durante el proceso de biodegradacin, han sido identificados en todos los tipos de aguas
naturales, aguas residuales y en aguas de consumo humano (Zoller 1989, Schrder, 1993).
Adems se ha sugerido el uso de sus metabolitos como un indicador de la contaminacin
industrial (Ballarin, 1989).
Como consecuencia de los problemas ambientales que presentan los NPEO,
determinados pases tales como Gran Bretaa, Alemania y Suiza, han prohibido su uso en
formulaciones domsticas, quedando restringidas sus aplicaciones al mbito industrial.
Pese a ello, son muchos los pases en los que se utiliza no solo en aplicaciones industriales
sino en detergentes domsticos, llegndose a casos tan extremos como los ocurridos en
Israel donde se hizo necesaria la bsqueda de aguas potables en acuferos para huir de la
34
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
presencia de NPEO (Zoller, 1989). En otros pases como Estados Unidos los
investigadores estn menos convencidos de los efectos txicos de los NPEO,
probablemente por las diferencias en los tratamientos de aguas residuales que resultan ser
ms efectivos en cuanto a eliminacin comparados con Europa (Renner, 1997).
La biodegradacin primaria y la ltima para los NPEO depende de una gran
cantidad de factores ambientales. Los porcentajes de eliminacin primaria van desde un
63% (Okpokwasili, 1991) hasta casi el 100% (Patozca, 1990). La mineralizacin vara en
un porcentaje muy bajo, y est alrededor del 90% (Manzano, 1998).
Para los NPEO el periodo de latencia es menor que para otros tensioactivos como el
LAS, esto puede ser debido a que en el caso de los NPEO las enzimas son
fundamentalmente hidrolticas y estn ya presentes en el medio o son sintetizadas
relativamente rpido, en el caso del LAS, las enzimas son mas especficas y lleva ms
tiempo el sintetizarlas (Manzano, 1998).
2.3.1.3. Alquilpoliglucsidos
Los alquilpoliglucsidos (APG) son tensioactivos no inicos hacia los que la
comunidad cientfica ltimamente ha dirigido la vista, debido al hecho de que, adems de
poseer interesantes propiedades interfaciales (Nickel, 1992), exhiben excelentes
propiedades ecolgicas y toxicolgicas (Andree, 1991). Estos compuestos se empezaron a
usar como ingredientes de detergentes y productos de cosmtica (Balzer, 1996) y tendrn
un gran futuro si la investigacin logra, al estudiar los sinergismos que aparecen al
mezclarlos entre s, optimizar sus propiedades fsico-qumicas.
Emil Fischer sintetiz e identific el primer alquilglucsido en 1893, pero estos
productos slo han tenido inters acadmico y no fueron utilizados de manera comercial,
hasta que en los aos 40-50, varias compaas desarrollaron los procesos comerciales para
su fabricacin. Fue en 1992 cuando Henkel inaugur la primera planta en EE.UU. con una
produccin de 25.000 toneladas al ao y en 1995 la segunda planta con igual capacidad por
Henkel KgaA en Alemania.
Respecto a la sntesis industrial de estos tensioactivos cabe comentar que se ha
desarrollado enormemente en las ltimas dcadas por la mejora del proceso de
glucosidacin, Fischer (1893); proceso basado en la catlisis cida de glucosas con
35
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
alcoholes. As, por ejemplo, en 1997 ya se alcanz una produccin total mundial de 8107
kg (Eichhorn, 1999).
Las materias primas para la fabricacin de alquilpoliglucsidos son los alcoholes
grasos y distintas fuentes de carbohidratos. Los alcoholes grasos se pueden obtener a partir
de fuentes petroqumicas y de fuentes naturales renovables como grasas y aceites; estos
alcoholes grasos, que proporcionan al alquilglucsido la parte hidrofbica de la molcula,
se obtienen despus de la transesterificacin y fraccionamiento de grasas y aceites, y
posterior hidrogenacin de los correspondientes steres metlicos de cidos grasos.
Dependiendo del tipo de aceite o grasa de partida la composicin del alquilpoliglucsido es
distinta.
La parte hidroflica del APG la proporciona el correspondiente carbohidrato. En el
proceso de produccin se pueden utilizar carbohidratos polimricos o monmeros como
materias primas, es decir, glucosa, almidn, jarabes de glucosa con bajo o alto contenido
en dextrosa equivalente, etc.
Formalmente los APG se describen en trminos de una estructura acetal (Figura II.
6), R representa el grupo alqulico de 8 a 16 tomos de carbono, DP es el grado de
polimerizacin (nmero medio de unidades de glucosa por radical alqulico), es siempre
mayor que 1 y usualmente menor que 2. Los APG tienen un grado de polimerizacin tpico
de 1.3 a 1.7.
CH2OH
O
OR
OH
H
DP
O
OH
R=C8-C16
DP:1-2
Figura II. 6.- Estructura de los Alquilpoliglucsidos
En los APG comerciales se encuentran mezclas ms o menos complejas de

compuestos del tipo descrito anteriormente. Estas estructuras se podrn diferenciar en el
nmero de unidades de glucosa que presentan pero tambin en la longitud de sus cadenas
36
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
alqulicas e incluso en las posibles diferencias isomricas de los grupos cclicos

(configuracin o ). Es decir, los APG comerciales son mezclas complejas de
homlogos e ismeros.
La adicin de APG a las formulaciones detergentes mejora la estabilidad de las
enzimas (proteasas, amilasas, lipasas y celulasas) durante el periodo de almacenamiento
del producto (Hill, 1997).
En los sistemas tradicionales de tratamiento de aguas residuales los APG presentan
un 100% de biodegradacin, en condiciones metanognicas los alquilpoliglucsidos
lineales se mineralizan en un 70%, aunque los APG ramificados presentan una cierta
resistencia a degradarse (Madsen, 1996).
Entre las innumerables ventajas que presentan estos interesantsimos tensioactivos
destacan las que se describen en la Tabla II. 4:
37
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Tabla II. 4.- Ventajas e inconvenientes de los APG

VENTAJAS
38
INCONVENIENTES
Estn basados en materias primas

renovables.
Presentan excelentes propiedades

como tensioactivo: propiedades
interfaciales (Balzer, 1996) y
comportamiento de fase (Platz,
1994).
Su poder espumante es mejor que

para otros tensioactivos no inicos
(Steber, 1995).
Son compatibles con todo tipo de

sustancias.
Soportan todo rango de pH.
Son aplicables en detergencia textil,

de superficies y cosmtica.
Poseen
una
excelente
compatibilidad con la piel y las
mucosas (Salka, 1993).
Son
los
tensioactivos
biodegradables de todos
conocidos.
La concentracin micelar crtica es

muy baja por lo que se necesita
menor materia activa, que adems
se degrada muy rpidamente.
Los
metabolitos
de
la
biodegradacin son tan solo CO2 y
agua, no se forman metabolitos
recalcitrantes durante la eliminacin
biolgica (Steber, 1995).
Presentan varios tipos de sinergismo

con algunos tensioactivos aninicos
(Fornara, 2000).
ms
los
Su precio es relativamente elevado.
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
2.3.1.4. Lineal alquilbenceno sulfonatos (LAS)

Los lineal alquilbenceno sulfonatos (LAS) pertenecen a la familia de tensioactivos
aninicos. La materia prima para la fabricacin de los LAS son los alquilbenceno lineales
(LAB), los cuales son producidos industrialmente a travs de procesos que difieren en su
forma de alquilacin del benceno. Dependiendo del proceso de sntesis, los LAB
resultantes presentan diferentes distribuciones porcentuales de los ismeros de posicin del
fenilo a lo largo de la cadena alqulica.
Las mezclas comerciales de LAS estn constituidas por conjuntos de homlogos en
los que la longitud de la cadena alqulica unida al grupo fenilo oscila entre C10 y C14
(Figura II. 7). El porcentaje en que los homlogos se encuentran en las formulaciones de
los LAS es variable dependiendo de la aplicacin que se quiera hacer del mismo, ya que la
mayor proporcin de unos u otros homlogos va a acentuar una u otra propiedad fsicoqumica que interese para su utilizacin.
4-C 12 -LAS
SO 3 -
I
S
M
E
R
O
S
4-C 11 -LAS
H
O
M
L
O
G
O
S
SO 3 -
6-C 11 -LAS
SO 3 -
Figura II. 7.- Estructura molecular de los LAS
Cada homlogo presenta un conjunto de ismeros en funcin de la posicin del

grupo sulfofenilo sobre la cadena alqulica (ismeros posicionales); el nmero y
39
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
proporcin de tales ismeros es un factor que va a depender de las condiciones de sntesis

del tensioactivo.
El LAS es uno de los tensioactivos ms utilizados en la fabricacin de detergentes
comerciales, las razones del aumento tan espectacular de su consumo son las que aparecen
en la Tabla II. 5 (Perales, 2001) donde tambin aparecen sus inconvenientes.
Tabla II. 5.- Ventajas e inconvenientes de los LAS

VENTAJAS
INCONVENIENTES
Poseen caractersticas generales de

buen
tensioactivo
(poder
dispersante, poder emulsionante,
reduccin de la tensin superficial,
capacidad de mojado).
Presentan menores valores de

detergencia para superficies grasas
que los alquilpoliglucsidos y que los
nonilfenol polietoxilados (Altmajer,
2004).
Son muy verstiles, ya que se usan

prcticamente en todos los tipos de
detergentes
domsticos
e
industriales.
Se obtienen a partir de petrleo.
Son seguros en el medio ambiente a

corto y largo plazo.
Poseen elevada biodegradabilidad.
Las materias primas requeridas para

su sntesis resultan econmicas.
Su comportamiento en agua es
bueno: para aguas con bajos niveles
de dureza se comporta de forma
similar al jabn, para aguas duras se
comportan mejor
2.3.2. PROPIEDADES Y APLICACIONES DE LOS AGENTES TENSIOACTIVOS

Los tensioactivos son compuestos anfiflicos (en su estructura molecular poseen un
grupo afn al disolvente y otro no), pero no todos los compuestos anfiflicos se pueden
considerar tensioactivos, as, el alcohol etlico es un compuesto anfiflico, pero no es un
40
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
tensioactivo. Para que un compuesto anfiflico pueda ser considerado tensioactivo es

necesario que posea una longitud de cadena hidrfoba de ocho o ms tomos de carbono
(hidrofobicidad
mnima)
que
presente
una
polaridad
mnima
(relacin
hidrfila/hidrfoba adecuada) dependiendo de las caractersticas del grupo o grupos

polares presentes. Por otro lado estos compuestos anfiflicos deben presentar la posibilidad
de formar agregados micelares para ser considerados compuestos tensioactivos.
Las propiedades fisicoqumicas de las disoluciones de tensioactivos y las
propiedades relacionadas con los fenmenos de asociaciones moleculares se muestran en la
Figura II. 8.
PROPIEDADES DE TENSIOACTIVOS
Aumento de la Humectabilidad
Mojado de un lquido sobre un slido
o capacidad de penetracin en los
poros
Solubilizacin de componentes
insolubles en agua en el interior de
las micelas
PROPIEDADES FSICO-QUMICAS
Espumacin
Formacin de espuma
Disminucin de la Tensin
Superficial e Interfacial por adsorcin
de la molcula de tensioactivo en la
interfase
Micelacin
Formacin de agragados
moleculares cuando se supera la
C.M.C. de tensioactivo
ASOCIACIONES MOLECULARES
Figura II. 8.- Propiedades de los tensioactivos
Las propiedades de adsorcin en superficies y de asociacin moleculares

determinan fenmenos relacionados con la aplicacin de los agentes tensioactivos como
son:
Formacin de espuma: la disminucin de la tensin superficial entre un lquido y el
aire hace que la superficie del lquido pueda deformarse con extrema facilidad y provocar
la inclusin de multitud de burbujas de aire (Hedreul, 2001).
Formacin de emulsiones, microemulsiones y liposomas: cuando dos lquidos
inmiscibles entre s se encuentran en presencia de tensioactivos, uno de ellos, por efecto de
la disminucin drstica de la tensin interfacial, puede dividirse, mediante accin
mecnica, en partculas de pequeo tamao (del orden de algunas micras). Este sistema de
41
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
dos fases dividido en pequeas gotitas (fase dispersa) inmersas en otra fase (fase continua)
se denomina emulsin. Se reconoce por su aspecto lechoso o de crema. Es
termodinmicamente inestable y con el tiempo termina separndose en sus dos fases
originales (proceso de coalescencia). Cuando la fase dispersa est formada por una fase
apolar y la continua es polar se dice que la emulsin es aceite en agua (O/W), y a la
inversa, cuando la fase dispersa son gotitas de agua o una sustancia polar, se denomina
emulsin agua en aceite (W/O).
Si la tensin interfacial es muy baja, pueden conseguirse sistemas dispersos en que
el tamao de las gotas es inferior a una micra. En este caso, el sistema es estable
termodinmicamente y se denomina microemulsin. Su aspecto es translcido o totalmente
transparente y de viscosidad normalmente elevada. Las emulsiones y microemulsiones son
de gran aplicacin en cosmtica, farmacia, tecnologa de los alimentos, etc.
Los liposomas son estructuras complejas huecas, similares a una estructura celular,
formadas artificialmente mediante un sistema agua, aceite y tensioactivo (intervienen
sustancias como el colesterol, la fosfatidilcolina y la lecitina). Se caracterizan por poder
transportar en su interior principios activos, y sobre todo por su capacidad de penetrar
intactos a travs de membranas biolgicas y posteriormente liberar, una vez producida la
penetracin, ese principio activo. (Kunieda, 1998; Solans, 2001; Forgiarini, 2002).
Solubilizacin: si la cantidad de tensioactivo es suficientemente elevada, pueden
llegarse a solubilizar de forma completa sustancias normalmente inmiscibles entre s. En el
trnsito, pueden darse no slo disoluciones verdaderas sino que pueden formarse
estructuras complejas tipo coloide o gel. En perfumera, esta propiedad es fundamental
para hacer que los perfumes (aceites) puedan estabilizarse en multitud de productos
comerciales que deben estar perfumados (cosmticos, detergentes, plsticos y otros objetos
en general), (Edwards, 1994; Friberg, 1999).
Detergencia: los tensioactivos pueden hacer que partculas de suciedad dejen de
adherirse a las superficies que ensucian, gracias a la modificacin del equilibrio de
tensiones interfaciales del sistema formado por el sustrato (lo que est sucio), la suciedad y
el bao de lavado (donde est disuelto el tensioactivo). Por esta razn, los tensioactivos son
el componente principal de los detergentes (Drachev, 1994; Prieto, 1996; Verma, 1998).
Transferencia de oxgeno y otros gases: otro de los efectos ms interesantes de los
tensioactivos es la modificacin de la transferencia de oxgeno, y cualquier gas en general,
42
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
a travs de membranas. Dos son los sistemas que hay que destacar como muy importantes:
El primero es el caso de los pulmones, ya que la transferencia de oxgeno slo es posible
por la presencia de los denominados tensioactivos pulmonares (Hallman, 1982). El otro
caso es el de las agallas de los peces: cuando el medio acuoso en que viven se contamina
con ligeras cantidades de tensioactivos, los peces terminan muriendo. Esta es una de las
razones por las que es imprescindible que los tensioactivos sean suficientemente
biodegradables para que no alcancen los ros, lagos y mares, (Sandbacka, 2000).
Ciertas propiedades, tales como la tensin superficial, la tensin interfacial, la
presin osmtica, la conductividad equivalente o la detergencia, presentan curvas
especiales frente a la concentracin de tensioactivo en disolucin. En todos los casos hay
una zona, ms o menos estrecha de concentracin en que la curva toma una forma singular
(un mnimo, un mximo o un cambio brusco). Esta concentracin se denomina
concentracin micelar crtica (CMC) y se asocia a la formacin de unas estructuras,
normalmente globulares, denominadas micelas.
Las propiedades anteriormente sealadas le confieren a los productos tensioactivos
una gran versatilidad y se utilizan en multitud de aplicaciones: productos farmacuticos,
formulaciones detergentes, operaciones con metales, flotacin, alimentacin, etc.
En la Tabla II. 6 se muestran los diferentes campos de aplicacin en diversas
industrias y los tensioactivos mas utilizados en ellas (Garca, 1986).
43
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Tabla II. 6.- Campos de aplicacin de los tensioactivos en la industria (Garca, 1986)
TIPO DE
INDUSTRIA
ALIMENTARIA
CURTIDOS
PINTURAS,
LACAS
Y TINTES
AGRICULTURA
COSMTICA
DETERGENTES
PAPELERA
44
TENSIOACTIVOS
Acilgliceroles
Esteres de sorbitano
Copolmeros de xido de etilenopropileno, Alquilsulfatos, Esteres de
poliglicol
CAMPOS DE
APLICACIN
Emulsionantes
Humectantes
Antiespumantes
Limpieza de instalaciones
Nonilfenoles polietoxilados
Alcoholes grasos polietoxilados
Monosteres de cidos grasos
sulfatados
Alquilsulfatos
Alquilnaftalensulfonatos, Ligninsulfonatos, Aceites saturados
Humectacin/penetracin
Desengrase
Curticin
Tintura
Engrase
Condensados de naftalensulfonato y
formaldehdo
Alquilsulfato, Dialquilsulfosuccinato
sdico, Alcoholes grasos
polietoxilados, Aminas
polietoxiladas
Dispersin de pigmentos
Modificadores de fludez
Alquilbenceno sulfonatos
Nonilfenoles polietoxilados, Esteres
fosfatados, Poliglicoles, Aceites
sulfatados
Esteres de poliglicol
xidos de amina
Alquilpoliter sulfatos,
Alcanolamidas, Alquilbetainas,
Dialquilsulfosuccinatos
Olefin-silfonatos
Parafin-sulfonatos
Sulfatos de alcoholes grasos
polietoxilados
Alquil polieter sulfatos
Oxidos de amina, Alquilfenoles
polietoxilados, Alcanolamidas,
Sulfonatos de cidos grasos, Sales de
amonio cuaternario
Esteres de poliglicoles
Polipropilen-glicoles, Aminas
polietoxiladas, Nonilfenoles
polietoxilados
Pastas de pigmento
Emulsionantes de resinas
Emulsificacin de
plaguicidas y herbicidas
Humectacin y dispersin
Emulsiones oleosas
Emulsiones de cremas
cosmticas
Champes, geles
Jabones de tocador
Solubilizantes de perfumes
Emulsionantes para aceites
esenciales
Detergentes en polvo
Detergentes lquidos
Estabilizadores de espuma
Productos limpieza de
superficies duras
Sanitarios
Productos lavavajillas
Limpiadores textiles
Agentes humectantes de la
pulpa
Eliminacin de espuma de
la pulpa
Emulsionantes de ceras
Reutilizacin del papel
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Tabla II. 6.- (Continuacin). Campos de aplicacin de los tensioactivos en la

industria (Garca, 1986)
TIPO DE
INDUSTRIA
TENSIOACTIVOS
PETRLEO Y
DERIVADOS
Alquilpoliter sulfatos
Lign-sulfonatos
Alcanolamidas
Imidazolinas, Poliglicoles, steres
sulfonados, Alquilbenceno
sulfonatos
PLSTICOS Y
GOMAS
Alquilsulfatos
Copolmeros xido de etilenopropileno
Amidas polietoxiladas,
Dialquilsulfosuccinato sdico, Sales
de amonio cuaternario
TEXTILES
Nonilfenoles polietoxilados
Sales de amonio cuaternario
Aceites naturales polietoxilados,
Alcoholes frasos polietoxilados,
Esteres de poliglicol, Esteres
sulfonados, Sulfonatos de petrleo
CAMPOS DE
APLICACIN
Solubilizantes del agua e
inhibidores de corrosin
Ruptura de emulsiones
Dispersantes
Recuperacin del petrleo
Eliminacin de mareas
negras
Emulsionantes para la
produccin de emulsiones
de polmeros
Agentes antielectrostticos
Modificadores de
viscosidad
Controladores del olor
Polimerizacin en
emulsin
Detergentes y auxiliares de
humectacin
Agentes antielectrostticos
Suavizantes y lubricantes
Aceites autoemulsionables
Jabones para limpieza en
seco
La detergencia es (al menos en cuanto a tonelaje) junto a la cosmtica, la aplicacin

principal de los tensioactivos (Deleu, 2004). La perfumera se relaciona como rama
auxiliar de stos y en menor proporcin, el mercado de los alimentos y el de los frmacos.
Un detergente se define como aquel agente que es capaz de realizar una accin
detersiva, es decir, que es capaz de lavar. Por ejemplo, el agua pura es un detergente, ya
que por s sola puede lavar, an sin ser ella misma un tensioactivo. Pero no obstante, los
detergentes comerciales son normalmente mezclas complejas de tensioactivos con otros
aditivos: lcalis, secuestrantes de iones, dispersantes, oxidantes, blanqueantes, colorantes,
perfumes, cargas, etc.
Otra ventaja muy importante que presentan los detergentes, es que al ser productos
de sntesis, pueden ser diseados estructuralmente para aplicaciones concretas permitiendo
una gran flexibilidad en la fabricacin, independientemente del diseo completo de cada
formulacin especfica.
45
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
La Tabla II. 7 muestra composiciones orientativas de formulaciones detergentes

utilizadas en textiles y superficies duras (cristales, azulejos, metales, etc.). La composicin
de los detergentes para el lavado de superficies duras difiere de la de textiles debido a las
distintas caractersticas que se requieren para estos productos.
Tabla II. 7.- Composicin de algunos detergentes (Bailn, 2003)

PRODUCTO
COMPOSICIN
Detergente textil
lavadora
Tensioactivos aninicos (LAS y FAS), jabones, lcalis,

secuestrantes, dispersantes, blanqueantes basados en
oxgeno, activadores, blanqueantes pticos, enzimas,
colorantes, perfume, cargas
Suavizante textil
Tensioactivos catinicos, perfume, colorante
Lavavajillas manual
Tensioactivos aninicos (LAS y LESS), tensioactivos

no inicos (Dietanolamida de coco), conservante,
perfume, colorante
Limpiahogar
Tensioactivos no inicos, tensioactivos aninicos,

glicoles, secuestrantes, perfume, colorante
Limpiacristales
Alcoholes, tensioactivos aninicos, perfume
Lavavajillas de
mquina
Tensioactivos no inicos, lcalis, secuestrantes,

dispersantes, oxidantes, colorantes
Debido a la enorme importancia comercial de los tensioactivos se sealan las

principales empresas relacionadas con estos productos (las productoras de tensioactivos,
las consumidoras y las de perfumera). Figura II. 9. La produccin est referida a artculos
cientficos publicados.
46
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
PR OD U C C IN (A rtculos)
250
223
200
150
105
100
57
40
50
39
22
20
20
rm
en
ich
tt
bo
Fi
Ab
ck
er
o
M
Ka
el
nk
He
il e
ve
te
r
Un
oc
w
Pr
Do
Figura II. 9.- Principales empresas relacionadas con los tensioactivos
La empresa ms importante con diferencia es Dow Chemical Co. USA, dedicada a

fabricar y consumir, entre otros muchos productos, tensioactivos. Tiene unas ventas de 28
millones de $, en 170 pases y 50.000 empleados. Las marcas comerciales de tensioactivos
propiedad de Dow son: Ttiton, Dowfax, Tergitol, Hamposyl y Hampshire.
Igualmente fabrican productos empleados en formulaciones detergentes, tales como
glicoles, poliglicoles, secuestrantes de iones, lcalis, etc. Los tensioactivos Ttritn son de
los ms empleados en investigacin (The Dow Chemical Company, 2004).
2.3.3. IMPLICACIONES AMBIENTALES

La gran variedad de productos detergentes comercializados, unida al incremento
que experimenta su consumo, propicia un aumento de la frecuencia de incorporacin de los
mismos a las aguas de los vertidos domsticos e industriales, existiendo un peligro
potencial de afectar negativamente a la calidad de las aguas.
La diversidad de tensioactivos comercialmente disponibles es enorme, como
muestran las recopilaciones de Hollis y Ash (Hollis, 1979; Ash, 2000). Slo en los Estados
Unidos hay ms de mil quinientos nombres comerciales de tensioactivos disponibles: el
nmero de compuestos relativamente puros asciende a unos setecientos (Myers, 1992) y el
47
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
resto de los productos comerciales existentes son una mezcla de una amplia variedad de
agentes de superficie puros o de diferentes composiciones isomricas de un mismo
tensioactivo.
Los productos detergentes se producen a escala mundial con un considerable
tonelaje y la produccin total se elimina por el consumidor a travs de los sistemas
domsticos de canalizacin de aguas residuales. Por lo tanto se produce una amplia
dispersin de los mismos en el entorno acutico.
Los detergentes, al ser vertidos despus de su uso, pueden terminar en varias
matrices ambientales, bien a travs de descargas directas (sin tratamiento) o despus de
tratamiento en estaciones depuradoras de aguas residuales (Figura II. 10).
VERTIDO DIRECTO DE
AGUAS RESIDUALES
JABONES Y
DETERGENTES
AGUAS
RESIDUALES
DEPURADAS
-Aguas Superficiales
-Mar
-Riego agricola
USOS DOMSTICOS
E INDUSTRIALES
PLANTAS DE
TRATAMIENTO
DE AGUAS
RESIDUALES
LODOS TRATADOS
-Compostaje
-Incineracin
-Vertedero
-Enmendado de
suelos agricolas
Figura II. 10.- Emisin de detergentes al medio ambiente
Los problemas medioambientales que provoca un detergente industrial, como

consecuencia de su presencia en las aguas, pueden resumirse como sigue:
1. Aumento del pH de las aguas residuales a valores superiores a 12.
2. Problemas de eutrofizacin en cauces receptores debido a los altos niveles de
fsforo
procedentes
del
tripolifosfato,
principal
secuestrante
de
las
formulaciones detergentes.
3. La sustitucin de los fosfatos por otros secuestrantes como el NTA o el EDTA
no evita el problema de la eutrofizacin y adems existe un problema aadido:
los iones pesados como plomo o mercurio pueden ser solubilizados entrando a
formar parte del ciclo del agua, de forma que al ser ingeridos son txicos
(llegan a ocasionar problemas mutagnicos).
48
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
4. Puede aumentar la presencia de niveles elevados de cloro y de compuestos

organoclorados de naturaleza muy dudosa; algunos posiblemente de carcter
txico y/o carcingeno.
5. Se requiere una cierta cantidad de oxgeno para degradar a los diferentes
compuestos orgnicos que forman el detergente, lo que podra conducir a unas
condiciones anxicas peligrosas para las diferentes especies que habitan en el
medio.
6. Algunos de los compuestos de la formulacin presentan efectos txicos, tanto
sobre los microorganismos como sobre los organismos superiores que all
habitan.
7. Efecto sobre la coagulacin y sedimentacin en plantas de depuracin.
8. Contaminacin de aguas subterrneas, aunque no es muy frecuente y siempre
como sntoma de otra contaminacin ms importante.
9. Produccin de espuma tanto en los ros como en las plantas de depuracin de
aguas residuales.
La primera prueba de contaminacin por detergentes no fue su efecto txico, sino la
aparicin de una gran cantidad de espuma en los cauces receptores. La espuma provocaba
un impacto visual que degradaba el valor paisajstico del medio. Adems, las aguas de
pozos localizadas cerca de puntos de descarga de aguas residuales domsticas, tendan a
formar espuma cuando salan del grifo. De esta forma, los tensioactivos sintticos
empezaron a hacerse notar debido precisamente a las mismas propiedades que los haban
llevado al xito: mantenan sus propiedades espumantes en aguas naturales a
concentraciones del orden de partes por milln, concentraciones muy inferiores a aquellas
a las que otros componentes de las aguas residuales, el jabn inclusive, pueden ser
detectados visualmente.
El origen de las espumas se deba a los tensioactivos, y aunque stos son
esencialmente no txicos para los humanos (Sivak, 1982), y las concentraciones que
normalmente se encontraban en las aguas para consumo humano son muy bajas, hay un
acuerdo general sobre que su presencia en aguas potables es indeseable, aunque slo sea
desde un punto de vista esttico.
Para resolver todos estos problemas, tcnicos y medioambientales, hay que dirigir
los esfuerzos a la formulacin de un tipo de detergente que sea capaz de trabajar en medios
49
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
menos agresivos y que consiga una alta eficacia de lavado. Esto es actualmente un reto en
el campo de las empresas que se dedican a la fabricacin y comercializacin de
detergentes. La optimizacin (bajo parmetros medioambientales y tcnicos) en el diseo
de estos productos sera muy bien acogida tanto por parte de los consumidores como de las
empresas que fabrican la maquinaria especfica necesaria para los procesos de lavado.
Adems los potenciales nuevos componentes que se incorporen a una nueva
formulacin detergente debern experimentar una serie de controles analticos tales como
ensayos de biodegradabildad y toxicidad para asegurar que sean ecolgicamente
aceptables. Los tensioactivos han sido objeto de una atencin especial, ya que pueden
inducir una relativamente elevada toxicidad sobre las especies que viven en un entorno
acutico y por los problemas de espuma que ocasionan.
2.3.4. NIVELES DE TENSIOACTIVOS EN AGUAS SUPERFICIALES

Las concentraciones de tensioactivos en aguas superficiales pueden predecirse a
partir de los estudios realizados en estaciones depuradoras de aguas residuales (EDARs),
segn los datos analticos obtenidos para las aguas depuradas y teniendo en cuenta un
factor de dilucin. Estos valores de concentracin predichos seran solo una aproximacin,
ya que aguas abajo, los ros poseen cierta capacidad para seguir degradando o eliminando
compuestos tensioactivos vertidos en l. (Snchez-Leal, 1995).
En la Tabla II. 8 se muestran datos promedio para concentraciones de tensioactivos
aninicos expresados como MBAS (sustancias activas al azul de metileno) y no inicos
expresados como BiAS (sustancias activas al yoduro de bismuto), para la entrada y salida
de una EDAR de tipo biolgico, as como las concentraciones promedio predecibles en los
ros a que se vierte el agua depurada, considerando un factor de dilucin de 12, en puntos
prximos al de vertido de dichas aguas.
50
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Tabla II. 8.- Concentraciones medias de tensioactivos aninicos (MBAS) y de

tensioactivos no inicos (BiAS) en EDARs y en aguas de ro
DEPURADORA
TENSIOACTIVOS
ENTRADA, mg/L
SALIDA, mg/L
RO, mg/L
Aninicos, (MBAS)
4-20
0.08-0.40
0.006-0.032
No inicos, (BiAS)
2-6
0.10-0.30
0.008-0.025
Se observa que los valores de concentracin para ambos tensioactivos en las aguas
depuradas, son de un orden muy bajo, y por supuesto en los ros son an menores, llegando
a ser en algunos casos inferiores al lmite de sensibilidad del mtodo analtico
correspondiente.
En determinadas aguas superficiales pueden llegar a detectarse concentraciones de
tensioactivos superiores a los indicados en la Tabla II. 8 como consecuencia de que el
factor de dilucin sea menor que el valor considerado de 12, o bien porque en ciertos
tramos del ro se realicen vertidos sin depurar o incontrolados.
Cabe destacar que durante el proceso de canalizacin de las aguas residuales
domsticas a travs de los colectores y en el trayecto hasta la propia entrada de las EDARs,
tiene lugar una importante eliminacin de los tensioactivos por efecto de adsorciones en
slidos en suspensin y en las propias conducciones, e incluso, por procesos de hidrlisis o
degradacin (Spohn, 1967; Fischer, 1984; Moreno, 1990; Berna, 1993).
En general, las concentraciones de detergentes en aguas residuales pueden oscilar
entre 1-20 mg/L, y en aguas superficiales en torno a 0.5 mg/L. El sabor en agua se detecta
a partir de 0.2 mg/L, y la formacin de espumas a partir de 0.3 mg/L, concentraciones en
agua de 2.5 mg/L afectan al crecimiento de plantas y de 5-6 mg/L son txicas para algas y
peces en general (Martn, 1995).
2.4. BIODEGRADACIN. CONCEPTO Y EVALUACIN

Desde hace aproximadamente 40 aos, el comportamiento de los contaminantes
qumicos en el medio ambiente se ha convertido en un tema extremadamente importante.
51
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Se han desarrollado numerosos mtodos para la investigacin y vigilancia de un elevado

nmero de compuestos, entre ellos los tensioactivos (Battersby, 1990). Aunque la
eliminacin de estos productos del medio ambiente acutico puede ocurrir mediante
procesos abiticos tales como adsorcin, hidrlisis y fotlisis, la conversin total de la
materia orgnica en productos inorgnicos es debida a procesos de biodegradacin
microbiana (Swisher, 1987).
El aumento en el consumo de detergentes en los aos 50 coincidi con la aparicin
de espuma persistente en los ros. Debido a este hecho, se iniciaron una serie de
investigaciones con el objeto de estudiar este problema. Como resultado se puso de
manifiesto que uno de los principales responsables de la espuma observada en los ros era
el tetrapropilenbenceno sulfonato sdico, tensioactivo muy empleado entonces en las
formulaciones detergentes. Debido a su compleja estructura molecular ramificada, no era
descompuesto con facilidad por la accin biolgica de algunas bacterias, es decir, no era
biodegradable, por lo que conservaba sus propiedades humectantes y espumantes.
Por este motivo, se introdujo el uso de tensioactivos ms fcilmente
biodegradables, como el LAS. La total conversin a este tipo de tensioactivos en los pases
industrializados se consigui a mediados de los aos 60 y supuso una inversin de ms de
150 millones de dlares en investigacin y en la construccin de plantas de produccin
adecuadas. Sin embargo, esto no signific el fin del problema de la espuma en los ros,
puesto que sta tambin se deba a causas naturales y otros productos como los de desecho
de tipo protenico.
De forma parecida, los alcoholes lineales ms biodegradables han reemplazado a
los alcoholes y alquilfenoles de cadena altamente ramificada en la fabricacin de
polietoxilados no inicos, alquilsulfatos y alquilpoliter sulfatos para las aplicaciones de
detergentes en usos domsticos.
Tericamente todos los tensioactivos son biodegradables dndoles tiempo y
condiciones apropiadas. Pero para que la accin de los microorganismos pueda solucionar
el problema de la contaminacin originada por estas sustancias, es preciso que se degraden
fcilmente y en un tiempo relativamente corto. De aqu la divisin entre tensioactivos
duros y blandos segn su velocidad y resistencia a la biodegradacin.
La biodegradacin puede definirse de un modo simple como la destruccin de un
compuesto qumico por la accin biolgica de microorganismos vivos (Swisher, 1987).
52
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Para el caso particular de los tensioactivos como molculas a degradar, estos organismos
son los microorganismos vivos (principalmente bacterias) presentes en los diversos medios
que reciben las aguas residuales, que son capaces de alimentarse de una gran variedad de
compuestos orgnicos.
El proceso global que tiene lugar es una oxidacin, de forma que la materia
orgnica se va descomponiendo en sustancias ms simples que pueden llegar a ser
utilizadas por las bacterias para su metabolismo. Las bacterias estn adaptadas a mltiples
tipos de compuestos, debido a la relativa simplicidad de su organizacin y estructura, que
les permite revisar y modificar sus rutas metablicas. Debido a esta posibilidad
denominada adaptacin o aclimatacin, las bacterias pueden llegar a vivir y propagarse
incluso en sustratos como la gasolina, benceno, fenol o multitud de compuestos
considerados normalmente como txicos.
Del concepto de biodegradacin se deduce el de biodegradabilidad, que se puede
definir como la susceptibilidad de una sustancia a la degradacin biolgica.
A la cuestin fundamental: en que se descomponen los tensioactivos? podemos
contestar de tres formas posibles:
1. Biodegradabilidad primaria: se entiende por este concepto una oxidacin o
modificacin de la molcula del tensioactivo, de forma que vayan desapareciendo sus
propiedades tensioactivas, o bien no pueda detectarse la molcula por medios analticos
especficos. Esta prdida de propiedades tensioactivas o de especificidad analtica, es una
secuencia de pasos y no un cambio brusco. El concepto de biodegradabilidad primaria es
importante, por su relacin con problemas visibles, como el de espumacin que puede
aparecer en los ros.
2 Biodegradabilidad final o mineralizacin: se considera la destruccin de una
molcula de un compuesto qumico, de forma que se convierta toda ella en CO2, sales
inorgnicas y otros productos asociados al metabolismo normal de las bacterias.
Por ejemplo, para demostrar la biodegradabilidad final de fenol, sera necesario
demostrar no solo la desaparicin de la respuesta analtica especfica, sino tambin que
ningn otro metabolito orgnico (biointermediato) resistente a las particulares condiciones
de biodegradacin se est formando. Esta tarea analtica es extremadamente difcil incluso
para una sustancia tan simple como el fenol, y para ser llevada a cabo con un completo
53
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
rigor cientfico se precisa la sntesis de material marcado con carbono-14 y una

experimentacin ms elaborada.
En la prctica, la biodegradabilidad final es evaluada en sistemas aerobios mediante
la medida del dixido de carbono producido, el oxgeno consumido durante el proceso de
biodegradacin (demanda biolgica de oxgeno, DBO) o mediante la medida de los niveles
de carbono orgnico que permanecen en disolucin a lo largo del curso de la
biodegradacin. Cada uno de estos mtodos tiene sus problemas intrnsecos sin tener en
cuenta cualquier problema experimental asociado con las medidas en s mismas
Resumiendo, se puede decir que en los ensayos de biodegradacin se realiza el
anlisis del tensioactivo por mtodos especficos, con lo que se obtienen datos sobre la
biodegradabilidad primaria, o bien se realizan determinaciones de tipo no especfico (como
el oxgeno disuelto, la demanda qumica de oxgeno, la demanda biolgica de oxgeno, el
carbono orgnico total, etc), con lo que se obtiene informacin sobre la biodegradabilidad
total del tensioactivo ensayado.
3 Biodegradabilidad ambientalmente aceptable:
La biodegradabilidad ambientalmente aceptable es un tipo de biodegradabilidad
primaria en la que los metabolitos resultantes del proceso de biodegradacin son
ambientalmente inocuos, es decir, presentan una baja ecotoxicidad. Adems la extensin y
velocidad resultante del proceso degradativo, debe igualar desde el punto de vista
cuantitativo, la degradacin de la materia orgnica residual normal en plantas de
tratamiento o cauces receptores.
Muchos compuestos de inters y utilizados por el hombre son considerablemente
ms complejos en su estructura que simples molculas como el fenol, el acetato sdico,
etc., las cuales pueden demostrarse de un modo relativamente sencillo si se biodegradan
primariamente o se mineralizan en sistemas de ensayos simples. Ms an, muchas de estas
sustancias ms complejas son mezclas multicomponentes como por ejemplo muchos
tensioactivos de inters comercial
En estos casos pueden utilizarse experimentos biolgicos junto a los experimentos
de biodegradacin para demostrar si el proceso de biodegradacin tiene como resultado la
aparicin de metabolitos ms o menos txicos que el producto original. Para el ejemplo de
los tensioactivos, los cuales en general presentan una toxicidad significativa hacia
organismos acuticos como peces, algas, invertebrados, etc., hay numerosos trabajos
54
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
(Kimerle, 1977; Manzano, 1999) que muestran cmo a lo largo de la biodegradacin se

dan procesos tanto de aumento como de disminucin de la toxicidad, dependiendo del
compuesto ensayado.
Por otra parte, la OCDE, a travs de su grupo de Expertos, considera otros dos
nuevos trminos:
Biodegradabilidad
fcil
rpida
(Ready
Biodegradability)
Biodegradabilidad intrnseca o inherente (Inherent Biodegradability). Estos dos

trminos se aplican, respectivamente, a un compuesto que empieza a degradarse
inmediatamente despus de ponerlo en contacto con una determinada poblacin
microbiana, o bien a un compuesto cuya biodegradacin no empieza hasta que dicha
comunidad microbiana se haya aclimatado al compuesto, lo que ocurre tras un determinado
tiempo (horas, das o semanas).
Por otra parte, cabe destacar el posible error que se suele cometer en el clculo de la
biodegradabilidad, al no diferenciar entre dos fenmenos que pueden concurrir o tener
lugar por separado: biodegradacin y adsorcin. La eliminacin de un tensioactivo de un
medio acutico puede ocurrir por su biodegradacin o por otros medios entre los que cabe
destacar la acumulacin de molculas de tensioactivo en la superficie de las bacterias
(especialmente cuando la concentracin de slidos en el medio es muy elevada) o el hecho
de que el tensioactivo se acumule en la interfase lquido/aire, con lo que se forma una
espuma que concentra y elimina del medio a las molculas de tensioactivo, las cuales no se
veran as sometidas al proceso normal de la biodegradacin.
2.4.1. EVALUACIN DE LA BIODEGRADABILIDAD

2.4.1.1. Ensayos de biodegradacin
Para medir o evaluar la biodegradabilidad se recurre a los ensayos de
biodegradacin. Los tres componentes esenciales en un ensayo de este tipo para
tensioactivos son: el tensioactivo, el mtodo analtico para seguir el curso de la
biodegradacin, y el agente biolgico (Swisher, 1987). Estos tres componentes se
combinan en muy variadas formas para obtener los procedimientos de ensayo. Lo ms
importante en un ensayo de biodegradacin es que sea un mtodo biolgicamente correcto,
55
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
que tenga en cuenta las propiedades especiales de los tensioactivos y que sea reproducible
y adecuado para los trabajos de rutina. (Ruiz, 1972).
La eliminacin de las propiedades de los tensioactivos de comportarse como
agentes de superficie durante el tratamiento de aguas residuales ha llegado a ser un
requerimiento legal. Obviamente los primeros ensayos de biodegradacin fueron diseados
para que la eliminacin de estas propiedades de superficie, debido a la transformacin
microbiana, fueran un criterio de eleccin en los ensayos. Aquellos detergentes que
pasaban los ensayos de biodegradacin, especificados en la legislacin, en efecto no
causaban espuma durante el tratamiento de aguas residuales ni presentaban problemas de
toxicidad en los efluentes.
Durante los aos 1968-1970 un grupo de expertos de la OCDE (Organizacin para
la Cooperacin y el Desarrollo Econmico) trabaj en un procedimiento de ensayo que
pudiese ser adoptado internacionalmente. El procedimiento fue publicado en 1971 (OECD,
1971) y consista en dos mtodos de ensayo:
El ensayo esttico o de seleccin (Screening Test): consiste en un ensayo
con un matraz esttico, es relativamente rpido y sencillo. Se considera un
ensayo de aceptacin y no de rechazo. En un principio se dise para la
seleccin de tensioactivos aninicos blandos.
El ensayo dinmico o de confirmacin (Confirmatory Test): est basado
en la simulacin de las condiciones existentes en una planta de depuracin
que opera mediante fangos activados. Es un ensayo que se usa para
tensioactivos que no han superado el ensayo esttico y permite confirmar o
rechazar los resultados obtenidos en este ensayo.
De forma general cabe hacer una distincin entre ensayos estticos y dinmicos.
Los mtodos estticos son aquellos en los que las condiciones experimentales quedan
fijadas desde el principio del ensayo, y los microorganismos pasan por las distintas fases
tpicas de su desarrollo. En los mtodos dinmicos se hacen ajustes continuos o peridicos
con objeto de mantener el desarrollo de los microorganismos en fase exponencial o
estacionaria; por ejemplo, alimentacin de los microorganismos por una renovacin
peridica o continua del medio.
El rigor del ensayo esttico viene determinado por la duracin del ensayo, el valor
de biodegradacin fijado para aceptar un tensioactivo y el inculo utilizado. El valor de
56
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
biodegradacin para aceptar un tensioactivo se fij en un 80% a los 19 das de ensayo, y la

cantidad de inculo sebe ser tal que un tensioactivo aninico blando (Marlon A), que es
un linear alquilbenceno sulfonato, se degrade entre 90-95 % en 14 das. El nivel de
desaparicin de un tensioactivo aninico duro del tipo tetrapropilnbenceno sulfonato
debe ser al menos del 35 % durante el tiempo de duracin del ensayo.
En el caso de los tensioactivos se probaron al principio, como indicadores de su
presencia en el medio de ensayo, su capacidad de formacin de espumas o la medida de la
tensin superficial, pero sin demasiado xito; la reactividad de los tensioactivos aninicos
con el colorante azul de metileno, result mas exitoso. Por tanto para estos ensayos se
define el grado de biodegradabilidad como el porcentaje de eliminacin de MBAS
eliminado en las condiciones del ensayo.
Los dos mtodos de ensayo descritos anteriormente tambin son adecuados para
tensioactivos no inicos, sin embargo, la principal dificultad consista en establecer una
metodologa analtica adecuada. Despus de diversos ensayos, el grupo de expertos de la
OCDE decidi adoptar el mtodo del tetrayoduro de bismuto de acuerdo con el mtodo de
Wickbold, expresando los resultados analticos como mg/L de BiAS. En el caso de analizar
una formulacin detergente sera necesaria una prepurificacin de la muestra. Estos nuevos
procedimientos de ensayo fueron publicados en 1976 (OEDC, 1976) para incluir los
mtodos analticos de tensioactivos no inicos.
Posteriormente se pens que un parmetro analtico no especfico para seguir el
curso de la biodegradacin resultara menos costoso, adems respondera a cualquier
residuo o intermedio de biodegradacin, indicando as la extensin de la biodegradacin
ltima del tensioactivo ensayado. El grupo de expertos de la OCDE modific y combin
elementos del ensayo esttico con otros mtodos de ensayo para otras sustancias.
Se desarrollaron muchas y variadas metodologas de ensayo, pero finalmente se
lleg a un acuerdo en la forma de stos en las denominadas Guas de Ensayos para la
degradacin y acumulacin de compuestos tensioactivos. Estas guas fueron elaboradas y
recomendadas en 1981 (OECD, 1981). Las metodologas desarrolladas fueron
posteriormente incorporadas a las Directivas de la Unin Europea para tensioactivos
utilizados en productos de limpieza domsticos e industriales (CEE, 1973b CEE, 1982)
57
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Las guas de ensayos de la OCDE abarcan tres tipos de ensayos, que se realizan en
fases sucesivas, para determinar: a) biodegradabilidad fcil; b) biodegradabilidad
inherente; c) comportamiento en condiciones reales (ensayos de simulacin):
a) Biodegradabilidad fcil (Ready Biodegradability):

Se aceptaron cinco ensayos (son los llamados RBTs: Ready Biodegradability Tests)
basados en parmetros de seguimiento de la biodegradacin no especficos tales como el
carbono orgnico disuelto, consumo de oxgeno o produccin de CO2. Estos ensayos tienen
en comn con el ensayo esttico que el tensioactivo es la nica fuente de carbono y que
ste se expone a una cantidad relativamente baja de biomasa microbiana.
Los ensayos recomendados para esta determinacin son los siguientes:
Ensayo esttico o de seleccin modificado (Screening Test)
Ensayo MITI modificado (I)
Ensayo en reactor cerrado o botella cerrada (Closed Bottle Test)
Ensayo de Sturm modificado
Ensayo AFNOR modificado
Todos estos mtodos tienen unas caractersticas similares:
El compuesto en estudio es la nica fuente de carbono orgnico
El medio est compuesto solo de nutrientes inorgnicos
Inculo de densidad celular < 106/ml
Inculo sin pre-exposicin
Duracin del ensayo inferior a 28 das: para permitir la comparacin de los

mtodos, el grupo de expertos fij un tiempo estndar de 28 das para la
duracin de los ensayos, aunque originariamente cada mtodo tena una
duracin diferente.
De acuerdo con este tipo de ensayos, se considera que una sustancia es fcilmente
biodegradable cuando la disminucin de la materia activa, tras el ensayo, es superior al
80%, o bien cuando la disminucin de algn otro parmetro no especfico es superior al
60-70%, esto es; COD (carbono orgnico disuelto) (70%), DBO (demanda bioqumica de
58
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
oxgeno) (60%) y CO2 (60%). Se trata de una clasificacin totalmente arbitraria de los
tensioactivos que han pasado este tipo de ensayos.
Estas pruebas informan sobre la biodegradabilidad ltima de una sustancia en
condiciones difciles. Los RBTs son los ensayos ms importantes para uso prctico aunque
tambin los ms estrictos de los publicados por la OCDE. Un resultado positivo denota que
la sustancia desaparece rpidamente (Dorado, 1996). Por tanto, las sustancias que resultan
biodegradables por estos mtodos, se consideran que en un medio ambiente real, sufrirn
una degradacin rpida y fcil. Por el contrario, debido a las condiciones tan estrictas del
ensayo, un resultado negativo no significa inequvocamente que la sustancia no sea
degradable, sino que para asegurarse esta condicin, deberan realizarse ms ensayos.
Si alguna o todas las condiciones de los ensayos de biodegradabilidad fcil se
suavizan, el ensayo pasa a denominarse de inherente biodegradabilidad. Algunos de los
factores que pueden incrementar la probabilidad de la degradacin son: mayores
densidades celulares, pre-exposicin del inculo al compuesto ensayado, mayor duracin
del ensayo, reinoculacin, etc...
b) Biodegradabilidad inherente (Inherent Biodegradability):

En este grupo de ensayos se incluyen:
Ensayo SCAS modificado (Semicontinuous Active Sludge)
Ensayo de Zahn-Wellens modificado
Ensayo MITI modificado (II)
En los ensayos de biodegradabilidad inherente la densidad celular utilizada se

encuentra en el intervalo 107-108 clulas/ml. Puesto que se considera que la
biodegradabilidad inherente es una propiedad especfica de un compuesto, no tiene sentido
definir un lmite de duracin del ensayo. Datos en torno al 20 % de disminucin de la
materia activa tras el ensayo, pueden considerarse como evidentes de una biodegradacin
inherente primaria, y datos superiores al 70% en la disminucin de parmetros no
especficos (consumo de oxgeno, carbono orgnico disuelto, etc...) son indicativos de una
biodegradacin inherente total.
Las pruebas de biodegradacin inherente tambin permiten calcular la formacin de
compuestos intermedios. Estas pruebas indican si en condiciones ptimas una sustancia
59
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
tiene el potencial de biodegradarse, y un resultado positivo indica que la sustancia no

persiste indefinidamente (Dorado, 1996). Si una sustancia no posee biodegradacin
inherente se considera no degradable (a menos que se degrade abiticamente).
c) Pruebas de simulacin:
Dentro de este tipo de ensayos, encaminados a conocer el comportamiento de un
tensioactivo en condiciones ambientales reales, cabe destacar:
Ensayo dinmico o de confirmacin modificado (Confirmatory Test)
Ensayo del Porous Pot
De acuerdo con los datos que se obtengan en este tipo de ensayos, se considera que
un tensioactivo es totalmente biodegradable en una EDAR con fangos activados, cuando su
porcentaje de eliminacin del carbono orgnico disuelto sea superior al 70%.
En 1981 se llevaron a cabo una serie de estudios comparativos de los RBTs para 44
compuestos diferentes encontrndose diferencias significativas en cuanto a su severidad o
rigor. El ensayo ms estricto fue el ensayo en reactor cerrado seguido de: ensayo MITI (I),
ensayo esttico modificado, ensayo AFNOR modificado y ensayo de Sturm modificado.
Estos dos ltimos ensayos son los menos estrictos debido a que utilizan una concentracin
de inculo varios rdenes de magnitud superiores.
En 1985 comenzaron a revisarse las guas de ensayo publicadas en 1981, en
especial lo referente a los RBTs (301A-301E) en el sentido de armonizar todos los ensayos
y para adoptar un ensayo adicional que fuese adecuado para compuestos poco solubles, se
propuso un ensayo de respirometra manomtrica como una simplificacin del ensayo
MITI (I). 37 laboratorios participaron en un ensayo interlaboratorio para comprobar la
validez de los mtodos propuestos.
Finalmente en 1993 la OCDE (OEDC, 1993b) public una nueva gua de ensayos
para biodegradabilidad fcil que contena seis mtodos: COD Die-Away, evolucin de
produccin de CO2, ensayo esttico modificado, respirometra manomtrica, ensayo en
reactor cerrado y ensayo MITI (I). El medio mineral utilizado es similar en los cuatro
primeros ensayos, y la mxima concentracin de inculo permitida vara en un rango de
dos rdenes de magnitud para todos los ensayos si no se considera el ensayo esttico
modificado.
60
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Adems de las condiciones expuestas, otra condicin arbitraria que se debe

cumplir, es que la degradacin del compuesto ensayado debera tener lugar dentro de los
10 das siguientes al comienzo del ensayo (14 das para el ensayo en reactor cerrado),
considerando como comienzo de la degradacin aquel momento en el que desaparece el
10% del sustrato adicionado. Es el llamado criterio 10 days-window o principio de los
diez das. Este criterio est siendo cuestionado por numerosos investigadores y se presenta
como inadecuado para clasificar un compuesto como fcilmente biodegradable en
especial para mezclas comerciales y compuestos de escasa solubilidad (Richterich, 2001).
En la ltima legislacin europea (COM, 2002) ya se considera como un principio no
deseable. La concentracin de compuesto y el inculo es menos favorable en el ensayo
esttico modificado que en los otros ensayos, por lo tanto los efectos txicos reducen su
aplicabilidad.
Algunos de los RBTs revisados en 1993 resultan muy apropiados para medir la
biodegradabilidad ltima. El mtodo en reactor cerrado resulta til para tensioactivos
aninicos y no inicos de buena solubilidad. En 1994 Struijs (Struijs, 1994) hizo un estudio
comparativo entre los nuevos RTBs y el ensayo esttico de la OCDE, y observ que en el
ensayo en reactor cerrado las condiciones para la biotransformacin de un tensioactivo son
similares o incluso ms favorables que en el ensayo esttico, ya que la concentracin de
inculo es diez veces mayor y la duracin del ensayo se prolonga de 19 a 28 das. Se
concluy que los RTBs revisados deberan considerarse como mtodos complementarios
ms que como meros sustitutos del ensayo esttico y dinmico. Por otra parte la aplicacin
de los RTBs constituye una doble seleccin para distinguir entre tensioactivos que son
fcilmente mineralizables y aquellos que son rpidamente convertidos en intermediatos
estables. Por tanto se propone un sistema de ensayos de doble seleccin: el ensayo esttico
de la OCDE y un ensayo adecuado de entre los RTBs revisados.
En la misma poca en la que se publicaron los RBTs revisados de la OCDE se
crearon una serie de ensayos estndar de biodegradabilidad por la Organizacin
Internacional para la Estandarizacin (ISO), ensayos que son bastante similares a los
creados por la OCDE.
En la Tabla II. 9 se presenta una lista de mtodos para la determinacin de la
biodegradabilidad total.
61
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Tabla II. 9.- Lista de mtodos para determinar la biodegradabilidad total (mineralizacin)
de compuestos (Karsa, 1995)
A. Mtodos revisados de la OCDE (fcil biodegradabilidad)
301 A COD Die-Away
301 B Evolucin en la Produccin de CO2 (Test de Sturm modificado)
301 C Ensayo MITIc (I) (DBO)
301 D Ensayo en Reactor Cerrado (DBO)
301 E Ensayo esttico de la OCDE Modificado (COD)
301 F Respirometra Manomtrica (DBO)
B. Mtodos de ensayo de la Unin Europea (fcil biodegradabilidad)
C3 Ensayo esttico de la OCDE modificado (COD)
C4 Ensayo AFNOR modificado (NF T90/302) (COD)
C5 Ensayo de Sturm modificado (CO2)
C6 Ensayo en reactor cerrado (DBO)
C7 Ensayo MITIc (I) modificado (DBO)
C8 Demanda bioqumica de oxgeno (DBO)
C. Mtodos de la Organizacin Internacional para la Estandarizacin (ISO)a
ISO 7827 Mtodo mediante anlisis de carbono orgnico disuelto
ISO 9408 Mtodo mediante respirometra (demanda de oxgeno)
ISO 9439 Mtodo mediante produccin de CO2
ISO/CD 10,707 Mtodo en reactor cerrado (an sin implantar)
ISO/CD 10,634 Gua para sustancias insolubles
D. Mtodos de la OCDE (inherente biodegradabilidad)
302 A Ensayo de lodos activos en discontinuo (SCAS) modificado (COD)
302 B Ensayo Zahn-Wellens-EMPAb modificado (COD o DQO)
E. Mtodos de la Unin Europea (inherente biodegradabilidad)
Ensayo SCAS modificado
Ensayo Zahn-Wellens modificado
F. Mtodos de la Organizacin Internacional para la Estandarizacin (ISO)a
ISO 9887 Ensayo SCAS
ISO 9888 Ensayo Zahn-Wellens
G. Mtodos de la OCDE (simulacin)
303A Tratamiento aerobio de aguas residuales (COD)
H. Mtodos de la Unin Europea (simulacin)
Ensayo de simulacin de lodos activos (COD)
I. Mtodos de la Organizacin Internacional para la Estandarizacin (ISO)a
ISO/TC147/SC5/WG4 N140 Ensayo de simulacin de lodos activos (COD)
a
no se diferencia entre ensayos de fcil o inherente biodegradabilidad

EMPA: Laboratorios Federales Suizos para el Ensayo e Investigacin de materiales
c
MITI: Ministry of International Trade and Industry (Japn)
b
62
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
2.4.1.2. Tcnicas analticas para el seguimiento de la biodegradacin

Para la estimacin del progreso y la extensin de la biodegradacin de un
tensioactivo en el sistema bajo observacin, existen multitud de mtodos analticos. Estas
tcnicas pueden hacer uso de propiedades fsicas o qumicas del propio tensioactivo o de
sus intermedios de biodegradacin. Tambin es posible medir funciones relacionadas tales
como la cantidad de oxgeno consumido o el CO2 producido por los microorganismos.
Cada uno de los mtodos analticos tiene ventajas para su aplicacin, pero ninguno de ellos
est exento de limitaciones (Swisher, 1987). Muchos de estos mtodos no son aplicables a
concentraciones excesivamente pequeas (0.1-10 mg/L), concentraciones de inters en
investigacin ambiental y en ensayos de biodegradabilidad.
Mtodos fsicos o no especficos:

Se basan en la medida de alguna propiedad fsica del sistema que contiene al
tensioactivo, tales como la formacin de espuma o la disminucin de la tensin superficial.
Se les denomina mtodos no especficos por no distinguir entre los tensioactivos aninicos,
catinicos o no inicos. Revelan concentracin de tensioactivos en el intervalo entre 0.1 y
100 ppm (Swisher, 1987).
Mtodos qumicos o semiespecficos:

El principio de los mtodos qumicos consiste en la formacin de un compuesto o
complejo con el tensioactivo para extraerlo (por transferencia de fases o precipitacin),
seguido de una determinacin colorimtrica o espectrofotomtrica.
El principal inconveniente que presentan estos mtodos es la baja sensibilidad a los
homlogos de menor cadena carbonada (Sivak, 1982; Patoczka, 1990).
A diferencia de los mtodos fsicos, los qumicos distinguen entre las distintas
clases de tensioactivos, aninicos, catinicos y no inicos, pero dentro de cada clase no se
distingue al tensioactivo concreto de que se trata, por lo que tambin reciben el nombre de
semiespecficos.
63
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Mtodos fsico-qumico o especficos:

Son las tcnicas instrumentales, basadas en la aplicacin de tcnicas fsicoqumicas, permiten distinguir entre los tensioactivos de una misma clase y determinar los
diversos componentes (oligmeros, homlogos, ismeros...). Las tcnicas cromatogrficas
han resultado de gran utilidad por su selectividad, sensibilidad y versatilidad. La
cromatografa lquida y gaseosa de alta resolucin son actualmente las tcnicas de uso ms
extendido en el anlisis especfico de tensioactivos, aunque tambin existen otras como
espectroscopia de infrarrojos, espectroscopia ultravioleta y tcnicas traza.
Mtodos metablicos y otros mtodos no especficos

Algunas de estas tcnicas son: DQO, DBO (tcnicas de botella cerrada,
respirometra), CO2, crecimiento bacteriano y toxicidad.
Merece especial importancia la toma de muestras en los ensayos de
biodegradabilidad. A causa de la capacidad de los tensioactivos de adsorberse en las
superficies y slidos en suspensin, es necesario extremar las precauciones a la hora de
obtener muestras representativas para su posterior anlisis. Una precaucin en la toma de
muestras es tomar sta exenta de espuma as como rellenar completamente el recipiente de
la muestra. En el caso de que se tomara una alcuota de la muestra, el recipiente debe
someterse a una cuidadosa agitacin con un agitador magntico o invertir el recipiente
hasta mezclar bien el contenido.
En la mayora de los ensayos de biodegradabilidad las muestras a analizar
contienen cierta cantidad de slidos, suspendidos o no. Si se hace necesaria la separacin,
es conveniente centrifugar la muestra en lugar de filtrar (Karsa, 1995). Si se utilizara la
filtracin se aconseja rechazar los primeros 10-20 ml de filtrado obtenidos con objeto de
minimizar la adsorcin del tensioactivo en el material filtrante. La conservacin de
muestras antes de ser analizadas puede hacerse mediante la adicin de mercurio,
formaldehdo, o mediante congelacin.
A continuacin se describen de forma general los principales mtodos de anlisis
para medir biodegradacin primaria para tensioactivos aninicos y no inicos, que son las
clases de tensioactivos estudiados en este trabajo.
64
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
En el caso de los tensioactivos aninicos, cuando se desea conocer el nivel de

tensioactivos totales en aguas residuales, el mtodo analtico oficialmente reconocido es:
Azul de Metileno o MBAS (Sustancias activas al Azul de Metileno). Este

mtodo est basado en las modificaciones de Abbott (Abbott, 1962) del
mtodo de Longwell y Maniece (1955). Permite medir un rango de
concentraciones de 0.1-2.0 mg/L para 100 ml de muestra. El lmite de
deteccin est en 0.02-0.05 mg/L. Es el mtodo colorimtrico ms usual
para determinacin de tensioactivos aninicos. El tensioactivo aninico
reacciona con un colorante catinico para formar un par inico que se extrae
bajo condiciones controladas de pH y agitacin, finalmente se realiza una
medida espectrofotomtrica. La especificidad del mtodo es baja: todos los
sulfatos y sulfonatos utilizados en preparaciones comerciales reaccionan
positivamente. El mtodo del azul de metileno para tensioactivos aninicos
ha sido oficialmente adoptado en Europa (OEDC, 1976; CEE, 1982a).
Mtodos cromatogrficos: TLC (cromatografa de capa fina), GC

(cromatografa gaseosa) y HPLC (cromatografa lquida de alta resolucin).
En el caso de los tensioactivos no inicos, los tensioactivos comerciales con un

grupo etoxilado (representan el grupo mas importante de tensioactivos no inicos) no son
entidades moleculares individuales, estn formados por un elevado nmero de homlogos
y oligmeros, por tanto la determinacin analtica de tensioactivos no inicos a bajas
concentraciones resulta ms complicada que para tensioactivos aninicos y catinicos en
tres sentidos: los tensioactivos polietoxilados incluyen una gran variedad de sustancias
qumicas, las interferencias con otros materiales en muestras ambientales resultan mas
complicadas, los intermediatos de biodegradacin no se identifican tan claramente como el
tensioactivo de partida. En muchas ocasiones se requiere una purificacin de las muestras
en muestras ambientales. Los mtodos que se aplican comnmente al anlisis de estos
tensioactivos son:
Yoduro de Bismuto, BiAS o Mtodo de Wickbold (Wickbold, 1972; Waters,

1986). Es el mtodo oficial europeo (OEDC, 1976; CEE, 1982b) para
anlisis de tensioactivos no inicos etoxilados en general, expresndose
como contenido en BiAS (Sustancias activas al yoduro de bismuto).
65
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Cobaltotiocianato o CTAS (Crabb, 1964).
Mtodos cromatogrficos: TLC (cromatografa de capa fina), GC

(cromatografa gaseosa) y HPLC (cromatografa lquida de alta resolucin).
Mtodo propuesto por la American SDA (Matthijs, 1991).
Mtodo europeo normalizado para la determinacin de tensioactivos no

inicos (Matthijs, 1991).
Potasio picrato o PPAS.
2.4.2. VARIABLES QUE INFLUYEN EN LA BIODEGRADACIN

En un ensayo de biodegradacin intervienen numerosas variables que pueden tener
gran influencia en el resultado final obtenido como son: los microorganismos (tipo,
aclimatacin, concentracin), el medio de cultivo (tipo, concentracin), oxgeno,
temperatura, pH, luz, la concentracin del propio tensioactivo y el mtodo analtico
utilizado.
Los microorganismos que se utilizan en los mtodos de ensayo de la
biodegradabilidad deben ser del tipo de los que realmente se encuentran en las aguas de
ro, agua de mar, aguas residuales y en los procesos de depuracin (autodepuracin y
tratamiento biolgico en plantas depuradoras), de esta forma los resultados que se
obtengan de los ensayos pueden ser extrapolados a la realidad. Aunque son numerosos y
variados los microorganismos existentes en estos medios, las bacterias forman la mayor
parte de su poblacin por desarrollarse mejor y ms rpidamente que otros
microorganismos.
La experiencia indica que los mejores resultados en los ensayos de biodegradacin
se obtienen con un inculo polivalente de diferentes especies (Swisher, 1987) ya que las
poblaciones mixtas proporcionan ms informacin para la prediccin del comportamiento
de un tensioactivo en un medio natural real. Las especies puras son apropiadas en los
estudios de biodegradacin en que se quieran aclarar los mecanismos o secuencias de
reacciones de la oxidacin biolgica (Ruiz, 1972). Adems, la concentracin bacteriana es
un factor muy importante en los ensayos de biodegradabilidad, ya que afecta a la velocidad
de degradacin, al perodo de aclimatacin, y por consiguiente al tiempo total de la
66
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
degradacin. Cuando la relacin de bacterias a tensioactivo disminuye, el perodo de

adaptacin aumenta y la velocidad de degradacin disminuye (Ruiz, 1972).
En los mtodos de ensayo de fcil biodegradabilidad de la OCDE se hace alusin
sobre los siguientes aspectos; el inculo debe provenir del medio ambiente, la densidad
celular est limitada a alrededor de 106 clulas/mL en el medio de ensayo y el
pretratamiento no debe incluir una pre-exposicin del inculo al compuesto a ensayar. En
los mtodos revisados de la OCDE se admite un pre-acondicionamiento, lo que permite a
los microorganismos aclimatarse a las condiciones del ensayo elegido.
Puesto que los tensioactivos se usan principalmente en medios acuosos, los ensayos
ms importantes son los que ocurren en este medio. Ya que los mtodos de ensayo de
biodegradabilidad suelen representar o simular en el laboratorio las condiciones naturales,
se debe utilizar en los ensayos agua de ro, mar o agua residual. Sin embargo, si se quieren
obtener ensayos reproducibles se recomienda el uso de aguas sintticas a base de
sustancias orgnicas que suministren los elementos necesarios. En algunos casos se utilizan
mezclas de medio natural y sinttico y en otros casos medios sintticos que reproducen
condiciones naturales y donde el detergente o el tensioactivo es la nica fuente de sustancia
orgnica, o bien va acompaado de otros nutrientes orgnicos que sirven para ayudar al
normal desarrollo de los microorganismos.
Puede ocurrir que, dependiendo del tipo de compuestos y la concentracin en el
medio, las bacterias inicien su metabolismo a base de otro compuesto orgnico ms
asequible y no degraden la molcula de tensioactivo hasta que dicho compuesto haya
desaparecido prcticamente, con lo que la degradacin del tensioactivo se retarda de forma
sensible. Igualmente puede ocurrir que los nutrientes presentes en el medio acen como
agente bacteriosttico o bactericida, e incluso comportarse como uno u otro dependiendo
de las condiciones del ensayo.
La presencia de oxgeno libre en el medio es fundamental para el desarrollo de los
microorganismos aerobios, que lo utilizan como agente oxidante de los sustratos orgnicos.
En los mtodos de ensayo y estudios de biodegradacin en medio aerobio, el medio se
airea por agitacin o por paso de una corriente de aire, en ningn caso se introduce oxgeno
puro, ya que puede afectar al desarrollo de los microorganismos por prdidas de las
pequeas, pero necesarias, cantidades de anhdrido carbnico disuelto en el medio.
Adems es muy importante la relacin existente entre el oxgeno disuelto disponible en el
medio y el tensioactivo, ya que ste puede impedir el paso del oxgeno del aire al medio de
67
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
ensayo, esto es importante sobre todo en las superficies estticas, debido a que el
tensioactivo se adsorbe en las paredes. Otro efecto importante es la adsorcin del
tensioactivo en las membranas exteriores celulares de los microorganismos afectando de
esta forma su permeabilidad al oxgeno.
El intervalo de temperaturas dentro del cual pueden crecer y desarrollarse los
microorganismos es relativamente amplio, sin embargo, para cada organismo en particular,
este intervalo es pequeo. El aumento de la temperatura en los ensayos de biodegradacin
lleva consigo una disminucin del perodo de latencia o tiempo de adaptacin. Igualmente
influye sobre la concentracin limitante, pues aunque las curvas de degradacin en funcin
del tiempo sean anlogas, los valores de esta concentracin aumentan con la temperatura.
Por lo general, se suelen usar temperaturas en los ensayos de biodegradabilidad del orden
de 20-25 C.
La mayora de las bacterias se adaptan y desarrollan dentro de intervalos de pH
relativamente amplios, sin embargo, existen algunos microorganismos cuyo desarrollo se
inhibe en medios cidos o alcalinos. Este factor no tiene importancia en los estudios de
biodegradacin, ya que stos se llevan a cabo, generalmente en medios neutros o
ligeramente alcalinos, que son los ms representativos de los medios naturales
contaminados. Sin embargo, se observa en los mtodos de ensayo de laboratorio una cierta
tendencia del medio a cambiar hacia pH cido como consecuencia de los cambios
qumicos debido al desarrollo de la poblacin bacteriana. Para amortiguar los cambios
excesivos de pH a veces se aaden al medio soluciones tampn.
La luz tiene una influencia apreciable para el desarrollo de los microorganismos,
siendo esencial para ciertas especies de bacterias (fotosintticas). Por lo general, en los
mtodos de ensayo de la biodegradabilidad se recomienda la oscuridad o luz difusa.
Concentracin inicial de tensioactivo

Si una sustancia es utilizada por los microorganismos como sustrato, stos solo se
desarrollan propiamente dentro de los lmites especficos de concentracin. A
concentraciones muy bajas de sustrato, la velocidad de desarrollo es generalmente lenta,
pero aumenta progresivamente a medida que se incrementa su concentracin. Por encima
de un cierto lmite, la velocidad de crecimiento se hace constante e independiente de la
concentracin.
68
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
La concentracin de tensioactivo en el medio de ensayo es siempre del orden de

partes por milln (mg/L) y suele ser anloga, o ligeramente superior, a la concentracin
normal en aguas receptoras o residuales, de acuerdo con el mtodo de ensayo empleado.
En los ensayos que simulan condiciones naturales de aguas receptoras la concentracin
suele ser de 5 mg/L. En cualquier caso, el lmite inferior de concentracin vendr dado por
la sensibilidad del mtodo analtico que se utilice y por la precisin que se desee en los
resultados. La concentracin mxima depender en cada caso del posible efecto txico o
inhibidor del tensioactivo que pueda afectar al desarrollo de los microorganismos.
Al aumentar la concetracin de tensioactivo se observa un aumento significativo
del perodo de adaptacin y una disminucin de la velocidad de degradacin. Este hecho
puede ser debido a un efecto de interaccin bacteria-tensioactivo o a una disminucin de la
solubilidad del oxgeno disuelto en el medio (Ruiz, 1972; Swisher, 1987).
Existen muchos ejemplos en bibliografa en los que se muestra cmo diversos
compuestos en concentraciones iniciales entre 20-100 mg/L presentan efectos inhibitorios
sobre su propio proceso degradativo, pero se degradan a concentraciones ms bajas.
Dobarganes (Dobarganes, 1975), realiza ensayos de biodegradacin a escala de
laboratorio con alquilfenoles polietoxilados, demostrndose la influencia de las variaciones
de concentracin del tensioactivo en los resultados de degradacin obtenidos. Se
comprueba la existencia de un aumento significativo del perodo de induccin conforme
aumenta la concentracin, llegndose a concentraciones de tensioactivo donde este efecto
es muy pronunciado.
En los ensayos convencionales (fcil e inherente biodegradabilidad) la
concentracin del compuesto a ensayar debe ser lo ms baja posible, siempre acorde con
los lmites de deteccin del mtodo analtico empleado, como se ha indicado. Una
orientacin para compuestos inhibidores, dada por la OCDE, es que la concentracin
inicial (para lodo activo) debera ser de alrededor del 10% del valor de la EC50
(concentracin que provoca efecto sobre el 50% de la poblacin ensayada) cuando este
valor es del orden de 300 mg/L, mientras que para compuestos ms inhibidores, habra que
realizar ensayos de biodegradacin con un rango de concentraciones iniciales.
En cualquier caso, las condiciones del ensayo de simulacin adoptadas han de ser
consideradas a la hora de interpretar y extrapolar los resultados obtenidos.
69
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
2.4.3. MODELOS CINTICOS DE BIODEGRADACIN

2.4.3.1. Introduccin
El conocimiento de la cintica de biodegradacin es esencial para evaluar la
persistencia de contaminantes orgnicos como los tensioactivos y para valorar los riesgos
de exposicin en humanos, animales y plantas, adems es til para el diseo de plantas o
equipos industriales que permitan eliminar estos productos.
La cintica de biodegradacin es enormemente importante porque permite conocer
la concentracin de tensioactivo en cualquier instante, permite la prediccin de niveles
probables en un tiempo futuro, y permite la evaluacin de si el compuesto ser eliminado
antes de ser transportado a un compartimento ambiental al que las personas, animales o
plantas podran estar expuestos.
Tradicionalmete el estudio de la cintica de biodegradacin se ha centrado en dos
aspectos; en primer lugar, la evaluacin de factores que afectan a la cantidad de
tensioactivo transformado por unidad de tiempo, tales como temperatura, pH, otras fuentes
de carbono, etc...y en segundo lugar, la determinacin de la forma de la curva que describe
la biodegradacin y la evaluacin de cul es el modelo de biodegradacin que mejor ajusta
el metabolismo del compuesto estudiado.
Sin embargo, la velocidad y forma de la curva de biodegradacin de tensioactivos
depende de muchos factores: del compuesto que se biodegrada, de su concentracin, de las
condiciones mantenidas durante el ensayo, de los organismos responsables del proceso, y
de una enorme variedad de factores ambientales (Alexander, 1994), por lo que establecer
un modelo cintico general es una tarea complicada.
El desarrollo de modelos cinticos de biodegradacin para los productos
tensioactivos es de vital importancia para la prediccin de los niveles de contaminacin de
estos compuestos as como para el anlisis de la influencia de las distintas variables del
proceso sobre la velocidad de biodegradacin (Battersby, 1990).
Los ensayos de biodegradacin actuales propuestos por la OCDE no recogen un
tratamiento cintico preciso de los datos, tan solo proporcionan el porcentaje de
eliminacin de un compuesto despus de un periodo dado. En los protocolos de estos
70
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
ensayos, los nicos parmetros cinticos que se contemplan son el tiempo de vida media y
el periodo de latencia. Ambos son calculados mediante mtodos grficos sobre la curva de
degradacin (Figura II. 11).
% Biodegradacin
100
90
80
70
60
t1/2
50
40
30
20
tL
10
0
0
10
20
30
40
50
60
Tiempo
Figura II. 11.- Curva tpica de biodegradacin de un ensayo de biodegradacin en

discontinuo
El tiempo de latencia (tL) es considerado como el periodo que transcurre hasta que
se alcanza un 10% de biodegradacin, mientras que el tiempo de vida media (t1/2) es
considerado como el tiempo que pasa desde la finalizacin del tiempo de latencia hasta que
se alcanza el 50% de biodegradacin. Aunque estos ensayos no fueron diseados para
obtener constantes cinticas, las curvas sigmoidales de degradacin que se obtienen,
pueden ser usadas para proporcionar tales constantes mediante un proceso de ajuste
reiterativo de los datos experimentales (Quiroga, 1999).
Las cinticas de biodegradacin de compuestos orgnicos en el medio ambiente se
han descrito usando una gran variedad de expresiones matemticas, aumentando en
complejidad con el objeto de incluir las numerosas variables que pueden afectar a la
velocidad del proceso de biodegradacin
Un resumen de las expresiones cinticas ms usuales para describir los procesos de
biodegradacin se incluyen en los apartados 2.4.3.2. a 2.4.3.6. Unas aplicadas al
71
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
crecimiento de los microorganismos responsables del proceso y otras analizando la

disminucin de la concentracin del compuesto a ensayar.
2.4.3.2. Modelo cintico de primer orden

Una aproximacin simple, utilizada por la mayora de los autores, es la de ajustar la
curva de degradacin a una ecuacin de primer orden de la forma:
S = S 0 e K1t
Ecuacin II. 1
donde:
S = concentracin de sustrato que permanece sin degradar.
S0 = concentracin inicial de sustrato.
K1 = constante de velocidad, t-1.
t = tiempo.
La constante de velocidad K1 de primer orden puede determinarse directamente

mediante clculo numrico utilizando mtodos de regresin lineal, aunque tambin puede
determinarse mediante un anlisis de regresin no lineal de los datos (Larson, 1980).
Algunos autores consideran incompleta la Ecuacin II. 1, pues en ella no se
considera la existencia de un perodo inicial de adaptacin. Si se considera este perodo
inicial de adaptacin, la expresin anterior queda de la forma:
dS
= K1 S
dt
Ecuacin II. 2
La velocidad de biodegradacin es proporcional a la concentracin de sustrato

72
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
entonces:
dS
= K1 dt
S
Ecuacin II. 3
integrando:
S
dS
S S = K1 t dt
0
0
S = S 0 e K1(t t0 )
Ecuacin II. 4
Si en lugar de la desaparicin de sustrato, consideramos la aparicin de un producto

(por ejemplo la formacin de CO2), la cintica de primer orden se puede aplicar para la
determinacin de la velocidad de formacin de dicho producto (Larson, 1980), por tanto la
Ecuacin II. 4 se transforma en:
S = a (1 e K1(1c ) )
Ecuacin II. 5
donde a es la mxima cantidad de producto formado y c el perodo de adaptacin.

La evolucin de la produccin de CO2 durante la degradacin de una gran variedad
de sustancias qumicas en el laboratorio puede ser descrita por una expresin de primer
orden. La constante de velocidad observada, K1, es un valor global para un conjunto de
pasos metablicos.
La constante de velocidad de primer orden K1 se puede utilizar para calcular el
tiempo de vida media de acuerdo con la expresin:
t1 / 2 =
ln 2
K1
Ecuacin II. 6
73
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
La cintica de primer orden se usa frecuentemente para describir la biodegradacin

de compuestos orgnicos en sistemas acuticos, algunos valores de la constante de
velocidad K1 para compuestos tensioactivos aparecen reflejados en la Tabla II. 10. Las
diferencias que aparecen entre los valores de K1 se deben probablemente a variaciones en
la calidad y/o cantidad de biomasa del entorno acutico.
Tabla II. 10.- Algunos de los valores de K1 publicados para tensioactivos en aguas
naturales
TENSIOACTIVO
K1, d-1
MUESTRA
REFERENCIA
C12 (LAS)
0.05
Ro
Larson, 1981
C12 (LAS)
0.50
Ro
Larson, 1981
Muchos autores consideran ms adecuado describir las reacciones anteriormente

mencionadas utilizando cinticas de pseudo-primer orden, debido a la participacin de
bacterias en las reacciones.
2.4.3.3. Cinticas de Monod, co-metabolismo y segundo orden
El modelo de Monod no es aplicable a todas las situaciones bajo las que puede
darse un proceso biodegradativo, entre otras razones porque fue un modelo concebido para
cultivos puros consumiendo un nico sustrato, pero existen otras muchas situaciones en las
que el modelo puede proporcionar una buena aproximacin del crecimiento de cultivos
mixtos (Simkins, 1984).
En estos casos, el modelo da una buena, aunque indirecta, descripcin de la
desaparicin del sustrato limitante del crecimiento. Adems, algunas simplificaciones del
modelo (como la aproximacin a una cintica de primer orden), pueden resultar una buena
aproximacin de los patrones de biodegradacin observados bajo ciertas condiciones
especficas.
74
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Si consideramos que la velocidad de crecimiento viene dada por:
dX
=X
dt
Ecuacin II. 7
donde X es la concentracin de microorganismos y es la velocidad de crecimiento

especfica de la bacteria que degrada al sustrato, expresada como (tiempo)-1, y si
expresamos como Y el rendimiento de produccin de biomasa, esto es, la proporcin de
sustrato original convertido en biomasa, el cual se asume constante a lo largo del proceso
de biodegradacin, la desaparicin de sustrato puede ser definida por:
dS 1 dX
=
dt Y dt
Ecuacin II. 8
donde S es la concentracin de sustrato limitante del crecimiento celular. Estas

velocidades pueden ser calculadas haciendo uso de la ecuacin de Monod (Monod, 1949)
en la que se asume que el crecimiento es un proceso continuo y que la masa celular se
produce durante la utilizacin del sustrato:
max S
KS + S
Ecuacin II. 9
La relacin entre la velocidad de crecimiento bacteriano y la concentracin de

sustrato se muestra en la Figura II. 12. Se puede observar que la velocidad de crecimiento
es una funcin hiperblica de la concentracin de sustrato y que tiende a max a altas
concentraciones.
75
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
(t-1)
max
max/2
Ks
Concentracin de Sustrato
(mg/L)
Figura II. 12.- Evolucin de la velocidad especfica de crecimiento en funcin de la
concentracin de sustrato
Sustituyendo la Ecuacin II. 9 en la Ecuacin II. 7, obtenemos:
dX max S X
=
dt
KS + S
Ecuacin II. 10
donde max es la velocidad mxima de crecimiento especfico de los

microorganismos y Ks es la constante de saturacin de sustrato, esto es, la concentracin de
sustrato a la que se da una velocidad especfica de crecimiento igual a la mitad de la
mxima (Figura II. 12). Por lo tanto, sustituyendo la Ecuacin II. 10 en la Ecuacin II. 8
obtenemos:
dS max S X
=
dt Y ( K S + S )
Ecuacin II. 11
Esta es la forma generalmente aceptada del modelo de Monod para el consumo de

sustrato como nica fuente de carbono y energa, aunque como ya se ha comentado
anteriormente, existen algunas limitaciones a la hora de aplicarla a datos de biodegradacin
76
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
en medios acuticos naturales, por ejemplo, en muchos entornos ambientales el

crecimiento bacteriano puede ser debido a otros sustratos que pueden actuar o no como
limitantes (Battersby, 1990).
Schmidt y col. (Schmidt, 1985) han publicado ecuaciones cinticas ms complejas,
doce en total, para considerar factores tales como la inhibicin o la utilizacin de un
segundo sustrato.
La utilizacin del modelo de Monod asume que el coeficiente de rendimiento Y
presenta un valor constante (alrededor de 0.5), sin embargo, existen datos que indican que
a bajas concentraciones una gran cantidad de la energa resultante del proceso de
biodegradacin se utiliza para mantener los requerimientos energticos y no slo para el
crecimiento.
Por otra parte, estudios de laboratorio han demostrado que muchos compuestos
sintticos son tranformados por bacterias que no utilizan estos sustratos como nica fuente
de carbono y energa, aparecen por tanto sustratos que soportan el crecimiento de
microorganismos y sustratos que no lo soportan. Este fenmeno ha sido calificado como
co-metabolismo y fue definido por Dalton (Dalton, 1982). El co-metabolismo se debe
probablemente a la carencia de especificidad de ciertas enzimas microbianas, y tiene
importantes consecuencias en trminos de persistencia de un compuesto orgnico en el
medio ambiente. Un compuesto co-metabolizado es transformado a una velocidad muy
pequea, y los productos resultantes son estructuralmente semejantes al compuesto de
partida.
Algunos autores proponen la aplicacin de la Ecuacin II. 11 para procesos de cometabolismo tomando la precaucin de definir los parmetros cinticos Y y max prximos
a 0.
En la mayora de los entornos ambientales del medio acutico las concentraciones
de los compuestos qumicos sintticos son bajas y muy inferiores a KS (cuyo valor suele
ser del orden 0.1-10 mg/L). Bajo estas condiciones la Ecuacin II. 11 se puede aproximar a
la Ecuacin II. 12:
dS
= max S B = K 2 S B
dt Y K S
Ecuacin II. 12
77
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
donde K2 es la constante de velocidad de segundo orden, estas constantes son

determinadas frecuentemente en ensayos del tipo die-away.
2.4.3.4. Eleccin del modelo cintico ms adecuado para un conjunto de datos de

biodegradacin
Ecuacin de Monod integrada
Simkins y Alexander (Simkins, 1984) expresaron la ecuacin de Monod como:
S
1 dX
= = max
X dt
KS + S
Ecuacin II. 13
y propusieron que la diversidad de las curvas de consumo de sustrato obtenidas en

los diferentes ensayos de biodegradacin realizados, son el resultado de la interaccin entre
S y X. Estos autores expresaron el balance de materia en un reactor discontinuo como:
S0 + q X 0 = S + q X
Ecuacin II. 14
donde:
X0 = concentracin inicial de microorganismos.
q = inverso del coeficiente de rendimiento, (1/Y).
El valor de q se puede considerar razonablemente constante cuando la fuente de
carbono es el sustrato limitante del crecimiento, pero cambia notablemente con las
concentraciones de nitrgeno y fsforo del medio. No obstante, dado que las
concentraciones de nutrientes inorgnicos eran similares en los ensayos realizados, estos
autores asumieron q constante. El conocimiento del valor de q no resulta necesario cuando
el aspecto de inters es la desaparicin de sustrato y no el crecimiento bacteriano; en este
78
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
caso, el trmino qX puede ser reemplazado por B, parmetro que se corresponde con la
cantidad de sustrato requerido para producir una densidad celular X. De forma similar B0
es definido como qX0, de modo que la Ecuacin II. 14 se transforma en:
S 0 + B0 = S + B
Ecuacin II. 15
entonces, la Ecuacin II. 13 puede ser escrita como:
1 dB max S
=
B dt K S + S
Ecuacin II. 16
despejando B de la Ecuacin II. 15, derivando con respecto al tiempo y

sustituyendo el trmino dB/dt en la Ecuacin II. 16 se obtiene que:
dS max S ( S 0 + B0 S )
=
dt
KS + S
Ecuacin II. 17
Los autores llamaron a la Ecuacin II. 17, ecuacin integrada de Monod, la cual da
lugar a seis formas simplificadas, que representan situaciones en las que se dan relaciones
extremas, entre la densidad de inculo y la concentracin de sustrato inicial o entre la
concentracin de sustrato y KS. Estas formas se recogen en la Tabla II. 11, la cual contiene
tambin las condiciones que llevan a ellas y las constantes de velocidad que se derivaran
de su aplicacin.
79
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Tabla II. 11.- Modelos cinticos de biodegradacin usando solamente las variables,
concentracin de sustrato y de biomasa (Simkins, 1984)

Modelo
A) Primer Orden
Condiciones
Necesarias
Ecuacin
-dS/dt =
B0 >> S0
S0 << KS
K1 S
Constantes
(unidades)
B
K1 = max 0
KS
-1
(h )
K3 =
max
KS
B) Logstico
S0 << KS
K3 S (S0 + B0 - S)
(mg L h-1)
C) Monod (sin crecimiento)
B0 >> S0
K0 S
( KS + S )
K0 = max B0
(mg L-1 h-1)
Ninguna
max S ( S0 + B0 S )
max
E) Orden Cero
B0 >> S0
S0 >> KS
K0
F) Logartmico
S0 >> KS
max (S0 + B0 - S)
D) Monod (con crecimiento)
( KS + S )
-1
(h-1)
K0 = max B0
(mg L-1 h-1)
max
(h-1)
Las condiciones bajo las que las seis ecuaciones resultan tiles aparecen de forma
ms clara en la Figura II. 13 (Simkins, 1984). A modo de ejemplo, Ks se ha tomado como
1 mg/L y se representa por la lnea vertical continua, y q se ha tomado como 1 pg de
sustrato por clula. Los puntos a lo largo de la lnea diagonal, representan las densidades
microbianas que daran lugar a una divisin de las clulas activas, para diferentes
concentraciones iniciales de sustrato. Los sistemas con concentraciones iniciales de
microorganismos situadas por encima de esta lnea, para una concentracin inicial de
sustrato dada, mantendran la concentracin celular aproximadamente constante a lo largo
de la biodegradacin, dado que habra una cantidad de sustrato insuficiente para producir
un aumento celular significativo. La lnea vertical discontinua est situada a una
concentracin de sustrato de aproximadamente 1.5 rdenes de magnitud superior a Ks, y
separa las condiciones bajo las que la capacidad de consumo de los organismos activos est
prcticamente saturada hasta casi el agotamiento del sustrato (a la derecha de la lnea), de
aquellas condiciones bajo las que la velocidad de biodegradacin por unidad celular vara
apreciablemente con la concentracin de sustrato.
80
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Log 10 X0
12
E
ORDEN
CERO
MONOD
(sin crecimiento)
F
10
LOGA RTMICA
A
8
PRIM ER ORDEN
MONOD
(con crecimiento)
B
LOGSTICA
1 g/L
1 mg/ L
1 g/ L
Concentracin de Sustrato
Figura II. 13.- Modelos cinticos en funcin de la concentracin de sustrato y biomasa
(Simkins, 1984)
A partir de las dos lneas verticales y la lnea diagonal, pueden ser predichos los
intervalos aproximados de concentracin inicial de sustrato y de microorganismos que
mostraran una cintica de mineralizacin correspondiente a las seis simplificaciones del
modelo. En el caso de que se tratase de otros sustratos, as como de poblaciones diferentes
(provenientes de otra fuente), los diagramas seran similares, pero las lneas verticales y los
puntos de corte con la diagonal estaran en posiciones diferentes. Adems, la posicin de
las lneas es un tanto arbitraria, y puede variar con la precisin de los mtodos de ensayo y
anlisis empleados.
A concentraciones de sustrato por debajo de Ks, la cual es la situacin usual en el
caso de ensayos de simulacin de compartimentos ambientales naturales, la degradacin
puede ser descrita bien por cinticas de primer orden o bien por una cintica logstica. En
la zona A (Figura II. 13) no tiene lugar un aumento significativo de la densidad celular a lo
largo del proceso biodegradativo, de modo que se aplica una cintica de primer orden. En
la zona B, la pequea poblacin crece a expensas del compuesto de ensayo (a niveles traza)
a muy bajas velocidades, incluso descendentes, tpico de cinticas logsticas. La diferencia
entre estos dos tipos de modelos es tan sutil, que a menudo ocurre que la precisin de los
81
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
datos experimentales de biodegradacin, puede no ser lo suficientemente buena para

distinguir entre los dos tipos (Alexander, 1985). La zona D representa la adicin de un
pequeo nmero de clulas a un sistema que contiene sustrato a una concentracin por
encima de Ks, y la cintica es descrita por el modelo de Monod: el crecimiento ocurre a
medida que el sustrato desaparece.
Por otra parte, cuando la concentracin de sustrato es mucho mayor que Ks, la gran
cantidad de sustrato adicionado ser degradado por un sistema biolgico cuya capacidad de
consumo se encuentra saturada. Estas condiciones, zona F, permiten aproximar el trmino
(Ks+S) a S, y la cintica sigue el modelo logartmico, hasta que el sustrato esta casi
agotado. Cuando la concentracin inicial de sustrato es insuficiente para soportar un
aumento significativo en la poblacin, estando la capacidad de consumo saturada, zona E,
la eliminacin de sustrato ser lineal, y se aplicar una cintica de orden cero.
Por ltimo, la ecuacin cintica de Monod sin crecimiento puede ser utilizada en
situaciones en las que, a pesar de adicionar una cantidad de sustrato por encima del valor
de Ks, la elevada densidad celular del medio hace que el aumento de la poblacin que
supone el consumo de dicho sustrato no resulte significativo en comparacin con la
inicialmente existente (Zona C). Esta ecuacin sin crecimiento es anloga a la ecuacin de
Michaelis-Menten de cintica enzimtica.
Las curvas de biodegradacin representando a los distintos modelos cinticos se
muestran en la Figura II. 14 (Alexander, 1985).
82
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
% Sustrato
remanente
100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
Tiempo
Figura II. 14.- Curvas de biodegradacin de compuestos de acuerdo con los modelos
cinticos mostrados en Tabla II. 11
2.4.3.5. Modelo cintico de Quiroga-Sales
Quiroga y Sales (Quiroga, 1998) desarrollan un modelo cintico en el que la

velocidad de degradacin viene dada por un polinomio de segundo grado, exclusivamente
en funcin de la concentracin de sustrato. La ecuacin representativa del modelo es:
dS
= K 2 S 2 + K1 S + K 0
dt
Ecuacin II. 18
separando variables e integrando, se puede obtener la relacin existente entre la

materia orgnica y el tiempo de degradacin:
83
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
dt = ( K
0
S0
dS
2 S + K1 S + K 0 )
2
Ecuacin II. 19
la concentracin de tensioactivo puede evaluarse por la expresin:
S=
h ( S 0 q ) q ( S 0 h) e pt
( S 0 q) ( S 0 h) e pt
Ecuacin II. 20
siendo:
p = K12 4 K 2 K 0
Ecuacin II. 21
q=
( K 1 + p )
2K2
Ecuacin II. 22
h=
( K 1 p )
2K2
Ecuacin II. 23
K2 = coeficiente de S en el polinomio de segundo grado.

K1 = coeficiente de S en el polinomio de segundo grado.
K0 = trmino independiente del polinomio de segundo grado.
t = tiempo.
S = concentracin de sustrato.
La representacin de la concentracin de sustrato frente al tiempo dada por la

Ecuacin II. 20, conduce a una curva cuya forma puede visualizarse en la Figura II. 15.
De la Ecuacin II. 20 se sigue que la velocidad de consumo de sustrato se anula
cuando la concentracin de sustrato presente en el medio es igual a "q" o "h", ya que estas
84
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
seran las soluciones de dicha ecuacin. El hecho de que la velocidad de consumo de

sustrato se anule para el valor de la concentracin de materia orgnica S = q, implica que q
es el valor mnimo alcanzable de concentracin de materia orgnica y, por tanto, representa
Conce ntracin de S us trato
el nivel de materia orgnica no biodegradable para este tipo de microorganismos.
Tiempo
Figura II. 15.- Representacin grfica de la Ecuacin II. 20
Dicho modelo ha sido aplicado con xito tanto a la degradacin de tensioactivos en

aguas naturales (Quiroga, 1999; Perales, 1999), en presencia como en ausencia de
sedimentos, como a otros sustratos orgnicos (vinazas, etc.) (Romero, 1991).
Las bases tericas del modelo hay que buscarlas en el modelo no estructurado de
crecimiento de microorganismos en reactores discontinuos propuesto por Velhurst, Pearl y
Read (Bayley, 1980), as como en la suposicin de Gaden (Gaden, 1959).
Dicho modelo prev una fase de adaptacin al nuevo sustrato por parte de la
microbiota presente en el medio, seguida de un crecimiento exponencial del nmero de
microorganismos, fase en la que se produce de forma efectiva la biodegradacin, y una
fase final en la que la concentracin residual del sustrato debe tender asintticamente a
cero y que coincide con un estacionamiento del crecimiento de los microorganismos.
Atendiendo a la forma de la curva de concentracin frente al tiempo obtenida
experimentalmente, dicho modelo proporciona diferentes situaciones que es posible
85
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
encontrar en un proceso de biodegradacin, mediante la anulacin de algunos de los

trminos del polinomio (Quiroga, 1991).
Lgicamente, en la aplicacin del modelo se han adoptado importantes
simplificaciones del proceso real, ya que de lo contrario la aplicacin del modelo a los
resultados experimentales sera prcticamente inviable. Las simplificaciones que se
introducen son las siguientes:
Respecto de la heterogeneidad del sistema, ha de considerarse que las diferentes
etapas de transferencia de materia y de reaccin qumica (considerada como un todo) estn
conectadas en serie. As, los sustratos han de difundirse desde la fase lquida hasta el
interior de los microorganismos, atravesando la capa lmite que rodea al microorganismo,
la membrana celular y transportndose hacia el interior para, una vez alcanzado el centro
reactivo, reaccionar. Por todo ello, las etapas estn conectadas en serie y la velocidad
global vendr limitada por la etapa ms lenta. Normalmente se considera que la etapa de
reaccin es la limitante de la velocidad.
Respecto del conjunto de reacciones consecutivas que dan lugar a la degradacin
del sustrato ha de considerarse que estn conectadas en serie, por lo que la velocidad de
consumo de sustrato corresponder a la de la etapa ms lenta del proceso. Esta etapa puede
considerarse elemental y es la que determina la velocidad de reaccin.
La segunda hiptesis que se efecta es que aunque son posibles diferentes rutas
metablicas alternativas, las cantidades desviadas con respecto de la que se considera
reaccin principal, permanecen constantes. Por ello, es posible simplificar el esquema de
rutas metablicas conectadas en serie-paralelo a una nica ruta.
2.4.3.6. Modelo cintico de Romero
Teniendo en cuenta las simplificaciones anteriores, Romero (Romero, 1991),

asemeja el comportamiento de un proceso de degradacin en discontinuo al de un reactor
autocataltico, ya que cuando se aade a ste una sustancia orgnica, se observa al
principio del experimento una conversin lenta del sustrato. Como el microorganismo se
multiplica conforme avanza la reaccin, la velocidad de reaccin aumenta hasta alcanzar
un mximo y cuando se produce un descenso gradual de la fuente de carbono (en sistemas
en discontinuo), se produce un descenso de la velocidad de la reaccin hasta que sta se
86
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
anula. Este comportamiento es claramente autocataltico y presenta la siguiente ecuacin

de velocidad:
S + n P + n VS =
dS
= Kv S n
dt
Ecuacin II. 24
Considerando la estequiometra de la reaccin, por cada molcula de S que

desaparece se forman molculas de P y se originan un nmero de microorganismos (
debe ser > 1), por lo que si partimos de una concentacin inicial S0 y de un nmero inicial
de microorganismos n0, cuando haya desaparecido una cierta cantidad de sustrato y la
cantidad de sustrato que queda en el medio sea S, se habrn originado un nmero de
microorganismos n, dado por la expresin .(S0-S), de forma que el nmero de
microorganismos que existe en el medio en un instante determinado (y que es el que
nosotros medimos realmente) es: n=.(S0-S) + n0 y sustituyendo en la expresin de la
velocidad tendremos:
dS
= K v S [n0 + ( S 0 S )]
dt
Ecuacin II. 25
dS
= K v S 0 + S0 S
dt
Ecuacin II. 26
n
dS
= K v ( 0 + S 0 ) S S 2
dt

Ecuacin II. 27
Como puede verse, dicha ecuacin corresponde a un polinomio de segundo grado

respecto a la concentracin de sustrato presente en el medio, como se propone en la
ecuacin emprica de Quiroga y Sales (Quiroga, 1991).
87
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
La integracin de esta ecuacin de velocidad permite obtener las expresiones que

relacionan las concentraciones de las diferentes variables de estado (Sustrato, S y biomasa,
XV) con el tiempo de incubacin.
St =
S 0 ( S t 0 S nb ) + S nb ( S t 0 S 0 ) e maxt
( S to S nb ) + ( S t 0 S 0 ) e maxt
Ecuacin II. 28
XV =
X V 0 e maxt
( S S nb ) ( S 0 S t 0 ) e maxt
= YX / S 0
X V0
( S t 0 S nb ) + ( S 0 S t 0 ) e maxt
max t
1
(1 e
)
X Vmax
Ecuacin II. 29
donde:
St = concentracin total de sustrato en un instante t.
St0 = concentracin inicial total de sustrato.
S0 = mxima concentracin de sustrato invertible en formacin de biomasa.
Snb = concentracin de sustrato no biodegradable.
max = mxima velocidad especfica de crecimiento de los microorganismos.
XV = concentracin de biomasa en un instante t.
XV0 = concentracin inicial de biomasa.
XVmax = mxima concentracin de biomasa alcanzada.
YX/S = coeficiente de rendimiento biomasa/sustrato.
Romero, (Romero, 1991) da una interpretacin fsica a los parmetros cinticos p, h

y q obtenidos por Quiroga y Sales (Quiroga, 1989) a partir de las expresiones matemticas
utilizadas.
As p tendra la significacin de una velocidad mxima ya que es el producto de
la constante de velocidad observada por la concentracin mxima de microorganismos
88
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
alcanzable en el medio. Es decir, supondra aquella velocidad mxima alcanzable cuando

el trmino K2 = 0. El trmino h tiene dimensiones de sustrato y corresponde a la mxima
cantidad disponible en el medio para formar biomasa e incluye el trmino relativo a la
concentracin inicial de microorganismos. Finalmente, el trmino q representa la
concentracin de sustrato no metabolizable por los microorganismos que ya habra
predicho el modelo de Quiroga-Sales. Lgicamente, la velocidad de degradacin en
procesos discontinuos se anula para los valores de h y q (cuando an no han
comenzado a degradar el sustrato y cuando no existe sustrato biodegradable en el medio,
respectivamente).
El modelo de Romero contempla tambin las diferentes simplificaciones del
modelo de Quiroga y Sales, pero a partir de posibles situaciones que puedan darse en el
proceso. As, por ejemplo, cuando no existe concentracin de sustrato no biodegradable en
el medio, la ecuacin polinmica se segundo grado (Ecuacin II. 18) se transforma en:
dS
= K 2 ST2 + K1 S T
dt
Ecuacin II. 30
En los casos en los que la concentracin de microorganismos activos se mantenga

prcticamente constante, porque la concentracin de stos en el medio sea muchsimo
mayor que la que se pueda formar durante el proceso de biodegradacin del sustrato, la
ecuacin de velocidad inicial se transforma en simplificaciones del modelo cuando los
coeficientes K2 y K0 son despreciables.
V =
dS
= K1 ST
dt
Ecuacin II. 31
Si no todo el sustrato es biodegradable, adems de permanecer n constante, la

ecuacin toma la forma:
89
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
dS
= K1 S T + K 0
dt
Ecuacin II. 32
2.4.4. RUTAS DE BIODEGRADACIN
Los mecanismos aceptados como principales responsables de la destruccin de una

molcula orgnica, son tres: oxidacin metlica, -oxidacin y oxidacin aromtica
(Swisher, 1987).
El mecanismo de oxidacin metlica es el que interviene en la degradacin de las
molculas de hidrocarburos con alto peso molecular y que, como producto final, origina
una molcula de cido graso.
La -oxidacin es la va normal segn la cual se degradan o sintetizan los cidos
grasos, compuestos esenciales para los procesos vitales. En forma resumida, el proceso
consiste en un acortamiento de la cadena hidrocarbonada en dos unidades, con liberacin
de un radical de acetato. Sucesivas etapas de -oxidacin provocan la total conversin de
la molcula original en CO2, agua y biomasa. En un sistema aerbico, el hidrgeno termina
por desprenderse en forma de agua y, en un sitema anaerobio, en forma de metano o de
cido sulfhdrico.
En el mecanismo de oxidacin aromtica el resultado es la produccin de un
compuesto del tipo del cido-cetoadpico, que se ve sometido posteriormente al mecanismo
de -oxidacin hasta su total biodegradacin, generando grupos acetato y succinato.
En el caso de las molculas de tensioactivos, que poseen grupos un tanto especiales,
paralelamente o posteriormente a los mecanismos antes mencionados, tienen lugar
procesos de hidrlisis o desulfonacin, con lo que se originan productos que sufren uno o
varios de los mecanismos ya comentados.
90
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Para los alcoholes grasos etoxilados (AGE) la influencia de parmetros tales como
la longitud de la cadena etoxilada y la posicin del enlace con la cadena hidrofbica ha
sido estudiada en numerosas ocasiones. Patterson propuso dos posibles mecanismos que
ocurren simultneamente durante la degradacin de los alcoholes grasos etoxilados: una
fisin de la molcula en dos entidades, una hidrfoba y otra hidrfila y una oxidacin
rpida del grupo hidrofbico (Patterson, 1970).
Otros autores han propuesto tres mecanismos diferentes para la biodegradacin
aerobia de alcoholes grasos etoxilados (Figura II. 16): una escisin central de la molcula,
un ataque microbiano al carbono terminal de la cadena alqulica a travs de una , oxidacin, y un ataque primario al carbono terminal de la cadena polietoxilada mediante un
proceso hidroltico similar al que muestran los tensioactivos no inicos del tipo alquilfenol
polietoxilado (Marcomini, 2000). As pues, el mecanismo hidroltico es el responsable de
la degradacin de la cadena etoxilada (Osburn, 1966).
El mecanismo de escisin central conduce a la formacin de polietilenglicol con la
misma longitud que la cadena etoxilada, alcoholes grasos y posteriormente cidos grasos
resultantes del resto alqulico. La biodegradacin de los alcoholes grasos etoxilados se
considera rpida y completa (Swisher, 1987), ya que las molculas de alcohol graso no son
detectadas en experimentos de biodegradacin de AGE. Las molculas de polietilenglicol
se degradan posteriormente mediante un mecanismo hidroltico y/o hidroltico oxidativo
con la consiguiente formacin de polietilenglicol mono o di-carboxilado.
El mecanismo de ataque al carbono terminal de la cadena alqulica determina una
-oxidacin seguida de una serie de -oxidaciones que conducen a la formacin de
polietilenglicol monocarboxilados.
El mecanismo de ataque primario al carbono terminal de la cadena polietoxilada
tiene lugar mediante una serie de acortamientos de la cadena polietoxilada formndose
finalmente polietilnglicol dicarboxilado.
La determinacin de polietilenglicol en diferentes muestras ambientales se ha visto
facilitada en los ltimos aos por el desarrollo de mtodos de anlisis como tcnicas
tensiomtricas indirectas (ITM).
91
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
La divisin y oxidacin de la cadena alqulica son mecanismos que han sido

propuestos para la biodegradacin de alcoholes etoxilados lineales, mientras que la
biodegradacin primaria a travs de un ataque a la cadena polietoxilada ha sido propuesto
para alcoholes etoxilados ramificados (Marcomini, 2000).
En los ensayos de biodegradacin que simulan una planta de tratamiento de aguas
residuales el mecanismo de divisin central (que es el mecanismo dominante) se produce
independientemente de las diferencias existentes en la cadena alqulica del AGE, de la
longitud de la cadena etoxilada, del tipo de fango, tipo de planta y del tiempo de retencin
hidrulico (Szymanski, 2000).
Alcohol Etoxilado
R
O
OH
Escisin central
oxidacin
Hidrlisis oxidativa
R
OH
Alcohol
HO
HO
OH
Polietilnglicol
Acortamiento
no oxidativo
O
R
O
Alcohol etoxilado
carboxilado
OH
OH
O
O
oxidacin
O
R
O
HO
oxidacin
Hidrlisis oxidativa
O
O
OH
HO
Polietilnglicol monocarboxilado
+
HO
O
O
OH
Alcohol etoxilado
carboxilado
Hidrlisis oxidativa
HO
Alcohol etoxilado
dicarboxilado
OH
O
oxidacin
OH
O
O
Polietilnglicol dicarboxilado
R=1 para Alcoholes etoxilados lineales

= C1-C6
Figura II. 16.- Mecanismo de biodegradacin y metabolitos para la degradacin aerobia
de alcoholes grasos etoxilados
92
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
2.4.4.2. Nonilfenoles polietoxilados
La ruta de biodegradacin de los alquilfenoles polietoxilados (APEO) ha sido

seguida en numerosos estudios realizados tanto en experimentos de laboratorio como en
plantas de tratamiento, siendo la ms aceptada la propuesta por Yoshimura (Yoshimura,
1986). Todos los mecanismos de biodegradacin que aparecen en esa ruta, con sus
respectivos metabolitos, son posibles, y su importancia relativa depende de las condiciones
ambientales bajo las que transcurre el proceso de biodegradacin. Adems la
transformacin que sufren los metabolitos en condiciones anaerobias da lugar a alquilfenol.
En el caso de los alquilfenoles polietoxilados, a diferencia de lo que ocurre con los
alcoholes etoxilados, algunos autores proponen que no existe evidencia de hidrlisis en el
enlace eter-fenlico para liberar polietilenglicol por un lado y alquilfenol por otro, debido
probablemente a factores estricos. S existe evidencia de que la cadena etoxilada se acorta
un mol de etilenglicol en cada paso (Schrder, 1993), permaneciendo unida al resto
hidrfobo. Este acortamiento parece ser meramente hidroltico, liberando etilenglicol que
ser posteriormente oxidado.
Otros autores afirman que en las condiciones de un ensayo de simulacin mediante
fangos activados los APEO siguen un mecanismo de -oxidacin de la cadena etoxilada y
otro de divisin central. Como resultado de estas rutas se forma alquilfenol, alquilfenoles
mono y di-etoxilados (compuestos persistentes) y polietilenglicol mono y di-carboxilado
respectivamente (Franska, 2003).
La oxidacin de la cadena hidrofbica ya haba sido puesta de manifiesto en los
trabajos desarrollados por Osburn (Osburn, 1966), en los que se encuentran evidencias de
que la cadena hidrocarbonada puede oxidarse apareciendo carboxilada, pese a estos
resultados este no parece ser un mecanismo principal de degradacin de APEO.
Para el nonilfenol polietoxilado (NPEO) se han propuesto dos posibles rutas de
biodegradacin (Figura II. 17). En la ruta hidroltica oxidativa (A) los principales
metabolitos son los cidos alquilfenoxi acticos seguidos de los metabolitos doblemente
oxidados (Jonkers, 2004). De la ruta hidroltica no oxidativa (B) resultan cadenas cortas de
NPEO: NP1EO (Nonilfenol monoetoxilado), NP2EO (Nonilfenol dietoxilado) y NP
(Nonilfenol). Esta es la ruta principal que aparece en agua de mar y sedimentos.
93
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Los NPEO y sus oligmeros cidos carboxlicos son relativamente hidroflicos,

tienen una escasa tendencia a adsorberse en las partculas durante los procesos de
tratamiento, y por lo tanto pueden permanecer predominantemente en solucin antes de ser
degradados. El NP y los nonilfenoles mono o di-etoxilados son ms hidrofbicos (Ahel,
1987) por tanto tienen una enorme tendencia a la adsorcin encontrndose en grandes
cantidades en los lodos de las EDARs.
Las rutas metablicas conducen a la formacin de biointermediatos que resultan ser
persistentes (Ahel, 2000) y ms txicos que el compuesto de partida (Fujita, 2000).
NPnEO (n=1-20)
C9H19
H(OCH2CH2)nO
NPnEC
C9H19
(B)
(A)
C9H19
H(OCH2CH2)2O
NP2EO
C-CH2-O-(OCH2CH2)n-1O
HO
O
C9H19
C8H16COOH
CNPnEC
H(OCH2CH2)O
C-CH2-O-(OCH2CH2)n-1O
NP1EO
HO
C9H19
HO
NP
Figura II. 17.- Rutas de biodegradacin del nonilfenol polietoxilado: (A) ruta hidroltica
oxidativa y (B) ruta hidroltica no oxidativa
94
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Para la determinacin analtica de los APG se describen diversos mtodos en la

literatura tales como determinaciones colorimtricas o cromatografa de capa fina, sin
embargo dada la baja sensibilidad de estos mtodos, para la deteccin de APG a bajas
concentraciones, tal como ocurre en muestras ambientales, se requieren mtodos ms
sofisticados como cromatografa gaseosa o lquida y espectrometra de masas. Eichhorn
(Eichhorn, 1999) aplic estos mtodos de anlisis en ensayos de biodegradabilidad para la
deteccin de los metabolitos de biodegradacin.
El mecanismo de biodegradacin propuesto es el que aparece en la Figura II. 18. En
la ruta I el primer paso es una -oxidacin de la cadena alqulica seguida de una oxidacin. En la ruta II se produce una ruptura del enlace glucosdico conduciendo a la
aparicin de glucosa y alcohol graso, la glucosa es metabolizada rpidamente va piruvato,
mientras que el alcohol graso es oxidado al correspondiente cido, que se ver sometido al
mecanismo clsico de degradacin de los cidos grasos.
95
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Alquilpoliglucsido
CH2OH
O
O
OH
CH3
OH
Ruta I
Ruta II
OH
-oxidacin
cadena alqulica
Ruptura enlace glucsido
CH2OH
O
COOH
CH2OH
OH
OH
OH
OH
OH
HO
CH3
OH
-oxidacin
OH
oxidacin
O
CH2OH
HO
O
O
OH
CH3
COOH
n-1
-oxidacin
OH
OH
O
Piruvato
HO
CH3
n-1
Figura II. 18.- Rutas de biodegradacin de los alquilpoliglucsidos
2.4.4.4. Lineal alquilbenceno sulfonatos
Es un hecho demostrado que la ruta de biodegradacin del LAS conlleva una serie
de etapas en las que la prdida de actividad superficial en la secuencia bioqumica se
corresponde con la prdida de respuesta al mtodo del azul de metileno para la
determinacin de tensioactivos aninicos (Swisher, 1963).
La labor de Swisher junto con las aportaciones de otros autores (Hammerton, 1956;
Huddleston, 1963; Divo, 1980) han dado como resultado la posible ruta metablica a
96
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
travs de la cual los microorganismos aerobios degradan y mineralizan los LAS. Esta ruta
aparece recogida en la Figura II. 19.
COOH
- oxidacin
SO3-
COOH
- oxidacin
SO3-
SO3hidroxilacin
ms oxidaciones
(ej. - oxidaciones)
O
CH3 C SCoA, etc.
asimilacin
biomasa
mineralizacin
COOH
O
C
COOH
desulfonacin
COOH
O
C
COOH
SO3-
apertura
del anillo
COOH
OH
SO3-
CO2 + H2O
Figura II. 19.- Esquema de la ruta de biodegradacin aerobia del LAS
En trminos generales, se puede decir que el proceso es similar en el medio natural

y en las plantas de tratamiento de aguas residuales, siendo posible distinguir los cuatro
pasos fundamentales siguientes:
Conversin oxidativa de uno de los dos grupos metilos de la cadena alqulica
en grupo carboxlico (-oxidacin). (Hammerton, 1956; Huddleston, 1963)

Acortamiento oxidativo de la cadena alqulica en dos unidades de tomos de
carbono (-oxidacin).
Escisin oxidativa del anillo.
Ruptura del enlace carbono-azufre (C-S) con liberacin del grupo sulfonato.
La y -oxidacin son las formas oxidativas predominantes en la biodegradacin

de la cadena, se identificaron diversos intermediatos como consecuencia de una
combinacin de estas oxidaciones, aunque no es la nica ruta. Posteriormente se detectaron
otras cinco vas de reaccin diferentes a la propuesta anterior, las cuales se esquematizan a
continuacin:
-oxidacin con subsiguiente -oxidacin de la cadena aliftica, pero no
desulfonacin ni degradacin posterior.

97
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
-oxidacin con subsiguiente -oxidacin y simultnea desulfonacin y
escisin del anillo.

Anloga al caso anterior pero acompaada por la reduccin que supone la
desulfonacin. As, en este caso, el fenilacetato es producido a partir del phidroxipentilalcanoato.

-oxidacin seguida de -oxidacin y posterior desulfonacin del anillo sin
ataque a ste.
Si la cadena alqulica tiene un bajo nmero de tomos de carbono (< 4), la
degradacin comienza por el anillo bencnico por cualquiera de las rutas

metablicas citadas o, en algunos casos, por desulfonacin reductiva del
anillo.
2.4.5. RELACIN ENTRE ESTRUCTURA Y BIODEGRADABILIDAD
En el caso de los tensioactivos y otras molculas orgnicas como los pesticidas, es

ampliamente conocido el hecho de que una ligera modificacin en la estructura de la
molcula condiciona la susceptibilidad a la destruccin de sta en el medio ambiente
(Alexander, 1994).
Es evidente que compuestos de corta vida son destruidos microbiolgicamente,
pequeas alteraciones en la estructura qumica, tales como la sustitucin de un tomo,
pueden alterar la adecuacin de las molculas como sustratos para el crecimiento o
metabolismo de los microorganismos reinantes en el medio.
Debido a la enorme importancia econmica de los tensioactivos y a su contribucin
al deterioro ambiental si stos persisten en el medio ambiente, se han desarrollado
numerosos estudios encaminados a establecer las caractersticas estructurales que
gobiernan la susceptibilidad de estas molculas para ser degradadas.
La biodegradacin de alcoholes grasos etoxilados ha sido estudiada ampliamente

por numerosos investigadores, aunque se ha prestado escasa atencin a la determinacin y
cuantificacin de los posibles biointermediatos, debido a la gran complejidad de la
98
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
composicin de los compuestos de partida. La biodegradacin primaria y final ha sido

determinada en la mayora de los casos utilizando mtodos de medida no especficos tales
como: eliminacin de carbono orgnico disuelto, demanda bioqumica de oxgeno,
consumo de oxgeno o produccin de CO2. Slo en algunos casos se han empleado
tcnicas especficas como resonancia magntica nuclear y espectrometra de masas para
identificar metabolitos (Marcomini, 2000).
El factor que afecta de forma ms importante a la biodegradabilidad de alcoholes
grasos etoxilados es la estructura hidrfoba y en particular la linealidad del esqueleto
carbonado, que tiene una influencia mayor que otros factores tales como la longitud de la
cadena alqulica, el tipo de enlace a la cadena etoxilada y su longitud.
Los alcoholes grasos etoxilados lineales se caracterizan como fcilmente
biodegradables. La biodegradacin primaria, detectada mediante mtodos analticos
especficos, es usualmente rpida y completa. La biodegradacin final medida como
consumo de oxgeno, o mediante otro procedimiento adecuado, suele ser bastante extensa
(Swisher, 1987).
El efecto de la ramificacin de la cadena alqulica sobre la biodegradacin se ha
demostrado claramente por la comparacin de un AGE lineal C12-C15 que contiene 9 OE
con un alcohol altamente ramificado C13 que contiene 7 OE. El alcohol graso etoxilado
lineal alcanz valores superiores al 80% de la biodegradacin en 28 das, en cambio, el
alcohol graso etoxilado ramificado alcanz nicamente un 40% de biodegradacin
(Kravetz, 1991). Adems la facilidad de biodegradacin de alcoholes grasos etoxilados
ramificados aumenta con el numero de unidades etoxi en la molcula (Siegfried, 1993).
Los alcoholes grasos etoxilados lineales se eliminan principalmente mediante el
mecanismo de escisin central de la molcula de tensioactivo (Swisher, 1987).
Posteriormente se ha confirmado este mecanismo debido a la biodegradacin preferente de
alcoholes grasos etoxilados con cadenas cortas etoxiladas que no podra ser observado en
el caso de ,-oxidacin de la cadena alqulica (Marcomini, 2000).
Bajo condiciones anaerobias, la biodegradacin de los alcoholes grasos etoxilados
presenta comportamientos diferenciados en funcin del tamao de cadena carbonada y del
numero de unidades etoxi (Mezzanotte, 2002). El mecanismo principal de eliminacin de
tensioactivos con un numero de unidades etoxi de 2 es la adsorcin en lodo, mientras que
para los AGE ms solubles (OE = 7) la biodegradacin desempea un papel principal.
99
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
2.4.5.2. Nonilfenoles Polietoxilados
Para
los
tensioactivos
nonilfenol
polietoxilados
se
pueden
diferenciar
estructuralmente tres elementos: la cadena alqulica, el grupo aromtico y la cadena

polietoxilada, a continuacin se describe de qu manera influye cada uno de estos
elementos en la biodegradacin de los NPEO:
1. La cadena alqulica: Segn Kravetz, (Kravetz, 1991), la biodegradabilidad de
los APEOS viene determinada principalmente por la cadena alqulica,

obtenindose porcentajes de biodegradacin menores en el caso de presencia de
cadena alqulica ramificada. Igualmente Kravetz y col. (Kravetz, 1991),
realizaron estudios acerca de la influencia de la estructura del grupo hidrfobo y
su longitud en la biodegradacin de los APEOs obteniendo las siguientes
conclusiones:
Los APEOS lineales son ms biodegradables que los ramificados.
Cuanto mayor es el grado de ramificacin de la cadena alqulica, mas

lentamente ocurre el proceso degradativo.
Al incrementarse el grado de ramificacin, menor es la extensin de la

biodegradacin.
A elevadas concentraciones de tensioactivo o baja temperatura, la

extensin de la biodegradacin de los APEOS ramificados disminuye
considerablemente con respecto a las condiciones normales de
operacin.
2. El grupo aromtico: La presencia de un grupo aromtico tambin afecta
negativamente a la biodegradacin (Sivak, 1982). La posicin de la cadena

alqulica en el anillo bencnico influye en la velocidad de degradacin de
manera que el acoplamiento del grupo aromtico al carbono primario de la
cadena alqulica da lugar a velocidades de biodegradacin mayores (Little,
1977). Por otro lado, segn estudios de Patozca, (Patozca, 1990), realizados en
plantas de lodos activos a escala de laboratorio, la biodegradacin de los
APEOS es de menor extensin y velocidad en el producto con base aromtica.
100
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
3. La cadena polietoxilada: La velocidad de degradacin de los APEOS est
influenciada por el nmero de unidades etoxiladas. As, un incremento en el

nmero de unidades etoxiladas provoca una disminucin de la velocidad de
degradacin (Little, 1977; Sivak, 1982). La longitud de cadena necesaria para
que tenga lugar la inhibicin depende de la relacin cadena etoxilada/cadena
alqulica, es decir, de su balance hidrfilo/lipfilo (Dobarganes, 1975).
Debido al hecho de que los alquilpoliglucsidos son tensioactivos relativamente

nuevos, hay pocos estudios en relacin a sus propiedades ecotoxicolgicas. Garca y col.
(Garca, 1997) estudi la biodegradabilidad aerobia de APG comerciales con distinto grado
de polimerizacin y cadena alqulica. Los ensayos de biodegradabilidad utilizados fueron
el ensayo en reactor cerrado, el ensayo esttico modificado y un ensayo de simulacin en
plantas de tratamiento de aguas residuales. En el ensayo en reactor cerrado los APG
ensayados alcanzaron un grado de mineralizacin del 80%, en el ensayo esttico
modificado, a pesar de las condiciones tan estrictas de trabajo (baja concentracin de
inculo), el porcentaje de eliminacin alcanzado fue del 100%. Se concluye por tanto que
los APG son fcilmente biodegradables. Adems los APG de mayor cadena se degradan
ms rpidamente (Eichhorn, 1999).
Por otra parte, estudios de biodegradacin aerobia en ensayos de simulacin de
plantas de tratamiento de aguas residuales permiten asegurar una elevada biodegradacin
primaria y una extensa biodegradacin ltima bajo condiciones reales de plantas de
tratamiento de aguas residuales (Steber, 1995).
2.4.5.4. Lineal alquilbenceno sulfonatos
La biodegradacin primaria de los diferentes homlogos del LAS (normalmente

entre C10 y C13, pero incluso entre C6 a C16), en general aumenta a medida que lo hace la
longitud de la cadena alqulica (Swisher, 1987). De la misma forma, para los distintos
ismeros, a medida que aumenta la distancia entre el grupo sulfofenil y el extremo metilo
101
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
terminal de la cadena, la degradacin es ms rpida. Este efecto es conocido como el

principio distancia (Swisher, 1963).
Sin embargo, hay excepciones a estas reglas generales, y parece ser que los factores
determinantes de las velocidades relativas de degradacin son complejos e interactivos
(Perales, 2001). Entre ellos estn:
La concentracin de los ismeros y homlogos del LAS
Los posibles efectos inhibitorios del LAS
La presencia de otros homlogos e ismeros
La concentracin de slidos en suspensin
El grado de aclimatacin del inculo
En la biodegradacin de los tensioactivos aninicos tambin hay que tener en

cuenta un factor importante que es la ramificacin de la cadena alqulica. Hammerton
(1955; 1956), sugiri despus de diversos estudios con los alquilbenceno y alquil-sulfatos,
que el factor ms importante no slo en la velocidad, sino tambin en la extensin de la
biodegradacin, era la linealidad del grupo hidrfobo, y que la naturaleza qumica, adems
del modo de ataque a este grupo, eran slo factores de menor importancia, llegando a la
conclusin de que los tensioactivos lineales como el LAS eran fcilmente degradables
mientras que los ramificados no.
De modo general, para tensioactivos aninicos, en cuanto a la relacin entre
estructura qumica y biodegradabilidad, es posible indicar las siguientes conclusiones:
La naturaleza del grupo hidrfilo no tiene excesiva importancia en la
biodegradacin. En igualdad de condiciones, los ms biodegradables son los

que poseen grupo carboxlico, seguidos de los del grupo sulfato y por ltimo
los del grupo sulfonato.
Cuanto mayor sea la distancia entre el grupo sulfonato (si se trata de este
grupo) y el extremo final de la cadena, mayor es la biodegradabilidad

(principio distancia).
El principal factor que determina la biodegradabilidad es la estructura del
grupo hidrfobo. La biodegradabilidad est favorecida por un aumento de la

102
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
linealidad del grupo hidrfobo, y deteriorada por su ramificacin. Sin

embargo, si la ramificacin de la cadena est prxima al grupo hidrfilo, el
tensioactivo es degradado a pesar de ser ramificado. Esto es debido a que las
bacterias atacan al tensioactivo empezando por el extremo opuesto al grupo
hidrfilo. La destruccin de la cadena se paraliza cuando se llega a un
carbono terciario.
2.5. TOXICIDAD
2.5.1. INTRODUCCIN
Bajo este epgrafe el trmino toxicidad se limita estrictamente a los efectos txicos
causados por los tensioactivos en el medio acutico, es decir, hablamos de toxicidad
acutica. Quedan por tanto al margen los posibles efectos adversos que se puedan provocar
en otras reas, como son la irritacin de la piel y la ingestin accidental.
Cabe destacar que existe una gran diferencia en la realizacin de los ensayos de
toxicidad en cuanto se refiere a llevarlos a cabo a un nivel de laboratorio o en el medio
acutico real. En el primer caso, se establecen unas condiciones patrn, mientras que en el
segundo caso (ecotoxicidad), ejercen una gran influencia en los resultados una serie de
variables tales como: temperatura, oxgeno disuelto, pH, slidos en suspensin, etc.
La toxicidad acutica de productos tensioactivos se estudia bsicamente a travs de
dos tipos de ensayo bien diferenciados: toxicidad aguda y toxicidad crnica.
Con el ensayo de toxicidad crnica se trata de determinar la concentracin de una
sustancia potencialmente txica, que causa algn efecto adverso durante una larga
exposicin a lo largo de la vida o ciclo biolgico de una determinada especie. En el ensayo
se observa la mortalidad producida, retrasos en el crecimiento, prdida de peso,
deformaciones, efecto sobre la reproduccin, etc. Los ensayos suelen realizarse sobre
peces, daphnias y algas.
La toxicidad aguda trata de determinar la concentracin de un compuesto qumico
que produce un efecto adverso a corto plazo (normalmente entre 24 y 96 horas) en un
grupo de organismos, tras una exposicin de los mismos al compuesto que es
potencialmente txico.
103
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
La evaluacin de la toxicidad se realiza a travs de las correlaciones entre sucesivas

dosis del compuesto txico y el efecto adverso producido. Las medidas comnmente
empleadas son la EC50 y la LC50, definidas como la concentracin del producto que
inactiva o causa la mortalidad, respectivamente, del 50% de los organismos con los que se
ensaya (Snchez-Leal, 1995).
Existe una gran gama de especies utilizadas en estos ensayos de toxicidad: alevines
de peces (trucha y gripis), microcrustceos (Daphnia, Artemia, Gammarus), algas
(Chlorella, Selenastrum) y bacterias (Photobacterium y Spirillum).
La experiencia demuestra que los ensayos de toxicidad con peces son
excesivamente costosos y laboriosos, y que el ensayo frente a algas exige unas
instalaciones muy especficas y un personal de gran especializacin. Por ello, basado en las
ventajas de su rapidez, sencillez y economa, se elige como mtodo de ensayo el mtodo
con bacterias luminiscentes.
Este ensayo est perfectamente descrito en la bibliografa (Bulich, 1979; Rib,
1992); y est ganando gran aceptacin para la determinacin rpida y simple de la
toxicidad de compuestos qumicos en aguas superficiales y residuales, as como en
extractos de matrices slidas. Esto explica el hecho de que juntamente al ensayo de
Daphnias, figure como bioensayo homologado para la caracterizacin de residuos txicos
y peligrosos (BOE, 1989), habindose comercializado en forma de kit bajo diversas marcas
registradas (Microtox, LumiStox, etc.).
La bibliografa existente en torno a la toxicidad medioambiental acutica de
tensioactivos es abundante, aunque resulta difcil unificar criterios por la gran variedad de
especies empleadas y por las diversas condiciones en que se realizan la mayora de los
ensayos. No obstante, en algunos trabajos publicados se recogen, en forma de tablas, datos
de toxicidad de productos tensioactivos y del resto de componentes de una formulacin
detergente.
2.5.2. RELACIN ENTRE ESTRUCTURA Y TOXICIDAD
La toxicidad es muy dependiente de la longitud de la cadena hidrocarbonada y/o

etoxilada, as como de la pureza de los compuestos qumicos ensayados (Wong, 1997). De
104
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
forma general, la toxicidad de los tensioactivos para clulas y animales acuticos aumenta
con la longitud de cadena etoxilada, aunque esta tendencia puede disminuir para longitudes
de cadena de 14 tomos de carbono (Sandbacka, 1999).
Kimerle (Kimerle, 1977), al estudiar la toxicidad para los homlogos del LAS
encontr que la toxicidad aguda se incrementa al aumentar la longitud de la cadena
hidrocarbonada como se aprecia en la Tabla II. 12 donde se muesta la IC50 para los
diversos homlogos del LAS.
Tabla II. 12.- Valores de IC50 (mg/L) de diversos homlogos del LAS frente a Daphnia
magna
HOMLOGO
IC50, mg/L
HOMLOGO
IC50, mg/L
Fenil C10
30-50
Fenil C13
5-10
Fenil C11
20-30
Fenil C14
1-3
Fenil C12
8-20
Siendo IC50 la concentracin que provoca efecto sobre el 50% de la poblacin

ensayada de Daphnia magna.
En general, los tensioactivos aninicos de cadena lineal suelen presentar mayor
toxicidad aguda que los de cadena ramificada, si bien este efecto se ve compensado por
una mayor biodegradabilidad de los primeros (Kimerle, 1977).
Para el caso especfico del LAS, la toxicidad disminuye para los ismeros con el
anillo aromtico ms lejos del extremo de la cadena alqulica, es decir, que los 2-fenilos
son ms txicos que los ismeros centrales (Huddleston, 1963; Vandoni, 1973).
La toxicidad de los tensioactivos no inicos del tipo polietoxilados, se ve
incrementada al disminuir la longitud de la cadena etoxilada (Swisher, 1963; Ahel, 1985).
Comparando la toxicidad de los alcoholes grasos etoxilados con la de los
alquilfenoles etoxilados, estos ltimos resultan menos txicos (Garca, 1994), si bien sus
productos resultantes de la degradacin (nonilfenol sin etoxilar o con bajo grado de
etoxilacin) parece que son un tanto recalcitrantes, por cuanto su biodegradacin es ms
lenta que la de los correspondientes homlogos de alcoholes grasos sin etoxilar con 1 2
unidades de xido de etileno.
105
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
La Tabla II. 13 muestra, para una serie de alcoholes grasos etoxilados y de

nonilfenoles polietoxilados, los valores de toxicidad frente a bacterias luminiscentes y
frente a la Daphnia magna (Ribosa, 1993).
Tabla II. 13.- Datos comparativos de toxicidad frente a bacterias luminiscentes
(EC50) y frente a Daphnia magna (IC50) para alcoholes grasos y nonilfenoles polietoxilados
UNIDADES DE OE
ALCOHOL GRASO C12-C14
NPEO
EC50 (mg/L)
IC50 (mg/L)
EC50 (mg/L)
IC50 (mg/L)
0.1
1.3
2.5
0.6
2.1
100
7.6
1.6
3.0
150
14.0
10
3.5
4.6
325
19.1
En trminos generales se puede decir que hay una serie de criterios comunes
aplicables a cualquier tipo de tensioactivo (Snchez-Leal, 1995):
1. La toxicidad que presentan los tensioactivos en aguas limpias resulta ser mayor
que en aguas contaminadas, debido a la adsorcin de los tensioactivos sobre la materia
orgnica en suspensin de ests ltimas, con lo que se reduce la cantidad de tensioactivo en
disolucin.
2. Los metabolitos generados en el proceso de la biodegradacin resultan menos
txicos que los productos de partida, con algunas excepciones, como el caso de los
alquilfenoles etoxilados.
3. Existe una relacin entre la biodegradacin y la toxicidad, por cuanto los
productos ms txicos resultan ser los ms fcilmente biodegradables.
4. La toxicidad de los tensioactivos se debe, fundamentalmente, a la

desestructuracin que producen en las membranas celulares, lo que provoca un shock
osmtico y unas alteraciones de la permeabilidad de las clulas; por ello se explica que la
mayora de los tensioactivos resulten ms txicos para especies de mayor organizacin
biolgica como peces que para las Daphnias.
106
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
2.6. LEGISLACIN SOBRE TENSIOACTIVOS
Del primer tensioactivo que se fabric en Alemania durante la 1 Guerra Mundial y

comercializado con el nombre de NEKAL (un isopropil naftalen sulfonato sdico), se pas
posteriormente, durante la dcada de los cincuenta a los alquilbenceno sulfonatos
ramificados (ABS), tensioactivos que alcanzaron un extraordinario desarrollo debido a su
menor coste de produccin y sus mejores propiedades detersivas, y entre ellos el TBS.
Paralelamente se produjo un aumento de la concentracin de tensioactivos en las aguas,
aumento que se deba a la compleja estructura molecular ramificada de estos compuestos
que los haca difcilmente biodegradables.
Ms tarde, en los inicios de los sesenta, las concentraciones de tensioactivos eran
tan altas que la espuma que ocasionaban era demasiado visible y la vida acutica empez a
verse seriamente afectada (Willing, 2000), as que los TBS fueron sustituidos por los LAS
ya que eran tensioactivos con similares o mejores propiedades y ambientalmente ms
lbiles.
El cambio de materia prima en la formulacin de los detergentes di resultados
bastante sorprendentes. Se encontr que el fenmeno de la detergencia, empleando LAS,
era mejor que cuando se usaba TBS. Por otra parte, las consecuencias ambientales fueron
claras: el ro Necker, primer ro alemn donde se observ la espumacin, pas de presentar
concentraciones a principios de los aos 60 de hasta 0.7 mg/L de tensioactivos aninicos, a
reducirse por debajo de la mitad (Swisher, 1987). Aunque esto no signific el fin de la
espuma en los lugares citados, puesto que sta adems de ser producida por los
detergentes, puede deberse a otras causas, s se produjo un descenso apreciable en las
espumas.
Es necesario resaltar, no obstante, que fue la primera vez que se produca un
cambio importante en la formulacin de un producto qumico para contribuir a la mejora
de la calidad de las aguas.
Ante esta situacin, los gobiernos de diferentes pases comenzaron a establecer
legislaciones al objeto de limitar el empleo de agentes tensioactivos duros. Paralelamente y
de motu propio, por un lado mediante Gentelman Agreements, como en el Reino Unido,
y por otro para evitar legislaciones ms duras, la Asociacin Americana de Productos
107
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Tensioactivos, en la que estaban representadas las grandes industrias del sector, realizaron
grandes esfuerzos tanto econmicos como de investigacin en el desarrollo de
tensioactivos que fuesen ms biodegradables, adems, a los diferentes componentes que
integran la formulacin de un detergente se les oblig a pasar una serie de controles para
asegurarse de que fuesen ecolgicamente aceptables.
La sustitucin de tensioactivos duros del tipo TBS por tensioactivos blandos se
facilit por el uso de ensayos de biodegradacin en laboratorio para asegurar que los
nuevos tensioactivos eran ms degradables que los anteriores. Importantsimo fue el papel
de la OCDE (OECD, 1976) en estandarizar estos mtodos.
2.6.1. LEGISLACIN EN EL MBITO EUROPEO
La primera legislacin, que fue establecida en Alemania en el ao 1961 para evitar

los problemas anteriores, exiga que la biodegradabilidad de los tensioactivos aninicos
fuese del 80%. En 1973, la Comunidad Econmica Europea public dos directivas
(73/404/CEE) y (73/405/CEE) relativas a la biodegradabilidad de tensioactivos utilizados
en las formulaciones detergentes (CEE, 1973, a, b).
La Directiva 73/404/CEE, tambin llamada Directiva marco afirma en su
Artculo 2: que los Estados miembros prohibirn la comercializacin y el empleo de los
detergentes cuando la biodegradabilidad media de los tensioactivos que contengan sea
inferior al 90 %, en cada una de las categoras siguientes: aninicos, catinicos, no inicos
y anflitos. El empleo de tensioactivos cuyo ndice medio de biodegradabilidad sea, por lo
menos, igual al 90 % no deber perjudicar, en condiciones normales de uso, la salud del
hombre o de los animales.
Hay dos puntos de particular inters en este artculo:
1.
No es una Directiva general para la biodegradacin de tensioactivos y

slo es aplicable a tensioactivos utilizados en formulaciones detergentes.
2.
La biodegradabilidad de tensioactivos individuales no est regulada, pero

s la biodegradabilidad de los tensioactivos de las clases especificadas
(aninicos, no inicos, etc...).
108
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Esta Directiva se puso al da en la Directiva del Consejo 82/242/CEE (CEE,

1982b) en la que se fija un nivel mnimo de degradacin del 80% para tensioactivos no
inicos. Tambin introduce una excepcin en su Artculo 5 con vistas a la utilizacin
temporal de determinados tensioactivos. La ltima modificacin a esta directiva la

constituye la Directiva del Consejo 86/94/CEE (CEE, 1986).
La Directiva 73/405/CEE, examina los procedimientos por los que la
biodegradabilidad de tensioactivos aninicos contenidos en los detergentes puede ser
determinada. Estos procedimientos se dividen en dos partes: la primera se refiere a la
extraccin de los detergentes aninicos de las formulaciones detergentes, y la segunda, se
refiere al procedimiento de medida de la biodegradabilidad que se basa en el mtodo de
anlisis de MBAS. Resulta claro en esta directiva que las regulaciones y el control se
ejercen sobre el producto detergente y no sobre los componentes individuales del mismo,
adems el mtodo analtico evala MBAS totales en el producto sin discriminar entre los
tensioactivos individuales. Es por tanto la directiva marco la que especifica ampliamente
las clases de tensioactivos para su control y regularizacin.
En la prctica sin embargo, el control sobre el detergente lo ejerce el propio
fabricante que realiza los ensayos oportunos en los tensioactivos individuales que utiliza en
sus formulaciones.
Esta Directiva se puso al da en la Directiva del Consejo 82/243/CEE (CEE,
1982a), que contiene una serie de puntos adicionales:
1.
En su Artculo 2 afirma que los Estados miembros prohibirn la

comercializacin
el
empleo
de
los
detergentes
cuando
la
biodegradabilidad media de los tensioactivos aninicos sea inferior al

80 %. Este nivel del 80% est en contradiccin con la directiva marco
que especificaba al menos un 90% de degradacin. La razn que se

afirma para esta contradiccin en la Directiva 82/242/CEE es que deben
fijarse los mrgenes de tolerancia adecuados en la determinacin del
ndice de biodegradabilidad con el fin de evitar que las inexactitudes de
los mtodos de control pudieran conducir a decisiones de rechazo que
tendran consecuencias econmicas importantes.
2.
El Artculo 2 continua especificando los mtodos para determinar la

biodegradabilidad
de
tensioactivos
aninicos
contenidos
en
un
109
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
detergente, tales como el mtodo de la OCDE (OCDE, 1976), el mtodo

alemn, el mtodo francs y el mtodo del Reino Unido.
Por otra parte, en el mbito de la Unin Europea la poltica de prevencin y control
de los productos qumicos est coordinada por las Directivas y Reglamentos que regulan
las sustancias y preparados qumicos peligrosos. Los cuatro instrumentos jurdicos bsicos
y de carcter horizontal que regulan los productos qumicos en la Unin Europea son:
Directiva 67/548/CEE del Consejo sobre aproximacin de las disposiciones
legales, reglamentarias y administrativas de los Estados Miembros relativas a la

clasificacin, envasado y etiquetado de las sustancias peligrosas. (Real Decreto 363/1995,
de 10 de marzo).
Directiva 1999/45/CEE del Consejo, sobre la aproximacin de las disposiciones
legales, reglamentarias y administrativas de los Estados Miembros relativas a la

clasificacin, envasado y etiquetado de preparados peligrosos. (Real Decreto 255/2003, de
28 de Febrero).
Reglamento CEE n 793/93 del Consejo, sobre evaluacin y control del riesgo de
sustancias existentes.
Directiva 76/769/CEE relativa a la aproximacin de las disposiciones legales,
reglamentarias y administrativas de los Estados Miembros que limitan la comercializacin

y el uso de determinadas sustancias y preparados peligrosos. (Real Decreto 1406/1989, de
10 de noviembre).
Toda esta normativa regula las sustancias y preparados qumicos peligrosos y se
basa en los siguientes principios: unificacin de los criterios de clasificacin, envasado y
etiquetado de las sustancias y preparados qumicos peligrosos, proteccin de la salud y
seguridad de la poblacin consumidor y usuario profesional, evaluacin del riesgo de las
sustancias y preparados en todo su ciclo de vida, sistema armonizado de informacin al
ciudadano mediante el etiquetado y las fichas de datos de seguridad, procedimiento comn
y normalizado de intercambio de informacin, y limitacin o prohibicin de sustancias y
preparados en el mercado europeo.
Existe legislacin en este mbito desde 1967, fecha en que se reconoci que las
disposiciones sobre clasificacin, envasado y etiquetado de sustancias en el mercado,
especialmente de los productos qumicos industriales peligrosos, deba armonizarse en la
Comunidad para eliminar las barreras comerciales que podan suponer las disposiciones
110
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
nacionales de los Estados Miembros. Desde entonces se han adoptado una serie de
instrumentos legislativos comunitarios para alcanzar y mantener un alto nivel de
proteccin de la salud humana y del medio ambiente en el contexto del mercado interior.
El requisito de proteccin del medio ambiente se introdujo en la legislacin en
1979. Al mismo tiempo, para garantizar un control de los productos qumicos
comercializados, se decidi establecer un sistema de notificacin para las "nuevas"
sustancias a partir de 1981.
Desde su adopcin en 1967, la Directiva 67/548/CEE ha sido modificada ocho
veces y adaptada al progreso tcnico en veintiocho ocasiones. Por su parte, la Directiva
76/769/CEE, hasta la fecha, ha sido modificada en 26 ocasiones.
Mediante la propuesta de Reglamento COM (2002) 485 relativo a detergentes:
Biodegradabilidad y etiquetado de detergentes, el Parlamento Europeo propone modernizar
la legislacin europea sobre los tensioactivos contenidos en los detergentes con el fin de
reforzar la proteccin del medio acutico contra los efectos nocivos de estas sustancias, y
mejorar la informacin proporcionada a los consumidores a un coste razonable para las
empresas. Adems la propuesta tiene por objetivo permitir la libre circulacin de
detergentes en el mercado interior y modernizar las directivas existentes sobre los
detergentes en cuanto a la biodegradabilidad de los tensioactivos y la proteccin del medio
ambiente en este mbito.
Asimismo, la comisin propone que, para los productos regulados por dicha
propuesta de reglamento, sea obligatorio el cumplimiento de las obligaciones enunciadas
en la recomendacin 89/542/CEE relativa al etiquetado de detergentes y productos de
limpieza as como el suministro a los consumidores de informacin especfica sobre
ingredientes perfumantes.
Esta propuesta de la Comisin deroga las directivas 73/404/CEE, 73/405/CEE,
82/242/CEE, 82/243/CEE, 86/94/CEE y la recomendacin 89/452/CEE.
Los nuevos ensayos de determinacin de la biodegradabilidad propuestos
garantizan un nivel de proteccin del medio ambiente ms elevado, y son aplicables a
todos los tipos de tensioactivos de los detergentes. La definicin de detergente que se
propone ampla el mbito de aplicacin de la legislacin actual para abarcar otros usos
similares, adems se introduce la definicin de tensioactivos que no exista en la
legislacin anterior.
111
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
En este reglamento se establecen los mtodos de ensayo y analticos para evaluar la

biodegradabilidad primaria de los tensioactivos: aninicos, no inios, catinicos y
anfotricos. Los principales cambios en relacin con la legislacin existente tienen la
finalidad de abarcar, por primera vez, los tensioactivos catinicos y anfotricos y tambin
los aninicos y no inicos que no reaccionan en los ensayos incluidos en la legislacin
existente anterior a este reglamento. Se exige el uso de anlisis instrumental en el caso de
tensioactivos que no reaccionen a los mtodos semiespecficos, de manera que todos los
tensioactivos estn cubiertos.
La biodegradabilidad primaria se considerar satisfactoria en un nivel mnimo del
80% para el ensayo de referencia propuesto, que se basa en el procedimiento de ensayo de
confirmacin del mtodo de la OCDE (OECD, 1976). Los mtodos de anlisis para
tensioactivos aninicos y no inicos son el mtodo de anlisis de sustancias activas al azul
de metileno (MBAS) y el mtodo de anlisis de sustancias activas al bismuto (BiAS)
respectivamente.
En cuanto a la biodegradabilidad final, el ensayo de referencia es el ensayo de
espacio de cabeza de CO2. Dependiendo de las caractersticas fsicas del tensioactivo, se
podrn utilizar otros mtodos para medir la biodegradabilidad final como el mtodo de
desaparicin del carbono orgnico disuelto (COD) en el que no se utilizar adaptacin
previa ni se aplicar el principio de los 10 das. La biodegradabilidad medida de
conformidad con el ensayo se considerar adecuada si alcanza como mnimo el 70% en un
plazo de 28 das.
2.6.2. LEGISLACIN EN EL MBITO ESTATAL
En Espaa, la Legislacin (BOE, 1985) especifica que la biodegradabilidad de un

producto tensioactivo aninico ha de ser de un 80% del porcentaje de biodegradacin de un
dodecil-benceno sulfonato sdico lineal.
Para los vertidos resultantes de la actividad industrial a los cauces pblicos, el
lmite de concentracin en tensioactivos aninicos est en el margen de 2-6 mg/L,
dependiendo de las caractersticas del entorno (BOE, 1986); en cambio, para los vertidos
industriales a la red de alcantarillado y que, por tanto, han de someterse posteriormente a
un tratamiento en EDARS, se admiten valores lmites de concentracin de tensioactivos
112
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
ms elevados, en el margen 10-30 mg/L, dependiendo de las Administraciones locales, y

en su defecto, de las Comunidades Autnomas (Snchez-Leal, 1995).
La concentracin lmite admisible para el contenido de tensioactivos en aguas
superficiales continentales empleadas en la obtencin de agua potable para el consumo
pblico, est entre 0.2 y 0.5 mg/L, segn el tipo de tratamiento a que se someta (BOE,
1988). Para aguas ya tratadas que se destinan a consumo pblico, la reglamentacin
establece una concentracin lmite de tensioactivos aninicos de 0.2 mg/L (BOE, 1990).
La legislacin espaola sobre etiquetado de sustancias y preparados peligrosos
proviene en su mayor parte de una adopcin de las disposiciones comunitarias. La
referente al etiquetado en transporte, sin embargo, es reflejo de convenios internacionales.
Existen, adems, algunas disposiciones de la Unin Europea que todava no han sido
adoptadas por la normativa espaola.
La elaboracin de la normativa sobre sustancias y preparados qumicos es
competencia del Ministerio de Sanidad y Consumo, en coordinacin con los Ministerios de
Medio Ambiente, Industria y Energa, Trabajo y Asuntos Sociales y Agricultura, Pesca y
Alimentacin.
El Real Decreto 2816/1983, de 13 de octubre, aprob la Reglamentacin tcnicosanitaria para la elaboracin, circulacin y comercio de los detergentes. Teniendo en
cuenta, que los productos en ella regulados han sufrido, en los ltimos aos, importantes
innovaciones, tcnicas y comerciales y, adems, la entrada en vigor del Real Decreto
1078/1993, de 2 de julio, por el que se aprueba el Reglamento sobre clasificacin,
envasado y etiquetado de preparados peligrosos, y la aprobacin del Real Decreto

363/1995, de 10 de marzo, por el que se aprueba el Reglamento sobre notificacin de
sustancias nuevas y clasificacin, envasado y etiquetado de sustancias peligrosas (BOE,

1995), se hizo necesario llevar a cabo una actualizacin de la Reglamentacin tcnicosanitaria.
Se consider oportuno extender el mbito de aplicacin de la Reglamentacin
tcnico-sanitaria hacia otros productos cuya fabricacin, comercializacin y aplicaciones
son similares a los detergentes. Asimismo, se establecieron requisitos especiales de
formulacin y etiquetado para ciertos lavavajillas lquidos con el fin de mejorar su
seguridad. Finalmente mediante el Real Decreto 770/1999, de 7 de mayo, se aprueba la
113
TESIS DOCTORAL
INTRODUCCIN
Reglamentacin tcnico-sanitaria para la elaboracin, circulacin y comercio de

detergentes y limpiadores (BOE, 1999).
2.6.3. LEGISLACIN EN EL MBITO DE LA COMUNIDAD AUTNOMA

ANDALUZA
En la Comunidad Autnoma Andaluza el Decreto 14/1996, de 16 de Enero, aprob

el reglamento de calidad de las aguas litorales (BOJA, 1996). Tras definir el marco
normativo de actuacin para preservar y mejorar la calidad de las aguas litorales en la Ley
de Proteccin Ambiental de la comunidad andaluza, se establecen los lmites de vertido y
los mtodos de anlisis correspondientes. En el Anexo I del Reglamento se establece que
no podrn autorizarse vertidos al dominio pblico martimo-terrestre cuya carga
contaminante en detergentes supere los lmites siguientes: 5 mg/L (media mensual); 20
mg/L (media diaria) y 50 mg/L (valor puntual). Como mtodo de anlisis para dertergentes
se especifica la espectrofotometra de absorcin molecular con un lmite de deteccin de
0.001 mg/L. Se trata por tanto de una legislacin general que no distingue entre los
distintos tipos de tensioactivos y que nicamente contempla un mtodo de anlisis de
biodegradabilidad primaria y no final.
En 1997 se publica la Orden de la Consejera de Medio Ambiente de 14 de Febrero
de 1997, por la que se clasifican las aguas litorales andaluzas y se establecen los objetivos
de calidad de las aguas afectadas directamente por los vertidos (BOJA, 1997). Con arreglo
a las exigencias y limitaciones de vertidos establecidas en las normas comunitarias y en el
ordenamiento espaol, se fijan para los detergentes los siguientes lmites de vertido en
funcin de la clasificacin de las aguas: 100 g/L (aguas especiales); 300 g/L (aguas
limitadas); 200 g/L (aguas normales); 200 g/L (aguas menos limitadas).
114
3. MATERIALES Y MTODOS
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
En el presente captulo se describen los principales materiales y mtodos empleados

en este trabajo. En el apartado 3.1 se indican los tensioactivos utilizados, as como sus
propiedades y caractersticas. En el apartado 3.2. se describen los diferentes diseos
experimentales, que se estructuran a su vez en: ensayos de biodegradacin, toxicidad de
tensioactivos, y toxicidad durante el proceso de biodegradacin. Los mtodos de ensayo de
la biodegradabilidad: ensayo esttico o de seleccin y ensayo dinmico o de confirmacin
se recogen en el apartado 3.3. En el apartado 3.4. se muestran los mtodos empleados para
el anlisis de tensioactivos y para el recuento de la biomasa, los parmetros de control y la
determinacin de los parmetros de calidad de un mtodo analtico. En el apartado 3.5.
aparece reflejado el estudio de la toxicidad y en el apartado 3.6. se establece el protocolo
de limpieza empleado.
3.1. TENSIOACTIVOS UTILIZADOS
Los tensioactivos no inicos empleados en este estudio son los alcoholes grasos
etoxilados (AGE); Findet 10/15, Findet 10/18, Findet 1618A/18, Findet 1618A/23, Findet
1214N/16 y Findet 1214N/23, suministrados por Kao Corporation, S. A., Nonilfenol
polietoxilado (NPEO) suministrado por Kao Corporation, S. A., los alquilpoliglucsidos
(APG) Glucopon 215 CS UP, Glucopon 600 CS UP y Glucopon 650 EC, de Henkel,
adems del Berol LFG61 (mezcla de alcholes grasos etoxilados y alquilpoliglucsidos),
proveniente de Akzo Nobel y el cido graso etoxilado Findet AR/52 suministrados por Kao
Corporation, S. A.
Como tensioactivo aninico, se ensay el alquilbenceno sulfonato lineal (LAS, C1114),
de frmula general CH3(CH4)CH4(C6H4)SO3-, suministrado por Kao Corporation, S.A.

Las principales caractersticas de estos tensioactivos se resumen en la Tabla III. 1,
donde PM corresponde al peso molecular del producto, C al carbono, O al oxgeno, H al

hidrgeno, NC al tamao de la cadena carbonada, DP al grado de polimerizacin, OE al
nmero de unidades de xido de etileno, HLB al balance hidrfilo-lipfilo, CMC a la
concentracin micelar crtica y CP al punto de enturbiamiento. El valor de CMC se obtuvo
de Sabahi (Sabahi, 2004). Los datos del anlisis elemental del tensioactivo, el punto de
117
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
enturbiamiento y los valores de humedad fueron proporcionados por Cuevas (Cuevas,

2001).
Tabla III. 1.- Propiedades de los tensioactivos utilizados
PRODUCTO
PMmedio(3)
ANALISIS ELEMENTAL (%) (2)
ESTRUCTURA QUMICA (1)
(g/mol)
NC
DP
OE
Findet 10/15
272
66.16
14.00
19.84
C10
--
Findet 10/18
387
62.37
12.81
24.82
C10
--
Findet 1618A/18
603
66.82
14.26
18.92
C16 - C18
--
Findet 1618A/23
1386
59.49
11.76
28.75
Findet 1214N/16
370
66.11
13.74
14.00
Findet 1214N/23
630
61.13
12.56
26.31
NPEO (9.5 OE)
--
--
--
--
C16 - C18
C12 (70%) C14
(30%)
C12 (70%) C14
(30%)
--
GCP 215
376
35.61
10.20
54.19
GCP 600
377
32.65
8.81
GCP 650
383
29.09
--
--
Berol LFG61
CP (2)
11
--
--
11
--
--
C8 - C10
1.42
--
58.54
C12 - C14
1.59
--
10.88
59.83
C8 - C14
1.35
--
--
--
--
--
--
CMC (g/L) (3)
HLB (1)
HUMEDAD (2)
PRODUCTO
(C)
30C
40C
60C
Findet 10/15
46-50
--
--
--
9.2
24.0
Findet 10/18
51-53
0.191
0.196
0.169
12.6
0.0
Findet 1618A/18
71-75
--
--
--
10.2
1.0
Findet 1618A/23
78-82
--
--
--
13.2
0.0
Findet 1214N/16
60-65
--
--
--
9.5
2.1
Findet 1214N/23
76.7-77.1
0.025
0.020
0.016
14.3
1.9
NPEO (9.5 OE)
58.6
0.018
0.017
0.026
--
--
GCP 215
GCP 600
---
1.012
0.050
0.974
0.048
0.960
0.051
(%)
12.6
(4)
37.0
12.7
(4)
46.6
(4)
50.4
GCP 650
--
0.153
0.124
0.126
12.8
LAS
--
0.129
0.194
0.718
--
--
0.521
0.797
1.445
--
--
Berol LFG61
(1)
Datos suministrados por los fabricantes de los tensioactivos, (2) Datos obtenidos de Cuevas
(2001), (3) Datos obtenidos de Sabahi (2004), (4) Datos obtenidos de Altmajer (2004).
118
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
3.2. DISEO EXPERIMENTAL
En la fase experimental del presente trabajo se han realizado un total de 34 ensayos

de biodegradacin agrupados en cinco categoras, de acuerdo con los objetivos que se
pretendan alcanzar, y 13 ensayos de toxicidad para todos los tensioactivos utilizados. A
continuacin se describen las condiciones de cada uno de estos ensayos.
3.2.1. ENSAYOS DE BIODEGRADACIN
Con este primer bloque de experimentos se pretendi estudiar la biodegradabilidad

primaria de los AGE, para ello se realizaron 16 ensayos de biodegradacin bajo las
condiciones recogidas en la Tabla III. 2, donde se indica el nmero de experimento, su
identificacin y las caractersticas del ensayo, esto es; mtodo de ensayo empleado,
tensioactivo, concentracin inicial del ensayo, recuento de biomasa y control utilizado en
el ensayo. En la misma Tabla III. 2 se incluye un experimento para medir la
biodegradabilidad final para el AGE Findet 1618A/18. De las misma forma, en la Tabla
III. 3 se recogen los experimentos realizados con el tensioactivo nonilfenol polietoxilado, y
en la Tabla III. 4, Tabla III. 5 y Tabla III. 6 los ensayos realizados para los APG, LAS y
mezclas de AGE y APG respectivamente.
En cuanto a las condiciones de ensayo (temperatura, luminosidad, nutrientes, etc.),
estas son las mismas en todos los experimentos realizados y se recogen en el apartado
correspondiente al mtodo de ensayo de biodegradabilidad empleado (apartado 3.3.).
119
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Tabla III. 2.- Diseo de experimentos para el estudio de la biodegradabilidad de AGE

n
Nombre
MTODO DE
ENSAYO
TENSIOACTIVO
1
2
3
3
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
F1
F2
F3
F4
F5
F6
F7
F8
F9
F10
F11
F12
F13
F14
F15
F16
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
Dinmico
Dinmico
F10/15
F10/18
F1618A/18
F1618A/18
F1618A/18
F1618A/23
F1214N/16
F1214N/16
F1214N/16
F1214N/23
F1214N/23
F1214N/23
F1214N/23
F1214N/23
F1618A/18
F1214N/23
17
F17
Respirometra
manomtrica
F1618A/18
CONC.
(mg/L)
RECUENTO
BIOMASA
CONTROL
5
5
5
25
50
5
5
25
50
5
15
20
25
50
10
10
15
25
50
--Si
Si
-Si
Si
Si
Si
-Si
Si
-Si
------
Aninico
Aninico
Aninico
Aninico
Aninico
Aninico
Aninico
Aninico
Aninico
Aninico
Aninico
Aninico
Aninico
Aninico
------
Tabla III. 3.- Diseo de experimentos para el estudio de la biodegradabilidad del NPEO
120
Nombre
MTODO
DE
ENSAYO
TENSIOACTIVO
CONC.
(mg/L)
RECUENTO
BIOMASA
CONTROL
1
2
3
N1
N2
N3
Esttico
Esttico
Esttico
NPEO
NPEO
NPEO
5
25
50
Si
Si
Si
Aninico
Aninico
Aninico
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Tabla III. 4.- Diseo de experimentos para el estudio de la biodegradabilidad de APG

n
Nombre
MTODO
DE
ENSAYO
TENSIOACTIVO
CONC.
(mg/L)
RECUENTO
BIOMASA
CONTROL
1
2
3
4
5
G1
G2
G3
G4
G5
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
GCP 215
GCP 600
GCP 600
GCP 650
GCP 650
12
12
100
12
20
Si
Si
Si
Si
Si
Aninico
Aninico
Aninico
Aninico
Aninico
Nombre
RM1
RM2
RM3
MTODO
DE ENSAYO
CONC.
(mg/L)
TENSIOACTIVO
Respirometra
manomtrica
15
25
50
75
100
15
25
50
75
100
GCP 215
Respirometra
manomtrica
GCP 600
Respirometra
manomtrica
GCP 650
50
Tabla III. 5.- Diseo de experimentos para el estudio de la biodegradabilidad del LAS
n
Nombre
MTODO
DE
ENSAYO
TENSIOACTIVO
CONC.
(mg/L)
RECUENTO
BIOMASA
CONTROL
1
2
3
4
L1
L2
L3
L4
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
LAS
LAS
LAS
LAS
5
25
50
100
Si
Si
Si
--
Aninico
Aninico
Aninico
Aninico
Tabla III. 6.- Diseo de experimentos para el estudio de la biodegradabilidad de mezclas
de AGE y APG
n
Nombre
MTODO
DE
ENSAYO
TENSIOACTIVOS
CONC.
(mg/L)
RECUENTO
BIOMASA
CONTROL
1
2
M1
M2
Esttico
Esttico
F1214N/23 y GCP 650

F1214N/23 y GCP 650
10+10
15+5
Si
Si
Aninico
Aninico
121
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
3.2.2. TOXICIDAD DE TENSIOACTIVOS
En la Tabla III. 7 se indican los ensayos realizados para el estudio de la toxicidad

de diferentes tensioactivos segn la tcnica experimental indicada en el apartado 3.5. Se
indica el nmero de experimento, su identificacin y el tensioactivo utilizado.
Tabla III. 7.- Ensayos para el estudio de la toxicidad de diferentes tensioactivos

n
Nombre
MTODO
DE
ENSAYO
TENSIOACTIVO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
T1
T2
T3
T4
T5
T6
T7
T8
T9
T10
T11
T12
T13
Toxicidad
Toxicidad
Toxicidad
Toxicidad
Toxicidad
Toxicidad
Toxicidad
Toxicidad
Toxicidad
Toxicidad
Toxicidad
Toxicidad
Toxicidad
F10/15
F10/18
F1618A/18
F1618A/23
F1214N/16
F1214N/23
FAR/52
NPEO
LAS
GCP 215
GCP 600
GCP 650
BEROL
3.2.3. TOXICIDAD DURANTE EL PROCESO DE BIODEGRADACIN
En la Tabla III. 8 se recogen los ensayos realizados para el estudio de la toxicidad

durante el proceso de biodegradacin. Se indica el nmero de experimento, su
identificacin y el tensioactivo utilizado.
122
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Tabla III. 8.- Ensayos para el estudio de la toxicidad durante el proceso de biodegradacin
n
Nombre
NOMBRE
ENSAYO
MTODO
DE
ENSAYO
TENSIOACTIVO
CONC.
(mg/L)
TB1
F5
Esttico
F1618A/18
50
TB2
F6
Esttico
F1618A/23
3
4
TB3
TB4
F7
F8
Esttico
Esttico
F1214N/16
F1214N/16
5
25
5
6
7
8
9
10
11
12
TB5
TB6
TB7
TB8
TB9
TB10
TB11
TB12
F11
F12
F13
F14
N1
N2
N3
G1
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
F1214N/23
F1214N/23
F1214N/23
F1214N/23
NPEO
NPEO
NPEO
GCP 215
15
20
25
50
5
25
50
12
13
TB13
G3
Esttico
GCP 600
100
14
15
16
17
18
TB14
TB15
TB16
TB17
TB18
G5
L2
L3
M1
M2
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
Esttico
GCP 650
LAS
LAS
F1214N/23+GCP 650
F1214N/23+GCP 650
20
25
50
10+10
15+5
3.3. MTODOS DE ENSAYO DE LA BIODEGRADABILIDAD

3.3.1. ENSAYO ESTTICO (ENSAYO DE SELECCIN)
Se utiliza este ensayo para determinar la biodegradabilidad de tensioactivos

aninicos y no inicos. Viene recogido en la NORMA UNE 55-844-91 (UNE 55-844-91);
Determinacin de la biodegradabilidad de agentes tensioactivos no inicos empleados en
la fabricacin de formulaciones detergentes.
El mtodo especificado en esta norma y sus anexos se corresponde totalmente con
el mtodo para tensioactivos aninicos y no inicos que se detalla en el anexo I de la
Orden del Ministerio de Industria y Energa del 5 de Septiembre de 1985 sobre
Actualizacin de la determinacin de la biodegradabilidad de agentes tensioactivos
utilizados en la preparacin de los detergentes, (BOE, 1985).
Por otra parte, ste mtodo es el aprobado por la OCDE, (OEDC, 1976). Las
Directivas 82/242/CEE y 82/243/CEE del Consejo de las Comunidades Europeas,
123
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
reconocen como vlido el citado mtodo de la OCDE para determinar el ndice de

biodegradabilidad de los tensioactivos aninicos y no inicos contenidos en los detergentes
(CEE, 1982a; 1982b).
3.3.1.1. Fundamento del mtodo
Se trata de un ensayo tipo matraz abierto que permite determinar la

biodegradabilidad de tensioactivos. Los tensioactivos que se ensayan deben superar un
porcentaje mnimo requerido para concluir que son biodegradables y que pueden utilizarse
en aplicaciones comerciales. Es un ensayo sencillo y relativamente rpido, puesto que dura
19 das como mximo y adems puede efectuarse simultneamente para diferentes
tensioactivos o para diferentes concentraciones de un mismo tensioactivo.
Consiste en inocular una pequea cantidad de microorganismos aerobios,
procedentes de una poblacin mixta y aireada, en una mezcla formada por la disolucin
nutriente, que es un medio acuoso de composicin qumica definida apto para el desarrollo
microbiano, y la disolucin de ensayo, que contiene los tensioactivos que se deseen
ensayar.
La disolucin de ensayo debe estar libre de productos que puedan interferir en la
determinacin. Ciertos productos qumicos, presentes en los medios acuosos o en el aire
ambiente, pueden reducir, o incluso inhibir, la actividad de los microorganismos causantes
de la biodegradacin de los tensioactivos, retrasando el proceso o influyendo en el
resultado final. Entre estos productos se encuentran lcalis fuertes, metales txicos,
bactericidas y disolventes orgnicos. Incluso los propios tensioactivos pueden inhibir la
actividad de los microorganismos si se encuentran presentes en concentraciones
suficientemente elevadas (Jurado, 2004).
La muestra debe contener inicialmente una concentracin de tensioactivo igual o
superior a 5 mg/L y se coloca en un matraz cnico de 2 L de capacidad. El control de los
microorganismos responsables de la biodegradacin se comprueba mediante ensayos
paralelos al tensioactivo problema, efectuados con tensioactivos aninicos que sirven como
patrones de biodegradacin. El patrn aninico utilizado ha sido el alquilbenceno sulfonato
lineal (LAS, C11-14). Se aplica a los matraces una agitacin continua de tipo orbital a razn
124
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
de 125 carreras/vaivn que facilite la aireacin de su contenido. La temperatura se

mantiene a 25 C durante todo el ensayo.
3.3.1.2. Reactivos y disoluciones
Todos los productos qumicos utilizados en el ensayo son de calidad P.A. calidad
para anlisis o P.R.S. calidad del reactivo pursimo, el agua es destilada o de pureza
equivalente, en cualquier caso exenta de sustancias txicas, especialmente de productos
que contengan cobre.
Disolucin Nutriente
Esta disolucin se prepara aadiendo a 1 L de agua destilada 1 ml de cada una
de las cuatro disoluciones siguientes:

a. Se disuelven en 1000 ml de agua las siguientes cantidades de productos:
8.5 g de dihidrgenofosfato potsico (KH2PO4, P.A.) de Panreac.
21.75 g de monohidrgenofosfato dipotsico (K2HPO4, P.A.) de

Panreac.
33.4
de
monohidrgenofosfato
disdico
dihidratado
(Na2HPO42H2O, P.R.S.) de Panreac.
1.7 g de cloruro amnico (NH4Cl, P.R.S.) de Panreac.
b. Se disuelven en 1000 ml de agua 22.5 g de sulfato magnsico

heptahidratado (MgSO47H2O, P.R.S.) de Panreac.
c. Se disuelven en 1000 ml de agua 27.5 g de cloruro clcico anhidro (CaCl2,
P.A.) de Panreac.
d. Se disuelven en 1000 ml de agua 0.25 g de cloruro de hierro (III)
hexahidratado (FeCl36H2O, P.R.S.) de Panreac.
La disolucin nutriente se prepara inmediatamente antes de su uso en el ensayo
de biodegradacin.
Disolucin de tensioactivo a ensayar

Se prepara una disolucin de tensioactivo no inico de 1g/L (disolucin madre)
disolviendo ste en agua desionizada (calidad Milli-Q con resistividad de 18.2

125
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
M.cm equivalente a la del agua pura). Dependiendo del tensioactivo puede ser
necesario someter la disolucin a un ligero calentamiento. La disolucin de
concentracin de tensioactivo requerida (entre 0-100 mg/L) se obtiene por dilucin de
la disolucin madre en agua desionizada.
Disolucin de tensioactivo aninico (patrn blando)

Partiendo del cido dodecilbenceno sulfnico se obtiene por neutralizacin con
NaOH (calidad P.A. de Panreac) hasta pH 7 una disolucin de alquilbenceno sulfonato

sdico de cadena lineal (LAS). A partir de una disolucin madre de 1g/L de LAS se
obtiene por dilucin en agua desionizada una disolucin hija de 5 mg/L que se
emplear en el ensayo de biodegradacin.
Inculo
Aunque puede considerarse como inculo adecuado cualquier fuente que
proporcione microorganismos aerobios de una poblacin mixta, el inculo debe

proceder preferentemente de un efluente secundario de buena calidad, tomado de una
planta de depuracin de agua con tratamiento biolgico (fangos activos), que opere con
vertidos urbanos en forma predominante. El inculo se tom de la estacin depuradora
de aguas residuales urbanas Los Vados de Granada (EDAR Los Vados).
Es
esencial
al
emplear
el
mtodo
por
primera
vez
comprobar
experimentalmente la actividad del inculo, para ello se realizaron ensayos con el

tensioactivo aninico patrn (LAS) utilizando cantidades variables de inculo. De esta
serie de ensayos previos se dedujo la cantidad y el tipo de inculo necesario para
provocar una biodegradacin del patrn empleado, que debe estar comprendida entre el
90% y 95% dentro de los primeros 14 das del ensayo, aunque normalmente solo se
requieren de 7 a 10 das.
Se ensayaron dos tipos de inculo: uno proveniente de fangos activados y otro
del efluente secundario de la EDAR. Las cantidades ensayadas de ambos inculos
fueron: 5, 15 y 20 ml en 1.2 L de disolucin nutriente, con 5 mg/L de tensioactivo
aninico. Los ensayos mostraron que en los 7 primeros das se haba degradado el
100% del tensioactivo utilizando como inculo agua tratada. Se descartaron los fangos
activados como inculo y cantidades de agua tratada mayores de 5 ml.
126
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
A continuacin se ensayaron diferentes cantidades de inculo proveniente del

efluente secundario (0.5, 1 y 2 ml) sobre LAS. Los resultados revelaron que con 0.5 ml
de inculo a los 5 das se alcanza un 94 % de biodegradacin para el tensioactivo
aninico. Por tanto, en todos los ensayos estticos de biodegradacin la cantidad de
inculo a utilizar es de 0.5 ml por 1200 ml de disolucin nutriente, cumpliendo as los
requisitos de la norma.
3.3.1.3. Equipos
A continuacin se describen los equipos utilizados en el ensayo esttico de

biodegradabilidad.
Agitador orbital
En los ensayos estticos de biodegradacin se utiliz el agitador orbital modelo
Rotabit de SELECTA. Se trata de una mquina agitadora por vaivn con capacidad para
seis matraces cnicos que permite efectuar hasta 220 carreras de vaivn por minuto, con un
recorrido de 5 a 10 cm cada una.
pHstato
Sistema automtico de valoracin Titrino GP 736 de METROHM AG, que consta
de: depsito para el agente valorante, bureta automtica de 10 20 ml, dosificador
automtico acoplado a la bureta y electrodo redox de platino/ClAg. El equipo dispone de
software adecuado para realizar una valoracin potenciomtrica.
Espectrofotmetro
Espectrofotmetro de doble haz UV-Visible de teclado integrado y pantalla de
cristal lquido con una lmpara halgena de tungsteno y otra de deuterio. Opera con
longitudes de onda entre 194 y 1100 nm. Modelo Unican Heios Alpha&Beta de
SPECTRONIC UNICAM.
127
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Evaporador rotativo
Equipo utilizado en la determinacin de tensioactivos por el mtodo de Wickbold
para la concentracin de los mismos, permite la evaporacin de agua en cantidades de 50 a
3000 ml. Modelo ROTAVAPOR R-110 de la casa BCHI.
Centrfuga
Utilizada para eliminar la materia en suspensin de las muestras a analizar. Permite
trabajar en un rango de 0-8000 r.p.m. y hasta 6 muestras. Modelo Centromix de
SELECTA.
Equipo de filtracin a vaco

Compuesto por bomba de vaco GmbH de ILMVAC, matraz kitasatos, adaptador
de vidrio y portafiltros de polipropileno. El mismo equipo se puede utilizar para filtracin
con crisoles de vidrio sinterizado.
3.3.1.4. Preparacin de las muestras
La muestra problema de tensioactivo aninico o no inico y la muestra control del

tensioactivo aninico patrn se preparan de la siguiente forma: en un recipiente de vidrio
de volumen adecuado y perfectamente limpio (apartado 3.6.) se procede a la mezcla de la
disolucin nutriente y el volumen necesario de disolucin de tensioactivo a ensayar para
obtener la concentracin final deseada. A continuacin se aaden 0.5 ml de inculo por
cada 1.2 L de mezcla a ensayar.
Antes de iniciar el ensayo, todo el volumen de muestra se somete a agitacin
durante 1 hora y aireacin durante 15 minutos para homogeneizar el tensioactivo y evitar
su acumulacin en la interfase aire-agua, lo que podra determinar errores iniciales en la
toma de muestra. Adems inicialmente la disolucin de ensayo no debe presentar espuma.
En todos los ensayos se prepara un blanco formado por la disolucin nutriente y el
inculo, en cualquier caso exento de tensioactivo. Tambin se somete a agitacin durante 1
hora y aireacin durante 15 minutos.
128
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
3.3.1.5. Procedimiento y condiciones de operacin
Para ensayar la muestra problema y patrn, se introducen respectivamente 1.2 L de

la disolucin en sendos matraces cnicos de 2 L de capacidad; cada matraz se tapa con
algodn hidrfobo para no impedir la circulacin de aire entre el interior del matraz y la
atmsfera que lo rodea.
Los matraces se colocan en el agitador orbital (SELECTA Rotabit) a 125 carreras
de vaivn por minuto. El continuo vaivn del agitador proporciona la agitacin necesaria
para mantener la disolucin aireada. La capacidad del agitador es de 6 matraces, por lo que
normalmente se coloca uno con la disolucin patrn y 5 con la muestra problema para el
estudio de la biodegradacin. En caso de que se ensayen dos tensioactivos diferentes se
coloca uno con la disolucin patrn y dos para cada tensioactivo.
El sistema de agitacin se dispone en una estancia oscura y termostatizada a 25 C
1 C equipada con resistencias elctricas y refrigeracin adems de control de
temperatura, las paredes se encuentran aisladas con poliuretano. La atmsfera ambiente
debe mantenerse libre de contaminantes y productos txicos, especialmente de disolventes
clorados. La cmara dispone de una lmpara de radiacin ultravioleta que se conecta 1
hora antes del inicio del ensayo para esterlilizar la misma.
En la estancia termostatizada se colocan 2 frascos Winkler perfectamente sellados
con una sonda de oxgeno (CRISON OXI 96) cada uno para hacer el seguimiento de la
biodegradabilidad a partir de medidas de oxgeno disuelto en la muestra problema y el
blanco (apartado 3.4.1.6).
La frecuencia de muestreo vendr determinada por el seguimiento del oxgeno
disuelto que determina la biodegradacin producida. Se toman muestras por duplicado y
antes de proceder a la toma se agitan intensamente los matraces, durante 5 minutos, para
romper la tendencia del tensioactivo a acumularse en la interfase agua-aire. La disolucin
de ensayo, ya libre de espuma, se homogeneiza para su posterior determinacin.
Los volmenes de muestra deben ser lo suficientemente grandes como para
permitir el anlisis de la biodegradacin por el mtodo analtico que corresponda. En
cualquier caso las muestras se depositan en material de vidrio perfectamente limpio o en
frascos de plstico aspticos.
129
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Durante los ensayos de biodegradacin se toman diferentes muestras para la

determinacin del nmero de unidades formadoras de colonias (UFC) y para la medida de
la toxicidad durante el proceso de biodegradacin.
Cuando la concentracin de tensioactivo residual se mantiene constante con el
tiempo se da por finalizado el ensayo de biodegradacin.
En la Figura III. 1 se esquematiza el protocolo realizado y los mtodos de anlisis
empleados para la toma de muestras tanto de la disolucin de tensioactivo problema como
para el tensioactivo control.
Control
Disolucin de Tensioactivo
25 C
25 C
O2
250 ml
1.200 ml
1.200 ml
Agitacin
Agitacin
1 ml
UFC
10 ml
YodoYoduro
10 ml
MBAS
10 ml
Toxicidad
10 ml
TOC
Figura III. 1.- Protocolo de muestreo para el ensayo esttico de biodegradacin

130
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
3.3.1.6. Seguimiento de la biodegradacin
Para el tensioactivo problema se toman muestras durante los 19 das que como
mximo dura el ensayo, siendo la primera de ellas la que sigue a la inoculacin, a esta
muestra se le denomina muestra a tiempo cero. La frecuencia de la toma de muestras
depende del tensioactivo y de las medidas del oxgeno disuelto.
Para el tensioactivo aninico utilizado como patrn se analiza la biodegradacin el
primer y quinto da del ensayo tras la inoculacin, aunque tambin es posible seguir la
biodegradacin durante los 19 das.
El porcentaje de biodegradacin se calcula por la frmula:
Ai =
(S0 Si ) 100
S0
Ecuacin III. 1
donde:
Ai: Porcentaje de biodegradacin a tiempo ti.
S0: Concentracin media inicial de tensioactivo, expresada en mg/L.
Si: Concentracin de tensioactivo en la disolucin de ensayo a tiempo ti,
expresada en mg/L.
Las determinaciones en el quinto da sirven para dar una indicacin sobre si el
inculo empleado es efectivo. Para que los resultados del ensayo sean vlidos, el patrn
blando de tensioactivo aninico debe biodegradarse hasta un valor comprendido entre 90 y
95% al cabo de 14 das de ensayo, si esto no sucede debe repetirse todo el ensayo (El
experimento es rechazado y se propone otro en las mismas condiciones).
En cualquier caso se aceptan como vlidos todos los ensayos en los que el % de
biodegradacin del patrn blando al cabo de 5 das es mayor del 90%.
131
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
3.3.2. ENSAYO DINMICO (ENSAYO DE COMPROBACIN)
Se utiliza este ensayo para determinar la biodegradabilidad de tensioactivos no

inicos. Viene recogido en la NORMA UNE 55-844-91 (UNE 55-844-91);
Determinacin de la biodegradabilidad de agentes tensioactivos no inicos empleados en
la fabricacin de formulaciones detergentes.
El mtodo especificado en esta norma y sus anexos se corresponde totalmente con
el mtodo para tensioactivos aninicos y no inicos que se detalla en el anexo I de la
Orden del Ministerio de Industria y Energa del 5 de Septiembre de 1985 sobre
Actualizacin de la determinacin de la biodegradabilidad de agentes tensioactivos
utilizados en la preparacin de los detergentes, (BOE, 1985).
Por otra parte, ste mtodo es el aprobado por la OCDE, (OEDC, 1976). Las
Directivas 82/242/CEE y 82/243/CEE del Consejo de las Comunidades Europeas,
reconocen como vlido el citado mtodo de la OCDE para determinar el ndice de
biodegradabilidad de los tensioactivos aninicos y no inicos contenidos en los detergentes
(CEE, 1982a; 1982b).
Se realiza este ensayo para los tensioactivos que no se biodegradan de forma
satisfactoria durante el ensayo esttico (de seleccin), se comprueba as su
biodegradabilidad en condiciones prximas a las reales.
Consiste en inocular una pequea cantidad de microorganismos, procedentes del

efluente secundario de una planta de depuracin que trabaja preferentemente con aguas
residuales domsticas, en un agua residual sinttica que contiene el tensioactivo cuya
biodegradabilidad ha de determinarse.
El proceso de biodegradacin se realiza en una pequea planta de depuracin
(Figura III. 2), a escala de laboratorio, para tratamiento con fangos activos, en la cual se
introduce el agua residual sinttica con un caudal de 1 L por hora. El ensayo se efecta a
temperatura ambiente, la cual se mantiene estable entre 18 y 25C.
132
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
El porcentaje de biodegradacin primaria de los tensioactivos ensayados se

determina diariamente a partir de las concentraciones de tensioactivo en el agua residual
sinttica que entra en la planta y en el efluente acumulado en el depsito de recogida
durante las ltimas 24 horas.
Agua residual sinttica

Se prepara disolviendo en 1 L de agua corriente los productos especificados en
la Tabla III. 9:
Tabla III. 9.- Reactivos para la preparacin del agua residual sinttica
Peptona bacteriolgica de Panreac
160 mg
Extracto de carne de Panreac
110 mg
Urea, P.A. de Merck
30 mg
Cloruro sdico (NaCl, Q.P. de Panreac)
7 mg
Cloruro clcico dihidratado (CaCl22H2O, P.A. de Panreac)
4mg
Sulfato magnsico heptahidratado (MgSO47H2O, P.R.S. de Panreac)
2 mg
Monohidrgenofosfato dipotsico (K2HPO4, P.A. de Panreac)
28 mg
Disolucin de tensioactivo a ensayar

Se prepara una disolucin de tensioactivo no inico de 1g/L (disolucin madre)
disolviendo ste en agua desionizada. La disolucin de concentracin de tensioactivo

requerida se obtiene por dilucin de la disolucin madre en agua desionizada hasta obtener
la concentracin de partida del ensayo, que ser de 10 mg /L1 mg/L.
Esta cantidad inicial de tensioactivo que se alimenta a la planta corresponde
aproximadamente a las concentraciones detectadas en los sistemas de alimentacin de las
EDARs (Schberl, 1991).
133
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Inculo
El inculo debe proceder de un efluente secundario biolgico de buena calidad,
recin cogido de una planta de tratamiento de aguas residuales que opere

predominantemente con vertidos de origen domstico. Durante el tiempo que transcurra
entre la toma del efluente y su utilizacin, ste debe mantenerse en condiciones aerobias.
3.3.2.3. Equipos
Equipo para el ensayo dinmico de biodegradabilidad

Est formado por una planta de depuracin a escala de laboratorio a base de fangos
activos. Su esquema simplificado se representa en la Figura III. 2.
Se utiliz un equipo, de dimensiones normalizadas segn la NORMA UNE 55-84491 (UNE 55-844-91), proporcionado por AFORA.
G
E
Figura III. 2.- Equipo utilizado en el ensayo dinmico de biodegradacin
134
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
El equipo consta de:

A. Recipiente de almacenamiento, de vidrio o de un plstico adecuado, con 24 L de
capacidad mnima para almacenar el agua residual sinttica.
B. Bomba dosificadora, que debe dar un caudal constante del agua residual sinttica
contenida en el recipiente A.
C. Recipiente de aireacin, que contiene unos 3 L de la suspensin del lodo activo en
agua residual sinttica durante una operacin normal de biodegradacin.
D. Decantador, de 1.5 L de capacidad.
E. Tubo de inyeccin de aire comprimido, para recircular el lodo activo decantado
hacia el recipiente de aireacin C.
F. Colector de vidrio o de un plstico adecuado, con 24 L de capacidad mnima para
recoger el efluente tratado.
G. Aireador, formado por un disco de vidrio sinterizado, destinado a distribuir el aire
en la suspensin que contiene el recipiente C. El aireador se sita en el fondo de
este recipiente.
H. Medidor de caudal de aire que, procedente de una bomba, se inyecta a travs del
aireador C.
Equipo para extraccin y concentracin en corriente gaseosa

Cuando la concentracin de tensioactivo es pequea o cuando es necesario extraer
un producto tensioactivo de una solucin para su valoracin, ha de concentrarse, para lo
que se utiliza este equipo que viene recogido en la norma UNE 55-725-87 (UNE 55-72587): Determinacin de pequeas concentraciones de tensioactivos no inicos en medios
acuosos usando el reactivo de Dragendorff. Su esquema viene representado por la Figura
III. 3. Se utiliz un equipo de dimensiones normalizadas proporcionado por AFORA.
Consta de un frasco lavador de vidrio de 100 ml que se llena de acetato de etilo
(CH3COOC2H5, P.A. de Panreac) hasta sus dos terceras partes, una columna con una placa
filtrante de vidrio sinterizado que permite distribuir el aire uniformemente a travs de la
misma y un medidor de caudal del aire que circula por la columna. El frasco lavador y la
columna estn unidos por una junta esfrica. El equipo se conecta a una salida de aire
comprimido proporcionado por un compresor.
135
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
El aparato de extraccin se coloca en una vitrina bien ventilada a fin de eliminar los
vapores de acetato de etilo.
Figura III. 3.- Equipo para extraccin y concentracin en corriente gaseosa
Equipo de destilacin
Montaje utilizado para la destilacin de acetato de etilo con objeto de su
purificacin, compuesto por manta elctrica de SELECTA para calentar un matraz de 2 L
de capacidad y refrigerante encamisado, ambos de POBEL.
136
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
3.3.2.4. Puesta en marcha de la instalacin
Para la puesta en marcha de la instalacin se inocula el agua de alimentacin con

agua residual procedente del clarificador secundario de la estacin depuradora de aguas
residuales urbanas Los Vados de Granada (EDAR Los Vados) a razn de 200 ml por
litro de agua residual sinttica.
Una vez que el recipiente de almacenamiento contiene el agua residual sinttica
inoculada, por medio de la bomba dosificadora, se llena el recipiente de aireacin y el
decantador. La altura del decantador debe ser la necesaria para que el volumen de agua
contenido en el recipiente de aireacin sea de 3 L.
Se ponen en funcionamiento la entrada de aire a travs del difusor cermico (disco
aireador) y al tubo de inyeccin mediante los compresores de aire. El caudal de
recirculacin debe ser del 100 % (medido respecto del de alimentacin). El agua residual
sinttica debe circular en el interior del recipiente de aireacin con un caudal de 1 L/h, lo
que equivale a trabajar con un tiempo medio de residencia de 3 horas.
El compresor de aire conectado al difusor cermico proporciona, por un lado, la
cantidad de aire necesario para mantener la concentracin de oxgeno disuelto por encima
de los 2 mg/L., y por otro, la energa mecnica necesaria para mantener los fangos
activados en suspensin y mezclados de forma homognea.
La instalacin se mantiene funcionando hasta que se alcanza una concentracin de
fango en el reactor de 3 0.5 g/L, llegado este punto se extrae diariamente la cantidad
necesaria para mantener la concentracin de fango en el valor deseado. En estas
condiciones, el valor de carga msica (CM) es de 0.53 calculada segn:
CM =
Kg DBO5 e lim inada

Kg slidos en suspensin en el reactor
Ecuacin III. 2
La duracin del perodo inicial de adaptacin no debe ser superior a seis semanas.
137
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Una vez alcanzadas las condiciones de operacin del reactor, se incorpora al agua
de alimentacin el tensioactivo cuya biodegradabilidad se desee medir, a una
concentracin de 10 mg/L1 mg/L.
3.3.2.5. Procedimiento y condiciones de operacin
El recipiente de almacenamiento debe contener, durante todo el ensayo, un

volumen de agua residual sinttica suficiente para asegurar la alimentacin regular al
recipiente de aireacin y con un caudal de 1 L/h.
En el recipiente de aireacin, sta se regula de forma que los slidos all contenidos
se mantengan constantemente en suspensin. El contenido en oxgeno disuelto del medio
acuoso debe ser de 2 mg/L como mnimo. La temperatura del ensayo debe mantenerse, de
una forma estable entre 18C y 25C.
El extremo inferior del tubo de inyeccin de aire comprimido debe situarse de
forma que el lodo activo se recicle continua y regularmente desde el decantador hasta el
recipiente de aireacin. El lodo que se acumule en la parte superior del recipiente de
aireacin, en el fondo del decantador, o en otro lugar del circuito de desplazamiento del
mismo, debe pasarse a la suspensin, al menos una vez al da, por medio de un escobilln u
otro utensilio adecuado.
La formacin de espuma debe evitarse en lo posible por medios adecuados, en
cualquier caso no se utilizan antiespumantes que inhiban el fango activo o que contengan
productos capaces de comportarse como tensioactivos.
El efluente del decantador se va recogiendo en el depsito colector. Cada 24 horas
se mezcla bien su contenido, se toma un volumen del mismo que sea suficiente para
determinar, por duplicado, la concentracin de tensioactivo, se elimina el resto del efluente
y se limpia cuidadosamente el colector con agua y sin utilizar ningn agente tensioactivo
antes de iniciar una nueva recogida de efluente.
En la Figura III. 4 se muestra un esquema simplificado del protocolo de muestreo
efectuado y las determinaciones necesarias para seguir la biodegradacin del tensioactivo.
Los tensioactivos no inicos se analizan por el mtodo colorimtrico del yodo-yoduro
(apartado 3.4.1.3.) o mediante el mtodo de Wickbold (apartado 3.4.1.2).
138
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Aire
Salida
Entrada
pH
S.S.
Caudal
pH
S.S.
O2
T
pH
S.S.
YodoYoduro
D.Q.O.
D.B.O.
Reactivo de
Dragendorff
YodoYoduro
D.Q.O.
D.B.O.
Reactivo de
Dragendorff
Figura III. 4.- Protocolo de muestreo para el ensayo dinmico de biodegradacin
La comprobacin de la eficacia del proceso se realiza determinando, al menos dos

veces por semana, la diferencia entre los valores de la DQO, o entre los valores del COD
(carbono orgnico disuelto), correspondientes al agua residual sinttica inicial y al filtrado
del efluente contenido en el colector.
La reduccin en la DQO, o en el COD, debe igualarse cuando se obtenga un grado
de biodegradacin regular diario, es decir, una vez terminado el perodo inicial de
biodegradacin.
La materia seca en el lodo activo contenido en el recipiente de aireacin debe
determinarse, en gramos por litro, dos veces por semana. Si hay ms de 3 g/L, el exceso de
lodo activo debe retirarse purgando en el decantador la cantidad de fango que sea
necesario.
3.3.2.6. Seguimiento de la biodegradacin
La determinacin de la concentracin de tensioactivo en la muestra del efluente

debe efectuarse inmediatamente. En caso contrario, la muestra debe mantenerse libre de
alteraciones en su composicin, preferentemente por congelacin.
139
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
El mtodo de anlisis empleado para la determinacin de la concentracin de

tensioactivo ha sido el mtodo de Wickbold con el reactivo de Dragendorff (apartado
3.4.1.2.).
El porcentaje de biodegradacin se calcula cada da, aplicando la frmula;
At =
(S a S e ) 100
Sa
Ecuacin III. 3
donde:
At: Porcentaje de biodegradacin en el da t.
Sa: Concentracin de tensioactivo, expresada en mg/L, en el agua residual
sinttica que entra en el recipiente de aireacin.
Se: Concentracin de tensioactivo, expresada en mg/L, en el efluente
acumulado durante las ltimas 24 horas en el depsito colector.
Los valores de At se calculan con precisin de 0.1 y el resultado final se expresa
como porcentaje sin decimales redondeando a nmeros enteros.
En algunos casos puede permitirse una reduccin de la frecuencia de muestreo;
pero, para calcular la media, deben recogerse como mnimo 14 resultados correspondientes
al perodo de los 21 das siguientes al final del perodo inicial de adaptacin.
Los porcentajes de biodegradacin obtenidos se representan grficamente de la
forma indicada en la Figura III. 5 donde se observan los resultados que pueden obtenerse
en funcin del tiempo, dependiendo de la biodegradabilidad del tensioactivo ensayado.
140
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Figura III. 5.- Perfil tpico de biodegradacin para el ensayo dinmico de biodegradacin
La biodegradabilidad del tensioactivo viene expresada por la media aritmtica de

los valores de At correspondientes a los 21 das que siguen al perodo inicial de adaptacin,
siempre que la biodegradacin haya sido regular y que el funcionamiento del equipo no
haya presentado problemas.
3.3.3. ENSAYO POR EL MTODO RESPIROMTRICO
La biodegradacin es principalmente un proceso oxidativo. La cantidad terica de

oxgeno requerido para la oxidacin completa del compuesto es la misma
independientemente
del
mecanismo:
qumico
bioqumico.
En
principio
la
biodegradabilidad ltima de un tensioactivo se puede medir como DBO. En la prctica la

interpretacin de los resultados es dificultosa debido a la extrema complejidad de los
procesos metablicos implicados, ya que el oxgeno es utilizado por los microorganismos
para una multitud de reacciones, no nicamente para la oxidacin del compuesto.
141
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Los microorganismos existentes en un compartimento ambiental que contiene

materia orgnica biodegradable, utilizan oxgeno para sus procesos bioqumicos y
producen un volumen equivalente de CO2.
Si dichos procesos se desarrollan en un sistema cerrado y el CO2 es absorbido por
un lcali fuerte, por ejemplo hidrxido potsico, es posible medir la DBO a partir de una
progresiva disminucin de la presin interna en el sistema.

Hidrxido potsico (KOH, P.R.S. de Panreac), aunque no se requiere el reactivo
particularmente puro. Se utiliza para la absorcin del CO2.

La disolucin nutriente y la disolucin de tensioactivo a ensayar se preparan de
igual forma que para el ensayo esttico (apartado 3.3.1.2.).
3.3.3.3. Equipos
El equipo utilizado para medir la DBO por tcnica respiromtrica fue el

proporcionado por VELP Scientifica, modelo BOD Sensor System 6, y que consta de una
unidad de agitacin con capacidad para seis botellas de DBO.
Cada botella (fabricada en vidrio) tiene una capacidad nominal de 500 ml, va
provista de un alojamiento para reactivos o reservorio de absorcin de CO2, as como de un
sensor que es enroscado directamente en la botella de DBO. Este sensor posee un
transductor interno de presin que traduce los valores de presin directamente en valores
de DBO mediante un microprocesador (Figura III. 6).
El equipo permite medir valores de DBO en el rango 90-1000 mg O2/L. En funcin
del valor de DBO esperado el equipo permite elegir una escala de medida que condiciona
el volumen de muestra a ensayar (Tabla III. 10).
142
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Tabla III. 10.- Volmenes de muestra y valores de DBO en funcin de la escala elgida en
el equipo respiromtrico
Escala
Volumen de muestra, ml
A: 0-1000 mg O2/L
B: 0-600 mg O2/L
C: 0-250 mg O2/L
D: 0-90 mg O2/L
50
150
250
400
El equipo agitador con las seis botellas se aloja en una estufa termostatizada para
mantener la temperatura constante a 25C durante todo el ensayo, las botellas se incuban en
ausencia de luz para evitar las interferencias debidas a la produccin de oxgeno
fotosinttico de algas.
4
2
1: Agitador magntico
2: Medio de cultivo
3: Trampa de CO 2
4: Frasco de incubacin
5: Sensor de presin
Figura III. 6.- Representacin esquemtica del equipo respiromtrico
3.3.3.4. Procedimiento
Consiste en inocular una pequea cantidad de microorganismos aerobios,

procedentes de una poblacin mixta y aireada, en una mezcla formada por la disolucin
nutriente, y la disolucin de ensayo que contiene los tensioactivos a la concentracin
requerida (entre 0-100 mg/L). El inculo utilizado se tom del efluente secundario de una
143
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
planta de depuracin mediante fangos activos que opera con vertidos urbanos (EDAR Los
Vados). La cantidad de inculo empleada fue de 0.5 ml por 1200 ml de disolucin
nutriente (apartado 3.3.1.2.).
Para ensayar la muestra problema, se introducen 400 ml de la disolucin anterior en
cada una de las botellas de DBO. Una vez que se ha introducido el hidrxido potsico en el
recipiente reservorio para la absorcin de CO2 se cierran las botellas hermticamente al
enroscar el sensor en la botella. Las botellas se colocan en el agitador que tiene una
capacidad de 6 puestos, por lo que normalmente se coloca una botella con el blanco y 5
con la muestra problema para el estudio de la biodegradabilidad final.
El sistema de agitacin se dispone en una estufa termostatizada a 25 C 1 C
equipada con control de temperatura y en ausencia de luz.
3.3.3.5. Toma de datos y expresin de los resultados
El equipo de DBO permite registrar la disminucin de la presin interna de forma

continua en el sensor de presin, y la DBO es calculada de acuerdo con la siguiente
expresin (Reuschenbach, 2003):
DBO =
T
M (O2 ) VTOTAL VLQUIDO

+ 25 p(O2 )
R T
VTOTAL
T0
Ecuacin III. 4
donde:
M(O2): peso molecular del oxgeno.
R: constante de los gases.
T0: temperatura a 0C.
T25: temperatura de incubacin (25 C).
VTOTAL: volumen de la botella.
VLQUIDO: volumen de lquido contenido en la botella.
: coeficiente de absorcin de Bunsen.
p : diferencia de la presin parcial de oxgeno.
144
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
El equipo de DBO almacena y registra los valores de DBO cada 24 horas, sin
embargo la toma de datos se efectu de forma regular durante todo el perodo de duracin
del ensayo leyendo el valor de DBO en funcin del tiempo en la pantalla del sensor.
Una vez que se han restado los valores de DBO del blanco a los valores de DBO de
la muestra, la biodegradacin se calcula mediante la DBO y la demanda terica de oxgeno
(DOT).
En la Figura III. 7 se muestra, a ttulo de ejemplo, una curva de DBO obtenida por
tcnica respiromtrica.
GCP 215. 100 mg/L
50
45
DBO, mgO2/L
40
35
30
25
20
15
10
5
0
0
10
15
t, h
Figura III. 7.- Curva de DBO obtenida por tcnica respiromtrica para el tensioactivo GCP
215 a 100 mg/L
3.3.4. ENSAYO POR EL MTODO DE LA BOTELLA CERRADA

Es posible evaluar la biodegradabilidad final en sistemas aerobios mediante

determinaciones de tipo no especfico (como el oxgeno disuelto, la demanda qumica de
oxgeno, la demanda biolgica de oxgeno, el carbono orgnico total, etc), con lo que se
obtiene informacin sobre la biodegradabilidad total del tensioactivo ensayado.
145
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
La disolucin nutriente y la disolucin de tensioactivo a ensayar se preparan de

igual forma que para el ensayo esttico (apartado 3.3.1.2.).
3.3.4.3. Equipos
Se utilizan frascos Winkler de 250 ml de capacidad provistos de un agitador

magntico para la agitacin de la disolucin y una sonda de oxgeno (CRISON OXI 96)
para la medida del oxgeno disuelto.
Se inocula una pequea cantidad de microorganismos aerobios, procedentes de una

poblacin mixta y aireada, en una mezcla formada por la disolucin nutriente, y la
disolucin de ensayo que contiene los tensioactivos a la concentracin requerida. El
inculo utilizado se tom del efluente secundario de una planta de depuracin mediante
fangos activos que opera con vertidos urbanos (EDAR Los Vados). La cantidad de
inculo empleada fu de 0.5 ml por 1200 ml de disolucin nutriente (apartado 3.3.1.2.).
La concentracin de sustancia de ensayo a emplear no debe de exceder los 10
mg/L. El ensayo en el que se mide el oxgeno disuelto est limitado porque obliga a
trabajar con concentraciones de tensioactivo muy pequeas.
La disolucin que se desee analizar se coloca en un frasco Winkler de 250 ml de
capacidad. De igual forma se prepara otro frasco Winkler con la disolucin nutriente y
exento de tensioactivo. Los frascos se cierran hermticamente, teniendo cuidado de excluir
las burbujas de aire, se pone en marcha el agitador magntico y la sonda lee el contenido
de oxgeno disuelto en mg O2/L. Los frascos Winkler se disponen en una cmara
termostatizada que permite mantener la temperatura en 25 C y en ausencia de luz.
3.3.4.5. Toma de datos y expresin de los resultados
De forma peridica se anotan los valores de oxgeno disuelto en mgO2/L en funcin

del tiempo. La biodegradabilidad se calcula a partir de las curvas de oxgeno disuelto.
146
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
3.4. MTODOS DE ANLISIS

3.4.1. ANLISIS DE TENSIOACTIVOS
3.4.1.1. Mtodo simplificado de anlisis para determinacin de sustancias activas al
azul de metileno (MBAS)
Para la medida de la concentracin de tensioactivos aninicos se ha ensayado y

puesto a punto una simplificacin del mtodo que se describe en NORMA UNE EN 903
(UNE EN 903); Determinacin de agentes aninicos de superficie por medicin del ndice
de azul de metileno SAAM.
Fundamento del mtodo
Se basa en la formacin de sales coloreadas del tensioactivo aninico, en medio

alcalino, con azul de metileno (colorante catinico). Estas sales se extraen con cloroformo
y se hace un tratamiento cido de la disolucin clorofrmica. Se eliminan las interferencias
por extraccin del complejo sustancia aninica-azul de metileno contenido en la
disolucin alcalina, posteriormente se agita el extracto en presencia de una disolucin
cida de azul de metileno y se mide espectrofotomtricamente la absorbancia de la fase
orgnica.
Reactivos y Disoluciones
Cloroformo (CHCl3, P.A. de Panreac).
Disolucin de azul de metileno, estabilizada a pH ligeramente cido; se
disuelven 0.1 g de azul de metileno (C16H18CIN3S.xH2O, P.A. de Panreac) en

100 ml de la disolucin tampn brax 10 mM y pH 5-6. Esta disolucin se
guarda en un frasco color topacio.
Disolucin madre patrn de dodecilbenceno sulfonato sdico; se prepara a 1
g/L y pH neutro.
Disolucin patrn de dodecilbenceno sulfonato sdico de 10 mg/L; preparada
por dilucin 1/100 de la disolucin madre patrn.

Solucin tampn de tetraborato sdico (Na2B4O7, P.A. de Panreac) 50 mM y
pH 10.5.
147
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Procedimiento
En viales de vidrio para medidas espectrofotomtricas de 10 ml de capacidad, se

adicionan 5 ml de muestra, y se alcaliniza hasta pH 10 mediante la adicin de 200 l de
tetraborato sdico 50 mM y pH 10.5, a continuacin se aaden 100 l de azul de metileno
de 1 g/L estabilizado. Finalmente se adicionan 4 ml de cloroformo, y tras agitar, se esperan
5 minutos antes de medir la absorbancia a 650 nm frente a aire o frente a un blanco con
cloroformo.
A ttulo de ejemplo se muestra una recta de calibrado para el tensioactivo aninico
LAS.
2,0
0.384
0.575
0.806
1.128
1.362
1.588
1,5
Conc,
mg/L
0.00
0.50
1.00
1.50
2.00
2.50
1,0
y = 0,4973x + 0,3522
R2 = 0,9956
0,5
0,0
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
Conc, mg/L
Figura III. 8.- Recta de calibrado para el mtodo simplificado de anlisis para la
determinacin de sustancias activas al azul de metileno
3.4.1.2. Mtodo de Wickbold con el Reactivo de Dragendorff
El mtodo de Wickbold est descrito en la NORMA UNE 55-725-87 (UNE 55725-87): Determinacin de pequeas concentraciones de tensioactivos no inicos en
medios acuosos usando el reactivo de Dragendorff. Esta norma se corresponde totalmente
con la Norma Internacional ISO 7875/2-1984.
La norma es aplicable a la determinacin de pequeas concentraciones de
sustancias activas frente al bismuto (BiAS), es decir, de los tensioactivos no inicos
obtenidos por etoxilacin de alquilfenoles o de alcoholes en la medida en que ellos pueden
148
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
purificarse y precipitarse con el reactivo de Dragendorff (por ejemplo, los etoxilados con 5
a 30 moles de xido de etileno por molcula).
El lmite de deteccin del mtodo es de 0.05 mg/L para una muestra de 1L y la
gama ptima de aplicacin es de 0.25 a 0.8 mg/L.
Consiste en la extraccin del tensioactivo contenido en la muestra de ensayo por

medio de una corriente de aire (Figura III. 3), el tensioactivo se recoge en acetato de etilo,
despus se elimina el acetato de etilo y se precipita el tensioactivo no inico con el reactivo
de Dragendorff (KBiI4+BaCl2+CH3COOH).
Se separa el precipitado, se disuelve y se determina la concentracin de bismuto,
equivalente a la concentracin de tensioactivo, por potenciometra con una disolucin de
pirrolidinil-1 ditiocarboxilato de sodio o por espectrometra ultravioleta.
Reactivos y Disoluciones
Hidrogenocarbonato sdico (NaHCO3, P.A. de Panreac).
Acetato de etilo (C4H8O2, P.A. de Panreac), recin destilado.
Metanol, (CH3OH, P.A.I. de Panreac).
cido actico glacial (CH3COOH, Q.P. de Panreac), de densidad 1.05 g/ml.
cido clorhdrico (HCl 37%, P.A. de Panreac).
cido sulfrico (H2SO4 96%, P.A. de Panreac). c= 0.5 mol/L.
cido etilen-diamino-tetraactico (EDTA C10H14N2Na2O8.2H2O, P.A. de
Scharlau).
Disolucin de amonaco, 10 ml de amonaco (NH3, P.A. de Panreac) de
densidad 0.91 g/ml en 250 ml de agua.

Disolucin de tartrato amnico, se aaden 12.40 g de cido tartrico (C4H6O6,
P.A. de Panreac) a 12.40 g de amonaco de densidad 0.91 g/ml y se diluye a

1000 ml con agua.
Reactivo de precipitacin (Reactivo de Dragendorff);
Se mezclan dos volmenes de la disolucin A y un volumen de la

disolucin B.
Disolucin A: Se disuelven 1.70 g de nitrato bsico de bismuto (III)

monohidratado (BiONO3H2O, P.A. de Panreac) en 20 ml de cido
actico glacial y se diluye a 100 ml con agua. Se disuelven 65 g de
149
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
yoduro potsico (KI, P.A. de Panreac) en unos 200 ml de agua. Se

mezclan las dos disoluciones en un matraz aforado de 1000 ml, se
aaden 200 ml de cido actico glacial y se completa el volumen con
agua. Esta disolucin, conservada fuera de la luz, se mantiene estable
durante una semana aproximadamente.
Disolucin B: Se Disuelven 290 g de cloruro brico dihidratado

(BaCl22H2O, P.A. de Panreac) en 1000 ml de agua. sta disolucin,
conservada en frasco de vidrio oscuro, permanece estable durante una
semana aproximadamente.
Disolucin tampn de acetato: Se disuelven 40 g de hidrxido sdico (NaOH,
P.A. de Merck) en unos 500 ml de agua. Se aaden 120 ml de cido actico

glacial. Se mezcla cuidadosamente, se deja enfriar y se diluye a 1000 ml con
agua en un matraz aforado.
Pirrolidinil-1 ditioacarboxilato sdico, disolucin a 0.5 mmol/L: Se disuelven
103
mg
de
Pirrolidinil-1
ditioacarboxilato
sdico
dihidratado
(C5H8NS2Na2H2O, P.A. de Fluka) en unos 500 ml de agua, se aaden 10 ml de

alcohol amlico (C5H11OH, P.R.S. de Panreac) y 0.5 g de hidrgenocarbonato
sdico y se diluye a 1000 ml con agua.
Disolucin madre patrn de sulfato de cobre (II): Se disuelven 1.249 g de
sulfato de cobre (II) pentahidratado (CuSO45H2O, P.R.S. de Panreac) en 50 ml

de cido sulfrico y 200 ml de agua. Luego se diluye a 1000 ml con agua. No se
deben utilizar cristales rotos ni eflorescentes.
Disolucin patrn de sulfato de cobre (II): Se aaden 50 ml de la disolucin
madre patrn de sulfato de cobre a 10 ml de la disolucin de cido sulfrico y

se diluye a 1000 ml con agua.
Disolucin metanlica de prpura de bromocresol: Se disuelven 0.10 g de
prpura de bromocresol (C21H16Br2O5S, P.A. de Panreac) en 100 ml de

metanol.
150
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Procedimiento
Concentracin y separacin del tensioactivo
Las muestras, recogidas en frascos de vidrio perfectamente limpios, deben estar

exentas de materia en suspensin (menos de 0.3 g/L), por lo que se centrifugan las mismas
si es necesario antes de comenzar el anlisis.
La toma de ensayo, formada por un volumen definido de muestra, se introduce en el
aparato de extraccin en corriente gaseosa. Si el volumen de muestra sobrepasa los 500 ml
se aaden 100 g de cloruro sdico y 5 de hidrgenocarbonato sdico en forma slida, y se
disuelven las sales haciendo pasar una corriente de aire por la toma de ensayo. Las sales se
aaden para facilitar la separacin. Si el volumen de muestra es inferior a 500 ml, se
disuelven las sales anteriores en 400 ml de agua y se aaden a la toma de ensayo,
completndose el resto de la columna de extraccin con agua hasta el nivel de la llave
superior de la misma.
Una vez llena la columna se aaden 100 ml de acetato de etilo. Se llena el frasco
lavador, por el que circula la corriente de aire, hasta dos tercios con acetato de etilo. El
caudal de aire debe tener un caudal comprendido entre 20 y 50 L/h, se regula de tal forma
que la fase acuosa y la orgnica permanezcan separadas y no haya turbulencia en la
interfase, de esta forma la mezcla de las fases y de la disolucin de acetato de etilo con el
agua est limitada. El caudal de aire se corta al cabo de 5 minutos.
Terminada la fase de extraccin del tensioactivo se traslada toda la fase orgnica a
un embudo de decantacin, las trazas de agua que aparezcan en el embudo se devuelven a
la columna de extraccin. Se aaden otros 100 ml de acetato de etilo a la columna de
extraccin y se hace pasar de nuevo una corriente de aire durante 10 minutos. Se separa de
nuevo la fase orgnica utilizando el mismo embudo de decantacin y todo el acetato de
etilo recogido se trasvasa a un matraz de fondo redondo. Para eliminar toda la disolucin
de acetato de etilo se utiliza un evaporador rotativo ROTAVAPOR R-110 de la casa
BCHI situado dentro de una vitrina.
Precipitacin y filtracin
El residuo seco que se obtiene se disuelve aadiendo 5 ml de metanol, 40 ml de

agua y 0.5 ml de la disolucin de cido clorhdrico, se agita con un agitador magntico, y
se aaden, con una probeta graduada 30 ml de reactivo de precipitacin. Se agita
151
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
continuamente el matraz durante la formacin del precipitado, se detiene la agitacin al

cabo de 10 minutos y se espera durante 5 minutos como mnimo.
Se coloca un crisol filtrante de vidrio sinterizado de porosidad 4 y 40 ml de
capacidad en un adaptador apropiado, fijado sobre un matraz para filtracin de 500 ml. Se
lava el vaso, el agitador y el crisol con pequeas porciones de cido actico glacial hasta
un total de 50 ml.
Disolucin del precipitado
Se coloca el crisol anterior en un adaptador de vidrio montado sobre un matraz de

filtracin de 500 ml. Se disuelve el precipitado aadiendo cuidadosamente 50 ml de una
disolucin caliente de tartrato amnico a unos 80 C (disolucin que previamente se pasa
por el matraz redondo para disolver el precipitado que quede), se lava cuidadosamente el
crisol, el adaptador y el matraz de filtracin con 100 ml de agua, finalmente se aade esta
agua de lavado a la disolucin que resulta de la filtracin. Todo se lleva a un vaso de vidrio
perfectamente limpio.
A continuacin se lleva a cabo el anlisis por el mtodo potenciomtrico o
espectrofotomtrico:
Mtodo potenciomtrico
En primer lugar se trata de valorar la disolucin de pirrolidinil-1 ditiocarboxilato

sdico; la concentracin de la disolucin de pirrolidinil-1 ditiocarboxilato sdico debe
controlarse antes de cada empleo, o al menos una vez al da. Para ello se valora una mezcla
de 10 ml de la disolucin patrn de sulfato de cobre, 100 ml de agua y 10 ml de la
disolucin tampn de acetato.
El factor de correccin de la valoracin t de la disolucin de pirrolidinil-1
ditiocarboxilato sdico se calcula a partir de la expresin:
t=
V1
V2
Ecuacin III. 5
donde:
V1: Volumen en ml de la disolucin patrn. (V1=10 ml).
152
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
V2: Volumen en ml de la disolucin de pirrolidinil-1 ditiocarboxilato sdico

consumido.
El factor de correccin de la valoracin tiene un valor inferior a la unidad.
A continuacin se procede a la valoracin de la muestra de ensayo:
A la disolucin obtenida se aaden unas gotas de indicador de prpura de
bromocresol y de una disolucin de amonaco hasta que la disolucin vire del anaranjado
al violeta. Se aaden 10 ml de la disolucin tampn de acetato, se sumergen los electrodos
y se valora con la disolucin de pirrolidinil-1 ditiocarboxilato sdico.
La valoracin contina hasta que haya una cada de potencial significativa. El
caudal de la bureta se regula a 2 ml/min. El punto final de la valoracin se determina a
partir de la interseccin de las tangentes a las dos ramas de la curva de potencial. A veces,
la inflexin de las curvas de potencial puede estar aplanada, lo que se puede evitar
limpiando cuidadosamente el electrodo de platino.
En la Figura III. 9 se muestra, a ttulo de ejemplo, una curva de valoracin
potenciomtrica para el tensioactivo no inico Findet 1214N/23.
V,ml
-50
0
-55
-60
U,mV
-65
-70
-75
-80
-85
-90
Figura III. 9.- Curva de valoracin potenciomtrica para el tensioactivo Findet 1214N/23
153
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Ensayo en blanco
Para cada serie de muestras, se efecta de forma paralela a la determinacin, un
ensayo en blanco utilizando 5 ml de metanol y 40 ml de agua, al que se le aplica el mismo
procedimiento.
El consumo de la disolucin de pirrolidinil-1 ditiocarboxilato sdico debe ser
inferior a 1 ml. En otro caso debe controlarse el contenido en metales pesados de los
reactivos.
Expresin de los resultados
A partir del volumen de pirrolidinil-1 ditiocarboxilato sdico se calcula la

concentracin de tensioactivo. Cada tensioactivo no inico, en funcin de la longitud de la
cadena de xido de etileno, tiene su propio factor de conversin, por tanto los clculos se
refieren a una sustancia estndar. Un nonilfenol polietoxilado con 10 moles de xido de
etileno (NP 10) es apropiado como estndar. Para este tensioactivo se ha determinado un
factor emprico de 54, que significa que 1 ml de la disolucin de pirrolidinil-1
ditiocarboxilato sdico equivale a 54 g de NP 10.
La concentracin del tensioactivo no inico, x, expresada en miligramos de NP 10
por litro de muestra, se calcula por la ecuacin;
x =
(v3 v4 ) t f
v0
Ecuacin III. 6
V0; volumen en ml de la toma de ensayo.

V3; volumen en ml de la disolucin de pirrolidinil-1 ditiocarboxilato sdico
consumido por la toma de ensayo.
V4; volumen en ml de la disolucin de pirrolidinil-1 ditiocarboxilato sdico
consumido por el ensayo en blanco.
t; factor de correccin de la concentracin de la disolucin de pirrolidinil-1
ditiocarboxilato sdico.
f; factor de clculo, en este caso f=54 mg/L.
Para la gama de concentraciones entre 0.5 y 1.0 mg/L, la desviacin tpica relativa
es igual a 10%.
154
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Mtodo por espectrometra ultravioleta
Se procede de igual forma que en el mtodo potenciomtrico para la precipitacin,

filtracin y disolucin del precipitado. Las aguas de lavado se trasvasan a un matraz
aforado de 100 ml, perfectamente limpio, al que se aaden 4 ml de una disolucin de cido
etiln diamino tetraactico (EDTA), el resto se completa con agua.
Se lee la absorbancia de la disolucin del matraz aforado a una longitud de onda de
263.5 nm frente al aire o frente a agua. Se preparan disoluciones de calibrado que
contengan 0; 200; 400, 600 y 1000 g de tensioactivo no inico estndar, por disolucin de
cantidades adecuadas en 5 ml de metanol y 40 ml de agua. Se calcula el peso de
tensioactivo no inico en la toma de muestra a partir de la curva de calibrado.
En la Figura III. 10 se muestra, a ttulo de ejemplo, una recta de calibrado para el
tensioactivo no inico Findet 1214N/23.
0,40
0,35
0.051
0.069
0.080
0.110
0.168
0.228
0.289
0.347
Conc,
g
0
50
100
200
400
600
800
1000
0,30
0,25
0,20
0,15
0,10
y = 0,0003x + 0,0518
R2 = 0,9998
0,05
0,00
0
200
400
600
800
1000
1200
Conc, g
Figura III. 10.- Recta de calibrado por el mtodo espectrofotomtrico para el tensioactivo
Findet 1214N/23
3.4.1.3. Mtodo colorimtrico del yodo-yoduro
Se trata de un mtodo semiespecfico para tensioactivos no inicos, ya que dentro

de esta clase de tensioactivos el mtodo no distingue al tensioactivo concreto de que se
trata.
155
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Se basa en la formacin de un complejo coloreado entre el tensioactivo no inico y

el reactivo yodo-yoduro. Este complejo coloreado se determina espectrofotomtricamente.
La absorbancia es directamente proporcional a la concentracin de tensioactivo no inico.
Reactivos y disoluciones
Durante todo el anlisis se utilizan reactivos de calidad analtica reconocida, y agua

destilada, o de pureza equivalente.
Reactivo yodo-yoduro; se disuelve 1 g de yodo (calidad Q.P. de Panreac) y
2 g de yoduro potsico (KI, calidad P.A. de Panreac) en 100 ml de agua.

Esta solucin debe conservarse en frasco de vidrio color topacio y se
renueva cada 8 das.
Solucin madre patrn de tensioactivo no inico de 1 g/L.
Solucin hija patrn de tensioactivo no inico de 0.020 g/L preparada por
dilucin 1/50 de la solucin madre patrn.

Procedimiento
Se aaden 0.25 ml de reactivo yodo-yoduro sobre 10 ml de la muestra problema, se

agita y se mantiene durante 5 minutos a temperatura ambiente. Se mide la absorbancia
frente al aire a 500 nm en un espectrofotmetro.
La evaluacin de los resultados se realiza por medio de una recta de calibrado, para
cada una de las medidas de la muestra, que da directamente el contenido de tensioactivo no
inico expresado en mg/L. La curva de calibrado debe prepararse con el tensioactivo no
inico de que se trate en cada caso, puesto que es diferente para cada uno.
tensioactivo Findet 1214N/23.
156
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
1,0
0,9
0,8
0.376
0.450
0.547
0.668
0.749
0.871
0,7
0,6
Conc,
mg/L
0
2
4
6
8
10
0,5
0,4
0,3
y = 0,0499x + 0,3607
R2 = 0,9953
0,2
0,1
0,0
0
mg/L
10
12
Figura III. 11.- Recta de calibrado por el mtodo colorimtrico del yodo-yoduro
3.4.1.4. Mtodo del carbono orgnico total (TOC)
Actualmente existen dos mtodos para determinar el contenido de carbono orgnico

total (TOC), denominados de diferencia y de purgado. El mtodo elegido en este
trabajo es el de purgado que determina el TOC directamente con una nica medida, el
carbono inorgnico total se elimina en la fase de preparacin de la muestra. El hecho de
que los resultados obtenidos con este mtodo presenten desviaciones menores, puesto que
el TOC es medido directamente, y que el manejo de la muestra sea ms sencillo y rpido
nos lleva a elegir el mtodo de purgado.
Se utiliza el test de ensayo de TOC, Mtodo de Purgado LCK 383, de Dr.LANGE.
El carbono orgnico total (TOC) se transforma en dixido de carbono (CO2)

mediante oxidacin. El CO2 se detecta cuantitativamente en una determinacin
espectrofotomtrica.
El carbono inorgnico total (TIC) se elimina previamente sometiendo la muestra a
acidificacin y agitacin durante la fase de preparacin. En la cubeta de ensayo se lleva a
cabo una oxidacin qumica en medio hmedo. El CO2 de la cubeta de digestin pasa a
travs de una membrana gas-permeable a la cubeta indicadora. El cambio de color
resultante del indicador se evala espectrofotomtricamente.
El rango de medicin del mtodo es de 5-50 mg/L TOC.
157
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Reactivos
Reactivo de acidificacin A de Dr.LANGE
Reactivo de disgregacin B (LCK 383 B) de Dr.LANGE
Procedimiento
Preparacin de la muestra
El pH de la muestra debe estar comprendido entre 4 y 10. La temperatura de la

muestra, as como de los reactivos, debe estar entre 15 y 25 C.
En caso de dilucin de la muestra solamente se emplea agua desionizada (Milli-Q)
libre de carbono. Se procede a la filtracin de la muestra con filtros MILLIPORE tipo GS y
con un tamao de poro de 0.22 m.
Acidificacin
Se pipetean 5 ml de muestra filtrada y 0.2 ml de reactivo de acidificacin en un

matraz erlenmeyer de 50 ml. Se agita durante 5 minutos con un imn magntico de tamao
30.7 mm y con una velocidad de giro del agitador de 750-800 r.p.m.
Disgregacin
Mediante un dosificador de polvo se agrega una dosis de reactivo de disgregacin B

en la cubeta de disgregacin, se pipetean 2 ml de la muestra acidificada en la cubeta de
disgregacin. Es necesario invertir varias veces la cubeta para agitar suficientemente.
Digestin y medicin
Se desenrosca la tapa original de la cubeta y se cierra fuertemente sta con la tapa

de doble membrana, se enrosca en la parte superior la cubeta indicadora, Hay que mantener
siempre las cubetas en posicin vertical y no invertirlas.
A continuacin se calienta la combinacin de cubetas en el termostato precalentado
a 100 C, el tiempo de reaccin es de 2 horas, una vez transcurrido este tiempo se deja
enfriar la combinacin de cubetas a temperatura ambiente.
Finalmente se gira la combinacin de cubetas, se limpia bien su exterior, se
introducen en el espectrofotmetro y se mide frente al aire a una longitud de onda de 435
nm.
158
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS

tensioactivo Glucopn 600.
1,2
0.470
0.570
0.674
0.762
0.859
0.985
Conc,
mg/L C
0
10
20
30
40
50
1,0
0,8
0,6
0,4
y = 0,0101x + 0,4679
R2 = 0,9977
0,2
0,0
0
10
20
30
mg/L C
40
50
60
Figura III. 12.- Recta de calibrado por el mtodo del carbono orgnico total
En la Figura III. 13 se muestra un esquema de una cubeta para determinacin del

TOC, y en la Figura III. 14 una representacin simplificada del mtodo de determinacin
del TOC.
159
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Cubeta
Indicador
Solucin
Indicador
El CO 2 entrante
causa un cambio de
color en el
indicador
Membrana
doble capa
CO 2
Muestra
+
Reactivo
Cubeta
Digestin
Termostato
Figura III. 13.- Esquema de una cubeta para determinacin del TOC
160
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
PREPARACIN DE LAS
MUESTRAS
5 ml DE
MUESTRA
0,2 ml
SOLUC. CIDA
AGITAR
5 MIN
1 DOSIS REACTIVO
DISGREGACIN
Cubeta
Disgregacin
DETERMINACIN DE
TOC
2 ml MUESTRA
Combinacin
Cubetas
Cubeta
Indicadora
INVERTIR
AJUSTAR
MEMBRANA
MEDIR ABS
435 nm
ENFRIAR
INVERTIR
CALENTAR
2 h 200 C
Figura III. 14.- Representacin esquemtica del mtodo de determinacin del TOC
La determinacin del TOC se ha utilizado para el segumiento de la

biodegradabilidad de alquilpoliglucsidos durante el ensayo esttico de biodegradacin, ya
que se trata de tensioactivos no inicos que no se comportan como sustancias activas al
yoduro de bismuto y que tampoco reaccionan con el reactivo yodo yoduro.
Sin embargo, se ha encontrado que este mtodo no resulta fiable para la
determinacin de la biodegradabilidad final de APG, en especial para ensayos de baja
concentracin de tensioactivo para los que el mtodo del TOC (rango de medicin: 5-50
mg/L de TOC) no resulta de utilidad. A modo de ejemplo se muestra la concentracin
161
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
residual medida como mg/L de TOC y mg/L de GCP 600 en un ensayo esttico a una
concentracin inicial de 12 mg/L, (Figura III. 15).
GCP 600. 12 mg/L
70
60
Conc, mg/L
50
40
30
20
mg/L GCP 600

mg/L C
10
0
0
50
100
150
-10
t, h
-20
Figura III. 15.- Evolucin de la concentracin residual en funcin del tiempo para el
tensioactivo GCP 600 a una concentracin inicial de 12 mg/L utilizando el mtodo del
TOC
3.4.1.5. Demanda biolgica de oxgeno (DBO)
La medida de la demanda biolgica de oxgeno se ha realizado por el mtodo de la

dilucin. En general los mtodos de la dilucin tienen por principio establecer una dilucin
del agua rica en materias orgnicas con un agua que aporte el oxgeno disuelto en que se
mida la cantidad residual, en condiciones operatorias bien determinadas.
La demanda biolgica de oxgeno se define como la cantidad de oxgeno

consumido en las condiciones del ensayo, es decir, despus de incubacin durante 5 das, a
20 C y en la oscuridad, para ciertas materias presentes en el agua, principalmente para
162
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
asegurar su degradacin por va biolgica. La medida de la cantidad de oxgeno consumido

se puede seguir en una solucin inoculada o no.
Reactivos y disoluciones
Agua destilada.
Agua de inoculacin tomada de un depsito colector de una EDAR que
opera con aguas residuales urbanas.

Solucin de fosfatos: disolver en 1000 ml 8.493 g de monohidrogenofosfato
sdico (Na2HPO4.2H20, P.R.S. de Panreac) y 2.785 g de dihidrogenofosfato

potsico (KH2PO4, P.A. de Panreac).
Solucin de sulfato magnsico (MgSO47H2O, P.R.S. de Panreac) de 20 g/L.
Solucin de cloruro clcico (CaCl2, P.A. de Panreac) de 25 g/L.
Solucin de cloruro de hierro (FeCl36H2O, P.R.S. de Panreac) de 1.5 g/L.
Solucin de cloruro amnico (NH4Cl, P.R.S. de Panreac) de 2g/L.
El agua de dilucin se prepara disolviendo en 1000 ml de agua destilada 5 ml de la

solucin de fosfatos, 1 ml de la solucin de sulfato magnsico, 1 ml de la solucin de
cloruro clcico, 1 ml de la solucin de cloruro de hierro y 1 ml de la solucin de cloruro
amnico.
Procedimiento
El agua de dilucin se mantiene a 20 C y se airea procurando evitar toda

contaminacin por metales, materias orgnicas, oxidantes o reductoras. La aireacin se
detiene cuando la solucin contiene 8 mg/L de oxgeno disuelto. Se deja en reposo durante
12 horas manteniendo el recipiente destapado. Posteriormente se aaden 5 ml del agua de
inoculacin por litro de esta solucin. El agua de dilucin debe utilizarse dentro de las 24
horas siguientes a su preparacin.
A continuacin se introduce un volumen conocido de agua a analizar en un frasco
Winkler y se completa con el agua de dilucin. Se homogeneiza la mezcla y se comprueba
que el pH de la solucin est comprendido entre 6 y 8. Se llena completamente el frasco y
se tapa sin que entren burbujas de aire. Se preparan igualmente una serie de diluciones
sucesivas tales que el consumo de oxgeno est prximo al 50% del contenido inicial. Se
conservan los frascos a 20 C y en la oscuridad y se mide el oxgeno disuelto subsistente al
cabo de 5 das (120 horas). De forma paralela a la muestra problema se prepara un ensayo
163
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
en blanco en el que el oxgeno disuelto debe estar comprendido entre 0.5 y 1.5 g/L. En
caso contrario, la inoculacin no es conveniente y se necesita modificar la preparacin.
3.4.1.6. Oxgeno disuelto
La medida del oxgeno disuelto se realiza mediante una sonda de oxgeno

(CRISON OXI 96). La sonda lee el contenido de oxgeno disuelto en mg O2/L. De forma
peridica se anotan los valores de oxgeno disuelto en funcin del tiempo.
3.4.2. RECUENTO DE LA BIOMASA

3.4.2.1. Fundamento
Las curvas de crecimiento son un mtodo alternativo para evaluar la

biodegradacin de tensioactivos cuando stos son la nica fuente de carbono del medio de
cultivo. Inicialmente se inocula un pequeo nmero de microorganismos en el medio y se
registra el nmero de microorganismos viables en funcin del tiempo.
El modelo de crecimiento basado en el nmero de clulas viables tiene cuatro fases
ms o menos diferenciadas:
1) Fase de retardo. Tras la adicin de un inculo al medio de cultivo, la fase de
retardo representa el tiempo requerido para que los microorganismos se
aclimaten a sus nuevas condiciones ambientales.
2) Fase de crecimiento logartmico. Durante este periodo, la clula se divide a una
velocidad determinada por su tiempo de generacin y su capacidad de procesar
alimento.
3) Fase estacionaria. En este caso la poblacin permanece estacionaria. Las
razones que se apuntan para este fenmeno son: a) que las clulas han agotado
el sustrato o nutrientes necesarios para el crecimiento, y b) que el crecimiento
de nuevas clulas se nivela por la muerte de clulas viejas.
4) Fase de muerte logartmica o crecimiento decreciente. Durante esta fase la tasa
de muerte de las bacterias excede la poblacin de clulas nuevas. Los
microorganismos se ven forzados a metabolizar su propio protoplasma sin
reposicin del mismo, ya que la concentracin de sustrato disponible se halla en
164
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
un mnimo. Durante esta fase puede darse el fenmeno llamado lisis segn el
cual los nutrientes que quedan en las clulas muertas se difunden con objeto de
proporcionar alimento a las clulas existentes.

Disolucin de NaCl al 0.9%. NaCl de calidad P.A. de Panreac.
Agar nutritivo de Cultimed suministrado por Panreac.
3.4.2.3. Equipos
Autoclave
Utilizado para esterilizar el medio de cultivo para el crecimiento de
microorganismos as como el material necesario. Autoclave elctrico semiautomtico con
temperaturas regulables de 105 a 150 C. Modelo Autester-G de SELECTA P.
Cabina de flujo laminar horizontal

Utilizada para el cultivo de unidades formadoras de colonias en condiciones
estriles en los ensayos estticos de biodegradacin. Permite trabajar en condiciones de
esterilidad y en ausencia de partculas mediante un barrido continuo de la zona de trabajo.
Incluye lmpara germicida de U.V. Modelo Micro-V de la casa TELSTAR.
Contador de Unidades Formadoras de Colonias (UFC)

Utilizado para el recuento automtico de las unidades formadoras de colonias en los
ensayos estticos de biodegradacin. De la casa IUL.
El nmero de microorganismos viables se obtiene mediante recuento hetertrofo

en placa, expresndose el resultado como unidades formadoras de colonias (UFC) por ml.
El medio de cultivo, agar nutritivo, permite la deteccin de una amplia variedad de
microorganismos. Con una pipeta estril se toma 1 ml de muestra del cultivo y se hacen
165
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
una serie de diluciones seriadas 1:10 en ClNa al 0.9% hasta alcanzar una dilucin de
microorganismos entre 30 y 80 clulas viables por ml de solucin de prueba.
Cada dilucin se analiza por duplicado: sobre una placa de Petri de 10 cm de
dimetro se aade 1 ml de la muestra a analizar. Se vierten, a continuacin, 20 ml del
medio de cultivo previamente esterilizado, fundido y atemperado a 60C y se agita
suavemente hasta su total homogenizacin. Se deja enfriar hasta su completa solidificacin
y se incuba a 25C durante 72 horas en la oscuridad. El nmero total de microorganismos
se obtiene multiplicando el nmero de UFC por el factor de dilucin correspondiente.
3.4.3. PARMETROS DE CONTROL

3.4.3.1. Determinacin de slidos en suspensin
Los slidos en suspensin son los slidos retenidos por un filtro de fibra de vidrio
despus de secado hasta pesada constante a 105 C. Se utiliza el mtodo de filtracin para
determinar el contenido de materias en suspensin en medios acuosos del ensayo dinmico
de biodegradacin.
Fundamento
Se filtra el agua y el peso de materias retenido por el filtro se determina por

diferencia de pesada.
Aparatos y reactivos
9 Dispositivo de filtracin a vaco; bomba de vaco, matraz kitasatos, adaptador y
portafiltros de polipropileno.
9 Probeta graduada de 100 ml de polietileno o vidrio.
9 Discos filtrantes de fibra de vidrio borosilicatado de 47 mm de dimetro, tipo AP
40 de MILLIPORE.
9 Estufa de desecacin regulable a 103-105 C de SELECTA.
9 Balanza de 0.1 mg de precisin METTLER AE 260.
166
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Procedimiento
En primer lugar se lavan los discos de filtracin con agua destilada y se secan en la
estufa a 105 C hasta peso constante, la pesada se hace en una balanza de 0.1 mg de
precisin.
Se coloca el filtro en el equipo de filtracin y se vierte un volumen medido de
muestra bien mezclada entre 10-100 ml. Se separa cuidadosamente el filtro del equipo. Se
deja airear el filtro, se seca a 105 C (una hora al menos), se deja enfriar en el desecador
para equilibrar la temperatura y se vuelve a pesar con una precisin de 0.1 mg hasta peso
constante.
Expresin de los resultados
El contenido en slidos en suspensin, en mg/L del agua, viene determinado por la

siguiente expresin;
[S.S ] = (M1 M 0 ) 1000

V
Ecuacin III. 7
donde:
M0: Peso del disco filtrante en mg antes de su utilizacin.
M1: Peso del disco filtrante en mg despus de su utilizacin.
V: Volumen de agua filtrada, en ml.
3.4.3.2. Demanda qumica de oxgeno (DQO)

Fundamento
La demanda qumica de oxgeno es la cantidad de oxgeno consumido por las

materias existentes en el agua y oxidables en condiciones operatorias definidas, esto es;
digestin a 150 C con un exceso de dicromato potsico, en medio fuertemente cido y en
presencia de sulfato de plata como catalizador.
167
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Reactivos
9 Reactivo de cido sulfrico: se disuelven 10 g de sulfato de plata (SO4Ag2,
P.R.S. de Panreac) en 1 L de cido sulfrico concentrado (H2SO4, P.A. de

Panreac).
9 Solucin de dicromato potsico 0.5 N: se disuelven 24.6 g de dicromato
potsico (Cr2O7K2, P.A. de Panreac), previamente desecado a 103 C

durante dos horas, en 1 L de agua destilada.
9 Solucin patrn de ftalato cido de potasio: se seca el ftalato cido de
potasio (C6H4COOHHCOOK, P.A. de Panreac) hasta peso constante a 120

C. Se disuelven 0.85 g en 1 L de agua destilada. El ftalato cido de potasio
tiene una DQO terica de 1000 p.p.m. de O2.
Procedimiento
En un vial se aade: una esptula de sulfato de mercurio (SO4Hg2, P.R.S. de

Panreac), 4 ml de reactivo de cido sulfrico y 1 ml de solucin de dicromato potsico. El
reactivo as preparado es estable al menos durante un mes. A continuacin se aaden 3 ml
de la muestra problema y se agitan los viales.
Se introducen los viales en un reactor para la DQO a 150 C, durante dos horas.
Finalizada la digestin se dejan enfriar los viales y a continuacin se mide la absorbancia a
620 nm.
La evaluacin de los resultados se realiza por medio de una recta de calibrado que
da directamente la DQO expresada como mg O2/L. A continuacin se describe como se
prepara la recta patrn;
En una serie de tubos de ensayo se preparan las siguientes disoluciones patrn de
ftalato:
Tubo
Agua destilada, ml
10
9.5
Solucin ftalato, ml
0.5
10
DQO, mgO2/l
50
100
200
400
600
800
1000
Tabla III. 11.- Recta de calibrado para la determinacin de la DQO

168
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Se aaden 3 ml de cada una de las disoluciones de ftalato incluido el blanco en un

tubo con el reactivo para la DQO y se agita para homogeneizar la mezcla de reaccin, se
introducen los viales en el reactor a 150 C durante 2 horas y se mide la absorbancia a 620
nm.
En la Figura III. 16 se muestra, a ttulo de ejemplo, una recta de calibrado para la
DQO.
0,40
0,35
0.056
0.072
0.089
0.125
0.185
0.245
0.313
0.374
DQO,
mgO2/L
0
50
100
200
400
600
800
1000
0,30
0,25
A
0,20
0,15
y = 0,0003x + 0,0575
0,10
R 2 = 0,9997
0,05
0,00
0
200
400
600
800
DQO, m gO2/L
1000
1200
Figura III. 16.- Recta de calibrado para la DQO
3.4.4. DETERMINACIN DE LOS PARMETROS DE CALIDAD DE UN

MTODO ANALTICO
La validacin de un mtodo analtico es el proceso que establece, mediante estudios

sistemticos de laboratorio, que las caractersticas tcnicas de dicho mtodo cumplen las
especificaciones relativas al uso previsto de los resultados analticos (Cuadros, 2002). Es
decir, validar implica demostrar la validez del mtodo para el uso especfico al que se
destine.
La validacin implica por tanto una comprobacin de la exactitud de los resultados
que genera el mtodo de anlisis en sus dos componentes (comprobacin de la veracidad y
estimacin de la precisin), a travs del establecimiento de los parmetros de calidad.
Para comprobar la bondad del mtodo analtico empleado, se determinan los
parmetros de calidad utilizando el modelo de clculo propuesto por Cuadros y col.
169
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
(Cuadros 1993, 1996), que se basan el la utilizacin del conjunto de datos obtenidos en un
experimento de calibracin, como son:
Linealidad
Es la ausencia de curvatura de la lnea de calibracin. Tradicionalmente se ha

venido midiendo a partir de los coeficientes de correlacin (r) y el coeficiente de
determinacin (R2). Valores prximos a 1 indican una alta calidad de los datos analticos.
La linealidad puede ser cuantificada a partir de la expresin:
S
LIN (% ) = 1 m
m
100
Ecuacin III. 8
Donde Sm/m es la desviacin estndar relativa a la pendiente.

Sensibilidad
Hay dos formas de expresar la sensibilidad de un mtodo analtico: la sensibilidad

de calibracin, que mide la relacin entre la seal instrumental y la concentracin de
analito; y la sensibilidad analtica, que es la menor diferencia de concentracin que un
mtodo analtico puede discernir. La primera se evala
a partir de la pendiente de
calibracin, m, y la segunda a partir del cociente Sr/m, donde Sr es la desviacin estndar

de regresin.
Precisin
La precisin mide el grado de incertidumbre de un resultado analtico. Esta es

debida a la dispersin de la seal del instrumento y al uso de valores de la pendiente y la
ordenada en el origen estimadas de la recta de calibracin para transformar la seal
instrumental medida en concentracin. Matemticamente se expresa por la desviacin
estndar relativa de la concentracin, Sc/c y tiene un valor distinto a cada concentracin.
Lmite de deteccin (LD) y lmite de cuantificacin (LC)
El lmite de deteccin es la menor concentracin que puede detectarse con

razonable certeza por un procedimiento analtico determinado. Es la concentracin de
170
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
analito que da una seal, y, igual a la del blanco, y0, ms tres veces la desviacin estndar
del blanco, Sb:
y = y0 + 3 S b
Ecuacin III. 9
El lmite de cuantificacin se define como la menor concentracin de analito que

puede ser determinada con aceptable exactitud. Se calcula de la forma descrita en la
Ecuacin III. 9 pero sustituyendo el 3 por 10.
En los mtodos separativos, el error se evala a partir del rendimiento (Ra) de la
separacin, que se define como la relacin entre la cantidad, a, separada y la cantidad
inicial de a, a0:
Ra =
a
a0
Ecuacin III. 10
3.5. DETERMINACIN DE LA TOXICIDAD
La medida de la toxicidad se ha realizado mediante el ensayo LUMIStox, conforme

a la NORMA UNE-EN ISO 11348-2 (UNE-EN ISO 11348-2), utilizando bacterias marinas
luminiscentes Vibrio fischeri NRRL-B-11177 como microorganismos de prueba.
3.5.1. FUNDAMENTO
La medida de toxicidad se basa en la inhibicin de la intensidad luminosa de la

bacteria marina de la cepa Vibrio fisheri despus de un determinado tiempo de exposicin
con la sustancia txica y en comparacin con un control no txico.
171
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
3.5.2. REACTIVOS Y DISOLUCIONES

9 Bacterias luminiscentes secadas en lquido de la cepa Vibrio fischeri NRRL-
B-11177 de DrLANGE. Deben almacenarse en congelador a -18 C/-20 C.

9 Solucin de reactivacin; glucosa/cloruro sdico tamponado a pH 7 de
DrLANGE.
9 Solucin de NaCl al 2 %.
9 Cloruro sdico (NaCl, P.A. de Panreac).
3.5.3. EQUIPOS
3.5.3.1. LUMIStox
Equipo de medicin, unidad de medida y anlisis para el test de bacterias luminosas

en los ensayos de toxicidad conforme a DIN/EN/ISO 11348-2 (UNE EN ISO 11348-2).
Se utiliz el equipo LUMIStox 300 de DR. LANGE y cubetas de vidrio (LZP 187)
de DrLANGE.
3.5.3.2. Unidad de incubacin
Bloque termostatizado a 15 C para mantener a temperatura constante las muestras

utilizadas en el LUMIStox 300, cumple con la NORMA internacional ISO DIN 11348
(UNE EN ISO 11348-2).
3.5.4. PROCEDIMIENTO
Reactivacin de las bacterias luminiscentes
En primer lugar se descongela la solucin de reactivacin en un vaso de precipitado

con agua, se agita con energa y una vez descongelada se mantiene a 15 C en la unidad de
172
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
incubacin durante 15 min. A continuacin se sacan las bacterias del congelador y se agita
suavemente el vial durante 2 min en un vaso de precipitado con agua a T< 25 C.
Se aaden 0.5 ml de la solucin de reactivacin al vial de bacterias y se agita
suavemente hasta formar una suspensin. Se mantiene el vial en la unidad de incubacin
durante 15 min. Se mezclan las bacterias en suspensin con el resto de la solucin de
reactivacin y se homogeneiza suavemente. Una vez homogeneizado se aaden 0.5 ml de
dicha solucin a las cubetas vacas del incubador y se termostatiza durante 15 minutos.
Las bacterias comienzan a emitir luz inmediatamente despus de su reconstitucin
y estn listas para su utilizacin en el ensayo, adems las bacterias reactivadas deben
utilizarse en un plazo inferior a 4 horas.
Preparacin de la muestra y de la serie de dilucin
En primer lugar se aaden a la muestra 0.3 g NaCl en forma slida por cada 15 ml
de agua. Se introducen 3 ml de muestra en la cubeta correspondiente del incubador. El pH
de la muestra debe ser de 7 0.2 de acuerdo con la normativa, si el pH es inferior a 6.0 o
superior a 8.0, se puede producir una inhibicin de la luz relacionada con el pH, en este
caso se ajusta el pH aadiendo HCl o NaOH. Si las muestras presentan turbidez se filtran o
centrifugan antes de realizar el ensayo.
Para la serie de dilucin se introducen 1.5 ml de la solucin de NaCl al 2% en las
cubetas correspondientes y se van transfiriendo 1.5 ml desde la cubeta que contiene la
muestra hasta la cubeta en penltima posicin.
Medida
En primer lugar se prepara el LUMIStox, para ello se selecciona el modo de

medicin EC, la prueba 480 y se cambian los valores de la concentracin de la muestra si
es necesario.
A continuacin se mide la intensidad luminosa a tiempo cero y para tiempos de
incubacin de 15 y 30 minutos respectivamente. Todas las medidas se realizan por
duplicado. El tiempo de contacto de la suspensin de ensayo con las bacterias
luminiscentes debe ser el mismo para todas las muestras de la serie de dilucin, para ello
173
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
debe transcurrir el mismo intervalo de tiempo entre adiciones sucesivas, que suele ser de
20 segundos.
3.5.5. EVALUACIN
Efecto Inhibidor sobre las bacterias luminiscentes
Los valores iniciales de intensidad luminosa, medidos para todas las muestras de
ensayo, se corrigen mediante un factor que tiene en cuenta la disminucin de intensidad
luminosa que se produce de forma natural, an en ausencia de muestra txica.
fk =
I t (0)
I 0 (0)
Ecuacin III. 11
donde:
fk: factor de correccin para el tiempo de incubacin de 15 o 30 minutos.
I0 (0): intensidad luminosa a tiempo cero, antes de la adicin de la
suspensin de bacterias.
It (0): intensidad luminosa tras un tiempo de incubacin de 15 o 30 minutos.
La intensidad luminosa se expresa en unidades de luminiscencia relativa.
El efecto inhibidor de la muestra de ensayo para un tiempo de incubacin t, se
calcula mediante la expresin:
Ht =
( I 0t (c) I t (c))
100
I 0 t (c )
Ecuacin III. 12
donde
I 0 t (c ) = f k I 0 ( c )
Ecuacin III. 13
174
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Siendo f k el factor de correccin promedio de las muestras de control.

Para la evaluacin de las relaciones concentracin/efecto, se calcula para cada nivel
de dilucin la funcin Gamma. Esta funcin Gamma es la razn entre la intensidad de luz
perdida por la solucin de bacterias y la que queda despus de que stas han sido expuestas
a la accin de una muestra txica, y se puede evaluar por la ecuacin:
t =
Ht
f I (c ) I t (c )
= k 0
100 H t
I t (c )
Ecuacin III. 14
siendo:
I0 (0) y It (0): lecturas de intensidad luminosa de la cubeta que contiene
concentracin 0 a tiempo 0 y t.
I0 (c) y It (c): lecturas de intensidad luminosa en la cubeta que contiene
concentracin c a tiempo 0 y t.
De los resultados obtenidos se deduce una relacin lineal entre la funcin y la
concentracin de tensioactivo empleado de la siguiente forma:
log(c ) = blog( ) + log(a )
Ecuacin III. 15
Una reduccin de luz del 50% corresponde a un valor de = 1, ya que en este caso
la intensidad de luz perdida ser igual a la intensidad de luz remanente. En la Figura III. 17
se presenta, a ttulo de ejemplo, la linealizacin para el tensioactivo Findet 1214N/23.
175
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
100
y = 14.25x0.9406
R2 = 0.9891
10
log c
0
0.0
0.1
log
1.0
10.0
Figura III. 17.- Relacin lineal entre la funcin y la concentracin para el tensioactivo
Findet 1214N/23
3.5.5.2. Determinacin de los valores de EC
El valor de la toxicidad se mide como EC50 y EC20 que son, respectivamente, la

concentracin de tensioactivo en mg/L que produce una inhibicin del 50% y del 20%
despus de 15 30 minutos de exposicin con el txico. Los valores de EC50 y EC20 se
calculan dando a los valores 1 y 0.25, respectivamente.
3.5.5.3. Determinacin de la toxicidad durante el proceso de biodegradacin
Durante el proceso de biodegradacin del tensioactivo se analiz la evolucin de la

toxicidad de los metabolitos generados. Los resultados obtenidos para este caso se
determinaron como la dilucin de la muestra, (expresada en tanto por ciento, D50) que
produce una inhibicin del 50%, unidades Equitox/m3. Esta forma de expresar la toxicidad
presenta la ventaja de que su valor es mayor cuanto mayor es la toxicidad de la muestra. En
estos casos la toxicidad de la muestra se calcula a partir de la expresin:
176
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
TU =
1
100, Equitox/m 3
D 50 (%)
Ecuacin III. 16
3.6. PROTOCOLO DE LIMPIEZA

Limpieza del material corriente de laboratorio
Todo el material corriente de laboratorio, utilizado en ensayos o en anlisis, se

somete a un protocolo de limpieza para eliminar cualquier resto de agentes de superficie
que pueda interferir en los resultados de los anlisis. El protocolo seguido es el siguiente:
Limpieza del material de vidrio con mezcla crmica (H2S04, K2Cr2O7) de

Scharlau Chemie, S.A.
Enjuague con agua corriente.
Enjuague final con agua desionizada.

Finalmente antes de usar el material, ste se seca en una estufa hasta que quede
perfectamente seco.
Limpieza del aparato de extraccin en corriente gaseosa
El protocolo de limpieza de la columna y el disco de vidrio sinterizado es el

siguiente:
Burbujeo y enjuague con metanol (Calidad Q.P.) de Panreac para eliminar

cualquier resto de tensioactivo.
Enjuague con disolucin alcalina de EDTA 0.1 M. pH 10 (Wyrwas, 1993).
Enjuague con disolucin etanlica de HCl al 10 % en peso.
Enjuague final con agua desionizada.
177
TESIS DOCTORAL
MATERIALES Y MTODOS
Limpieza de los crisoles filtrantes de vidrio sinterizado
Los crisoles de vidrio sinterizado utilizados en el anlisis de tensioactivos no

inicos por el mtodo de Wickbold se limpian al finalizar cada sesin, segn el siguiente
protocolo;
Tras pasar 24 h sumergidos en una disolucin alcalina de EDTA 0.1 M, se filtra

una pequea cantidad de la misma para garantizar que el filtro est libre de
cualquier in metlico.
Filtracin con metanol para eliminar cualquier resto de tensioactivo que pudiese
quedar absorbido.
178
Enjuague y filtracin con agua desionizada.
4. RESULTADOS
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
En este captulo se indican los resultados experimentales primarios obtenidos en los

ensayos de biodegradacin y toxicidad. En el apartado 4.1. se presentan los resultados
correspondientes a los ensayos de biodegradacin de tensioactivos separados en cinco
bloques principales: biodegradabilidad de alcoholes grasos etoxilados, biodegradabilidad
de nonilfenol polietoxilado, biodegradabilidad de alquilpoliglucsidos, biodegradabilidad
del LAS y biodegradabilidad de mezclas de alcoholes grasos etoxilados y
alquilpoliglucsidos.
En el apartado 4.2. se presentan los resultados correspondientes a la toxicidad de
tensioactivos, y en el apartado 4.3. los resultados de toxicidad de tensioactivos durante el
proceso de biodegradacin.
4.1. BIODEGRADABILIDAD DE TENSIOACTIVOS
Para la presentacin de los resultados de biodegradabilidad de tensioactivos las

tablas muestran el tensioactivo ensayado, el tipo de ensayo de biodegradacin, el mtodo
empleado para la medida de la concentracin de tensioactivo o para el seguimiento de la
biodegradabilidad, la identificacin del experimento y las condiciones generales en las que
se ha realizado el ensayo.
4.1.1. BIODEGRADABILIDAD DE ALCOHOLES GRASOS ETOXILADOS
En la Tabla IV. 1 y Tabla IV. 2 se muestran los resultados de los ensayos de

biodegradacin para el tensioactivo Findet 10/15, en la Tabla IV. 3 aparecen los resultados
para el Findet 10/18. De la Tabla IV. 4 a la Tabla IV. 6 se muestran los resultados
correspondientes para el Findet 1618A/18. Para los tensioactivos Findet 1618A/23 y Findet
1214N/16 los resultados de biodegradabilidad se muestran en la Tabla IV. 7 y Tabla IV. 8
respectivamente. Finalmente los resultados de biodegradabilidad correspondientes al
Findet 1214N/23 aparecen en la Tabla IV. 9 a la Tabla IV. 11.
Para estudiar el efecto de la concentracin sobre la biodegradabilidad se han
realizado, para algunos tensioactivos, ensayos de biodegradacin a diferentes
concentraciones iniciales de ensayo, comprendidas entre 5 y 50 mg/L.
181
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
Tabla IV. 1.- Ensayo esttico de biodegradacin para el tensioactivo Findet 10/15. Mtodo
del yodo-yoduro
TENSIOACTIVO: FINDET 10/15
ENSAYO DE BIODEGRADACIN: Esttico
MEDIDA DE LA CONCENTRACIN: Mtodo del yodo-yoduro
Identificacin del experimento: F1
Condiciones del ensayo: 25 C, Oscuridad, Agitacin orbital
Concentracin inicial: 5 mg/L
Tiempo, h
Conc, mg/L
0.00
3.762
13.00
2.270
37.00
2.728
61.00
2.321
85.00
0.734
de Wickbold
MEDIDA DE LA CONCENTRACIN: Mtodo de Wickbold
potenciomtrico con el Reactivo de Dragendorff
182
Tiempo, h
Conc, mg/L
0.00
2.128
37.00
1.756
61.00
0.520
70.00
0.100
111.00
0.205
157.00
0.135
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
del yodo-yoduro
Tiempo, h
Conc, mg/L
0.00
2.800
9.00
2.970
21.00
2.520
46.00
1.000
70.50
0.400
98.50
0.550
142.50
0.300
165.50
0.000
190.50
0.000
183
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
Tabla IV. 4.- Ensayo esttico de biodegradacin para el tensioactivo Findet 1618A/18.
Mtodo del yodo-yoduro. Influencia de la concentracin

TENSIOACTIVO: FINDET 1618A/18
MEDIDA DE LA BIOMASA: Recuento de UFC
Identificacin: F3, F4, F5
Conc. inicial: 5 mg/L
184
Tiempo,
h
0.00
Conc.,
mg/L
4.458
Biomasa,
UFC/ml
14.75
Conc.,
mg/L
24.674
Biomasa,
UFC/ml
1750
Tiempo,
h
0.00
15000
Tiempo,
h
0.00
Conc.,
mg/L
44.817
4.580
21500
4.50
26.193
3845
15.00
47.853
22.75
1.634
19350
20.50
24.895
21025
23.00
44.302
39.25
0.876
33000
28.50
12.403
67000
39.50
27.136
46.25
--
416000
46.50
4.591
78875
70.50
17.632
70.25
0.304
36000
53.00
3.519
--
87.50
13.273
87.25
0.188
20000
70.50
2.447
--
113.50
7.737
113.25
0.347
--
93.000
3.020
341000
159.50
4.468
159.25
0.296
--
166.50
1.811
--
184.16
3.462
183.91
0.401
475000
189.50
1.310
573500
236.00
3.462
213.50
1.998
1125000
237.50
1.083
1250000
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
Tabla IV. 5.- Ensayo dinmico de biodegradacin para el tensioactivo Findet 1618A/18.
Mtodo de Wickbold
ENSAYO DE BIODEGRADACIN: Dinmico
MEDIDA DE LA CONCENTRACIN: Mtodo de Wickbold potenciomtrico
con el Reactivo de Dragendorff
Identificacin: F15
Condiciones del ensayo: Temperatura ambiente
t, horas
Conc., mg
Biodeg., %
0.00
0.068
99.317
O2 disuelto,
mg/L
3.80
24.50
0.176
98.244
3.20
1760
47.50
0.224
97.763
3.00
1570
71.50
0.229
97.714
4.50
3230
98.00
0.284
97.162
3.30
1780
143.00
0.202
97.982
2.90
2490
167.00
0.197
98.033
1.90
2440
191.50
0.222
97.781
4.60
1470
214.00
0.124
98.760
4.50
1950
239.50
0.272
97.280
3,.70
1480
265.00
0.248
97.520
2.00
1740
312.00
0.116
98.839
2.10
1080
336.50
0.181
98.193
2.40
880
362.00
0.106
98.936
2.80
1110
386.00
0.147
98.528
3.20
3580
409.00
0.090
99.101
1.70
1100
434.00
0.124
98.755
2.80
2360
482.50
0156
98.438
4.80
3150
505.50
0.168
98.324
3.80
3810
554.00
0.146
98.544
3.70
4440
575.50
0.140
98.598
4.00
4510
S.S., mg/L
1580
185
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
Tabla IV. 6.- Ensayo respiromtrico para el tensioactivo Findet 1618A/18.
Influencia de la concentracin
MTODO DE ENSAYO: Respirometra manomtrica
MTODO DE ANLISIS: DBO
Identificacin: F17
Condiciones del ensayo: 25 C, Oscuridad, Agitacin
D.B.O., mgO2/l
Tiempo,
h
186
Blanco
Conc. inicial:
Conc. inicial:
25 mg/L
50 mg/L
0.00
0.0
0.0
0.0
0.75
0.0
0.0
0.0
2.25
0.0
0.0
0.0
21.33
0.0
0.0
0.0
46.00
0.0
0.0
0.0
53.00
0.0
0.0
0.0
70.00
0.0
0.0
0.0
96.00
0.0
0.5
0.0
141.33
0.0
8.2
1.0
146.67
0.0
9.3
6.0
152.00
0.0
11.5
12.0
166.08
0.0
13.7
14.0
177.17
0.0
16.4
14.0
189.83
0.0
19.7
18.0
193.33
0.0
19.7
18.0
213.33
0.0
16.9
15.0
215.75
0.0
19.1
21.0
218.00
0.0
22.4
29.0
221.00
0.0
19.7
21.0
237.75
0.0
18.6
21.0
311.83
0.0
20.8
26.0
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
Mtodo del yodo-yoduro

Identificacin: F6
Tiempo, h
Conc., mg/L
0.00
5.234
Biomasa,
UFC/ml
0
8.00
4.927
22.50
5.285
27.00
5.250
--
31.25
4.943
10450
47.00
0.773
910000
56.00
0.521
344000
71.00
0.683
1527500
79.75
0.557
--
98.00
0.430
3960000
143.00
0.209
2183334
167.50
0.553
2500
191.50
0.437
6500
215.50
0.528
1000000
239.50
0.517
780000
187
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
Tabla IV. 8.- Ensayo esttico de biodegradacin para el tensioactivo Findet 1214N/16.
Mtodo del yodo-yoduro. Influencia de la concentracin

TENSIOACTIVO: FINDET 1214N/16
Tiempo, Conc., Biomasa, Tiempo,

h
mg/L UFC/ml
h
0.00
4.558
2050
0.00
Conc.,
mg/L
28.343
Biomasa,
UFC/ml
265

Tiempo, Conc., Biomasa,
h
mg/L UFC/ml
0.00
46.665
295
14.50
5.159
1000
15.75
25.451
3065
5.75
52.287
30
22.50
1.250
43200
23.25
25.027
102500
21.50
47.080
540
38.50
0.741
3710000
39.50
14.350
--
29.25
46.874
261500
43.50
0.515
--
47.00
11.944
--
45.75
39.172
8240000
62.50
0.408
880000
64.00
7.260
6500000
53.25
36.346
1048000
66.50
0.450
--
71.00
6.458
--
69.75
37.843
--
86.50
0.462
125000
87.50
5.087
--
78.75
37.264
--
182.50
0.334
--
159.50
2.186
70800000
94.25
37.261
895000
185.00
1.801
8260000
119.75
33.285
--
209.50
1.839
7550000
165.75
33.947
1165000
189.50
34.306
5875000
213.75
27.426
7607500
237.50
27.310
7645000
262.25
23.501
4342500
334.25
15.832
--
358.25
17.698
--
381.75
19.297
--
188
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
Tabla IV. 9.- Ensayo esttico de biodegradacin para el tensioactivo Findet 1214N/23. Mtodo
del yodo-yoduro. Influencia de la concentracin

Identificacin: F10, F11, F12, F13, F14
Conc. inicial:
Conc. inicial:
Conc. inicial:
Conc. inicial:
Conc. inicial:
5 mg/L
15 mg/L
20 mg/L
25 mg/L
50 mg/L
t, h
Conc.,
mg/L
t, h
Conc.,
mg/L
Biom.,
UFC/ml
t, h
Conc.,
mg/L
Biom.,
UFC/ml
t, h
Conc.,
mg/L
t, h
Conc.,
mg/L
Biom.,
UFC/ml
0.0
4.57
0.0
14.55
4300
0.0
19.13
498
0.0
23.7
0.0
47.0
80250
22.5
3.37
15.0
15.26
1000
6.5
18.55
255
15.0
19.6
16.0
48.6
243600
33.0
1.61
23.2
13.27
55250
22.5
17.62
--
24.2
9.0
23.5
48.1
1100000
46.5
0.35
39.0
2.17
7500000
26.5
--
221667
35.7
3.0
39.7
31.8
--
58.2
0.42
63.5
1.41
5350000
31.0
6.72
1205000
51.2
2.0
49.0
28.2
--
70.2
0.47
87.5
2.05
1314000
46.5
2.08
2260000
60.2
2.7
65.0
24.1
2765000
85.0
0.50
159.5
0.96
2870000
54.5
1.24
3020000
75.2
3.5
72.0
23.5
--
73.7
1.76
--
160.0
3.5
92.0
20.0
91500
78.8
1.82
15700000
136.0
15.8
1170000
95.3
2.33
13350000
160.0
13.3
1819500
167.5
1.95
3260000
184.0
12.2
12579334
198.5
1.76
1580000
209.0
9.5
4180000
232.0
6.6
5035000
305.0
6.125
--
328.0
4.538
--
353.0
4.761
--
376.0
4.450
--
189
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
Tabla IV. 10.- Ensayo esttico de biodegradacin para el tensioactivo Findet 1214N/23. Mtodo
de Wickbold. Influencia de la concentracin.

MEDIDA DE LA CONCENTRACIN: Mtodo de Wickbold con el Reactivo
de Dragendorff potenciomtrico
190
Tiempo,
h
0.00
Conc.,
mg/L
4.650
Tiempo,
h
0.00
Conc.,
mg/L
11.289
Tiempo,
h
0.00
Conc.,
mg/L
26.130
22.50
4.358
15.00
17.451
15.00
22.509
33.00
0.990
23.25
9.625
24.25
19.525
46.50
0.456
39.00
1.087
35.75
1.333
56.00
0.275
48.00
0.188
51.25
0.471
70.25
0.236
63.50
0.327
60.25
0.303
109.00
0.153
87.50
0.011
75.25
0.243
111.50
0.037
101.58
0.137
159.50
0.001
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
Tabla IV. 11.- Ensayo dinmico de biodegradacin para el tensioactivo Findet
1214N/23. Mtodo de Wickbold.

ENSAYO DE BIODEGRADACIN: Dinmico
MEDIDA
DE
LA
CONCENTRACIN:
espectrofotomtrico con el Reactivo de Dragendorff
Identificacin: F16
Condiciones del ensayo: Temperatura ambiente
Mtodo
de
Wickbold

D.Q.O., mgO2/l
Da
Conc.,
mg
Biodeg.,
%
O2,
mg/L
S.S.,
mg/L
0.172
98.453
7.1
0.090
99.553
0.550
D.B.O.,
mgO2/l
Agua Agua
Bruta Tratada
169
5
2730
Agua
Bruta
321
Agua
Tratada
65
4.2
2800
--
--
--
--
96.078
5.5
3380
278
31
--
--
0.210
97.628
1.8
2540
--
--
--
--
0.140
98.528
3.4
2230
261
28
--
--
0.095
99.003
3.6
--
--
--
--
--
0.097
99.178
3.0
--
--
--
241.7
12.5
0.186
98.113
3.2
2130
261
41
--
--
0.099
98.938
3.8
2010
--
--
--
--
10
0.076
99.213
7.9
2930
321
65
--
--
11
0.194
98.008
6.2
2420
--
--
--
--
12
--
--
3.1
2390
301
28
--
--
13
99.099
99.100
0.3
--
--
--
--
--
14
99.840
99.800
4.7
--
--
--
175
15
98.034
98.000
6.2
2570
244
12
--
--
16
99.007
99.000
6.7
2610
--
--
--
--
17
98.936
98.900
--
3270
267
--
--
18
98.252
98.300
--
3450
--
--
--
--
19
99.067
99.100
--
3420
281
11
--
--
20
98.745
98.800
--
--
--
--
--
--
21
--
--
--
--
--
--
125
22
99.100
99.100
--
4570
230
--
--
23
98.780
98.800
--
3480
--
--
--
--
24
--
--
--
--
298
11
--
--
29
--
--
--
--
--
--
112
36
--
--
--
--
--
--
119
43
--
--
--
--
--
--
150
5
191
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
4.1.2. BIODEGRADABILIDAD DEL NONILFENOL POLIETOXILADO
En la Tabla IV. 12 y Tabla IV. 13 se muestran los resultados experimentales obtenidos

durante el ensayo esttico de biodegradacin para el NPEO. El anlisis del tensioactivo se ha
realizado por el mtodo del yodo-yoduro (Tabla IV. 12) y por el mtodo de Wickbold (Tabla IV.
13). Para analizar el efecto de la concentracin los experimentos se realizaron a concentraciones
iniciales de tensioactivo de 5, 25 y 50 mg/L.
Tabla IV. 12.- Ensayo esttico de biodegradacin para el tensioactivo NPEO. Mtodo del yodo-
yoduro. Influencia de la concentracin

TENSIOACTIVO: NONILFENOL POLIETOXILADO
Identificacin: N1, N2, N3
Tiempo, Conc., Biomasa, Tiempo,

h
mg/L UFC/ml
h
0.00
3.818
5800
0.00
192
Conc., Biomasa, Tiempo, Conc., Biomasa,

mg/L
UFC/ml
h
mg/L UFC/ml
23.072
450
0.00
43.058
1745
14.50
3.956
600
16.00
24.571
24300
5.75
45.970
325
22.50
4.050
2200
23.25
22.328
149000
21.50
43.046
22950
38.50
4.204
--
39.75
21.612
167000
29.25
44.412
318.500
43.00
3.478
--
49.00
21.144
116000
45.75
36.744
1095000
62.50
0.336
695000
65.00
11.102
238000
53.25
19.853
5.465000
66.50
0.373
--
72.00
5.044
3240000
69.75
17.427
5520000
86.50
0.196
460000
87.50
--
2565000
78.75
17.095
--
182.50
0.053
--
92.00
3.874
--
94.25
16.653
50000
136.50
2.391
--
119.75
11.430
--
160.00
3.081
2900000
165.75
8.887
5070000
184.00
2.446
665000
189.50
7.446
5180000
209.00
2.215
1530000
213.75
6.599
6280000
232.00
0.700
--
237.50
7.250
5650000
305.00
1.000
--
262.25
5.942
--
328.00
0.528
--
334.25
2.440
--
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
Tabla IV. 13.- Ensayo esttico de biodegradacin para el tensioactivo NPEO. Mtodo del
Wickbold
MEDIDA DE LA CONCENTRACIN: Mtodo de Wickbold espectrofotomtrico
con el Reactivo de Dragendorff
Identificacin: N1
Tiempo,
h
0.00
Conc., mg/L
15.00
4.031
20.00
3.525
25.00
3.755
39.25
3.569
49.00
2.552
63.00
2.568
87.00
0.276
113.08
0.362
159.75
0.219
4.234
193
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
4.1.3. BIODEGRADABILIDAD DE ALQUILPOLIGLUCSIDOS
En la Tabla IV. 14 a Tabla IV. 17 se muestran los resultados experimentales obtenidos

durante el ensayo esttico de biodegradacin y mediante el mtodo de la botella cerrada para los
APG. El anlisis del tensioactivo se ha realizado por el mtodo del TOC y midiendo el oxgeno
disuelto respectivamente. Para analizar el efecto de la concentracin los experimentos se
realizaron a concentraciones iniciales de tensioactivo de 12, 20 y 100 mg/L.
Tabla IV. 14.- Ensayo esttico de biodegradacin y mtodo de la botella cerrada para el
tensioactivo GCP 215. Mtodo del TOC

TENSIOACTIVO: GCP 215
ENSAYO DE BIODEGRADACIN: Esttico y Mtodo de la Botella Cerrada
MEDIDA DE LA CONCENTRACIN: TOC
Identificacin: G1
194
Tiempo,
Conc.,
mg/L
0.00
3.00
6.50
9.50
22.75
26.50
30.00
46.50
54.00
71.00
73.00
142.75
150.00
167.50
190.75
14.409
-8.504
-12.761
-12.486
8.902
7.543
-3.835
4.522
-1.776
--
O2 Dis.
O2 Dis.
Blanco,
Muestra,
mgO2/l
mgO2/l
5.2
4.4
4.5
4.4
4.5
4.3
4.4
4.4
4.1
4.0
4.0
4.0
4.1
4.0
4.0
5.6
5.1
4.3
4.0
3.9
3.8
3.7
2.5
2.3
1.3
1.3
1.0
1.1
1.1
1.1
Biomasa,
UFC/ml
1367.50
-1757.50
-173500
-229500
1320000
1210000
-181500
66500
-155000
455000
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
tensioactivo GCP 600. Mtodo del TOC. Influencia de la concentracin

Identificacin: G2, G3
O2 Dis.
O2 Dis.
Blanco,
Muestra,
mgO2/l
mgO2/l
0.00
7.4
8.6
1510
0.00
99.46
7.2
2450
2.00
4.0
6.5
--
1.25
--
6.7
--
6.50
4.1
6.4
51350
3.00
--
5.2
--
9.00
3.8
5.9
--
15.50
155.78
5.2
271000
22.50
3.7
5.5
277250
19.00
--
5.1
--
26.00
3.6
4.9
--
23.00
131.01
4.7
455000
30.50
3.5
4.7
565250
39.50
56.71
4.4
1945000
33.00
3.5
3.9
--
42.25
--
4.2
--
47.50
3.5
2.2
695000
44.25
--
4.1
--
50.00
3.2
2.1
--
47.50
47.21
3.9
2420000
70.50
3.1
1.2
123500
49.50
--
3.9
--
73.50
3.0
1.0
--
63.50
--
0.4
5177500
95.25
3.1
0.7
45500
66.00
--
0.0
--
142.75
2.9
0.3
170000
71.25
57.02
--
3640000
150.00
2.9
0.3
--
88.50
50.40
--
4017000
169.00
2.8
0.2
410000
161.0
51.80
--
3920000
191.00
2.8
0.1
635000
214.00
2.7
0.1
--
t, h
Biomasa,
UFC/ml
Conc.,
t, h
mg/L
O2 Dis.
Muestra,
Biomasa,
UFC/ml
mgO2/l
195
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
Tabla IV. 16.- Mtodo de la botella cerrada para el tensioactivo GCP 650
ENSAYO DE BIODEGRADACIN: Mtodo de la Botella Cerrada
Identificacin: G4
196
Tiempo,
h
O2 Dis. Blanco,
mgO2/l
0.00
7.4
O2 Dis.
Muestra,
mgO2/l
8.1
2.00
4.0
6.7
--
6.00
4.1
7.2
20775
9.00
3.8
6.9
--
22.25
3.7
5.2
386000
26.00
3.6
4.8
--
30.50
3.5
4.6
690000
33.00
3.5
4.2
--
47.50
3.5
3.3
380000
50.00
3.2
3.2
--
70.50
3.1
3.0
43575
73.50
3.1
2.4
--
95.25
3.1
2.5
28500
142.75
2.9
2.3
80000
150.00
2.9
2.4
--
167.50
--
--
30000
169.00
2.8
2.4
--
191.00
2.8
2.3
285000
214.00
2.7
1.9
--
Biomasa,
UFC/ml
3172.50
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
Tabla IV. 17.- Esttico y Mtodo de la botella cerrada para el tensioactivo GCP 650
Identificacin: G5
O2 Dis.
O2 Dis.
Blanco,
Muestra,
mgO2/l
mgO2/l
15.393
5.6
4.7
1753
0.50
--
5.7
4.5
--
3.50
--
5.6
4.5
--
6.50
38.272
5.3
4.4
945
8.50
--
5.9
4.7
--
22.75
34.765
--
--
151000
23.25
--
5.7
4.2
--
24.25
--
5.6
4.0
--
30.50
--
5.4
4.1
642500
32.00
--
5.6
4.1
--
33.25
--
5.4
3.9
--
47.00
--
5.3
3.6
665000
49.00
--
5.4
3.2
--
54.75
32.928
5.9
3.2
393500
56.25
--
5.5
3.0
--
71.00
--
5.2
1.9
500000
94.75
--
5.9
0.9
4300000
147.00
--
5.8
0.7
--
167.75
17.898
5.8
0.9
14200000
190.75
17.564
4.9
0.7
15200000
215.00
13.222
5.8
0.8
7242500
Tiempo,
Conc.,
mg/L
0.00
Biomasa,
UFC/ml
197
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
En la Tabla IV. 18 a Tabla IV. 20 se muestran los resultados experimentales de

biodegradabilidad obtenidos para los APG mediante el mtodo respiromtrico
manomtrico. El anlisis del tensioactivo se ha realizado mediante la DBO. Para estudiar el
efecto de la concentracin los experimentos se realizaron a concentraciones iniciales de
tensioactivo de 15, 25, 50, 75 y 100 mg/L, excepto para el GCP 650 que solo se analiz a
50 mg/L.
Tabla IV. 18.- Ensayo respiromtrico de biodegradacin para el tensioactivo GCP 215.
Identificacin: RM1
D.B.O., mgO2/l
Tiempo,
h
0.00
4.50
21.50
25.00
29.50
45.25
48.50
52.50
69.50
72.92
140.25
149.00
166.50
189.75
198.50
214.25
237.25
309.50
335.50
198
Blanco
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
Conc.
Conc.
Conc.
Conc.
Conc.
Inicial:
Inicial:
Inicial:
Inicial:
Inicial:
15 mg/L
25 mg/L
50 mg/L
75 mg/L
100 mg/L
0.5
0.0
0.0
0.0
0.0
2.1
2.7
3.2
4.9
7.6
10.6
11.5
12.0
12.5
13.5
13.1
13.1
14.7
15.3
1.6
1.6
1.6
1.6
1.6
2.7
4.3
5.4
6.0
9.8
19.7
20.2
19.1
21.3
20.8
23.5
22.4
25.2
25.7
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
1.0
3.2
4.9
8.2
9.8
24.1
25.7
27.9
31.2
31.2
34.5
35.6
37.8
37.8
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.5
2.1
8.2
10.9
25.2
26.8
29.5
33.4
33.9
36.7
36.7
37.8
38.3
0.5
0.0
0.0
0.0
0.5
3.2
4.9
7.1
12.0
14.7
31.2
32.8
35.0
38.3
38.9
42.7
43.2
44.3
43.8
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
Identificacin: RM2
D.B.O., mgO2/l
Tiempo,
h
0.00
5.00
22.00
25.75
29.50
45.75
70.00
93.75
96.50
119.50
121.50
165.75
168.50
170.50
173.50
176.00
190.00
194.50
197.25
197.50
214.00
222.67
238.00
245.50
248.00
262.50
264.50
334.00
343.00
358.00
382.00
406.25
432.25
Blanco
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
Conc.
Conc.
Conc.
Conc.
Conc.
Inicial:
Inicial:
Inicial:
Inicial:
Inicial:
15 mg/L
25 mg/L
50 mg/L
75 mg/L
100 mg/L
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.5
0.5
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
1.6
1.6
1.6
1.6
2.1
2.1
2.1
2.1
2.7
2.7
2.7
2.7
2.7
2.7
2.7
2.7
3.2
3.2
3.8
3.8
3.8
4.3
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
4.3
4.3
4.3
4.3
4.9
5.4
5.4
5.4
5.4
6.0
6.0
6.0
6.0
6.5
6.5
6.5
7.6
7.6
7.6
8.2
8.2
8.7
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
2.1
2.7
6.0
6.0
10.9
10.9
11.5
11.5
11.5
12.0
12.0
12.0
12.0
12.6
12.6
12.6
12.6
12.6
13.1
13.1
13.1
13.7
13.7
14.2
14.2
14.7
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
0.0
2.7
2.7
8.2
8.2
8.2
8.7
8.7
9.3
9.3
9.3
9.3
9.8
9.8
9.8
9.8
9.8
10.4
10.4
10.9
10.9
11.5
11.5
11.5
11.5
199
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
Tabla IV. 20.- Ensayo respiromtrico de biodegradacin para el tensioactivo GCP 650
Identificacin: RM3
D.B.O., mgO2/l
200
Conc. Inicial:
Tiempo,
h
Blanco
50 mg/L
0.75
0.0
0.0
2.25
0.0
0.0
21.33
0.0
0.0
46.00
0.0
0.0
53.33
0.0
0.0
70.00
0.0
0.0
96.00
0.0
0.0
141.33
0.0
0.0
146.67
0.0
0.0
152.00
0.0
0.0
166.08
0.0
0.0
177.17
0.0
0.0
189.83
0.0
0.0
193.33
0.0
0.5
213.33
0.0
0.5
215.75
0.0
1.0
218.00
0.0
2.0
221.00
0.0
2.1
237.75
0.0
2.5
311.83
0.0
3.8
336.83
0.0
4.3
478.00
0.0
4.3
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
4.1.4. BIODEGRADABILIDAD DEL LAS
En la Tabla IV. 21 se muestran los resultados experimentales obtenidos durante el

ensayo esttico de biodegradacin para el LAS. El anlisis del tensioactivo se ha realizado
por el mtodo simplificado de anlisis para determinacin de sustancias activas al azul de
metileno. Para analizar el efecto de la concentracin los experimentos se realizaron a
concentraciones iniciales de tensioactivo de 5, 25 y 50 mg/L.
Tabla IV. 21.- Ensayo esttico de biodegradacin para el LAS. Mtodo simplificado de
anlisis para determinacin de sustancias activas al azul de metileno. Influencia de la

concentracin
TENSIOACTIVO: LAS
MEDIDA DE LA CONCENTRACIN: Mtodo simplificado de anlisis para determinacin de
sustancias activas al azul de metileno
Identificacin: L1, L2, L3
Tiempo,
h
Conc.,
mg/L
Biomasa,
UFC/ml
Tiempo,
h
Conc.,
mg/L
Biomasa,
UFC/ml
Tiempo,
h
Conc.,
mg/L
Biomasa,
UFC/ml
0.00
4.48
1512..500
0.00
29.83
1600
0.00
44.33
72
5.70
4.27
1422.500
4.50
27.89
15550
6.50
46.31
--
21.92
4.48
1977.500
20.50
27.38
22200
26.50
--
200
25.20
4.51
--
28.50
25.15
33.325
31.00
52.71
1700
29.50
4.51
3180
46.50
23.80
13850
46.50
42.11
78000
46.20
4.30
7650
53.00
23.40
176000
54.50
--
110500
53.75
3.88
7000
70.50
22.40
2800
78.75
39.61
245250
70.00
3.16
7000
93.50
22.26
103500
95.25
36.13
305500
94.50
1.17
30000
166.50
7.79
835000
167.50
41.94
--
166.25
0.19
18000
189.50
5.54
2705000
198.50
38.94
715500
189.75
0.15
3500
213.50
5.85
2970000
215.50
34.51
--
213.80
0.05
4000
237.50
4.12
1657500
264.50
21.54
--
238.25
0.12
5000
334.50
1.42
--
342.75
13.75
720250
262.25
0.11
--
359.50
9.32
364250
336.75
0.05
--
408.00
9.01
--
201
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
4.1.5. BIODEGRADABILIDAD DE MEZCLAS DE ALCOHOLES GRASOS

ETOXILADOS Y ALQUILPOLIGLUCSIDOS
En la Tabla IV. 22 se muestran los resultados experimentales obtenidos durante el

ensayo esttico de biodegradacin para las mezclas tensioactivas Findet 1214N/23 y GCP
650 a las concentraciones iniciales de 10 mg/L+10 mg/L y 15 mg/L+5 mg/L
respectivamente. El anlisis de la concentracin de tensioactivo se ha realizado nicamente
por el mtodo del yodo-yoduro.
Tabla IV. 22.- Ensayo esttico de biodegradacin para mezclas tensioactivas de AGE y
APG. Mtodo del yodo-yoduro. Influencia de la concentracin

TENSIOACTIVOS: FINDET 1214N/23 y GCP 650
MDIDA DE LA CONCENTRACIN: Mtodo del yodo-yoduro
Identificacin: M1, M2
Concentracin inicial:
FINDET 1214N/23: 10 mg/L
GCP 650: 10 mg/L
202
Concentracin inicial:
FINDET 1214N/23: 15 mg/L
GCP 650: 5 mg/L
Tiempo,
h
0.00
Conc.,
mg/L
8.534
Biomasa,
UFC/ml
2100
Tiempo,
h
0.00
Conc.,
mg/L
13.343
Biomasa,
UFC/ml
120
6.50
8.876
2597.5
2.00
12.804
--
22.75
8.514
446500
6.50
13.366
395
33.00
1.086
4410000
22.75
13.670
--
46.50
1.173
7080000
30.50
13.410
462500
54.00
1.138
--
47.00
7.986
316500
71.00
0.711
--
54.75
3.545
779750
73.00
--
3790000
71.00
1.639
1830000
142.75
0.553
2610000
95.75
1.688
3740000
167.50
0.464
3885000
167.75
1.324
2895000
190.75
0.598
2025000
190.75
1.516
2493334
215.00
1.045
395000
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
4.2. TOXICIDAD DE TENSIOACTIVOS
Para determinar la toxicidad de los tensioactivos ensayados se determin la

inhibicin de la luminiscencia emitida por las bacterias marinas luminiscentes de la cepa
Vibrio fischeri en contacto con el txico. Los experimentos se realizaron con

concentraciones de tensioactivo variables, de 5 a 500 mg/L, para permitir una medida
correcta de la intensidad luminosa.
En la Tabla IV. 23 a Tabla IV. 28 se presentan los resultados de toxicidad para los
alcoholes grasos etoxilados: Findet 10/15, Findet 10/18, Findet 1618A/18, Findet
1618A/23, Findet 1214N/16 y Findet 1214N/23.
En la Tabla IV. 29 a Tabla IV. 31 se presentan los resultados para el cido graso
Findet AR/52, NPEO y LAS, respectivamente.
En la Tabla IV. 32 a Tabla IV. 34 se presentan los resultados de inhibicin de la
luminiscencia para los alquilpoliglucsidos GCP 600, GCP 650 y GCP 215
respectivamente. Finalmente en la Tabla IV. 35 se presentan los resultados de inhibicin de
la luminiscencia obtenidos para el BEROL LFG 61, mezcla de AGE y APG.
En las tablas se presentan los valores de intensidad luminosa a tiempo cero, tiempo
de incubacin 15 y 30 minutos, el % de inhibicin, la funcin Gamma y el factor de
correccin promedio de la intensidad luminosa.
203
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
Tabla IV. 23.- Medida de la inhibicin de la luminiscencia de bacterias Vibrio fischeri
para el tensioactivo Findet 10/15

MEDIDA DE LA TOXICIDAD: Determinacin de la inhibicin mediante LUMIStox
ORGANISMO DE PRUEBA: Bacterias marinas de la cepa Vibrio fischeri
Identificacin: T1
Tiempo de incubacin: 15 min
Intens,
I0
568.90
Intens,
It
682.20
Inhibic,
%
t(c)
1.10
567.60
636.30
572.30
Intens,
It
760.30
Inhibic,
%
-0.32
t(c)
--
Intens,
I0
568.90
7.55
0.079
567.60
720.70
4.69
0.047
630.70
9.10
0.098
572.30
688.00
9.76
0.106
586.30
567.00
20.25
0.251
586.30
628.40
19.55
0.240
581.70
427.20
39.44
0.647
581.70
480.20
38.04
0.611
598.60
264.50
63.55
1.738
598.60
315.60
60.42
1.522
596.00
139.90
80.64
4.154
596.00
166.10
79.08
3.772
593.80
61.63
91.44
10.658
593.80
75.22
90.49
9.499
600.90
19.86
97.27
35.610
600.90
28.66
96.42
26.885
636.20
1.64
99.79
468.390
636.20
1.65
99.80
511.816
fc= 1.21
204
fc= 1.33
--
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
para el tensioactivo Findet 10/18

Identificacin: T2
Intens,
I0
640.40
Intens,
It
777.60
Inhibic,
%
t(c)
1.97
645.20
790.50
653.30

Intens,
It
878.40
Inhibic,
%
2.59
t(c)
--
Intens,
I0
640.40
1.08
0.012
645.20
895.10
1.48
0.016
791.30
2.21
0.023
653.30
883.40
3.98
0.042
680.40
789.60
6.31
0.068
680.40
884.90
7.65
0.084
705.20
753.40
13.74
0.160
705.20
853.50
14.06
0.165
705.40
700.90
19.79
0.248
705.40
808.20
18.64
0.230
715.60
578.90
34.69
0.532
715.60
666.90
33.83
0.513
713.50
418.60
52.63
1.113
713.50
500.50
50.19
1.010
722.20
235.70
73.65
2.799
722.20
284.10
72.07
2.584
737.00
110.50
87.90
7.270
737.00
129.30
87.54
7.036
fc= 1.24
--
fc= 1.41
205
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
para el tensioactivo Findet 1618A/18

Identificacin: T3
Intens,
I0
150.40
Intens,
It
199.70
Inhibic,
%
t(c)
0.43
145.60
193.60
148.50
Intens,
It
218.30
Inhibic,
%
0.22
t(c)
--
Intens,
I0
150.40
0.31
0.000
145.60
218.70
-3.27
-0.034
197.10
0.49
0.002
148.50
214.70
0.63
0.002
155.90
196.60
5.44
0.054
155.90
216.70
4.46
0.043
152.40
187.80
7.63
0.079
152.40
201.70
9.04
0.095
156.70
190.90
8.67
0.091
156.70
208.60
8.50
0.089
160.90
181.70
15.31
0.177
160.90
201.70
13.81
0.156
160.20
171.90
19.55
0.239
160.20
186.70
19.87
0.244
165.10
169.80
22.90
0.293
165.10
179.00
25.47
0.337
165.00
133.70
39.24
0.641
165.00
135.90
43.36
0.760
fc= 1.33
206
fc= 1.45
--
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
para el tensioactivo Findet 1618A/23

Identificacin: T4
Intens,
I0
268.00
Intens,
It
335.10
Inhibic,
%
t(c)
-3.68
262.60
317.90
276.20

Intens,
It
356.50
Inhibic,
%
-1.68
t(c)
--
Intens,
I0
268.00
-0.38
-0.000
262.60
353.60
-2.93
-0.027
323.80
2.78
0.032
276.20
352.60
2.42
0.026
273.20
322.50
2.13
0.025
273.20
346.70
3.02
0.032
282.00
331.00
2.67
0.030
282.00
348.50
5.52
0.060
283.10
324.20
5.06
0.056
283.10
347.80
6.11
0.066
287.40
300.80
13.24
0.156
287.40
324.40
13.75
0.160
283.60
270.40
20.93
0.269
283.60
287.50
22.52
0.292
290.70
258.60
26.25
0.360
290.70
271.50
28.62
0.402
294.30
209.30
41.03
0.701
294.30
212.20
44.90
0.816
fc= 1.20
--
fc= 1.30
207
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
para el tensioactivo Findet 1214N/16

Identificacin: T5
Intens,
I0
202.50
Intens,
It
310.80
Inhibic,
%
t(c)
0.53
207.30
301.60
196.80
Intens,
It
351.00
Inhibic,
%
0.71
t(c)
--
Intens,
I0
202.50
5.68
0.058
207.30
352.30
2.62
0.029
216.20
28.79
0.401
196.80
259.10
24.60
0.329
215.70
221.40
33.47
0.500
215.70
266.00
29.34
0.419
215.80
117.10
64.83
1.838
215.80
141.20
62.53
1.674
218.30
66.33
80.30
4.068
218.30
82.81
78.27
3.613
219.20
34.53
89.79
8.776
219.20
43.28
88.69
7.863
221.10
12.39
96.37
26.481
221.10
15.91
95.88
23.319
227.60
7.73
97.80
44.343
227.60
8.42
97.88
46.304
241.60
4.01
98.92
91.784
241.60
4.03
99.04
103.910
fc= 1.54
208
fc= 1.75
--
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
para el tensioactivo Findet 1214N/23

Identificacin: T6
Intens,
I0
686.60
Intens,
It
704.70
Inhibic,
%
t(c)
2.09
657.00
741.80
689.00
0.023
Intens,
I0
686.60
Intens,
It
766.50
Inhibic,
%
2.12
0.021
-7.70
-0.070
657.00
804.90
-7.41
-0.069
767.50
-6.25
-0.057
689.00
831.30
-5.78
-0.055
694.70
734.80
-0.90
-0.007
694.70
789.00
0.41
0.003
713.20
772.90
-3.37
-0.031
713.20
832.20
-2.30
-0.023
739.20
801.60
-3.44
-0.031
739.20
848.80
-0.68
-0.007
735.30
711.20
7.75
0.085
735.30
751.40
10.41
0.115
686.80
548.90
23.77
0.313
686.80
612.50
21.81
0.278
725.00
374.70
55.71
1.031
725.00
439.10
46.90
0.882
775.10
189.70
76.65
3.290
775.10
215.70
75.60
3.096
fc= 1.05
t(c)
fc= 1.14
209
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
para el tensioactivo Findet AR/52

TENSIOACTIVO: FINDET AR/52
Identificacin: T7
Intens,
I0
230.50
Intens,
It
315.20
Inhibic,
%
t(c)
0.74
231.00
322.40
234.70
0.009
Intens,
I0
230.50
Intens,
It
344.10
Inhibic,
%
-0.19
-0.001
-1.30
-0.011
231.00
339.30
1.45
0.014
318.70
1.42
0.016
234.70
343.70
1.71
0.017
240.00
319.60
3.31
0.036
240.00
334.60
6.42
0.068
245.50
316.30
6.48
0.071
245.50
339.10
7.33
0.078
251.10
315.60
8.77
0.098
251.10
331.50
11.40
0.128
245.30
302.00
10.63
0.120
245.30
317.50
13.14
0.151
248.40
287.00
16.13
0.194
248.40
303.70
17.95
0.218
249.60
265.80
22.70
0.295
249.60
285.50
23.24
0.302
257.50
198.30
44.10
0.792
257.50
214.70
44.05
0.787
fc= 1.38
210
fc= 1.49
t(c)
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
para el tensioactivo NPEO

Identificacin: T8
Intens,
I0
841.40
Intens,
It
1156.00
Inhibic,
%
000
t(c)
Intens,
It
1215.00
Inhibic,
%
0.00
t(c)
--
Intens,
I0
841.40
842.20
1190.00
-2.84
-0.028
842.20
1247.00
-2.54
-0.025
868.80
1179.00
1.23
0.012
868.80
1252.00
0.20
0.002
873.70
1162.00
3.20
0.033
873.70
1236.00
2.03
0.021
854.80
1116.00
4.97
0.052
854.80
1176.00
4.73
0.050
874.20
1074.00
10.58
0.118
874.20
1147.00
9.14
0.101
936.40
988.00
23.20
0.302
936.40
1036.00
23.38
0.305
861.50
813.60
31.26
0.455
861.50
832.90
33.05
0.494
884.60
780.00
35.82
0.558
884.60
825.60
35.37
0.547
895.70
576.60
53.14
1.134
895.70
568.60
56.04
1.275
fc= 1.37
--
fc= 1.44
211
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
para el LAS
TENSIOACTIVO: LAS
Identificacin: T9
Intens,
I0
1170.00
Intens,
It
1208.00
Inhibic,
%
0.00
t(c)
Intens,
It
1091.00
Inhibic,
%
0.00
t(c)
--
Intens,
I0
1170.00
1174.00
1305.00
-7.66
-0.071
1174.00
1288.00
-17.65
-0.150
1149.00
1296.00
-9.25
-0.085
1149.00
1276.00
-19.09
-0.160
1179.00
1287.00
-5.73
-0.054
1179.00
1240.00
-12.79
-0.113
1174.00
1207.00
0.42
0.004
1174.00
1133.00
-3.50
-0.034
1181.00
1178.00
3.39
0.035
1181.00
1099.00
0.20
0.002
1156.00
1071.00
10.27
0.114
1156.00
994.90
7.70
0.083
1138.00
870.90
25.88
0.349
1138.00
764.40
27.97
0.388
1171.00
691.00
42.85
0.750
1171.00
579.10
46.97
0.886
1192.00
532.10
56.76
1.313
1192.00
448.70
59.63
1.477
fc= 1.03
212
fc= 0.93
--
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
para el tensioactivo GCP 215

Identificacin: T10
Intens,
I0
736.00
Intens,
It
757.80
Inhibic,
%
t(c)
0.00
744.00
818.50
762.00

Intens,
It
767.70
Inhibic,
%
0.00
t(c)
--
Intens,
I0
736.50
-6.92
-0.065
744.00
836.00
-7.80
-0.072
816.30
-4.11
-0.040
762.00
797.20
-0.37
-0.004
773.80
807.40
-1.41
-0.014
773.80
811.50
-0.61
-0.006
775.40
789.70
1.02
0.010
775.40
774.20
4.21
0.044
755.30
740.80
4.68
0.049
755.30
711.70
9.60
0.106
734.10
647.20
14.32
0.167
734.10
602.60
21.25
0.270
733.40
596.60
20.94
0.265
733.40
573.70
24.95
0.333
768.90
459.30
41.94
0.722
768.90
441.40
44.93
0.816
770.90
299.90
62.19
1.645
770.90
276.30
65.62
1.908
fc= 1.02
--
fc= 1.04
213
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS

Identificacin: T11
Intens,
Intens,
Inhibic,
I0
It
1036.00
1218.00
0.17
1038.00
1234.00
1032.00
Intens,
Intens,
Inhibic,
I0
It
0.003
1036.00
1330.00
-0.60
-0.002
-0.95
-0.007
1038.00
1320.00
0.29
0.006
1214.00
0.12
0.003
1032.00
1321.00
-0.33
0.000
1040.00
1234.00
-0.72
-0.005
1040.00
1336.00
-0.65
-0.003
1028.00
1187.00
1.99
0.021
1028.00
1277.00
2.64
0.030
1058.00
1149.00
7.73
0.086
1058.00
1258.00
6.76
0.076
1053.00
1003.00
19.08
0.238
1053.00
1094.00
18.58
0.232
1027.00
742.00
38.64
0.633
1027.00
847.70
35.30
0.550
1040.00
650.90
46.88
0.885
1040.00
757.80
42.93
0.756
1070.00
231.60
81.62
4.451
1070.00
248.90
81.77
4.502
fc= 1.18
214
t(c)
fc= 1.28
t(c)
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS

Identificacin: T12
Intens,
I0
1320.00
Intens,
It
1444.00
Inhibic,
%
0,00
t(c)
Intens,
It
1554.00
Inhibic,
%
0.00
t(c)
--
Intens,
I0
1320.00
1364.00
1439.00
3.56
0.037
1364.00
1525.00
5.03
0.053
1324.00
1397.00
3.55
0.037
1324.00
1493.00
4.22
0.044
1345.00
1400.00
4.85
0.051
1345.00
1515.00
4.32
0.045
1355.00
1376.00
7.17
0.077
1355.00
1479.00
7.28
0.079
1345.00
1224.00
16.81
0.202
1345.00
1333.00
15.82
0.188
1310.00
1000.00
30.22
0.433
1310.00
1084.00
29.71
0.423
1330.00
799.60
45.04
0.820
1330.00
867.50
44.60
0.805
1305.00
502.60
64.79
1.840
1305.00
582.20
62.10
1.639
1376.00
287.70
80.89
4.232
1376.00
313.20
80.67
4.172
fc= 1.09
--
fc= 1.17
215
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
para el tensioactivo BEROL LFG 61

TENSIOACTIVO: BEROL LFG 61
Identificacin: T13
Intens,
I0
1127.00
Intens,
It
1185.00
Inhibic,
%
0.00
t(c)
Intens,
It
1135.00
Inhibic,
%
0.00
t(c)
--
Intens,
I0
1127.00
1170.00
1287.00
-4.62
-0.044
1170.00
1283.00
-8.89
-0.082
1184.00
1198.00
3.77
0.039
1184.00
1204.00
-0.97
-0.010
1181.00
1324.00
-6.62
-0.062
1181.00
1380.00
-16.03
-0.138
1204.00
1312.00
-3.64
-0.035
1204.00
1352.00
-11.50
-0.103
1190.00
1226.00
2.02
0.021
1190.00
1271.00
-6.05
-0.057
1142.00
1129.00
5.98
0.064
1142.00
1158.00
-0.69
-0.007
1158.00
1037.00
14.83
0.174
1158.00
1069.00
8.34
0.091
1187.00
876.10
29.80
0.425
1187.00
939.90
21.38
0.272
1203.00
638.80
49.50
0.980
1203.00
662.10
45.35
0.830
fc= 1.05
216
fc= 1.007
--
TESIS DOCTORAL
4.3.
TOXICIDAD
RESULTADOS
DE
TENSIOACTIVOS
DURANTE
EL
PROCESO
DE
BIODEGRADACIN
Para determinar la toxicidad de los tensioactivos durante el ensayo esttico de

biodegradacin se determin la inhibicin de la luminiscencia emitida por las bacterias
marinas luminiscentes de la cepa Vibrio fischeri en contacto con el txico, en funcin del
tiempo de duracin del ensayo.
En la Tabla IV. 36 a Tabla IV. 43 se presentan los resultados de toxicidad para los
alcoholes grasos etoxilados: Findet 1618A/18, Findet 1618A/23, Findet 1214N/16 y Findet
1214N/23 a concentraciones comprendidas entre 5 y 50 mg/L.
En la Tabla IV. 44 a Tabla IV. 46 se presentan los resultados correspondientes para
el NPEO a las concentraciones iniciales de ensayo de 5, 25 y 50 mg/L.
En la Tabla IV. 47 a Tabla IV. 49 se presentan los resultados de inhibicin de la
luminiscencia durante el ensayo de biodegradacin para los alquilpoliglucsidos GCP 215,
GCP 600 y GCP 650 respectivamente a concentraciones iniciales de ensayo entre 12 y 100
mg/L.
En la Tabla IV. 50 y Tabla IV. 51 se muestran los resultados correspondientes al
LAS para concentraciones iniciales de ensayo de 25 y 50 mg/L
Finalmente en la Tabla IV. 52 y Tabla IV. 53 se presentan los resultados de
inhibicin de la luminiscencia obtenidos para las mezclas tensioactivas de AGE y APG.
En las tablas se presentan los valores de intensidad luminosa a tiempo cero, tiempo
de incubacin 15 y 30 minutos, el factor de correccin promedio de la intensidad luminosa
y el % de inhibicin.
217
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
Tabla IV. 36.- Medida de la toxicidad durante el proceso de biodegradacin para el
tensioactivo Findet 1618A/18 a 50 mg/L

MEDIDA DE LA TOXICIDAD: Determinacin del porcentaje de inhibicin
Identificacin: TB1
218
1074.00
I0
muestra
1001.00
It
muestra
904.70
1.071
%
Inhibicin
15.679
974.70
281.30
1030.00
890.20
0.288
--
23.000
972.60
892.30
902.80
725.70
0.917
12.382
39.500
960.20
904.60
863.10
692.90
0.942
14..785
70.500
2116.00
2342.00
2033.00
1928.00
1.098
13.652
87.500
2140.00
2308.00
2052.00
1901.00
1.078
14.102
159.500
1651.00
2058.00
1698.00
2068.00
1.246
2.295
184.200
1649.00
1882.00
1687.00
2011.00
1.141
--
t, das
I0 blanco
It blanco
0.000
1002.00
15.000
fk
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
tensioactivo Findet 1618A/23 a 5 mg/L

Identificacin: TB2
911.20
I0
muestra
819.30
It
muestra
757.90
1.109
%
Inhibicin
36.620
805.50
936.10
816.60
683.00
1.162
28.029
22.500
1272.00
1135.00
1154.00
936.20
0.892
--
31.250
1266.00
1169.00
1175.00
883.40
0.923
18.578
47.000
1091.00
1195.00
1145.00
1186.00
1.095
--
56.000
1141.00
1063.00
1106.00
1240.00
0.931
--
71.000
1275.00
1382.00
1292.00
1178.00
1.083
15.882
79.750
1240.00
1407.00
1310.00
1374.00
1.134
7.563
98.000
982.00
1217.00
1036.00
1051.00
1.239
--
143.000
1012.00
283.40
1028.00
264.00
0.280
8.156
167.500
1042.00
1050.00
1034.00
1049.00
1.007
--
191.500
1055.00
1184.00
1124.00
1212.00
1.122
3.919
215.000
410.00
495.10
420.10
491.00
1.206
3.117
239.500
108.10
540.50
407.80
496.00
1.324
8..054
t, horas
I0 blanco
It blanco
0.000
821.60
8.000
fk
219
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
tensioactivo Findet 1214N/16 a 5 mg/L

Identificacin: TB3
t, horas
I0 blanco
It blanco
0.000
14.500
22.500
38.500
62.500
86.500
442.10
440.70
771.70
769.50
1110.00
2087.00
460.2
465.60
158.00
732.20
977.40
1723.00
I0
muestra
473.20
476.20
774.30
766.00
1099.00
1107.00
It
muestra
474.60
379.90
733.40
719.20
927.50
919.20
fk
1.040
1.056
0.204
0.951
0.880
0.825
%
Inhibicin
3.648
24.489
-1.326
4.155
0.000

Identificacin: TB4
220
t, horas
I0 blanco
It blanco
0.000
47.000
64.000
71.000
87.500
159.500
185.000
209.500
-960.50
1112.00
1172.00
1250.00
2278.00
2338.00
2738.00
-1159.00
1305.00
1237.00
1325.00
2376.00
2462.00
2461.00
I0
muestra
-1121.00
1110.00
1213.00
1216.00
2338.00
2318.00
2564.00
It
muestra
-887.40
1077.00
1118.00
1079.00
2394.00
2423.00
2251.00
fk
-1.206
1.173
1.055
1.060
1.043
1.053
0.898
%
Inhibicin
-34.396
17.322
12.674
16.289
1.828
0.734
2.325
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS

Identificacin: TB5
1793.00
I0
muestra
1303.00
It
muestra
1526.00
1.365
%
Inhibicin
14.238
1355.00
1828.00
1373.00
1497.00
1.349
19.180
23.250
1800.00
688.60
1842.00
1737.00
0.382
--
39.000
1831.00
1233.00
1887.00
2194.00
0.673
--
63.500
1164.00
1768.00
1289.00
1882.00
1.518
3.874
87.500
1128.00
1645.00
1249.00
1721.00
1.458
5.515
t, horas
I0 blanco
It blanco
0.000
1313.00
15.000
fk

Identificacin: TB6
609.10
I0
muestra
420.95
It
muestra
234.00
1.443
%
Inhibicin
61.415
412.10
481.90
407.30
428.40
1.169
10.055
78.750
412.10
481.90
398.70
417.10
1.169
10.537
95.250
1100.00
1350.00
1086.00
1309.00
1.227
1.787
167.500
1100.00
1350.00
1148.00
1381.00
1.227
1.980
198.500
1100.00
1350.00
1111.50
1350.50
1.227
0.999
t, horas
I0 blanco
It blanco
6.500
421.90
54.500
fk
221
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS

Identificacin: TB7
222
1487.00
I0
muestra
1268.00
It
muestra
755.60
1.169
%
Inhibicin
49.066
1368.00
1428.00
1386.00
878.10
1.043
39.306
24.250
1383.00
1450.00
1408.00
1003.00
1.048
32.055
51.250
1447.00
1462.00
1473.00
1014.00
1.010
31.867
60.250
1490.00
1551.00
1504.00
1139.00
1.040
27.247
75.250
1385.00
1609.00
1470.00
1735.00
1.161
--
t, horas
I0 blanco
It blanco
0.000
1271.00
15.000
fk
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS

Identificacin: TB8
It
muestra
1157.00
fk
% Inhibicin
2316.00
I0
muestra
1855.00
1.268
50.82
1830.00
2430.00
2054.00
874.40
1.327
67.94
23.750
2520.00
2530.00
2583.00
2292.00
1.003
--
39.750
2520.00
2347.00
2446.00
2184.00
0.938
--
49.000
1339.00
1843.00
1467.00
1643.00
1.376
18.63
65.000
1399.00
1910.00
1483.00
1755.00
1.365
--
92.000
1249.00
1524.00
1163.00
1205.00
1.220
15.08
160.000
1230.00
1552.00
1260.00
1443.00
1.261
9.23
184.000
1486.00
1942.00
1621.00
1929.00
1.306
8.94
209.000
1561.00
1015.00
1656.00
1974.00
0.650
--
232.000
2130.00
1561.00
2130.00
1709.00
0.732
--
305.000
2110.00
2290.00
2226.00
2376.00
1.085
1.65
t, horas
I0 blanco
It blanco
0.000
1826.00
16.000
223
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
tensioactivo NPEO a 5 mg/L

TENSIOACTIVO: NONILFENOL
Identificacin: TB9
224
517.60
I0
muestra
379.40
It
muestra
442.80
1.139
%
Inhibicin
0.00
419.30
486.90
421.30
517.30
1.161
--
22.500
433.50
457.70
431.30
428.60
1.055
5.88
38.500
436.00
467.30
421.30
432.40
1.071
4.23
62.500
456.60
505.50
435.90
507.00
1.107
0.00
86.500
456.10
513.80
464.40
463.90
1.126
--
t, horas
I0 blanco
It blanco
0.000
454.40
14.500
fk
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS

Identificacin: TB10
1734.00
I0
muestra
1489.00
It
muestra
1730.00
1.209
%
Inhibicin
3.915
1508.00
1897.00
1568.00
1781.00
1.257
9.707
23.500
1802.00
1905.00
1803.00
1863.00
1.057
--
39.750
1752.00
2036.00
1915.00
1993.00
1.162
10.443
49.000
1505.00
1963.00
1630.00
1784.00
1.304
16.088
65.000
1588.00
1984.00
1652.00
1658.00
1.249
19.668
92.000
2003.00
2167.00
1997.00
1825.00
1.081
15.529
136.500
1975.00
2092.00
2037.00
1841.00
1.059
--
160.000
1823.00
19999.00
1745.00
1440.00
1.096
24.744
184.000
1823.00
2062.00
1797.00
1475.00
1.131
27.432
209.000
1826.00
1499.00
1836.00
1564.00
0.820
--
232.000
1802.00
1983.00
1911.00
1693.00
1.100
19.493
t, horas
I0 blanco
It blanco
0.000
1434.00
16.000
fk
225
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS

Identificacin: TB11
226
1747.00
I0
muestra
1617.00
It
muestra
1596.00
1.126
%
Inhibicin
12.372
1551.00
1747.00
1584.50
1588.50
1.126
10.957
21.500
1551.00
1747.00
1639.00
1586.50
1.126
14.026
29.250
1551.00
1747.00
1598.00
1590.50
1.126
14.430
45.750
1850.00
1867.00
1909.00
1556.00
1.009
19.256
69.750
1850.00
1867.00
1766.50
1380.50
1.009
23.866
189.500
1598.00
1507.00
1574.50
1174.00
0.943
17.632
213,750
1598.00
1507.00
1517.00
1274.00
0.943
10.937
t, horas
I0 blanco
It blanco
0.000
1551.00
5.750
fk
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
tensioactivo GCP 215 a 12 mg/L

TENSIOACTIVO: GLUCOPN 215
Identificacin: TB12
1280.00
I0
muestra
1168.00
It
muestra
1175.00
1.160
%
Inhibicin
13.311
799.40
1069.00
825.70
1007.00
1.337
8.800
23.250
789.00
1067.00
868.40
1089.00
1.352
--
30.000
841.00
930.90
844.50
941.70
1.106
--
46.500
760.00
898.10
850.90
1009.00
1.181
--
54.000
176.80
221.30
171.60
180.20
1.251
16.104
71.000
171.60
232.70
167.70
187.00
1.356
17.770
190.750
103.60
179.50
103.70
177.40
1.732
1.265
t, horas
I0 blanco
It blanco
0.000
1003.00
6.500
fk
227
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS

Identificacin: TB13
228
1749.00
I0
muestra
1220.00
It
muestra
364.70
1.614
%
Inhibicin
81.489
990.00
1218.00
1033.00
547.00
1.230
--
23.000
1540.00
1705.00
1613.00
844.30
1.107
--
39.500
1020.00
925.70
1034.00
447.40
0.907
52.323
47.500
958.00
1157.00
981.00
511.90
1.207
56.780
63.500
944.50
1129.00
956.50
521.70
1.195
54.370
71.250
1127.00
1249.00
1113.00
807.50
1.108
--
88.500
1141.00
1316.00
1194.00
845.60
1.153
38.596
161.000
1088.00
1261.00
1088.00
843.30
1.159
33.124
t, horas
I0 blanco
It blanco
0.000
1083.00
15.000
fk
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS

Identificacin: TB14
2121.00
I0
muestra
2076.00
It
muestra
1556.50
1.030
%
Inhibicin
27.263
2058.00
2121.00
2057.00
1539.50
1.030
27.381
22.750
2058.00
2121.00
1994.50
1555.50
1.030
24.291
30.500
2132.00
2539.00
2186.00
2147.50
1.190
20.342
47.000
2132.00
2539.00
2155.00
1987.00
1.190
19.823
54.750
2132.00
2539.00
2195.00
2116.50
1.190
17.028
71.000
2132.00
2539.00
2281.00
2009.00
1.190
--
94.750
2717.00
2512.00
2673.50
2342.50
0.924
5.230
167.750
2717.00
2512.00
2620.50
2433.50
0.924
--
190.750
2717.00
2512.00
2573.00
2325.00
0.924
2.248
215.000
2717.00
2512.00
2536.00
2386.00
0.924
--
t, horas
I0 blanco
It blanco
0.000
2058.00
6.500
fk
229
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
Tabla IV. 50.- Medida de la toxicidad durante el proceso de biodegradacin para el LAS a
25 mg/L
TENSIOACTIVO: LAS
Identificacin: TB15
2036.00
I0
muestra
1725.50
It
muestra
1774.00
1.236
%
Inhibicin
16.832
1647.00
2036.00
1705.50
1728.00
1.236
18.041
94.500
2158.00
2005.00
2183.00
1791.00
0.929
11.698
189.750
1879.00
2112.00
1930.00
1983.00
1.124
8.578
262.250
2058.00
2112.00
2120.00
1974.00
1.030
9.650
t, horas
I0 blanco
It blanco
5.750
1647.00
29.500
fk
50 mg/L
TENSIOACTIVO: LAS
Identificacin: TB16
230
t, horas
I0 blanco
It blanco
0.000
6.500
31.000
78.750
95.250
167.500
198.500
359.500
1331.00
1331.00
1331.00
1480.00
1846.00
1846.00
1846.00
1846.00
1880.00
1880.00
1880.00
1774.00
2253.00
2253.00
2253.00
2253.00
I0
muestra
1347.00
1401.00
1379.00
1500.00
1884.00
1874.00
1860.00
1820.00
It
muestra
1267.00
1266.34
1313.00
1178.00
1434.00
1502.50
1508.00
1961.00
fk
1.412
1.412
1.412
1.198
1.220
1.220
1.220
1.220
%
Inhibicin
33.406
36.062
32.590
34.481
37.635
34.306
33.556
11.689
TESIS DOCTORAL
RESULTADOS
Tabla IV. 52.- Medida de la toxicidad durante el proceso de biodegradacin para las
mezclas tensioactivas Findet 1214N/23 y GCP 650

TENSIOACTIVO: F1214N/23+GCP 650
Identificacin: TB17
Concentracin inicial: 10+10 mg/L
t, horas
I0 blanco
It blanco
6.500
22.750
30.000
71.000
142.000
167.500
190.750
1172.00
1529.00
1529.00
1661.00
1661.00
1661.00
1661.00
1550.00
1572.00
1572.00
1751.00
1751.00
1751.00
1751.00
I0
muestra
1231.00
1465.00
1512.00
1648.00
1660.00
1660.00
1661.50
It
muestra
1507.00
1446.00
1487.00
1719.00
1744.00
1749.00
1738.00
fk
1.322
1.028
1.028
1.054
1.054
1.054
1.054
%
Inhibicin
7.434
3.996
4.344
1.020
0.339
0.054
0.772
mezclas tensioactivas Findet 1214N/23 y GCP 650

TENSIOACTIVO: F1214N/23+GCP 650
Identificacin: TB18
Concentracin inicial: 15+5 mg/L
t, horas
I0 blanco
It blanco
0.000
6.500
22.750
47.000
54.750
71.000
95.750
167.750
1100.00
1327.00
1327.00
1327.00
859.40
859.40
859.40
859.40
1350.00
1396.00
1396.00
1396.00
1501.00
1501.00
1501.00
1501.00
I0
muestra
1206.50
1316.00
1284.50
1285.00
930.80
942.10
954.00
982.60
It
muestra
1370.00
1319.00
1290.50
1326.00
1601.00
1605.00
1627.00
1699.00
fk
1.227
1.051
1.051
1.051
1.746
1.746
1.746
1.746
%
Inhibicin
7.479
4.725
4.493
1.909
1.519
2.457
2.354
1.000
231
5. DISCUSIN DE RESULTADOS
TESIS DOCTORAL
DISCUSIN DE RESULTADOS
5.1. DESARROLLO DE MTODOS DE ANLISIS PARA EL ESTUDIO DE LA

BIODEGRADABILIDAD PRIMARIA
5.1.1. MTODO SIMPLIFICADO DE ANLISIS PARA LA DETERMINACIN
DE TENSIOACTIVOS ANINICOS (MBAS)
Actualmente los tensioactivos ms empleados en las formulaciones de detergentes y

otros productos de limpieza que se utilizan diariamente, son los tensioactivos aninicos y
dentro de ellos el alquilbenceno sulfonato lineal (LAS), que representa el 40% de todos los
tensioactivos producidos.
En 1994 la produccin de LAS en USA, Europa occidental y Japn fue de 8.40105
Tm (Scott, 2000). De los 2.8109 Kg de tensioactivos producidos en Europa en 1998, casi
0.42109 Kg corresponden a LAS (AISE-CEFIC, 1999). En Espaa, el consumo "per
capita" se encuentra alrededor de los 5.6 g de LAS/hab/da. (Moreno, 1984). Teniendo esto
en cuenta, el contenido de este tipo de sustancias en un agua residual urbana suele ser del
orden del 5-10% del total de residuos orgnicos.
Estos tensioactivos llegan a las plantas de tratamiento de aguas residuales donde se
degradan parcialmente en condiciones aerobias y se adsorben en los lodos que sern
aplicados posteriormente al suelo. Finalmente son vertidos a la red fluvial y a la tierra,
siendo uno de los principales factores que afectan al ecosistema natural (McEvoy, 1985).
Por tanto, es de gran importancia la determinacin adecuada de la concentracin de
tensioactivos aninicos, as como la aplicacin de procedimientos simplificados y rpidos
que nos permitan seguir su biodegradacin en funcin del tiempo.
En los ltimos aos se han intentado desarrollar nuevas tcnicas analticas para la
cuantificacin de tensioactivos tanto aninicos como no inicos, as como los intermedios
de la biodegradacin (Rin, 2000). Los tensioactivos aninicos se determinan usualmente
por mtodos espectrofotomtricos utilizando azul de metileno, siendo ste el mtodo
estndar utilizado para la determinacin de agentes de superficie en muestras de agua
(COM, 2002). Sin embargo, este mtodo oficial es un procedimiento largo y tedioso que
requiere grandes cantidades de cloroformo para su aplicacin.
235
TESIS DOCTORAL
Este mtodo est basado en la formacin de un par inico entre el tensioactivo

aninico (AS) y el azul de metileno (MB) segn la reaccin:
SO3
+
(Me)2N
AS
+
MB
N(M
c e)2
SO3
(Me)2N
N(M
c e)2
AS-MB
Figura V. 1.- Reaccin de formacin del par inico tensioactivo aninico-azul de metileno
Segn el mtodo oficial, se requieren tres extracciones sucesivas del par inico ASMB contenido en 100 ml de muestra previamente alcalinizada, con 15, 10 y 10 ml de
cloroformo cada vez (Figura V. 2). Para evitar posibles interferencias el extracto de
cloroformo se limpia de nuevo con una solucin de lavado y se lleva a 100 ml con
cloroformo. La determinacin del par inico se realiza por espectrofotometra midiendo la
absorbancia a 650 nm.
Se han publicado numerosos mtodos simplificados que ayudan a reducir las
cantidades de reactivo, utilizando sodio dodecilsulfato como tensioactivo aninico estndar
(Chitikela, 1995), utilizando adsorbentes (Moskvin, 1996) o reduciendo el volumen de
muestra y de reactivos empleados (Koga, 1999). Sin embargo estos mtodos implican
tambin procedimientos tediosos sin posibilidad de eliminacin de la etapa de filtracin.
Este procedimiento de anlisis se hace especialmente complicado en el caso del
seguimiento de la biodegradabilidad de tensioactivos aninicos, que por imperativos
legales debe realizarse para poder ser utilizados comercialmente. Para ello es necesario
realizar sucesivas determinaciones del tensioactivo a bajas concentraciones hasta su
biodegradacin total.
236
TESIS DOCTORAL
SOLUCIONES
PATRN
0-0.5 mg/l
100 ml de
muestra
Embudo de decantacin (I) 250 ml
Na2HPO4, (710-2 M), Dn Bsica, 10

ml
MB, (10-3 M), Dn Neutra, 5 ml
CHCl3, 15 ml
Agitar
1 min
Fase Acuosa
Embudo de decantacin (II)

250 ml
Fase CHCl3
CHCl3, 10 ml
H20, 100 ml
MB, (10-3 M), Dn cida, 5 ml
Agitar
1 min
Agitar
1 min
Fase CHCl3
Fase Acuosa
Reposar
CHCl3, 10 ml
Fase CHCl3
Agitar
1 min
Fase Acuosa
Desechar
Fase CHCl3
Filtrar
CHCl3
Fase Acuosa
50 ml de
volumen Total
Desechar
Matraz aforado 50 ml
Solucin de
muestra
La parte
se puede omitir en el
mtodo simplificado
MEDIDA
650 nm
Figura V. 2.- Procedimiento analtico normalizado para la determinacin de tensioactivos
aninicos
Los equilibrios de reparto de las sustancias AS (tensioactivo aninico), MB (azul de

metileno) y el par inico asociado AS-MB, entre agua y cloroformo han sido investigados
cuantitativamente (Koga, 1999), as como la estabilidad de cada especie en las respectivas
fases, demostrando que tanto las molculas de AS como MB solas, no se transferan a la
fase clorofrmica si no estn asociadas formando el par inico AS-MB.
El equilibrio de transferencia de materia entre fases del par inico AS-MB, puede
representarse de la siguiente forma:
237
TESIS DOCTORAL
[AS-MB]ac
[AS-MB]cl
Ecuacin V. 1
y su constante de equilibrio de reparto por la expresin:
K=
[AS MB]cl
[AS MB]ac
Ecuacin V. 2
donde el subndice "cl" indica la concentracin en la fase clorofrmica y el

subndice "ac" indica su concentracin en la fase acuosa.
Teniendo en cuenta la definicin de concentracin, cociente entre el nmero de
moles (nAS-MB) y el volumen de la fase en la que est disuelto, la concentracin del par
inico AS-MB en cada una de las fases, vendr dada en la fase clorofrmica por:
[ AS MB ]cl
n AS MB cl
Vcl
Ecuacin V. 3
y en la fase acuosa por:
[AS MB]ac =
n AS MB ac
Vac
Ecuacin V. 4
Sustituyendo en la expresin de la constante de equilibrio (Ecuacin V. 2) y

teniendo en cuenta que el nmero total de moles de tensioactivo viene dado por:
nt = n AS MBac + n AS MBcl
Ecuacin V. 5
238
TESIS DOCTORAL
se obtiene:
K=
n AS MBcl
nt n AS MBac
Vac
Vcl
Ecuacin V. 6
Es posible realizar una extraccin cuantitativa en una sola etapa desplazando el

equilibrio de transferencia del par inico AS-MB hacia la fase orgnica, aumentando
mucho la cantidad de cloroformo respecto de la cantidad de muestra.
Se han probado distintas relaciones (volumen de muestra)/(volumen de cloroformo)
empleado en la extraccin, as como diferentes tiempos de agitacin, obtenindose los
mejores resultados cuando se ponen en contacto 5 ml de muestra, previamente alcalinizada,
con el colorante azul de metileno y con 4 ml de cloroformo, agitando durante un minuto y
5 minutos de reposo. La absorbancia debida al par inico AS-MB en la fase clorofrmica
se mide a 650 nm directamente en el tubo de ensayo sin necesidad de filtracin.
Procedimiento descrito en el apartado 3.4.1.1. de Materiales y Mtodos.
Teniendo en cuenta estos resultados, en la presente Tesis Doctoral se propone
una simplificacin del mtodo espectrofotomtrico del azul de metileno para la
determinacin de tensioactivos aninicos en aguas residuales (Figura V. 3). Este
procedimiento se ha aplicado para el seguimiento de la biodegradabilidad primaria del
LAS.
239
TESIS DOCTORAL
SOLUCIONES
PATRN
0-2.5 mg/l
5 ml de muestra
Cubeta de vidrio redonda 10 ml
Tampn tetraborato sdico 50 mM,

Dn Bsica, 200 l
MB, Dn cida, 100 l
CHCl3, 4 ml
Agitar
1 min
Reposar
5 min
Fase Acuosa
Fase CHCl3
MEDIDA
650 nm
Figura V. 3.- Procedimiento analtico simplificado para la determinacin de tensioactivos
aninicos
Para comprobar la bondad del mtodo analtico empleado se han determinado los
parmetros de calidad utilizando el modelo de clculo propuesto por Cuadros y col.
(Cuadros 1993; 1996), que se basa en la utilizacin del conjunto de datos obtenidos en un
experimento de calibracin.
5.1.1.1. Parmetros de calidad del mtodo analtico
Los parmetros de calidad del mtodo analtico propuesto se han calculado a partir
de rectas de calibrado obtenidas en el rango de concentracin de tensioactivo comprendido
entre 0 y 2.5 mg/L. En la Figura V. 4 se muestran, a ttulo de ejemplo, los valores de
absorbancia medidos a 650 nm frente a aire, para las concentraciones de tensioactivo de 0,
0.5, 1, 1.5, 2 y 2.5 mg/L. Cada medida se realiz por triplicado.
240
TESIS DOCTORAL
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
Conc, mg/L
Figura V. 4.- Recta de calibrado obtenida para el LAS utilizando el mtodo simplificado
de las sustancias activas al azul de metileno
Para las rectas de calibracin (Figura V. 4) se ensaya un ajuste lineal por mnimos
cuadrados ordinario (OLS) que minimiza la distancia de los residuos a la recta de
regresin. La curva de calibracin se muestra en la Figura V. 4 y los parmetros del
anlisis de regresin: desviacin estndar de la ordenada en el origen Sa, de la pendiente
Sb, de regresin Sr, el coeficiente de correlacin, r y el coeficiente de determinacin R2, se
muestran en la Tabla V. 1.; a es la ordenada en el origen y b la pendiente de la recta de
regresin.
Tabla V. 1.- Parmetros del anlisis de regresin
a
b
Sa
Sb
Sr
r
R2
0.3907
0.4385
0.01657
0.02509
0.06000
0.98877
97.7677
El modelo de regresin OLS slo es aplicable si los datos de partida cumplen una
serie de requisitos previos tales como: aleatoriedad e independencia de la variable
respuesta, normalidad de la variable respuesta, ausencia de errores aleatorios en la variable
independiente, linealidad e igualdad de varianzas u homocedasticidad. Generalmente, se
241
TESIS DOCTORAL
asumen como ciertos los tres primeros y slo se comprueban la linealidad y la

homocedasticidad.
Linealidad y homocedasticidad
La linealidad "in-line" describe la ausencia de curvatura en la lnea de calibracin.

La distribucin aleatoria de los residuos en torno al eje central (Figura V. 5) as como el
valor de PLOF 0.01 (PLOF=0.9335) del test de lack of fit (LOF) descarta un
comportamiento curvo. Por tanto, el modelo lineal empleado en la regresin es correcto.
0,3
0,2
RESIDUALES
0,1
0,0
-0,1
-0,2
-0,3
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
Conc, mg/L
Figura V. 5.- Grfico de residuales
La Linealidad "on-line" mide la dispersin de los datos alrededor de la lnea de

calibracin y determina el rango de valores para los cuales se cumple que existe una
relacin lineal entre la seal y la concentracin. La linealidad "on-line" se puede evaluar a
partir del coeficiente de determinacin R2, la desviacin estndar relativa de la pendiente
(Sb/b) y a partir de la expresin:
LIN OL (%) = (1
Sb
) 100
b
Ecuacin V. 7
Los valores obtenidos para estos parmetros son, respectivamente, 97.7677, 0.059 y
LINOL= 94.1%.
242
TESIS DOCTORAL
La homocedasticidad igualdad de varianzas se muestra en el grfico de residuales

(Figura V. 5). La dispersin de los puntos en torno a la lnea central parece aumentar
conforme aumenta el valor de concentracin. Existen, por tanto, evidencias de posible
heterocedasticidad, esto es, de que las varianzas no sean homogneas y que dependan de la
concentracin. Para confirmar o descartar este hecho se hace el test de Cochran y el test de
Barlett. Los valores de P obtenidos son respectivamente 0.37621 y 0.06226. En ambos test
el valor de P es 0.05, por tanto no hay una diferencia estadsticamente significativa entre
los cuadrados de la media a un nivel de confianza del 95%, y las varianzas son
homogneas.
La curva de calibracin obtenida en funcin de la concentracin viene dada por la
ecuacin:
A650 = 0.3907 + 0.4385 [AS ]

Ecuacin V. 8
Sensibilidad
Hay dos formas de expresar la sensibilidad de un mtodo analtico: la sensibilidad

de calibracin (SENScal) que mide la relacin entre la seal instrumental y la concentracin
de analito y la sensibilidad analtica (SENSanal) que es la menor diferencia de
concentracin que un mtodo analtico puede discernir (a la sensibilidad analtica tambin
se le conoce con el nombre de resolucin). La primera se evala a partir de la pendiente de
calibracin, b, y la segunda a partir del cociente Sr/m, donde Sr es la desviacin estndar de
regresin. Los valores obtenidos para la sensibilidad son:
SENS cal = b = 0.4385
unidades de absorbancia
mg / L
Ecuacin V. 9
SENS anal =
Sr
= 0.14 mg/L
b
Ecuacin V. 10
243
TESIS DOCTORAL
que indican, respectivamente, que un incremento de la concentracin de 1 mg/L

supone un aumento de la seal analtica de 0.4385 unidades y que el mtodo distingue
cambios de concentracin de 0.14 mg/L.
Precisin
La precisin mide el grado de incertidumbre de un resultado analtico. Es debida a

la dispersin de la seal del instrumento y al uso de valores de la pendiente y la ordenada
en el origen estimados a partir de la recta de calibracin para transformar la seal
instrumental medida en concentracin. Matemticamente se expresa por la desviacin
estndar relativa de la concentracin, Sc/c, y tiene un valor distinto a cada concentracin. A
partir de los datos de calibrado se puede obtener Sc para cada concentracin a partir de la
expresin:
S 1 1 S
S C = r + + b (c c )
b n m b
Ecuacin V. 11
donde n es el nmero de puntos de la recta de calibrado, m el nmero de rplicas, c

la concentracin de tensioactivo, y c la concentracin media de tensioactivo en el
intervalo de concentraciones considerado. En la Tabla V. 2 se muestran los valores de Sc
para cada valor de concentracin.
Tabla V. 2.- Valores de precisin obtenidos en el rango de valores de 0 a 2.5 mg/L

Conc. LAS,
mg/L
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
Sc
Sc/c
0.0726
0.0831
0.0924
0.1009
0.1087
0.1160
--0.166
0.092
0.067
0.054
0.046
m=3, n=6, c =1.25mg/L
244
TESIS DOCTORAL
Lmites inferiores
Lmite de deteccin (DL)
Es la menor concentracin que puede detectarse con razonable certeza por un

procedimiento analtico determinado. Utilizando la aproximacin de la IUPAC, el lmite de
deteccin se calcula a partir de la expresin: DL=3Sc0. El valor obtenido para el lmite de
deteccin es de 0.22 mg/L.
Lmite de cuantificacin (QL)
Representa la mnima concentracin cuantificable por el mtodo analtico. Se

calcula a partir de la expresin: QL=10Sc0. El valor obtenido para el lmite de
cuantificacin es de 0.73 mg/L.
Los parmetros de calidad obtenidos en el mtodo simplificado de sustancias
activas al azul de metileno demuestran que este procedimiento es adecuado para el anlisis
de tensioactivos aninicos en aguas y en ensayos de biodegradacin, en el rango de 0-2.5
mg/L.
El mtodo utilizado supone una extraccin cuantitativa en una sola etapa con una
considerable reduccin de la cantidad de muestra a ensayar, la cantidad de cloroformo
utilizada en la extraccin y el tiempo requerido para llevar a cabo el ensayo. Este
procedimiento requiere slo 5 ml de muestra, 4 ml de disolvente de extraccin
(cloroformo) y 1/10 del tiempo de anlisis comparado con el mtodo oficial. Adems el
mtodo es aplicable para el seguimiento del proceso de biodegradacin primaria de
tensioactivos aninicos y puede utilizarse para el control de stos con vistas a su posible
utilizacin en formulaciones comerciales.
245
TESIS DOCTORAL
5.1.2. MTODOS DE ANLISIS PARA DETERMINACIN DE ALCOHOLES

GRASOS ETOXILADOS
5.1.2.1. Mtodo colorimtrico del yodo-yoduro
Los alcoholes grasos etoxilados pertenecen al grupo de tensioactivos no inicos que

se utilizan ampliamente como emulsificantes, solubilizantes, agentes dispersantes y en
formulaciones detergentes.
La determinacin de estos tensioactivos se realiza usualmente aplicando el mtodo
de Wickbold (apartado 3.4.1.2, Wickbold, 1972), pero este procedimiento requiere una
amplia experimentacin analtica y largos tiempos de ensayo. En la presente Tesis
Doctoral se ha puesto a punto un procedimiento analtico aplicable a tensioactivos no
inicos etoxilados: el mtodo colorimtrico del yodo-yoduro.
Es un mtodo sencillo basado en la formacin de un complejo coloreado entre el
tensioactivo y el reactivo yodo-yoduro (apartado 3.4.1.3). En la Figura V. 6 se muestra un
esquema de este procedimiento.
Este mtodo ha sido aplicado para la medida de la concentracin de los diferentes
AGE comerciales utilizados en este trabajo: Findet 10/15, Findet 10/18, Findet 1214N/16,
Findet 1214N/23, Findet 1618A/18 y Findet 1618A/23. Tambin se ha aplicado al
nonilfenol polietoxilado puesto que pertenece a la familia de tensioactivos etoxilados y
reacciona con el reactivo yodo-yoduro.
El intervalo de concentraciones ensayado est comprendido entre 0 y 20 mg/L. Los
resultados obtenidos para los diferentes tensioactivos muestran una buena correlacin entre
la seal instrumental medida y la concentracin (Figura V. 7).
246
TESIS DOCTORAL
10 ml muestra
Tubo de ensayo de 20 ml
0,25 ml Reactivo
yodo yoduro
1 g I2
2 g KI
Agitar
1 min
Reposar
5 min
T ambiente
MEDIDA
500 nm
Figura V. 6.- Procedimiento analtico para el mtodo colorimtrico del yodo-yoduro para
la determinacin de tensioactivos no inicos
247
TESIS DOCTORAL
1,0
1.2
Y= 0.0100 x + 0.315
2
R = 0.8669
y = 0.0311 x + 0.3339
R2 = 0.9895
1.0
0,8
A500
A500
0.8
0,6
0.6
0,4
0.4
0.2
0,2
0
10
15
20
25
[F 10/15], mg/L
0.7
10
12
0.8
y = 0.0284 x + 0.3392
R2 = 0.9811
0.6
y = 0.3542 x + 0.0523
R2 = 0.9700
0.7
A500
0.6
A500
0.5
0.4
0.5
0.3
0.4
0.2
0.3
0
10
12
[F1214N/16], mg/L
10
[F 1214N/23], mg/L
0.70
0.70
0.65
0.65
y = 0.0257 x + 0.3585
R2 = 0.9900
0.60
0.60
0.55
0.55
A500
A500
[F10/18], mg/L
0.50
0.50
0.45
0.45
0.40
0.40
0.35
0.35
0.30
y = 0.0316 x + 0.3356
R2 = 0.9971
0.30
0
[F 1618A/18], mg/L
10
12
10
12
[F 1618A/23], mg/L
Figura V. 7.- Rectas de calibrado obtenidas para los distintos tensioactivos no inicos
etoxilados utilizando el mtodo colorimtrico del yodo-yoduro
248
TESIS DOCTORAL
0.60
y = 0.0454 x + 0.3378
R2 = 0.9895
0.55
A500
0.50
0.45
0.40
0.35
0.30
0
[NP], mg/L
Figura V. 7.- (Continuacin). Rectas de calibrado obtenidas para los distintos
tensioactivos no inicos etoxilados utilizando el mtodo colorimtrico del yodo-yoduro
Las rectas de calibracin se han obtenido utilizando tres rplicas para cada valor de
concentracin. Estos estndares incluyen el blanco como un valor adicional, porque su
seal instrumental est sujeta al mismo tipo de errores que el resto de los puntos.
Los parmetros de calibracin para los tensioactivos ensayados se recogen en la
Tabla V. 3. La Linealidad viene expresada en %, la sensibilidad analtica en mg/L, la
precisin en % (para 1 mg/L), el lmite de deteccin en mg/L, b y m representan la
ordenada en el origen y la pendiente de la recta de calibracin respectivamente.
Tabla V. 3.- Parmetros de calidad de las rectas de calibracin obtenidas por el mtodo
colorimtrico del reactivo yodo yoduro para distintos tipos de tensioactivos etoxilados
b
m
r2
Linealidad
Sensibilidad
Precisin
LD
F10/15
F 10/18
0.3339
0.0311
0.9895
94.85
0.90
5.00
1.74
0.3150
0.0100
0.8669
89.00
1.41
0.48(*)
2.13
F1214N/16 F1214N/23 F1618A/18 F1618A/23
0.3392
0.0284
0.9811
92.96
0.58
3.31
1.26
0.3542
0.0523
0.9700
95.22
0.53
0.95 (*)
0.72
0.3585
0.0257
0.9899
94.94
0.42
0.81
0.91
0.3356
0.0316
0.9971
97.47
0.22
1.43
0.67
NPEO
0.3378
0.0454
0.9895
94.93
0.21
1.96
0.47
(*) Precisin para 2 mg/L
249
TESIS DOCTORAL
Los mejores resultados (menor lmite de deteccin y sensibilidad) son para el

NPEO, seguido de Findet 1618A/23 y Findet 1214N/23. Estos resultados indican que la
bondad del mtodo analtico depende del nmero de moles de xido de etileno del
tensioactivo. Si representamos la sensibilidad y el lmite de deteccin frente al nmero de
moles de xido de etileno (Figura V. 8), se observa que estos valores disminuyen con el
nmero de OE de la molcula de tensioactivo, observndose un comportamiento anmalo
para el tensioactivo Findet 10/18.
2.5
F 10/15
F 1214N/16
F 10/18
F 1618A/18
NP
F 1214N/23
F 1618A/23
1.0
F 10/15
F 1214N/16
F 10/18
F 1618A/18
NP
F 1214N/23
F 1618A/23
2.0
Lmite de deteccin
Sensibilidad
1.5
0.5
1.5
1.0
0.5
0.0
0.0
2
10
12
Moles OE
10
12
Moles OE
Figura V. 8.- Variacin de la sensibilidad analtica y el lmite de deteccin con el nmero
de moles de OE presentes en los tensioactivos no inicos etoxilados
Se puede concluir, por tanto, que el mtodo colorimtrico del yodo-yoduro es

viable cuando el nmero de molculas de OE es mayor de 5 y no es recomendable para un
nmero menor, al menos en el rango de concentraciones de 0 a 5 mg/L, rango de inters en
los estudios de biodegradacin en aguas residuales.
250
TESIS DOCTORAL
5.1.2.2. Mtodo de Wickbold con el Reactivo de Dragendorff
Puesta a punto del mtodo
La medida de la concentracin de los alcoholes grasos etoxilados tambin se puede

realizar por el mtodo de Wickbold o BiAS (Wickbold, 1972). Este mtodo consiste en la
precipitacin cuantitativa del tensioactivo con el reactivo de Dragendorff. El precipitado
obtenido se disuelve y se valora el Bi presente en la disolucin que es proporcional a la
cantidad de tensioactivo presente en la muestra (apartado 3.4.1.2.).
La determinacin del Bi puede realizarse por espectrofotometra, se mide la
absorbancia a 263.5 nm del complejo EDTA-Bi formado, o bien por potenciometra con un
electrodo de Pt/ClAg, y utilizando como agente valorante pirrolidinil ditiocarboxilato
sdico. Ambos mtodos han sido aplicados.
El principal inconveniente que tiene la aplicacin del mtodo de Wickbold, tanto
por el procedimiento espectrofotomtrico como potenciomtrico, cuando se aplica al
anlisis de tensioactivos en aguas residuales, es que para evitar interferencias e incrementar
la concentracin de tensioactivo en la muestra, el anlisis precisa de la extraccin previa
del tensioactivo de su matriz acuosa.
En la Tabla V. 4 se muestran los resultados obtenidos de los procesos de extraccin.
Se ha evaluado el tanto por ciento de recuperacin por este mtodo obtenindose un valor
de recuperacin del tensioactivo comprendido entre el 68 y el 72% cuando se hacen 5
extracciones (sin sales) consecutivas partiendo de una cantidad inicial de 500 g de Findet
1214N/23 (500 ml de una disolucin de 0.001 g/L de concentracin).
251
TESIS DOCTORAL
Tabla V. 4.- Porcentaje de recuperacin de distintos tensioactivos no inicos etoxilados

Extraccin sin sales
TENSIOACTIVO
Findet 1214N/23
Findet 10/15
Findet 1618A/23
g F0
g F medidos
SDR
%R
500
500
500
343.46
286.17
362.37
20.8
16.96
8.25
68.69
57.23
72.5
Extraccin con sales

TENSIOACTIVO
g F0
g F medidos
SDR
%R
Findet 1214N/23
Findet 1618A/23
500
500
461.48
441.91
20.18
36.46
92.30
88.38
Donde g F0 son los microgramos de Findet inicial, g F son los microgramos de

Findet medido (valor medio obtenido a partir de 5 determinaciones), SDR es la desviacin
estndar relativa obtenida a partir de 5 determinaciones y % R el tanto por ciento de
recuperacin de tensioactivo.
Los resultados obtenidos (en las extracciones sin sales) para los distintos
tensioactivos ensayados ponen de manifiesto que el mtodo est sujeto a un error
sistemtico en torno al 30% cuyo origen est en la etapa de extraccin previa del
tensioactivo, siendo sta la principal fuente de error.
Este error puede reducirse al 8% (Tabla V. 4) si durante el proceso de extraccin se
incorporan sales (100 g de ClNa y 5 NaHCO3) al medio a fin de facilitar la extraccin del
tensioactivo en el acetato de etilo. La adicin de estas sales se hace en forma slida y
haciendo burbujear aire en la columna de extraccin durante 10 minutos. Por tanto, se
aplica este procedimiento de extraccin para la determinacin de tensioactivos no inicos.
En el mtodo de Dragendorff potenciomtrico la medida de la cantidad de Bi se
realiza con un electrodo de platino que es sensible a todos los iones metlicos presentes en
la disolucin, constituyendo stos una interferencia importante en el procedimiento de
anlisis. Para eliminar estas interferencias hay que ser muy cuidadosos con la limpieza del
material utilizado, sobre todo con el filtro de vidrio sinterizado que puede absorber algunos
de los iones de las disoluciones empleadas en el anlisis, fundamentalmente el Ba, y
utilizar productos qumicos de condiciones de pureza elevadas.
Es importante sealar que la optimizacin del mtodo de anlisis revel que el
acetato de etilo (de PANREAC y calidad PA) utilizado en la etapa previa de extraccin del
252
TESIS DOCTORAL
tensioactivo daba valores por exceso (Tabla V. 5) conduciendo a sobreestimaciones de la

concentracin de partida, y que era necesario limpiar los filtros exhaustivamente tras la
extraccin.
Tabla V. 5.- Porcentaje de recuperacin para el Findet 1214N/23 sin destilar el acetato de
etilo
TENSIOACTIVO
g F0
g F medidos
SDR
%R
Findet 1214N/23
500
607.21
26.55
121.44
Al objeto de identificar las posibles fuentes de error se llevaron a cabo 4

extracciones consecutivas en acetato de etilo sin destilar utilizando una muestra de agua
destilada en ausencia total de tensioactivo. Los resultados fueron los siguientes:
Tabla V. 6.- Extracciones con acetato de etilo sin destilar utilizando como muestra 1 L de
agua destilada
Vc
VB
VG
g tensioactivo
5.342
5.342
5.342
5.342
0.936
0.936
0.936
0.936
2.123
2.123
2.123
2.123
4.60
5.95
6.67
5.94
125
194
230
193
Vc es el volumen en ml, gastados en el contraste de pirrolidinil ditiocarboxilato

sdico; f es el factor de normalizacin calculado como f = 5/Vc, donde 5 es el volumen de
disolucin patrn; VB es el volumen en ml, de la disolucin de pirrolidinil ditiocarboxilato
sdico consumido por el ensayo en blanco; VG es el volumen en ml, de la disolucin de
pirrolidinil ditiocarboxilato sdico consumido por la muestra. Los g de tensioactivo estn
expresados como mg/L de NP 10 (apartado 3.4.1.2.).
Como se aprecia en la Tabla V. 6 las extracciones utilizando agua destilada en
ausencia de tensioactivo dan una seal positiva, evidenciando la presencia de un
tensioactivo que no hay (antes de llevar a cabo los ensayos de extraccin se tuvo la
precaucin de limpiar el material con mezcla etanol-cido clorhdrico).
253
TESIS DOCTORAL
A la luz de estos datos se estudi la posibilidad de que el acetato de etilo utilizado

en la etapa previa de la extraccin del tensioactivo fuera el responsable de estos resultados.
Para investigar la posible influencia de este reactivo se procedi como sigue: se vierten 200
ml de acetato de etilo en un matraz redondo, tal como se hace con los extractos del proceso
de extraccin, se evapora el disolvente y a continuacin el residuo se somete al proceso de
anlisis del tensioactivo por el mtodo de Wickbold potenciomtrico. Como demuestran
los resultados de la Tabla V. 7 el acetato de etilo da una seal positiva.
Tabla V. 7.- Comprobacin de la interferencia del acetato de etilo en el proceso de
extraccin
Vc/f
Vacetato
VB
VG
g tensioactivo
5.263/0.950
5.263/0.950
5.263/0.950
200
200
200
2.051
2.051
2.051
4.35
3.45
4.01
59
36
50.5
Para eliminar estas interferencias se destil el acetato de etilo antes de su

utilizacin, y para garantizar que el filtro de vidrio sinterizado estuviera libre de cualquier
in metlico, se procedi a su limpieza al finalizar cada sesin de trabajo con metanol, para
eliminar cualquier resto de tensioactivo que pudiese estar absorbido, y con EDTA 0.1 M
pH 10 (Wyrwas, 1993) para eliminar los iones metlicos, finalmente se enjuaga con agua
desionizada y el material queda listo para su uso (apartado 3.6).
Aplicacin del mtodo potenciomtrico
En el caso del mtodo de Wickbold potenciomtrico la concentracin de

tensioactivo se expresa como mg/L de un NPEO con 10 moles de oxido de etileno (NP 10).
Para poder expresar la concentracin en trminos de la sustancia de ensayo se ha
establecido la equivalencia entre el tensioactivo de referencia (NP 10) y los diferentes
tensioactivos no inicos ensayados.
En la Tabla V. 8 se muestra la equivalencia (E) entre los g de Findet analizados y
los g de NP 10 medidos (Ecuacin V. 12) para todos los tensioactivos no inicos
etoxilados utilizados. Tambin se presentan las desviaciones estndar correspondientes a la
254
TESIS DOCTORAL
determinacin de los distintos tensioactivos por este mtodo, siendo menores del 9% en
todos los casos.
E=
g ( Fin det)
g ( NP 10)
Ecuacin V. 12
Tabla V. 8.- Equivalencia entre AGE y NP 10 para el mtodo de Wickbold
potenciomtrico
FINDET
g F0
F10/18
F10/15
F1214N/16
F1214N/23
F1618A/18
F1618A/23
500
250
500
500
500
500
g NP10 SDR (%)

523.71
244.01
387.52
657.36
372.86
611.02
5.99
6.72
3.76
3.58
5.23
8.25
E
0.95
1.02
1.29
0.76
1.34
0.82
donde g F0 son los microgramos de Findet inicial, g NP10 son los g de Findet
medido como NP 10 y SDR (%) es la desviacin estndar relativa obtenida a partir de 5
determinaciones.
Aplicacin del mtodo espectrofotomtrico
Para una correcta aplicacin del mtodo espectrofotomtrico en aguas residuales, es

necesario realizar una recta patrn cada vez que se realiza una medida de concentracin de
tensioactivo. El mtodo potenciomtrico no requiere este procedimiento y necesita de un
menor tiempo de anlisis.
El mtodo de Wickbold, que analiza el Bi mediante tcnicas espectrofotomtricas
se ha aplicado para los tensioactivos Findet 1214N/23 y Findet 10/15 en el rango de 200 a
1000 g. Las rectas de calibrado obtenidas se recogen en la Figura V. 9, observndose una
buena correlacin entre la seal instrumental medida y la concentracin. Las rectas de
calibracin se han obtenido utilizando tres rplicas para cada valor de concentracin. Estos
estndares incluyen el blanco como un valor adicional, porque su seal instrumental est
sujeta al mismo tipo de errores que el resto de los puntos.
255
TESIS DOCTORAL
Los valores obtenidos para la linealidad, sensibilidad, precisin y lmite de

deteccin se muestran en la Tabla V. 9. La linealidad viene expresada en %, la sensibilidad
analtica en g, la precisin en % para 0.200 mg, el LD en g, el LC en g, y b y m son la
ordenada en el origen y pendiente de la recta de calibracin respectivamente.
0.25
0.6
y = 0.0651 x + 0.0004
R2 = 0.9983
0.5
y = 0.0002 x + 0.0212
R2 = 0.9906
0.20
0.4
A263.5
A263.5
0.15
0.3
0.10
0.2
0.05
0.1
0.0
0.00
0
200
400
600
800
1000
1200
200
F 1214N/23, g
400
600
800
1000
1200
F 10/15, g
Figura V. 9.- Rectas de calibrado obtenidas para los Findet 1214N/23 y Findet 10/15 en el
rango de 200 a 1000 g por el mtodo de Wickbold espectrofotomtrico
Tabla V. 9.- Parmetros de calidad para los tensioactivos etoxilados Findet 1214N/23 y
Findet 10/15 por el mtodo de Wickbold espectrofotomtrico
b
m
r2
Linealidad
Sensibilidad
Precisin
LD
F1214N/23
F10/15
0.0651
0.0004
0.9991
100
16.25
2.25
20.25
0.0212
0.0002
0.9906
100
37.5
6.5
81
En la Tabla V. 9 se observa que por el mtodo de Wickbold tambin se obtienen

mejores valores (menor lmite de deteccin y sensibilidad) cuando el nmero de molculas
de xido de etileno del tensioactivo es mayor (Findet 1214N/23).
256
TESIS DOCTORAL
5.1.2.3. Comparacin de mtodos de anlisis para alcoholes grasos etoxilados
En la Tabla V. 10 se comparan los parmetros de calibracin (linealidad,

sensibilidad, precisin y lmite de deteccin) obtenidos por el mtodo de Wickbold y el
mtodo del yodo yoduro. Se observa que los valores obtenidos para sensibilidad y lmite de
deteccin son mejores para el mtodo del yodo yoduro en los casos comparados.
Tabla V. 10.- Comparacin de los parmetros de calidad para los tensioactivos Findet
1214N/23 y Findet 10/15 por el mtodo de Wickbold y mtodo del yodo yoduro
MTODO DE
WICKBOLD
METODO YODO
YODURO
F1214N/23 F10/15 F1214N/23 F10/15

b
m
r2
Linealidad
Sensibilidad
Precisin
LD
0.0651
0.0004
0.9991
100
16.25
2.25
20.25
0.0212
0.0002
0.9906
100
37.5
6.5
81
0.3490
0.0052
0.9899
97.98
2.71
9.2
5.41
0.3340
0.0031
0.9868
94.86
9.00
48.6
29.16
En la Figura V. 10 se muestran los resultados de los ensayos de biodegradacin

obtenidos para el Findet 10/15 y el Findet 1214N/23 en los que se analiz la concentracin
por el mtodo de Wickbold y por el mtodo del reactivo yodo-yoduro.
Para el Findet 10/15, tensioactivo con 3 moles de OE, el mtodo colorimtrico del
yodo-yoduro no es adecuado para el seguimiento de la biodegradacin primaria debido a
su baja sensibilidad (apartado 5.1.2.1.). Sin embargo, para el Findet 1214N/23 con 11
moles de OE, se observa una buena concordancia entre los puntos obtenidos por ambos
mtodos.
257
TESIS DOCTORAL
FINDET 10/15. 5 mg/L
FINDET 1214N/23. 5 mg/L
4,0
5,0
3,5
Mtodo de Wickbold
4,5
Mtodo de Wickbold
Mtodo Yodo-Yoduro
4,0
Mtodo Yodo-Yoduro
3,0
2,5
Co n c, m g /L
Co n c, m g /L
3,5
2,0
1,5
3,0
2,5
2,0
1,5
1,0
1,0
0,5
0,5
0,0
0,0
0
20
40
60
t, h
80
100
120
140
160
20
40
60
80
100

30
20
18
Mtodo de Wickbold
Mtodo de Wickbold
25
16
Mtodo Yodo-Yoduro
Mtodo Yodo-Yoduro
14
20
C o n c, m g /L
C o n c, m g /L
t, h
12
15
10
8
10
6
4
2
0
0
0
20
40
60
80
100
120
140
160
20
40
t, h
60
80
100
120
140
160
t, h
Figura V. 10.- Comparacin de curvas de biodegradacin para diferentes AGE utilizando
el mtodo de Wickbold y el mtodo del yodo-yoduro
El mtodo del yodo yoduro es una alternativa viable y mejor que el mtodo de
Wickbold, especialmente cuando el nmero de molculas de xido de etileno en el
tensioactivo sea mayor de 5. Las ventajas de este mtodo son las siguientes: se requiere
menor volumen de muestra, menor tiempo de anlisis y es menos caro, adems puede
realizarse directamente en la muestra y no necesita de la etapa previa de separacin del
tensioactivo, que es la principal fuente de error del mtodo de Wickbold.
En la Tabla V. 11 se resumen las ventajas e inconvenientes de los mtodos
aplicados en la determinacin de tensioactivos no inicos.
258
TESIS DOCTORAL
Tabla V. 11.- Comparacin de los mtodos de anlisis para tensioactivos no inicos

METODO
VENTAJAS
9
YODO-YODURO
Menor
volumen de
muestra.
Menor tiempo
de realizacin.
Mas barato.
INCONVENIENTES
Aplicable cuando
el n de moles de
OE >5.
Necesidad de
concentrar la
muestra.
Errores
apreciables en los
procesos de
extraccin.
Necesidad de
realizacin de
recta de calibrado
en cada medida.
Mayor tiempo de
realizacin.
Mayor
complejidad en el
anlisis.
9
9
REACTIVO DE DRAGENDORFF
ESPECTROFOTOMTRICO
Mayor
sensibilidad.
Menor lmite
de deteccin.
9
9
REACTIVO DE DRAGENDORFF
POTENCIOMTRICO
Mayor
sensibilidad.
Menor lmite
de deteccin.
Interferencias de
iones metlicos
presentes en la
medida.
Necesidad de
utilizacin de
reactivos de
extremada pureza.
Necesidad de
extremar las
medidas de
limpieza.
5.1.2.4. Aplicacin de los mtodos de anlisis para mezclas tensioactivas de AGE y

APG
Interferencias de APG en la determinacin de tensioactivos no inicos
Los tensioactivos alquilpoliglucsidos no reaccionan con el reactivo yodo yoduro, y

por consiguiente este mtodo no puede utilizarse para medir su concentracin. Adems se
ha comprobado que los APG no interfieren significativamente en la medida de la
259
TESIS DOCTORAL
concentracin de tensioactivos etoxilados por el mtodo colorimtrico del yodo-yoduro,

por lo que este mtodo puede ser utilizado en la determinacin de tensioactivos etoxilados
en mezclas de estos tensioactivos con APG, as como en procesos de biodegradacin
conjunta de estos tensioactivos no inicos.
Para comprobar el que los APG no interfieren significativamente en la medida de
tensioactivos etoxilados por el mtodo del reactivo yodo-yoduro, se prepar una recta
patrn para el tensioactivo Findet 1618A/18 y se analizaron dos muestras: la primera de
ellas slo contena 10 mg/L de GCP 650 y en la segunda se adicionaron 10 mg/L de Findet
1618A/18 a 10 mg/L de GCP 650. Los resultados se muestran en la Tabla V. 12. Los
valores de la concentracin medida son la media de tres rplicas.
Tabla V. 12.- Comprobacin de la interferencia de APG en el mtodo del yodo yoduro

Concentracin inicial
10 mg/L GCP 650
10 mg/L GCP 650 + 10 mg/L Findet 1618A/18
Concentracin
medida, mg/L
0.810
10.891
Si comparamos el valor obtenido de 10.891 mg/L en presencia de 10 mg/L de GCP

650 con el valor esperado de 10 mg/L en ausencia de GCP para el Findet 1618A/18, se
observa que se comete un error del 8.9 % en la determinacin de la concentracin en
presencia de GCP 650. Tambin se observa una pequea seal de 0.81 mg/L en ausencia
de Findet 1618A/18. Estos resultados ponen de manifiesto que la presencia de APG
interfiere en la medida de la concentracin de alcoholes grasos etoxilados por el mtodo
colorimtrico del yodo-yoduro, si bien esta interferencia es despreciable.
Aunque los alquilpoliglucsidos tampoco pueden determinarse por el mtodo de
Wickbold s se ha encontrado que dan una pequea seal en presencia de los alcoholes
grasos etoxilados.
Para estudiar esta interferencia a 400 g de Findet 1214N/23 se le adicionaron
cantidades crecientes de GCP 650 y se midi su concentracin a partir de la recta patrn
obtenida para el Findet 1214N/23 utilizando el mtodo de Wickbold espectrofotomtrico.
Los resultados obtenidos se muestran en la Tabla V. 13.
260
TESIS DOCTORAL
Tabla V. 13.- Medida de la cantidad de tensioactivo Findet 1214N/23 en presencia de
cantidades variables de GCP 650

Cantidad inicial (g)
Cantidad medida
(g)
400 g F1214N/23 + 0 g GCP 650

400 g F1214N/23 + 100 g GCP 650
400 g F1214N/23 + 200 g GCP 650
400 g F1214N/23 + 400 g GCP 650
400.65
411.37
424.77
446.22
Los resultados indican que la presencia de APG en la muestra interfiere

proporcionando un valor de recuperacin de tensioactivo mayor que la cantidad de partida,
a razn del 11.48 g por cada 100 g de APG en la muestra (Tabla V. 13 y Figura V. 11).
0.250
0.500
0.245
A263.5
A263.5
0.400
0.300
0.240
0.200
y = 0.0004x + 0.0815
R2 = 0.9998
0.100
y = 4E-05x + 0.231
R2 = 0.9982
0.235
0.000
0.230
0
500
1000
1500
100
200
300
400
500
GLUCOPN, g adicionados
F 1214N/23, g
Figura V. 11.- Efecto de la cantidad de Glucopn 650 adicionado sobre la cantidad de
Findet 1214N/23 medida (derecha). Los valores de cantidad de Findet 1214N/23 medida se
obtuvieron por comparacin de las absorbancias con su recta patrn correspondiente
(izquierda)
Determinacin de la fraccin de alcoholes grasos etoxilados en el BEROL LFG 61
El hecho de que los APG den una pequea seal en presencia de los AGE puede ser
utilizado para estimar su presencia en productos comerciales que estn compuestos por
mezclas de estos tensioactivos.
Se ha desarrollado un procedimiento analtico, basado en el mtodo de las adiciones
patrn, que permita analizar la composicin del BEROL LFG 61 (producto comercial
mezcla de AGE y APG). Para la medida de la composicin en alcoholes grasos etoxilados
261
TESIS DOCTORAL
se ha utilizado el mtodo de Wickbold analizando el Bi por espectrofotometra y

potenciometra.
El mtodo de las adiciones patrn se basa en que a una cantidad fija y medida de
muestra a analizar, se le adicionan cantidades conocidas del analito cuya concentracin se
quiere medir. Se estudia como vara la propiedad medida con la cantidad de analito
adicionado. Si la dependencia es lineal, la extrapolacin de esta tendencia sobre el eje de
abcisas proporciona la cantidad de analito de la muestra. De este modo se puede analizar la
concentracin de tensioactivo cancelando la interferencia debida a la presencia de APG.
Al no conocerse en principio el tipo de alcohol graso etoxilado que forma parte del
producto, se midi como Findet 1214N/23, esto es, se supuso que el BEROL est
compuesto por una mezcla de alquilglucsidos y Findet 1214N/23.
Se aplic el mtodo de las adiciones patrn para la determinacin del contenido de
alcoholes grasos etoxilados presentes de la siguiente forma: a 400 g de BEROL, se le
adicionaron, por separado, 0, 200, 400, 600 y 1000 g de Findet 1214N/23 y se midieron
las absorbancias a 263.5 nm frente a un blanco sometido al mismo proceso pero sin Findet
1214N/23, utilizando el mtodo espectrofotomtrico.
La extrapolacin de la recta de calibrado sobre el eje de abscisas arroja un valor de
28 g para la cantidad de tensioactivo no inico del tipo alcohol graso etoxilado presente
en la muestra y medido como Findet 1214N/23 (Figura V. 12). Este resultado determina
que el tensioactivo est formado fundamentalmente por alquilpoliglucsidos, y su anlisis
por el mtodo de Wickbold no podra realizarse de forma adecuada.
Para confirmar este hecho, se analiz el BEROL con el mtodo potenciomtrico,
para lo cual, se precipitan los tensioactivos no inicos del tipo alcohol graso etoxilado
contenidos en 400 g de BEROL con el reactivo de Dragendorff, se separa el precipitado,
se disuelve y se determina la cantidad de Bi equivalente a la concentracin de tensioactivo
por potenciometra con una disolucin valorada de pirrolidinil-1-ditiocarboxilato sdico.
La cantidad de tensioactivo no inico medida en los 400 g de BEROL es de 39.53 g de
NP 10. Esta cantidad expresada como Findet 1214N/23 es de 30.04 g. Este resultado no
difiere
significativamente
del
obtenido
anteriormente
alquilpoliglucsidos son el componente principal del BEROL.
262
confirma
que
los
TESIS DOCTORAL
0.5
0.4
y = 0.012 x + 0.0004
R2 = 0.9995
A263.5
0.3
0.2
0.1
0.0
0
200
400
600
800
1000
1200
F 1214N/23, g adicionados
28 g
Figura V. 12.- Medida de la cantidad de tensioactivos no inicos en el BEROL por el
mtodo de Wickbold espectrofotomtrico y de las adiciones patrn.
263
TESIS DOCTORAL
5.2. BIODEGRADACIN DE ALCOHOLES GRASOS ETOXILADOS
Los alcoholes grasos etoxilados (AGE) son el segundo grupo ms importante de

tensioactivos, despus del LAS, en cuanto a manufactura, y el primer grupo dentro de la
familia de los tensioactivos no inicos etoxilados (Szymanski, 2000). En Europa se venden
cada ao 5.105 toneladas de estos tensioactivos (Karsa, 1995), la mayora de ellos
utilizados en formulaciones detergentes. Los AGE son considerados como tensioactivos
fcilmente biodegradables, sin embargo, los vertidos masivos de estos tensioactivos a las
aguas residuales requieren un estricto control para prevenir la contaminacin del medio
ambiente acutico. Un elemento clave en este proceso es la evaluacin de la
biodegradabilidad para garantizar el uso de estos tensioactivos en las formulaciones
domsticas o industriales.
Los alcoholes grasos etoxilados ms tpicos son los que van del rango de 9 a 18
tomos de carbono, y los ms comunes son aquellos de 12 a 15 tomos de carbono o
mezclas de ellos. Los AGE utilizados en este trabajo pertenecen a los llamados
oleoqumicos, es decir, procedentes de fuentes naturales y renovables: Findet 10/15, Findet
10/18, Findet 1618A/18, Findet 1618A/23, Findet 1214N/16 y Findet 1214N/23, de Kao
Corporation, S.A. Las propiedades de estos tensioactivos se describen en la Tabla III. 1.
(apartado 3.1. de Materiales y Mtodos). Los AGE seleccionados presentan diferente grado
de etoxilacin y diferente tamao de cadena carbonada. En el presente apartado
utilizaremos la nomenclatura de la Tabla V. 14 para identificarlos: C indica el tamao de la
cadena carbonada y E el nmero medio de OE.
Tabla V. 14.- Nomenclatura de los AGE utilizados
264
NOMBRE COMERCIAL
NOMENCLATURA
FINDET 10/15
FINDET 10/18
FINDET 1214N/16
FINDET 1214N/23
FINDET1618A/18
FINDET1618A/23
C10E3
C10E6
C12-14E4
C12-14E11
C16-18E6
C16-18E11
TESIS DOCTORAL
Para el estudio de la biodegradabilidad se han realizado experimentos a diferentes

concentraciones iniciales que varan entre 5 y 50 mg/L. La concentracin de tensioactivo
residual se midi utilizando el mtodo colorimtrico del reactivo yodo-yoduro (apartado
3.4.1.3.), excepto para el tensioactivo C10E3 que se analiz por el mtodo de Wickbold
(apartado 3.4.1.2.) al presentar un nmero de OE inferior a 5 (apartado 5.1.2.1.).
Con objeto de comprobar la actividad de la poblacin microbiana presente en el
medio de ensayo se realizaron ensayos de referencia con un tensioactivo fcilmente
biodegradable (LAS). La concentracin inicial del ensayo de referencia fue de 5 mg/L en
todos los casos, y la biodegradabilidad media alcanzada a los 5 das fue del 97.28 % 1.54.
De acuerdo con la NORMA UNE 55-844-91 (UNE 55-844-91), para aceptar la validez del
ensayo, el porcentaje de biodegradacin del patrn blando al cabo de 5 das debe ser mayor
del 90% (apartado 3.3.1.6.).
5.2.1. INFLUENCIA DEL GRADO DE ETOXILACIN Y LA LONGITUD DE LA

CADENA CARBONADA SOBRE LA BIODEGRADABILIDAD PRIMARIA
En la Figura V. 13 se representan los perfiles de biodegradacin primaria obtenidos

a una concentracin inicial de 5 mg/L para todos los AGE ensayados (Tabla V. 14). La
concentracin se expresa como porcentaje de tensioactivo residual y como porcentaje de
biodegradacin alcanzado.
El porcentaje de tensioactivo residual se calcula a partir de la siguiente expresin:
[S ]
%Tensioactivo residual = t 100
[S ]0
Ecuacin V. 13
donde:
[S]t = concentracin de sustrato en un instante t
[S]0 = concentracin de sustrato al comienzo del ensayo
Todos los perfiles de biodegradacin obtenidos presentan tres fases bien
diferenciadas:
265
TESIS DOCTORAL
1. Fase de aclimatacin de los microorganismos, caracterizada porque la

concentracin de tensioactivo se mantiene prcticamente constante. En esta primera etapa,
y debido a la acumulacin y adsorcin del tensioactivo en las interfases, se observan
algunas variaciones de la concentracin de tensioactivo residual.
2. Disminucin rpida de la concentracin de tensioactivo debido a la
metabolizacin por parte de los microorganismos del mismo. El 90% de la biodegradacin
se completa en un tiempo inferior a 3 das, excepto para el tensioactivo C10E3.
3. Perodo donde la concentracin de tensioactivo residual es prcticamente
despreciable, aunque puede continuar la biodegradacin de los metabolitos producidos
durante el proceso de biodegradacin.
5 mg/L
120
5 mg/L
120
100
C10E3
C10E6
C12-14E4
C12-14E11
C16-18E6
C16-18E11
80
% BIODE GRADACIN
% TEN SIO AC TIVO RESID U A L
100
60
40
20
80
60
C10E3
C10E6
C12-14E4
C12-14E11
C16-18E6
C16-18E11
40
20
50
100
150
200
250
t, h
-20
50
100
150
200
250
t, h
Figura V. 13.- Variacin de la concentracin de tensioactivo residual y del porcentaje de
biodegradacin con el tiempo para los AGE ensayados a 5 mg/L
Para todos los tensioactivos ensayados el porcentaje de biodegradacin alcanzado

es superior al 80% antes de los 4 das. La legislacin vigente exige que se alcance un nivel
mnimo del 80% de la biodegradacin primaria cuando se aplica el test de la OCDE. Segn
esto, todos los tensioactivos ensayados a una concentracin inicial de 5 mg/L pueden
considerarse como biodegradables.
Para analizar la influencia del grado de etoxilacin y del tamao de la cadena
carbonada sobre el proceso de biodegradacin primaria, se comparan los resultados
obtenidos para diferentes tensioactivos a las concentraciones iniciales de 5, 25 y 50 mg/L
(Figura V. 14, Figura V. 15 y Figura V. 16). Con el fin de poder comparar los distintos
266
TESIS DOCTORAL
tensioactivos, la concentracin residual de stos se ha expresado como tanto por ciento de

tensioactivo residual. Los puntos representan los porcentajes medios experimentales de dos
rplicas.
5 mg/L
100
100
80
60
C10E3
C10E6
40
20
80
60
40
C10E3
C10E6
20
0
0
50
100
150
200
t, h
50
100
-20
5 mg/L
120
100
80
60
C12-14E4
40
C12-14E11
150
200
t, h
5 mg/L
100
% BIODEGRADACIN
% TENSIOACTIVO RESIDUAL
5 mg/L
120
% BIODEGRADACIN
120
80
60
40
C12-14E4
C12-14E11
20
20
0
0
50
100
150
200
50
100
150
200
t, h
-20
t, h
Figura V. 14.- Influencia del grado de etoxilacin y del tamao de la cadena carbonada
sobre la biodegradabilidad primaria para los AGE ensayados a la concentracin inicial de 5

mg/L
267
TESIS DOCTORAL
5 mg/L
120
5 mg/L
120
100
100
% BIODEGRADACIN
80
60
C16-18E6
40
80
60
40
C16-18E6
C16-18E11
C16-18E11
20
20
0
50
100
150
200
250
50
100
-20
150
200
250
t, h
t, h
5 mg/L
5 mg/L
120
100
100
80
80
% BIODEGRADACIN
120
60
40
C16-18E6
C12-14E11
20
60
40
C16-18E6
20
C12-14E11
0
0
50
100
t, h
150
200
50
-20
100
150
200
t, h
Figura V. 14.- (Continuacin). Influencia del grado de etoxilacin y del tamao de la
cadena carbonada sobre la biodegradabilidad primaria para los AGE ensayados a la

concentracin inicial de 5 mg/L
268
TESIS DOCTORAL
25 mg/L
120
25 mg/l
120
100
% B IO D EG R A DA C I N
100
80
60
C12-14E4
C12-14E11
C16-18E6
40
80
60
C12-14E4
40
C12-14E11
C16-18E6
20
20
0
0
50
100
150
200
250
t, h
50
100
150
200
250
t, h
-20
sobre la biodegradabilidad primaria para los AGE ensayados a la concentracin inicial de

25 mg/L
50 mg/L
50 mg/L
100
100
80
C12-14E4
80
C12-14E11
C16-18E6
60
40
% BIODEGRADACIN
120
60
40
C12-14E4
C12-14E11
20
C16-18E6
20
0
0
0
50
100
150
200
t, h
250
300
350
-20
50
100
150
200
250
300
350
t, h
Figura V. 16.- Influencia del grado de etoxilacin y el tamao de la cadena carbonada
sobre la biodegradabilidad primaria para los AGE ensayados a la concentracin inicial de

50 mg/L
Para todas las concentraciones ensayadas los resultados obtenidos parecen
confirmar que ha tenido lugar una biodegradacin preferente del tensioactivo de mayor
longitud de cadena alqulica y mayor grado de etoxilacin. Si consideramos la velocidad de
biodegradacin como la pendiente de la curva de biodegradacin, se aprecia como la
velocidad es superior (a las tres concentraciones estudiadas) para el tensioactivo de mayor
cadena carbonada C16-18E6, es decir el tensioactivo de mayor cadena carbonada y etoxilada,
269
TESIS DOCTORAL
se degrada en mayor extensin y ms rpidamente que el resto de tensioactivos ensayados,

este hecho se observa de forma ms clara cuando se utilizan altas concentraciones de
tensioactivo en el ensayo (Figura V. 16).
A travs de la bibliografa se encuentran ejemplos de aumento, disminucin, y
valores aleatorios en la velocidad de biodegradacin en relacin a longitudes de cadena
alqulica mayores (Patterson, 1970). Para ensayos de biodegradacin en agua de ro se
encontr que la velocidad de biodegradacin aumentaba para longitudes de cadena C8 a
C12 y disminua de C12 a C18. En otros ensayos la velocidad de biodegradacin disminua al
pasar de una cadena C18 a C8 pero con diferentes longitudes de cadena etoxilada. Sin
embargo, teniendo en cuenta nicamente la parte hidrofbica del tensioactivo, se
encontraron evidencias de aumento de velocidad de biodegradacin primaria para
homlogos con longitudes de cadena alqulica mayores (Swisher, 1987).
5.2.2. INFLUENCIA DE LA CONCENTRACIN DE TENSIOACTIVO EN EL

PROCESO DE BIODEGRADACIN
Para estudiar la influencia de la concentracin inicial de los tensioactivos AGE

sobre la biodegradabilidad se han ensayado los tensioactivos C12-14E4, C12-14E11 y C16-18E6.
En la Figura V. 17 se muestran los resultados obtenidos para la evolucin del porcentaje de
tensioactivo residual y el porcentaje de biodegradacin en funcin del tiempo para las
distintas concentraciones ensayadas.
270
TESIS DOCTORAL
C1214E4
120
C1214E4
100
5 mg/L
25 mg/L
50 mg/L
100
% BIODEGRADACIN
80
60
40
60
40
20
20
0
0
50
100
150
200
250
300
350
400
t, h
50
100
150
% BIODEGRADACIN
80
5 mg/L
15 mg/L
20 mg/L
25 mg/L
50 mg/L
60
40
250
300
350
400
C1214E11
100
100
200
t, h
-20
C1214E11
120
5 mgL
25 mgL
50 mgL
80
80
60
5 mgL
15 mgL
20 mgL
25 mg/l
50 mg/l
40
20
20
0
100
200
300
t, h
150
200
250
300
350
400
t, h
C1618 E6
120
100
100
% BIODEGRADACIN
100
-20
C1618E6
120
50
400
80
60
5 mg/L
40
25 mg/L
50 mg/L
20
80
60
5 mgL
40
25 mgL
50 mgL
20
0
0
50
100
150
t, h
200
250
0
-20
50
100
150
200
250
t, h
Figura V. 17.- Influencia de la concentracin de tensioactivo durante el proceso de
biodegradacin: evolucin del porcentaje de tensioactivo residual y el porcentaje de

biodegradacin en funcin del tiempo para diferentes AGE
271
TESIS DOCTORAL
En un anlisis preliminar de los perfiles de biodegradacin primaria (Figura V. 17)

se observa, para todos los tensioactivos ensayados, que a bajas concentraciones iniciales de
ensayo (inferiores a 25 mg/L), la concentracin de tensioactivo residual disminuye
rpidamente con el tiempo de biodegradacin. Para concentraciones superiores, despus de
un perodo de adaptacin para los microorganismos, la concentracin de tensioactivo
disminuye exponencialmente y la velocidad de biodegradacin se hace mucho ms lenta
para todos los tensioactivos ensayados, siendo este efecto ms acusado para el tensioactivo
de menor nmero de moles de xido de etileno de los ensayados, C12-14E4.
5.2.3.
PARMETROS
CARACTERSTICOS
DEL
PROCESO
DE
BIODEGRADACIN
A fin de poder comparar los diferentes ensayos de biodegradacin se han definido

una serie de parmetros caractersticos para los perfiles de biodegradacin.
El tiempo de latencia (tL) es el tiempo que tardan en aclimatarse los
microorganismos no adaptados al nuevo sustrato; suele corresponder con el periodo de
tiempo durante el cual se produce un cambio suave de la concentracin residual. Para cada
ensayo de biodegradacin se calcula trazando dos tangentes a la curva de biodegradacin
para las etapas de adaptacin y biodegradacin (Figura V. 18). El tiempo de latencia es el
punto de corte de ambas rectas.
El perodo de latencia o aclimatacin previo al proceso biodegradativo de
compuestos orgnicos en el medio acutico puede tener varias causas tales como la falta de
nutrientes, la induccin enzimtica, predacin por protozoos, mutacin de especies, el
crecimiento de una poblacin microbiana capaz de metabolizar el sustrato, o simplemente
la adaptacin a la presencia de agentes txicos (Wiggins, 1987; 1988a; 1988b).
272
TESIS DOCTORAL
120
100
80
60
40
20
0
0
50
100
t, h
150
200
Figura V. 18.- Determinacin grfica del tiempo de latencia sobre la curva de
biodegradacin
El tiempo de vida media (t1/2) es el tiempo para el cual la concentracin de sustrato

disminuye a la mitad desde el inicio del proceso de biodegradacin. Por lo tanto tambin se
contabiliza el tiempo de latencia. Al igual que el tiempo de latencia, el tiempo de vida
media se calcula mediante mtodos grficos sobre la curva de biodegradacin.
La velocidad media de biodegradacin (VM) se ha calculado como el cociente entre
un porcentaje de biodegradacin alcanzado y el tiempo transcurrido para alcanzar ese valor
de biodegradacin. Para que los datos procedentes de los diferentes ensayos sean
comparables entre s, se ha fijado un valor de biodegradacin del 85% y se ha medido el
tiempo que tarda en alcanzarse dicho valor de biodegradacin. Este parmetro puede dar
idea de la rapidez con la que est transcurriendo el proceso de biodegradacin, adems esta
velocidad media por unidad de tiempo permite comparar todos los ensayos.
La concentracin de tensioactivo residual (SR) es la concentracin que no ha sido
degradada por los microorganismos, y representa la concentracin de tensioactivo que no
es metabolizable. Se calcula como el valor medio de la concentracin de tensioactivo al
final del ensayo cuando sta permanece prcticamente constante con el tiempo de
biodegradacin.
273
TESIS DOCTORAL
La biodegradabilidad del tensioactivo (B) se define como el porcentaje de

tensioactivo biodegradado a las 50 horas del ensayo.
En la Tabla V. 15 se muestran los parmetros caractersticos de los perfiles de
biodegradacin para todos los tensioactivos y a todas las concentraciones ensayadas. S0 es
la concentracin inicial del ensayo de biodegradacin en mg/L y tT el tiempo total de
duracin del ensayo en horas.
Tabla V. 15.- Parmetros caractersticos de los perfiles de biodegradacin para los AGE
C10E3
S0, mg/L
tT, h
B, %
tL, h
t1/2, h
VM, %/h
SR, mg/L
157.00
77
37.00
50.43
1.49
0.17
C10E6
S0, mg/L
tT, h
B, %
tL, h
t1/2, h
VM, %/h
SR, mg/L
190.50
83
9.00
19.14
1.63
0.30
C12-14E4
S0, mg/L
tT, h
B, %
tL, h
t1/2, h
VM, %/h
SR, mg/L
5
25
50
182.50
209.50
381.75
91
56
26
14.50
23.79
27.21
19.29
40.91
55.43
2.23
0.73
0.20
0.33
1.83
19.29
C12-14E11
S0, mg/L
tT, h
B, %
tL, h
t1/2, h
VM, %/h
SR, mg/L
5
15
20
25
50
85.00
159.00
167.50
160.00
376.50
94
92
92
91
44
22.51
22.28
22.52
15.00
24.28
26.20
30.75
27.68
19.71
54.02
2.07
2.17
2.02
2.42
0.37
0.50
0.96
1.76
3.52
4.45
C16-18E6
S0, mg/L
tT, h
B, %
tL, h
t1/2, h
VM, %/h
SR, mg/L
5
25
50
183.91
237.50
236.00
87.5
85
54
14.74
20.37
21.64
21.13
28.54
54.92
1.93
1.66
0.78
0.40
1.08
3.46
C16-18E11
274
S0, mg/L
tT, h
B, %
tL, h
t1/2, h
VM, %/h
SR, mg/L
239.50
88
29.71
39.42
1.80
0.45
TESIS DOCTORAL
En la Figura V. 19 se representa el efecto de la concentracin sobre el tiempo de

latencia para los tensioactivos ensayados y a las concentraciones de 5, 15, 20, 25 y 50
mg/L.
30
25
t L, h
20
15
C12-14E4
C12-14E11
C16-18E6
10
5
0
10
20
30
40
50
60
Conc, mg/L
Figura V. 19.- Efecto de la concentracin sobre el tiempo de latencia para diferentes AGE
Se observa que a bajas concentraciones iniciales de tensioactivo (5 mg/L), el

tiempo de latencia aumenta con el nmero de moles de OE de la molcula y el peso
molecular medio del tensioactivo. Estos resultados estn de acuerdo con datos encontrados
en bibliografa que ponen de manifiesto que cadenas etoxiladas de mayor tamao muestran
un aumento de la biorresistencia (Patterson, 1970; Karsa, 1995). Este efecto puede deberse
al aumento de la hidrofilicidad y a que un aumento en las dimensiones moleculares limita
el transporte de la molculas a travs de las paredes celulares (Swisher, 1987).
Sin embargo, cuando la concentracin de tensioactivo es elevada (25 y 50 mg/L) se
observa una disminucin del tiempo de latencia con el aumento del nmero de moles de
OE y con el PM, es decir, para molculas de tensioactivo de alto peso molecular y tamaos
de cadena etoxilada mayores el proceso de biodegradacin se acelera, y esto ocurre para
concentraciones de tensioactivo mayores a 25 mg/L.
Este hecho se comprueba al representar la velocidad media de biodegradacin
frente al nmero de moles de xido de etileno. De igual forma se observa que para
concentraciones de ensayo elevadas la velocidad de biodegradacin aumenta al hacerlo el
275
TESIS DOCTORAL
tamao de la cadena etoxilada. Para 5 mg/L el efecto de la influencia del nmero de moles
de OE sobre la velocidad media de biodegradacin es menos acusado (Figura V. 20).
3,0
R2 = 0,9123
2,5
VM , %/h
2,0
R2 = 0,9993
1,5
1,0
5 mg/L
25 mg/L
0,5
50 mg/L
0,0
3
11
13
OE
Figura V. 20.- Variacin de la velocidad media de biodegradacin frente al nmero de
moles de OE a diferentes concentraciones iniciales
Teniendo en cuenta el mecanismo de divisin central propuesto para la

biodegradacin de alcoholes etoxilados lineales (Marcomini, 2000), que conduce a la
formacin de polietilenglicol con la misma longitud que la cadena etoxilada, alcoholes
grasos y posteriormente cidos grasos resultantes del resto alqulico (Figura V. 21):
AGE
R
O
OH
Escisin ce ntral
R
OH
Alcohol
HO
OH
Polie tilnglicol
Figura V. 21.- Mecanismo simplificado de biodegradacin de alcoholes grasos etoxilados
y teniendo en cuenta que la velocidad de biodegradacin parece ser mayor cuanto

mayor es el nmero de moles de OE de la cadena etoxilada (Figura V. 20) y que este efecto
276
TESIS DOCTORAL
es ms acusado cuanto mayor es la concentracin inicial de tensioactivo, los resultados

obtenidos sugieren que cuanto menor es la longitud de las cadenas etoxiladas liberadas en
el proceso de biodegradacin ms acusado es el efecto inhibidor ejercido sobre los
microorganismos responsables del proceso biodegradativo.
El trmino HLB representa una medida de la afinidad relativa del tensioactivo para
las fases agua (W) y aceite (O). El HLB depende esencialmente del tensioactivo. Se mide
en una escala de 0 a 20, segn la importancia relativa del grupo hidroflico y del grupo
lipoflico en la molcula del tensioactivo. El valor de este parmetro adimensional
determina alguna de las propiedades caractersticas de los tensioactivos (Tabla V. 16).
El HLB ha sido y es todava una escala muy usada en la prctica, probablemente
por su extrema simplicidad y tambin porque suministra un excelente mtodo de
comparacin entre sistemas semejantes, por ejemplo con tensioactivos de la misma familia.
Tabla V. 16.- Relacin entre el HLB de los tensioactivos y sus aplicaciones

Solubilidad en agua
HLB
Descripcin
Insoluble
36
Emulsionante W/O (agua en aceite)
Disipado pobremente
(apariencia lechosa)
79
Humectantes
Transicin a claro
8 18
Emulsionantes O/W (aceite en agua)
13 15
Detergentes
15 18
Solubilizantes
Soluble
En la Figura V. 22 se representa la biodegradabilidad de los AGE estudiados frente

al HLB a las concentraciones iniciales de de 5, 25 y 50 mg/L. Como se aprecia la
biodegradabilidad aumenta con el HLB del tensioactivo. El AGE C12-14E11, tensioactivo de
mayor HLB, es el que presenta mayor biodegradabilidad.
277
TESIS DOCTORAL
100
80
B, %
60
40
5 mg/L
25 mg/L
20
50 mg/L
0
9
10
11
12
13
14
15
HLB
Figura V. 22.- Biodegradabilidad de los AGE frente al HLB a diferentes concentraciones
iniciales
En la Figura V. 23 aparecen representados los parmetros caractersticos (t1/2, VM,

B y SR) de los perfiles de biodegradacin en funcin de la concentracin inicial de ensayo
para los tensioactivos C12-14E4, C12-14E11 y C16-18E6.
Los parmetros t1/2 y VM son los que estn relacionados con la velocidad del
proceso de biodegradacin. Se observa que el tiempo de vida media aumenta ligeramente
con la concentracin de tensioactivo hasta 25 mg/L, en cambio para 50 mg/L ese efecto es
ms acusado. De la misma forma la velocidad media de biodegradacin disminuye con la
concentracin inicial de ensayo, es decir, se confirma que al aumentar la concentracin de
tensioactivo se est produciendo una ralentizacin del proceso de biodegradacin. Este
descenso de la velocidad media de biodegradacin puede deberse a un efecto de
autoinhibicin de la biodegradacin por efecto bacteriosttico del sustrato.
Por otra parte, a medida que aumenta la concentracin inicial de tensioactivo en el
ensayo se produce un aumento lgico de la concentracin residual como muestra la Figura
V. 23. Este efecto puede tener su origen en que no se completa la biodegradacin primaria
debido a una inhibicin de los microorganismos. La poblacin de microorganismos inicial
da paso a otra ms especializada en la biodegradacin de metabolitos.
278
TESIS DOCTORAL
C12-14E4
60
2,5
C12-14 E4
100
25
90
50
2,0
80
20
15
50
B
SR
40
VM
30
0,5
10
10
20
S R, mg/L
1,0
t 1/2
60
B, %
1,5
30
VM , %/h
40
t 1/2 , h
20
70
10
0
0,0
10
20
30
40
50
60
0
0
10
20
Conc, mg/L
2,5
50
t 1/2
1,0
VM
B, %
30
1 /2 ,
1,5
VM , %/h
40
20
0,5
10
0
20
30
40
50
4,5
80
4,0
70
3,5
60
3,0
50
2,5
40
SR
2,0
30
1,5
20
1,0
10
0,5
0,0
0
60
C16-18E6
5,0
90
10
20
30
40
50
60
Conc, mg/L
Conc, mg/L
60
60
0,0
10
50
C12-14E11
100
2,0
40
Conc, mg/L
C12-14E11
60
30
2,5
C16-18 E6
100
4,0
90
50
S R, mg/L
2,0
3,5
80
3,0
1,0
20
60
B, %
30
VM , %/h
1,5
VM
1 /2 ,
t 1/2
2,5
SR
2,0
50
40
1,5
S R, mg/L
70
40
30
1,0
0,5
10
20
0,5
10
0,0
0
10
20
30
Conc, mg/L
40
50
60
0,0
0
10
20
30
40
50
60
Conc, mg/L
Figura V. 23.- Variacin de los parmetros caractersticos de los perfiles de
biodegradacin para los AGE con la concentracin inicial de materia tensioactiva
279
TESIS DOCTORAL
Los parmetros caractersticos del proceso de biodegradacin definidos y

calculados como se ha descrito: tiempo de latencia, tiempo de vida media, velocidad media
de biodegradacin, concentracin residual y biodegradabilidad, han permitido cuantificar
los resultados obtenidos y analizar la influencia de diferentes parmetros caractersticos de
los tensioactivos como el nmero de moles de OE y el HLB sobre la biodegradabilidad de
AGE.

BIODEGRADACIN
Durante el proceso de biodegradacin primaria los microorganismos actan sobre el

tensioactivo, que es la nica fuente de carbono presente en el medio, y lo transforman de
acuerdo con la siguiente reaccin:
Tensioactivo + Microorganismos + O2 Subproductos + Microorganismos + CO2 + H 2 O
Es decir, los microorganismos actan sobre la molcula de tensioactivo, la rompen

y la transforman en biomasa y en subproductos de degradacin con desprendimiento de
CO2.
Las curvas de crecimiento de microorganismos son un mtodo alternativo para
evaluar la biodegradabilidad total o ltima de los tensioactivos cuando stos son la nica
fuente de carbono en el medio de cultivo.
Durante el ensayo de biodegradacin se ha utilizado como inculo una poblacin
aireada y mixta de microorganismos no adaptados procedentes de una EDAR que opera
con aguas residuales urbanas.
Las curvas de crecimiento se obtuvieron simultneamente a los perfiles de
biodegradacin primaria de acuerdo con el procedimiento descrito en el apartado 3.4.2. La
concentracin de microorganismos se expresa como unidades formadoras de colonias por
ml (UFC/ml).
Las curvas de crecimiento presentan cuatro fases ms o menos diferenciadas que se
corresponden con las fases de crecimiento microbiano en reactores discontinuos:
280
TESIS DOCTORAL
1.
Fase de retardo o aclimatacin, que algunos autores definen como el

tiempo durante el cual se consume menos del 10% del sustrato inicial
presente en el ensayo de biodegradacin. En esta fase de aclimatacin
apenas existe crecimiento de la poblacin microbiana.
2.
Fase de crecimiento exponencial durante la cual la clula se divide a una

velocidad determinada por su tiempo de generacin y su capacidad de
procesar el sustrato.
3.
Fase estacionaria en la que la poblacin: a) ha agotado el sustrato o

nutrientes necesarios para su crecimiento, b) existe un equilibrio entre
crecimiento y muerte de clulas.
4.
Fase de muerte o crecimiento decreciente. La concentracin de sustrato

disponible es muy baja y los microorganismos se ven forzados a
metabolizar su propio protoplasma sin reposicin del mismo. La tasa de
muerte de microorganismos excede de la poblacin de clulas nuevas.
En la Figura V. 24 se recogen las curvas de crecimiento para cada uno de los

tensioactivos y a las concentraciones ensayadas.
281
TESIS DOCTORAL
C12-14E4
C12-14E11
3.5E+07
5 mg/L
1.2E+07
15 mg/L
20 mg/L
25 mg/L
3.0E+07
50 mg/L
1.0E+07
50 mg/L
2.5E+07
UFC/ml
UFC/ml
8.0E+06
6.0E+06
2.0E+07
1.5E+07
4.0E+06
1.0E+07
2.0E+06
5.0E+06
0.0E+00
0.0E+00
50
100
150
200
250
50
100
t, h
C16-18E6
1.4E+06
150
200
250
t, h
C16-18E11
5 mg/L
4.5E+06
25 mg/L
1.2E+06
4.0E+06
5 mg/L
3.5E+06
1.0E+06
UF C/ml
UFC/ml
3.0E+06
8.0E+05
6.0E+05
2.5E+06
2.0E+06
1.5E+06
4.0E+05
1.0E+06
2.0E+05
5.0E+05
0.0E+00
0.0E+00
0
50
100 t, h
150
200
50
100
150
200
250
t, h
Figura V. 24.- Evolucin del nmero de UFC/ml durante los ensayos de biodegradacin
para los tensioactivos AGE estudiados a diferentes concentraciones iniciales
Para estudiar la influencia del grado de etoxilacin y del tamao de la cadena

carbonada sobre las curvas de crecimiento de microorganismos, se comparan las curvas de
los diferentes AGE a las concentraciones iniciales de 5, 25 y 50 mg/L (Figura V. 25). Se
observa que se obtienen valores mayores de UFC/ml cuando la longitud de la cadena
carbonada y el grado de etoxilacin es mayor.
282
TESIS DOCTORAL
5 mg/L
4,5E+06
4,0E+06
8,0E+06
C12-14E4
3,5E+06
7,0E+06
C16-18E11
C16-18E6
C16-18E6
6,0E+06
UFC/ml
3,0E+06
UFC/ml
25 mg/L
9,0E+06
2,5E+06
2,0E+06
5,0E+06
4,0E+06
1,5E+06
3,0E+06
1,0E+06
2,0E+06
5,0E+05
1,0E+06
0,0E+00
C12-14E4
0,0E+00
0
50
100
150
200
250
50
100
t, h
150
200
250
t, h
50 mg/L
1,4E+07
C12-14E11
1,2E+07
C12-14E4
UFC/ml
1,0E+07
8,0E+06
6,0E+06
4,0E+06
2,0E+06
0,0E+00
0
50
100
150
200
250
t, h
sobre las curvas de crecimiento de biomasa para diferentes AGE ensayados a la

concentracines iniciales de 5, 25 y 50 mg/L
En la Figura V. 26, Figura V. 27, Figura V. 28 y Figura V. 29 se representan las

curvas de crecimiento junto con los perfiles de biodegradacin primaria correspondientes.
Se observa que las formas de las curvas de biodegradacin se justifican mediante las
curvas de crecimiento de microorganismos.
Durante la fase de crecimiento exponencial de los microorganismos se produce una
disminucin lineal en la concentracin residual de tensioactivo, cuando la concentracin de
tensioactivo permanece constante se observa que no hay crecimiento de los
microorganismos. Finalmente para concentraciones de sustrato superiores a 5 mg/L se
observan curvas de crecimiento bifsicas con dos picos en las curvas de crecimiento,
sugiriendo as inhibicin de los microorganismos existentes inicialmente en el ensayo y
283
TESIS DOCTORAL
crecimiento de nuevas poblaciones debido a la biodegradacin de los subproductos de

biodegradacin.
C12-14 E4 . 5 mg/L
C12-14E4. 25 mg/L
4,0E+06
9,0E+06
30
UFC/ml
3,5E+06
UFC/ml
8,0E+06
Conc
25
7,0E+06
4
1,5E+06
UFC/m l
2,0E+06
6,0E+06
m g/L
2,5E+06
5,0E+06
15
4,0E+06
3,0E+06
1,0E+06
10
2,0E+06
5,0E+05
20
m g/L
3,0E+06
UFC/ml
Conc
5
1,0E+06
0,0E+00
0
50
100
150
0
200
0,0E+00
0
0
50
100
t, h
150
200
t, h
C12-14E4. 50 mg/L
1,2E+07
60
UFC/ml
UFC/ml
50
8,0E+06
40
6,0E+06
30
4,0E+06
20
2,0E+06
10
0,0E+00
mg/L
Conc
1,0E+07
0
0
100
200
300
400
t, h
Figura V. 26.- Curvas de crecimiento y perfiles de biodegradacin para el tensioactivo
C12-14E4 a 5, 25 y 50 mg/L
284
TESIS DOCTORAL
C12-14E11. 15 mg/L
8,E+06
7,E+06
UFC/ml
16
Conc
14
6,E+06
C12-14 E11 . 20 mg/L
4,E+07
18
25
UFC/ml
3,E+07
20
Conc
3,E+07
12
15
2,E+07
mg/L
UFC/ml
4,E+06
mg/L
10
2,E+07
10
3,E+06
6
1,E+07
2,E+06
1,E+06
5
5,E+06
0,E+00
0,E+00
0
0
50
100
0
0
150
50
100
150
200
t, h
t, h
C12-14E11 . 50 mg/L
1,E+07
60
UFC/ml
1,E+07
Conc
50
1,E+07
8,E+06
30
6,E+06
mg/L
40
UFC/ml
UFC/ml
5,E+06
20
4,E+06
10
2,E+06
0,E+00
0
0
100
200
300
t, h
Figura V. 27.- Curvas de crecimiento y perfiles de biodegradacin primaria para el
tensioactivo C12-14E11 a 15, 20 y 50 mg/L
285
TESIS DOCTORAL
C16-18E6. 5 mg/L
4,5E+05
C16-18E6. 25 mg/L
1,4E+06
30
4,0E+05
1,2E+06
UFC/ml
3,5E+05
25
Conc
1,0E+06
3,0E+05
20
2,0E+05
8,0E+05
15
6,0E+05
1,5E+05
m g/L
2,5E+05
U FC /m l
mg/L
U FC/ml
UFC/ml
Conc
10
4,0E+05
1,0E+05
5,0E+04
2,0E+05
0,0E+00
0
0
50
t, h
100
0,0E+00
150
0
0
50
100
t, h
150
200
tensioactivo C16-18E6 a 5 y 25 mg/L
C16-18E11. 5 mg/L
4,5E+06
4,0E+06
5
3,5E+06
UFC/ml
2,5E+06
3
2,0E+06
1,5E+06
mg/L
3,0E+06
1,0E+06
1
5,0E+05
0,0E+00
0
0
50
100
150
200
t, h
Figura V. 29.- Curva de crecimiento y perfil de biodegradacin primaria para el
tensioactivo C16-18E11 a 5 mg/L
5.2.5.
PARMETROS
CARACTERSTICOS
DE
LAS
CURVAS
DE
CRECIMIENTO
En la Tabla V. 17 se muestran los parmetros caractersticos de las curvas de

crecimiento durante el proceso de biodegradacin: X0 es el valor inicial de UFC/ml
obtenido en el ensayo; UFC/ml,max representa el valor mximo de UFC/ml que aparecen en
la primera fase de crecimiento exponencial (primer pico). Se observa que UFC/ml,max
286
TESIS DOCTORAL
aumenta con la concentracin cuando el nmero de moles de OE de la molcula de

tensioactivo es bajo, para nmero de moles de OE mayor el crecimiento se inhibe con la
concentracin, aparecen nuevas unidades formadoras de colonias responsables de la
degradacin de los metabolitos de biodegradacin.
El crecimiento microbiano durante la fase primaria de crecimiento exponencial
puede describirse mediante la ecuacin de Monod segn la siguiente ecuacin:
dX
=kx
dt
Ecuacin V. 14
o en su forma integrada:
X = X 0 exp(k t )
Ecuacin V. 15
Donde k representa la velocidad especfica de crecimiento en h-1, X la

concentracin de biomasa en cada instante expresada como UFC/ml, y X0 la concentracin
de biomasa al inicio del ensayo.
Mediante regresin no lineal se ha determinado la velocidad especfica de
crecimiento para los cuatro AGE ensayados. Se observa que para cada tensioactivo k
disminuye con la concentracin inicial del ensayo (Figura V. 30, Tabla V. 17) debido a un
efecto de inhibicin de los microorganismos.
Tambin se ha calculado el parmetro Yap (Tabla V. 17) que representa el
rendimiento de produccin de biomasa, es decir: la proporcin de sustrato original
convertido en biomasa, el cual se asume constante a lo largo del proceso de
biodegradacin. A partir de los perfiles de biodegradacin del sustrato y de las curvas de
crecimiento se calcula Yap como el cociente X/S, donde X es la cantidad de
microorganismos formados durante la fase de crecimiento exponencial y S la cantidad de
sustrato consumido durante el mismo perodo de tiempo.
287
TESIS DOCTORAL
Tabla V. 17.- Parmetros caractersticos de las curvas de crecimiento de biomasa para
AGE
C12-14E4
S0, mg/L
X0, UFC/ml
.
5
25
50
UFC/ml max
2.05 10
2.65.102
2.95.102
3.71 10
6.50.106
1.05.107
k, h-1
Yap, UFC/g sustrato
0.271
0.155
0.162
9.01.105
5.43.105
8.84.105
k , h-1
Yap, UFC/g sustrato
0.207
0.116
0.052
6.13.105
9.71.105
1.11.105
k, h-1
Yap, UFC/g sustrato
0.076
0.020
9.82.103
6.25.104
k, h-1
Yap, UFC/g sustrato
0.080
7.69.105
C12-14E11
S0, mg/L
X0, UFC/ml
.
15
20
50
UFC/ml max
4.30 10
4.98.102
8.02.104
7.50 10
1.57.107
2.77.106
C16-18E6
S0, mg/L
X0, UFC/ml
.
5
25
UFC/ml max
1.75 10
1.50.104
4.17 10
3.40.105
C16-18E11
S0, mg/L
X0, UFC/ml
.
1.04 10
UFC/ml max
3.96 10
0,3
C12-14E4
C12-14E11
0,3
k,h
-1
0,2
0,2
0,1
0,1
0,0
0
15
30
45
60
Conc, mg/L
Figura V. 30.- Variacin de la velocidad especfica de crecimiento con la concentracin
inicial de ensayo para los AGE C12-14E4 y C12-14E11
288
TESIS DOCTORAL
5.2.6. ESTUDIO CINTICO DE LA BIODEGRADACIN PRIMARIA DE LOS

AGE
Los mtodos estndar utilizados en el estudio de la biodegradabilidad de

tensioactivos son tiles para indicar si un producto es o no biodegradable pero no son tiles
para poder predecir la velocidad con que un determinado producto se biodegrada en el
medio ambiente. La necesidad de plantear expresiones que describan la velocidad de
biodegradacin en un medio acutico hace que se desarrollen modelos que permitan
predecir el comportamiento de productos difcilmente biodegradables en distintas
condiciones ambientales.
La cintica de biodegradacin de un compuesto orgnico por una poblacin de
microorganismos o poblaciones mezcladas de los mismos, depende de si este compuesto
soporta el crecimiento de los microorganismos, es decir, es su fuente de carbono y energa
principal o si no lo es, por lo que se pueden plantear diferentes modelos cinticos: modelos
para la biodegradacin de sustratos que no soportan el crecimiento de microorganismos y
modelos cinticos para la biodegradacin de sustratos que soportan el crecimiento de
microorganismos, estos modelos se presentan y discuten en los siguientes apartados.
5.2.6.1. Modelos cinticos para la biodegradacin de un sustrato que no soporta el

crecimiento de los microorganismos
Para establecer modelos de biodegradacin de compuestos, que no contribuyen

apreciablemente al crecimiento de los organismos responsables, se necesitan expresiones
que describan el crecimiento de esos organismos, ya que, en general, las velocidades de
crecimiento de stos y de desaparicin del compuesto orgnico son independientes.
Schmidt y col. (Schmidt, 1985) expresan la velocidad de biodegradacin del sustrato
mediante una cintica de saturacin utilizando la ecuacin de Michaelis-Menten:
dS
r S
= max X
dt
KM + S
Ecuacin V. 16
289
TESIS DOCTORAL
y la velocidad de crecimiento mediante la ecuacin logstica:
dX
X
= kX 1
dt
X max
Ecuacin V. 17
donde X representa la concentracin de biomasa y S la concentracin del

compuesto orgnico biodegradado.
Integrando esta ltima ecuacin resulta:
X=
X max
X X0
1 + max
exp ( kt )
X0
Ecuacin V. 18
La ecuacin logstica se simplifica a crecimiento exponencial cuando la

concentracin de biomasa es mucho ms pequea que la mxima permitida:
dX
kX
dt
X = X 0 exp ( kt )
Ecuacin V. 19
Y a crecimiento cero cuando la concentracin de biomasa es prcticamente la

mxima permitida:
dX
0
dt
X = X max
Ecuacin V. 20
y en la zona intermedia la ecuacin logstica se aproxima a crecimiento lineal con

una pendiente aproximadamente igual a su pendiente en el punto de inflexin.
290
TESIS DOCTORAL
La localizacin del punto de inflexin se puede realizar igualando a cero la segunda

derivada de la Ecuacin V. 17:
d2X
X kX dX
=
k
1
dt 2
X max X max dt
X kX i
2kX i
k 1 i
=k
=0
X
X
X
max
max
max
X max 1 kX max
dX
=k
1 =
2 2
4
dt i
Xi =
X max
2
el tiempo correspondiente al punto de inflexin:
X ( X max X 0 )
X max X 0
ln
= ln
= kti
X
X
X
X
(
)
0
max
0
X X0
ln max
X0
ti =
k
Ecuacin V. 21
la recta que con esa pendiente pasa por este punto:
X=
1 X X0 1
kX max
t ln max
X max
X
4
4
0
Ecuacin V. 22
Si sustituimos la Ecuacin V. 18, que expresa el crecimiento de biomasa, en la

Ecuacin V. 16, que expresa la variacin de la concentracin de tensioactivo en funcin
del tiempo, se obtiene:
291
TESIS DOCTORAL
dS
r S
X max
= max
dt
K M + S 1 + X max X 0 exp kt
( )
X0
Ecuacin V. 23
separando variables e integrando resulta:
r X
S
K M ln 0 + S0 S = max max ln 0 ( exp ( kt ) 1) + 1
k
S
X max
Ecuacin V. 24
e introduciendo la conversin de acuerdo con:
S = S 0 (1 x )
Ecuacin V. 25
queda:
M ln (1 x ) + x = X ln 0 ( exp ( kt ) 1) + 1
Ecuacin V. 26
donde:
M =
KM
S0
X =
rmax X max
kS0
0 =
X0
X max
Ecuacin V. 27
ecuacin que para KM >> S0 se reduce a:
292
TESIS DOCTORAL
x = 1 0 ( exp ( kt ) 1) + 1
X / M
Ecuacin V. 28
y para KM << S0 se reduce a:
x = X ln 0 ( exp ( kt ) 1) + 1
Ecuacin V. 29
En la Tabla V. 18 se recogen las expresiones correspondientes a los modelos que

tienen en cuenta la biodegradacin de un sustrato que no soporta el crecimiento de los
microorganismos y que no tienen en cuenta una concentracin de sustrato no
biodegradable, modelos propuestos por Schmidt y col. (Schmidt, 1985).
Tabla V. 18.- Modelos propuestos por Schmidt y col. (Schmidt, 1985) para sustratos que
no soportan el crecimiento de microorganismos sin considerar una concentracin residual

no biodegradable
CONDICIONES
MODELO CINTICO
Ecuacin logstica para la

biomasa y Michaelis Menten
para la biodegradacin del
M ln (1 x ) + x = X ln 0 ( exp ( kt ) 1) + 1
sustrato
biomasa y primer orden para la
biodegradacin del sustrato,
x = 1 0 ( exp ( kt ) 1) + 1
X / M
KM>> S0
biomasa y orden cero para la
biodegradacin del sustrato,
x = X ln 0 ( exp ( kt ) 1) + 1
KM<< S0
293
TESIS DOCTORAL
De haber una fraccin del sustrato no biodegradable, SR, bastara modificar la

Ecuacin V. 23 en la forma:
r ( S SR )
dS
X max
= max
dt
K M + S S R 1 + X max X 0 exp kt
( )
X0
Ecuacin V. 30
separando variables e integrando:
S SR
rmax X max X 0
ln
exp ( kt ) 1) + 1
K M ln 0
(
+ S0 S =
k
S SR
X max
Ecuacin V. 31
introduciendo la conversin queda:
xm
+ x = X ln 0 ( exp ( kt ) 1) + 1
x
x
m
M ln
)
Ecuacin V. 32
que se reduce a la Ecuacin V. 26 para xm = 1.

Esta es la ecuacin general para el modelo de biodegradacin de sustratos que no
soportan el crecimiento de microorganismos y que supone un crecimiento logstico para los
microorganismos teniendo en cuenta una concentracin residual SR para el sustrato.
Sin embargo, el segundo miembro de la Ecuacin V. 32 tambin puede
simplificarse si se considera no un crecimiento logstico para el crecimiento de
microorganismos, sino un crecimiento exponencial, lineal o permanece constante a la
concentracin de biomasa mxima permitida, Ecuacin V. 19, Ecuacin V. 22 y Ecuacin
V. 20 respectivamente.
294
TESIS DOCTORAL
El segundo miembro de la Ecuacin V. 32 se simplifica cuando la degradacin del

sustrato se produce simultneamente al crecimiento exponencial de la biomasa, Ecuacin
V. 19:
rmax
rmax X 0
X
kt
dt
exp
=
(
)
( exp ( kt ) 1) = X '( exp ( kt ) 1)
0
S0 0
kS0
Ecuacin V. 33
donde
X =
rmax X 0
k S0
Ecuacin V. 34
cuando la degradacin del sustrato se produce simultneamente al crecimiento

lineal de la biomasa:
rmax
S0
( X
'+ k ' t ) dt =
rmax
k' 2
2
X 0 ' t + t = X 1t + X 2t
S0
2
Ecuacin V. 35
y cuando la degradacin del sustrato se produce a la concentracin mxima de

biomasa:
rmax
rmax
=
X
dt
X max t = X 3t
max
S0 0
S0
Ecuacin V. 36
donde
r X
X 1 = max 0
S0
X2 =
rmax k
2
X3 =
rmax X max
S0
Ecuacin V. 37
295
TESIS DOCTORAL
que combinadas con los dos casos lmites de la ecuacin de Michaelis-Menten,

conducen a los 12 modelos de Schmidt y col. (Schmidt, 1985) corregidos para incluir la
existencia de una fraccin del sustrato no biodegradable, que se indican en la Tabla V. 19.
Tabla V. 19.- Modelos de Schmidt y col. (Schmidt, 1985) adaptados a una conversin
mxima ( concentracin de tensioactivo residual)

CONDICIONES
1) Ecuacin Logstica para la
biomasa
Michaelis-Menten para el sustrato
biomasa
Primer orden para el sustrato
biomasa
Orden cero para el sustrato
4) Crecimiento Exponencial para
la biomasa
la biomasa
la biomasa
7) Crecimiento Lineal para la
biomasa
biomasa
biomasa
10) Concentracin mxima de
biomasa
biomasa
biomasa
296
ECUACIN CINTICA INTEGRADA
xm
+ x = X ln 0 ( exp ( kt ) 1) + 1
x
x
m
M ln
xm
= X ln 0 ( exp ( kt ) 1) + 1
x
x
m
M ln
x = X ln 0 ( exp ( kt ) 1) + 1
xm
+ x = X ' ( exp ( kt ) 1)
xm x
M ln
xm
= X ' ( exp ( kt ) 1)
xm x
M ln
x = X ' ( exp ( kt ) 1)
xm
2
+ x = X 1t + X 2t
xm x
M ln
xm
2
= X 1t + X 2t
xm x
M ln
x = X 1t + X 2t 2
xm
+ x = X 3t
x
x
M ln
xm
= X 3t
x
x
m
M ln
x = X 3t
TESIS DOCTORAL
De todos los modelos cinticos de la Tabla V. 19 slo la ecuacin 5 puede aplicarse

de forma satisfactoria a nuestros resultados experimentales. Esta ecuacin asume un
crecimiento exponencial de la masa microbiana y una degradacin de primer orden del
tensioactivo.
En la Figura V. 31 se muestra, a ttulo de ejemplo, para algunos de los ensayos de
biodegradacin de los AGE estudiados la comparacin de los resultados experimentales de
conversin (Ecuacin V. 25) obtenidos frente a los calculados con la ecuacin 5 de la
Tabla V. 19. Las concentraciones ms altas de tensioactivo (25 y 50 mg/L) no definen bien
el perfil de biodegradacin obtenido, fundamentalmente en la etapa inicial de conversin.
Los parmetros del ajuste del modelo cintico M, X, k y xm obtenidos para los
diferentes tensioactivos estn recogidos en la Tabla V. 20. Tambin se muestra el valor de
la constante KM, obtenida teniendo en cuenta la relacin:
M =
KM
S0
Si el modelo es aplicable, el valor de la velocidad especfica de crecimiento de los

microorganismos k, y la constante de Michaelis-Menten KM deben ser constantes con la
concentracin de sustrato empleada, y como KM representa el valor de la concentracin de
sustrato para la cual la velocidad de biodegradacin es igual a la mitad de la mxima, no
seran vlidos valores muy elevados de esta constante.
Se observa que los valores de la constante KM varan de forma significativa con la
concentracin de sustrato, y se hacen negativos en algunos casos, por lo que este modelo, a
pesar de que ajusta los valores experimentales obtenidos, no explica el comportamiento de
la biodegradacin de los tensioactivos ensayados. Por tanto se ensayarn los modelos
donde el sustrato soporta el crecimiento de microorganismos.
297
TESIS DOCTORAL
C12-14E11. 15mg/L
C16-18E11. 5mg/L
1,2
1,0
1,0
0,8
0,8
0,6
0,6
0,4
0,4
0,2
0,2
0,0
0,0
-0,2
-0,2
0
50
100
150
200
250
20
40
80
100
120
140
160
180
t, h
t, h
C12-14E11. 50mg/L
C12-14E4. 25mg/L
1,0
1,0
0,8
0,8
0,6
0,6
0,4
0,4
60
0,2
0,2
0,0
0,0
-0,2
-0,2
0
50
100
150
200
250
100
200
300
400
t, h
t, h
Figura V. 31.- Comparacin entre los resultados experimentales y los obtenidos aplicando
la ecuacin 5 del modelo que considera crecimiento exponencial para la biomasa y primer
orden para el sustrato
298
TESIS DOCTORAL
Tabla V. 20.- Parmetros cinticos de la ecuacin 5 del modelo que considera crecimiento
exponencial para la biomasa y primer orden para el sustrato

FINDET 1214N/23 (C12-14E11)
S0, mg/L
k, h-1
KM, mg/L
xm
5
15
20
25
50
0.517
1.263
5.198
0.271
-0.027
0.005
7.00.10-4
1.00.10-4
0.002
0.455
0.148
0.227
0.351
0.201
-6.00.10-4
2.589
18.958
103.962
6.782
-1.360
0.897
0.889
0.893
0.873
0.953
0.996
0.996
0.997
0.998
0.975
FINDET 1618A/18 (C16-18E6)

S0, mg/L
5
25
50
1.586
0.577
0.448
-4
1.00 10
0.011
2.76.10-6
k, h-1
KM
xm
0.427
0.113
0.294
7.930
14.442
22.410
0.908
0.903
0.813
0.995
0.985
0.969
FINDET 1214N/16 (C12-14E4)

S0, mg/L
5
25
50
0.949
0.024
0.070
2.52 10
0.004
0.120
-8
k, h-1
KM, mg/L
xm
0.792
0.039
0.001
4.749
0.620
3.520
0.883
0.897
0.876
0.992
0.991
0.959
FINDET 1618A/23 (C16-18E11)

S0, mg/L
0.105
9.44 10
-6
k, h-1
KM, mg/L
xm
0.226
0.527
0.903
0.997
FINDET 10/18 (C10E6)

S0, mg/L
k, h-1
KM, mg/L
xm
0.494
0.011
0.085
2.470
0.905
0.989

S0, mg/L
k, h-1
KM, mg/L
xm
0.691
2.00.10-4
0.182
3.458
0.853
0.990
En general, cuando la sustancia considerada soporta el crecimiento de los

microorganismos, las velocidades de crecimiento de stos y de desaparicin del compuesto
orgnico estn acopladas, admitindose que se cumple aproximadamente la ecuacin de
Gaden (Gaden, 1959):
299
TESIS DOCTORAL
dX
dS
= Yap
dt
dt
Ecuacin V. 38
que por integracin permite relacionar la concentracin de biomasa (X) con la

concentracin del compuesto orgnico, sustrato (S):
X = X 0 + Yap ( S 0 S )
Ecuacin V. 39
En estas condiciones, para obtener modelos de biodegradacin de un sustrato, es

equivalente proponer un modelo cintico para el crecimiento de los microorganismos o
para el consumo de sustrato.
La aplicacin de la Ecuacin V. 39 hasta la primera etapa de crecimiento
exponencial de los microorganismos para los diferentes tensioactivos ensayados, y
teniendo en cuenta los parmetros X0 e Yap mostrados en la Tabla V. 17, donde Yap se ha
calculado siguiendo el procedimiento descrito en el apartado 5.2.5. (a partir de los perfiles
de biodegradacin y del crecimiento de microorganismos), determina que puede
considerarse vlida la expresin propuesta por Gaden en nuestras condiciones
experimentales. En la Figura V. 32 se muestra a ttulo de ejemplo para los AGE C12_14E11,
C16_18E6 y C12_14E4 a distintas concentraciones la comparacin de los resultados
experimentales del crecimiento de microorganismos con los calculados a partir de la
Ecuacin V. 39.
300
TESIS DOCTORAL
C12-14E11. 15 mg/L
9,0E+06
C12-14E11. 50 mg/L
3,0E+06
8,0E+06
2,5E+06
7,0E+06
2,0E+06
X, U FC /m l
X, UFC/ml
6,0E+06
5,0E+06
4,0E+06
3,0E+06
2,0E+06
1,5E+06
1,0E+06
5,0E+05
1,0E+06
0,0E+00
0,0E+00
-1,0E+06
10
20
30
40
50
10
20
30
t, h
50
60
70
t, h
C16-18E6. 5 mg/L
4,0E+04
4,0E+06
3,5E+04
3,5E+06
C12-14E4. 5mg/L
3,0E+06
X, UFC/ml
3,0E+04
X, UFC/ml
40
-5,0E+05
2,5E+04
2,0E+04
1,5E+04
2,5E+06
2,0E+06
1,5E+06
1,0E+06
1,0E+04
5,0E+05
5,0E+03
0,0E+00
0,0E+00
-5,0E+05
10
20
30
-5,0E+03
t, h
40
-1,0E+06
10
20
30
40
50
t, h
Figura V. 32.- Comparacin entre los resultados experimentales y calculados del
crecimiento de microorganismos para diferentes AGE
Por tanto se aplican los modelos para la biodegradacin de sustratos que soportan el
crecimiento de los microorganismos.
5.2.6.2. Modelos cinticos para la biodegradacin de un sustrato que soporta el

crecimiento de los microorganismos
Modelo de Monod
Si se utiliza el modelo de Monod (Monod, 1949) para el crecimiento:
301
TESIS DOCTORAL
S
1 dX
== m
X dt
KS + S
Ecuacin V. 40
la velocidad de biodegradacin del sustrato, teniendo en cuenta el modelo de Gaden

(Ecuacin V. 39) ser:
dS
1 mS
mS
X =
=
dt
Yap K S + S
KS + S
X0
+ S0 S
Yap
Ecuacin V. 41
con sus dos casos limites, dependiendo de los valores relativos de KS y S:

a) Para KS >> S:
dS
X
= m S 0 + S0 S
dt
K S Yap
Ecuacin V. 42
b) Para KS << S:
dS
= m 0 + S0 S
Y
dt
ap
Ecuacin V. 43
Introduciendo en la Ecuacin V. 41 la conversin del sustrato (x):
S = S0 (1 x )
m (1 x ) X 0
dx
=
+ S0 x
dt K S + S0 (1 x ) Yap
Ecuacin V. 44
302
TESIS DOCTORAL
dx m (1 x)
=
( 0 + x)
dt S + 1 x
Ecuacin V. 45
t=0
x=0
donde:
S =
KS
S0
0 =
X0
Yap S 0
Ecuacin V. 46
S + 1 x
(1 x ) (
0
+ x)
dx = mt
Ecuacin V. 47

+ x
S
ln (1 x ) + S + 1 ln 0
= mt
1 + 0
1 + 0
0
+x
S
0 + x
ln 0
+ ln
= mt
1 + 0 0 (1 x )
x
Ecuacin V. 48
En algunos casos los sustratos considerados son sustancias complejas que pueden
contener componentes no biodegradables, o la biodegradacin puede terminar antes de
alcanzar la mineralizacin completa del sustrato, por lo que habra que considerar una
fraccin de sustrato no biodegradable, SR.
Las simplificaciones lmites de la ecuacin de Monod, Ecuacin V. 42 y Ecuacin
V. 43, con una fraccin del sustrato no biodegradable, conducen a:
303
TESIS DOCTORAL
a) Para KS >> S:
dS m
=
( S S R ) 0 + S0 S = m S 2 + m 0 + S0 + S R S m S R 0 + S0
dt K S
KS
K S Yap
K S Yap
Yap
Ecuacin V. 49
expresin semejante a la propuesta por Quiroga y col. (Quiroga, 1998):
dS
= K 2 S 2 + K1 S + K 0
dt
Ecuacin V. 50
de manera que los parmetros primarios, de la ecuacin cintica inicial, son:
K2 =
K1 =
KS
m X 0
+ S0 + S R
K S Yap
K0 =
S R 0 + S0
K S Yap
Ecuacin V. 51
y los parmetros finales, de la expresin integrada:
p = K 4K2 K0 =
2
1
m X 0
KS
m X 0
KS
+ S0 + S R 4 S R 0 + S0 =
Yap
ap
X
+ S0 S R = m 0 + S0 S R
K S Yap
Yap
Ecuacin V. 52
304
TESIS DOCTORAL
q=
m X 0
+ S0 + S R + m 0 + S0 S R
K Y
K S Yap
S ap
=S
R
m
2
KS
Ecuacin V. 53
h=
m X 0
+ S0 + S R m 0 + S0 S R
K Y
X
K S Yap
S ap
= 0 +S
0
Yap
m
2
KS
Ecuacin V. 54
tal como estos mismos autores indican.

Si tenemos en cuenta la definicin de conversin:
xm =
S0 S R
S0
S R = S0 (1 xm )
Ecuacin V. 55
la expresin integrada en funcin de la conversin sera:
dx m
=
( xm x )(0 + x )
dt S
t =0
x=0
Ecuacin V. 56
305
TESIS DOCTORAL
xm x
0 + x
dx
1
1
=
ln
+
ln
0 ( xm x)(0 + x) xm + 0 xm xm + 0 0
x
x ( + x) m
ln m 0
= ( xm + 0 ) t
x
x
(
)
0
m
S
Ecuacin V. 57
y puede expresarse en forma explcita para x:
0 xm 1 exp
x=
( xm + 0 ) t
xm exp m ( xm + 0 ) t + 0
S
Ecuacin V. 58
b) Para KS << S:
dx
= m ( 0 + x)
dt
Ecuacin V. 59
t=0
x=0
+ x
= m t
ln 0
0
x = 0 (exp(mt ) 1)
Ecuacin V. 60
ya que evidentemente el orden cero no puede mantenerse hasta conversiones muy

altas.
En la Tabla V. 21 se resumen las ecuaciones propuestas para la aplicacin del
modelo de Monod en las diferentes condiciones expuestas anteriormente en funcin de la
conversin.
306
TESIS DOCTORAL
Tabla V. 21.- Modelo cintico de Monod en funcin de la conversin
CONDICIONES
Modelo general de Monod sin
considerar una fraccin de sustrato no
biodegradable
ECUACIN CINTICA
+x
S
+ x
+ ln 0
ln 0
= mt
1 + 0 0 (1 x )
x
concentracin residual de sustrato no

biodegradable (SR)
0 xm 1 exp
Modelo de Monod para KS>>S y una
x=
( xm + 0 ) t
xm exp m ( xm + 0 ) t + 0
S
Modelo de Monod para KS<<S y una

concentracin residual de sustrato no
x = 0 (exp( m t ) 1)
biodegradable (SR)
En la Figura V. 33 se muestran los resultados obtenidos de la aplicacin de las

diferentes ecuaciones del modelo de Monod (Tabla V. 21) a los tensioactivos C12-14E11 y
C16-18E11 que se han elegido como ejemplo. Se observa que slo es aplicable el modelo de
Monod que considera KS>>S (Ecuacin V. 58) y una concentracin residual de sustrato no
biodegradable. Resultados anlogos se obtienen para los diferentes tensioactivos a las
distintas concentraciones ensayadas.
307
TESIS DOCTORAL
C12-14E11_15mg/L
1,0
0,8
0,6
0,4
Modelo Monod KS>>S
Modelo General de Monod
Modelo Monod KS <<S
0,2
0,0
-0,2
0
20
40
60
80
100
120
140
160
t, h
C16-18E11_5mg/L
1,0
0,8
0,6
0,4
Modelo Monod KS>>S
Modelo General de Monod
Modelo Monod KS<<S
0,2
0,0
-0,2
0
50
100
150
200
250
t, h
Figura V. 33.- Aplicacin de las diferentes ecuaciones del modelo de Monod para los
tensioactivos C12-14E11 y C16-18E11

En la Tabla V. 22 se recopilan los parmetros cinticos 0, S, m y xm obtenidos de
la aplicacin de la Ecuacin V. 58 a todos los tensioactivos ensayados, as como el
coeficiente de correlacin r y la constante de saturacin KS, obtenida aplicando la relacin
establecida con la concentracin inicial de sustrato (Ecuacin V. 46). Estos parmetros se
han obtenidos por regresin no lineal utilizando el soporte informtico SigmaPlot .
308
TESIS DOCTORAL
Tabla V. 22.- Parmetros cinticos del modelo propuesto para los AGE
(Ecuacin V. 58)
FINDET 1214N/23 (C12-14E11)
S0, mg/L
5
15
20
25
50
-3
2.30 10
4.51.10-5
3.60.10-6
2.30.10-3
1.200
m, h-1
KS, mg/L
xm
0.064
0.129
0.042
0.050
0.359
0.015
0.046
0.020
0.016
0.002
0.321
1.924
0.852
1.265
17.995
0.907
0.899
0.897
0.879
0.895
0.998
0.997
0.999
0.998
0.977
Parmetros recalculados
S0, mg/L
5
15
20
25
-3
2.30 10
4.51.10-5
3.58.10-6
2.30.10-3
m h-1
KS, mg/L
xm
0.102
0.067
0.050
0.074
0.024
0.024
0.024
0.024
1.101
1.101
1.101
1.101
0.907
0.899
0.897
0.879
0.998
0.997
0.999
0.998
FINDET 1618A/18 (C16-18E6)

S0, mg/L
5
25
50
-6
8.86 10
4.60.10-3
6.58.10-2
m, h-1
KS, mg/L
xm
0.040
0.075
0.138
0.023
0.014
0.007
0.201
1.877
6.910
0.908
0.907
0.899
0.995
0.989
0.984
FINDET 1214N/16 (C12-14E4)

S0, mg/L
5
25
50
-9
9.46 10
6.04.10-2
2.381
m, h-1
KS, mg/L
xm
0.031
0.116
0.869
0.030
0.008
8.00.10-4
0.156
2.920
43.475
0.888
0.905
0.992
0.991
0.955
0.959
FINDET 1618A/23 (C16-18E11)

S0, mg/L
3.87 10
-6
m, h-1
KS, mg/L
xm
0.051
0.017
0.257
0.907
0.998

S0, mg/L
8.30 10
-3
m, h-1
KS, mg/L
xm
0.083
0.010
0.415
0.916
0.990

S0, mg/L
8.67 10
-6
m, h-1
KS, mg/L
xm
0.055
0.018
0.275
0.856
0.992
Se observa para el tensioactivo C12-14E11, donde se ha modificado en mayor medida

la concentracin inicial de sustrato en los experimentos, que excepto para la concentracin
de 50 mg/L tanto la velocidad mxima de crecimiento m como la constante KS
permanecen prcticamente constantes con la concentracin de sustrato, por lo que se ha
309
TESIS DOCTORAL
tomado un valor medio para estas constantes y se han recalculado el resto de los
parmetros del modelo 0, S y xm que tambin se muestran en la Tabla V. 22.
En la Figura V. 34 se representa el parmetro S frente a la concentracin de
sustrato obtenindose la relacin lineal prevista hasta la concentracin de 20 mg/L, la
concentracin de 25 mg/L no sigue el mismo comportamiento. Estos resultados parecen
indicar que a concentraciones elevadas y superiores a la CMC, lo que ocurre para este
tensioactivo y para ese rango de concentraciones (Tabla III. 1), el comportamiento cintico
del tensioactivo es diferente que para bajas concentraciones. Este hecho ya fue establecido
para otros AGE cuando la concentracin inicial de ensayo es muy superior a la CMC por
Zhang y col. (Zhang, 1999).
0,12
0,10
0,08
0,06
0,04
R = 0,9999
5, 15 y 20 mg/L
25 mg/L
0,02
0,00
0
10
15
20
25
30
S0, mg/L
Figura V. 34.- Representacin de S frente a la concentracin inicial de tensioactivo para
C12-14E11
Por tanto el modelo reproduce los resultados experimentales hasta concentraciones

de 20 mg/L con los mismos parmetros cinticos, para la concentracin de 25 mg/L
tambin puede ser utilizado el modelo, pero los parmetros cinticos son diferentes. En la
Figura V. 35 se comparan los valores experimentales y calculados de la conversin con el
modelo propuesto. Se observa que para la concentracin de 50 mg/L las desviaciones son
importantes y el modelo no define el perfil de biodegradacin experimental encontrado, a
esta concentracin el ajuste es peor y la constante KS presenta un valor muy elevado.
310
TESIS DOCTORAL
C12-14E11. 15 mg/L
1,0
1,0
0,8
0,8
0,6
0,6
0,4
0,4
C12-14E11. 5 mg/L
0,2
0,2
0,0
0,0
-0,2
-0,2
20
40
60
80
20
40
60
80
100
120
t, h
t, h
C12-14E11. 20mg/L
C12-14E11. 25mg/L
1,0
1,0
0,8
0,8
0,6
0,6
0,4
140
160
0,4
0,2
0,2
0,0
0,0
-0,2
-0,2
50
100
150
20
40
60
80
100
120
140
160
180
200
t, h
t, h
C12-14E11. 50mgL
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
-0,2
0
100
200
300
400
t, h
el modelo propuesto para el tensioactivo C12-14E11 a diferentes concentraciones iniciales
Para los tensioactivos C16-18E6 y C12-14E4, los parmetros cinticos son diferentes
para las concentraciones extremas ensayadas (25 y 50 mg/L). Para el resto de tensioactivos
311
TESIS DOCTORAL
ensayados: C16-18E11, C10E6 y C10E3, al no haberse modificado la concentracin inicial de

tensioactivo en el ensayo los parmetros del modelo son los presentados en la Tabla V. 22.
En la Figura V. 36 y Figura V. 37 y Figura V. 38 se comparan los resultados
obtenidos de la aplicacin del modelo y los resultados experimentales para estos
tensioactivos. Se observa una buena concordancia entre ellos excepto para las
concentraciones ms elevadas de tensioactivo (50 mg/L) para la cual el modelo no
reproduce satisfactoriamente los resultados experimentales.
C16-18E6. 5mg/L
C16-18E6. 25 mg/L
1,0
1,0
0,8
0,8
0,6
0,6
1,2
1,2
0,4
0,4
0,2
0,2
0,0
0,0
-0,2
-0,2
0
50
100
150
200
50
t, h
100
150
200
250
t, h
C16-18E6. 50 mg/L
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
-0,2
0
50
100
150
200
250
t, h
312
TESIS DOCTORAL
C12-14E4. 5mg/L
C12-14E4. 25 mg/L
1,0
1,0
0,8
0,8
0,6
0,6
0,4
0,4
0,2
0,2
0,0
0,0
-0,2
0
50
100
150
200
50
100
150
200
250
t, h
t, h
C12-14E4. 50mg/L
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
-0,2
0
100
200
300
400
t, h
313
TESIS DOCTORAL
C10E6. 5mg/L
C16-18E11. 5mg/L
1,2
1,0
1,0
0,8
0,8
0,6
0,6
1,2
0,4
0,4
0,2
0,2
0,0
0,0
-0,2
-0,2
0
50
100
150
200
250
50
100
t, h
150
200
t, h
C10E3. 5mg/L
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
20
40
60
80
100
120
140
160
t, h
el modelo propuesto para los tensioactivos C16-18E11, C10E6 y C10E3
En la Figura V. 39 se comparan los valores de conversin experimentales y los

calculados con el modelo de Monod (Ecuacin V. 58) con los parmetros indicados en la
Tabla V. 22. La desviacin relativa media calculada segn la siguiente expresin:
DES =
x
x
exp erimental
xterico
exp erimental
Ecuacin V. 61
ha sido de: 4.54 %, para bajas concentraciones (5, 15 y 20 mg/L): 5.43 % para 25
mg/L: y 11.50 % para 50 mg/L.
314
TESIS DOCTORAL
1,2
5, 15 y 20 mg/L
25 mg/L
x experimental
1,0
50 mg/L
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
x terico
Figura V. 39.- Comparacin entre los valores de conversin experimentales y calculados
segn el modelo de Monod para los AGE a diferentes concentraciones
Aplicacin y comprobacin del modelo cintico propuesto para la evaluacin de los

parmetros cinticos
Teniendo en cuenta los parmetros cinticos evaluados para los perfiles de

biodegradacin (Tabla V. 22) se ha aplicado el modelo cintico para evaluar el tL y el t1/2
despejando el tiempo de la Ecuacin V. 57:
x ( + x )
ln m 0
(
)
x
x
t= 0 m
m (x m + 0 )
Ecuacin V. 62
Para calcular el tiempo de latencia se sustituyen todos los parmetros cinticos y el

trmino x = 0.1 en la Ecuacin V. 62, para determinar el tiempo de vida media se procede
igual pero sustituyendo x = 0.5. Los resultados obtenidos se muestran y se comparan con
los valores experimentales obtenidos de los perfiles de biodegradacin en la Tabla V. 23.
315
TESIS DOCTORAL
Tambin es posible calcular la velocidad especfica de crecimiento () (Tabla V.

23) a partir de los perfiles de biodegradacin primaria (Figura V. 13, Figura V. 15 y Figura
V. 16) de la siguiente forma:
Teniendo en cuenta la expresin para el crecimiento exponencial:
X = X 0 exp( t )
Ecuacin V. 63
para t = t1 y para t = t2 la ecuacin anterior adopta las expresiones:
t = t1 X 1 = X 0 exp( t1 )
Ecuacin V. 64
t = t2 X 2 = X 0 exp( t 2 )
Ecuacin V. 65
donde t1 y t2 son dos tiempos cualesquiera correspondientes a la fase de

degradacin del sustrato y X1 y X2 la concentracin de biomasa correspondiente.
Suponiendo constante cuando S >> KS (esto se cumple para tiempos bajos, es
decir, al inicio de la biodegradacin) y asumiendo un rendimiento Y (gmicroorganismos/gsustrato)
constante, se puede relacionar la concentracin de microorganismos en cada instante con la
cantidad de sustrato consumida a travs de las expresiones:
X 1 X 0 tt1
=
e
Y
Y
Ecuacin V. 66
X 2 X 0 tt 2
=
e
Y
Y
Ecuacin V. 67
316
TESIS DOCTORAL
donde X1/Y se define como los gramos de sustrato que producen X1 gramos de
microorganismos y X2/Y los gramos de sustrato que producen X2 gramos de
microorganismos.
X1/Y puede ser:
[S ]i [S ] t1
[S ]i
Ecuacin V. 68
X2/Y puede ser:
[S ]i [S ] t 2
[S ]i
Ecuacin V. 69
si se dispone de datos de concentracin de tensioactivo residual o de oxgeno

disuelto frente a tiempo. Tambin puede ser el cociente entre demanda de oxgeno y
demanda de oxigeno total si se dispone de datos de demanda de oxgeno frente a tiempo:
X
DO
=
Y DOT
Ecuacin V. 70
Si se dividen la Ecuacin V. 66 y la Ecuacin V. 67 se obtiene la ecuacin que

permite el clculo de a partir de los datos de un perfil de biodegradacin (primaria o
ltima):
X /Y
ln 1 = (t1 t 2 )
X 2 /Y
Ecuacin V. 71
317
TESIS DOCTORAL
En la Tabla V. 23 se comparan los parmetros experimentales obtenidos de los

perfiles de biodegradacin y los obtenidos tras la aplicacin del modelo. Se observa que a
pesar del error experimental en la estimacin de parmetros a partir de los perfiles de
biodegradacin (fundamentalmente para ), existe una buena concordancia entre ellos.
Tabla V. 23.- Comparacin de los parmetros experimentales y los obtenidos de la
aplicacin del modelo propuesto para diferentes AGE

FINDET 1214N/23 (C12-14E11)
Parmetros experimentales Parmetros modelo
S0, mg/L
tL, h
t1/2, h
, h-1
tL, h
t1/2, h
m, h-1
5
15
20
25
22.51
22.28
22.52
15.00
26.20
30.75
27.68
19.71
0.052
0.144
0.077
0.078
16.32
23.80
23.04
13.86
28.58
30.62
28.98
22.05
0.027
0.027
0.027
0.016
FINDET 1618A/18 (C16-18E6)

S0, mg/L
tL, h
t1/2, h
, h-1
tL, h
t1/2, h
m, h-1
5
25
14.74
20.37
21.13
28.54
0.273
0.258
17.53
18.91
21.78
32.09
0.023
0.014
FINDET 1214N/16 (C12-14E4)

S0, mg/L
tL, h
t1/2, h
, h-1
tL, h
t1/2, h
m, h-1
5
25
14.50
23.79
19.29
40.91
0.280
0.089
19.00
25.73
21.71
43.60
0.030
0.008
FINDET 1618A/23 (C16-18E11)

S0, mg/L
tL, h
t1/2, h
, h-1
tL, h
t1/2, h
m, h-1
29.71
39.42
0.069
32.53
39.79
0.017

S0, mg/L
tL, h
t1/2, h
, h-1
tL, h
t1/2, h
m, h-1
9.00
19.14
0.043
22.54
41.19
0.010

318
S0, mg/L
tL, h
t1/2, h
, h-1
tL, h
t1/2, h
m, h-1
37.00
50.43
0.060
33.81
42.24
0.018
TESIS DOCTORAL
5.2.6.3. Modelos para la biodegradacin de sustratos que inhiben el crecimiento de

microorganismos
Los perfiles de biodegradacin para la concentracin de 50 mg/L para todos los

tensioactivos ensayados no se pueden ajustar mediante el modelo cintico que supone
crecimiento de microorganismos segn la ecuacin de Monod (Ecuacin V. 58). Para estas
concentraciones parece existir una inhibicin por sustrato de los microorganismos, por lo
que se aplica para estas concentraciones el Modelo de Andrews para el crecimiento de
microorganismos.
Modelo de Andrews
Si se considera el modelo de Andrews para el crecimiento, aplicable a la

biodegradacin de sustratos que inhiben el crecimiento, la velocidad especfica de
crecimiento y la velocidad de disminucin del sustrato, teniendo en cuenta la ecuacin de
Gaden, vienen dadas por las siguientes ecuaciones:
m S
S2
KS + S +
Ki
Ecuacin V. 72
dS
=
dt
X0
+
S
+
S
0
S 2 Yap
KS + S +
Ki
m S
Ecuacin V. 73
introduciendo en la Ecuacin V. 73 la conversin del sustrato:
m (1 x )
dx
=
( 0 + x )
dt S + 1 x + i (1 x )2
i =
S0
Ki
Ecuacin V. 74
319
TESIS DOCTORAL
que por integracin conduce a:
+x
0 + x
S
ln 0
+ (1 + i (1 + 0 ) ) ln
i x = mt
1 + 0 0 (1 x )
Ecuacin V. 75
Ecuacin que para i = 0, se reduce a la anteriormente obtenida aplicando el

modelo de Monod, Ecuacin V. 48.
En el caso de considerar una concentracin de sustrato no biodegradable la
Ecuacin V. 73 quedara en la forma:
X0
+ S0 S
dS
Yap
=
2
dt
( S SR )
KS + S SR +
Ki
m ( S S R )
Ecuacin V. 76
Introduciendo la conversin mxima definida por la Ecuacin V. 55, la Ecuacin V.

76 se reduce a:
m ( xm x )( 0 + x )
dx
=
dt S + xm x + i ( xm x )2
Ecuacin V. 77
que por integracin conduce a:
x ( + x )
+ x
ln m 0
+ (1 + i ( xm + 0 ) ) ln 0
i x = mt
xm + 0 0 ( xm x )
0
Ecuacin V. 78
320
TESIS DOCTORAL
donde S y i han sido definidas en las Ecuacin V. 46 y Ecuacin V. 74

respectivamente.
Obsrvese que en ausencia de inhibicin la Ecuacin V. 78 se reduce a:
x ( + x )
+ x
ln m 0
+ ln 0
= mt
xm + 0 0 ( xm x )
0
Ecuacin V. 79
que es la expresin general utilizando la ecuacin de Monod, que se reduce a la

Ecuacin V. 58 cuando predomina el primer trmino del primer miembro (S >> 1), y a la
Ecuacin V. 59 cuando predomina el segundo (S << 1).
En la Tabla V. 24 se muestran las diferentes ecuaciones para la aplicacin del
modelo de Andrews.
Tabla V. 24.- Modelo cintico de Andrews en funcin de la conversin
CONDICIONES
ECUACIN CINTICA
Modelo General
+x
0 + x
S
ln 0
+ (1 + i (1 + 0 ) ) ln
i x = mt
1 + 0 0 (1 x )
Concentracin
de sustrato no
biodegradable
x ( + x )
0 + x
S
ln m 0
+ (1 + i ( xm + 0 ) ) ln
i x = mt
xm + 0 0 ( xm x)
(SR)
Si la inhibicin predomina, la Ecuacin V. 78 puede simplificarse a:
0 + x
i x = mt
i ( xm + 0 ) ln
Ecuacin V. 80
que puede linealizarse en la forma:
321
TESIS DOCTORAL
x
1 + x m
= ( xm + 0 ) ln 0
t
t 0 i
Ecuacin V. 81
La aplicacin del modelo de Andrews a los resultados experimentales para la

concentracin de 50 mg/L slo ha sido posible, considerando el modelo general y una
concentracin de sustrato no biodegradable (Tabla V. 24). Se ha aplicado a los
tensioactivos C12-14E11 C16-18E6 y C12-14E4. Los parmetros de aplicacin del modelo se
muestran en la Tabla V. 25 junto con la constante de inhibicin Ki calculada a partir de la
siguiente expresin:
i =
S0
Ki
Se observa que la constante de inhibicin es mucho mayor para los tensioactivos de

mayor peso molecular, mayor grado de etoxilacin y mayor cadena carbonada.
Tabla V. 25.- Parmetros cinticos del modelo de Andrews para diferentes AGE a 50
mg/L
FINDET 1214N/23 (C12-14E11)
S0, mg/L
m, h-1
Ki, mg/L
xm
50
37.591
22.436
0.006
0.033
1515.15
0.934
0.9906
FINDET 1618A/18 (C16-18E6)

S0, mg/L
m, h-1
Ki, mg/L
xm
50
5.049
0.575
0.033
0.020
2500
0.927
0.9813
FINDET 1214N/16 (C12-14E4)
322
S0, mg/L
m, h-1
Ki, mg/L
xm
50
26.961
22.337
0.0013
0.701
71.32
1.540
0.9621
TESIS DOCTORAL
5.3. BIODEGRADACIN DEL NONILFENOL POLIETOXILADO
Los primeros tensioactivos utilizados en las formulaciones detergentes eran

tensioactivos catinicos, pero su persistencia en el medio oblig a limitar su uso por su
escasa biodegradabilidad y a exigir que todos los tensioactivos que formaban parte de las
formulaciones detergentes fueran biodegradables. Como productos alternativos empezaron
a utilizarse mezclas de tensioactivos aninicos y tensioactivos no inicos del tipo
etoxilados, convirtindose en producto estrella el nonilfenol polietoxilado.
Los alquilfenol etoxilados, y en particular los nonilfenol polietoxilados, son
tensioactivos no inicos que se vierten en grandes cantidades a las plantas de tratamiento
de aguas residuales o directamente a entornos ambientales. Los NPEO pueden ser
degradados biolgicamente en plantas de tratamiento y en medios naturales. En aguas
naturales se ha comprobado que los NPEO no son persistentes, pero algunos productos de
degradacin pueden presentar una persistencia moderada, en especial bajo condiciones
anaerobias (Maguire, 1999).
La ramificacin del grupo nonil en los NP y NPEO retardan la biodegradacin as
como un incremento en la longitud de la cadena etoxilada, adems los alquilfenoles y los
alquilfenoles etoxilados son ms persistentes que los LAS y que los alcoholes etoxilados
(Patterson, 1970; Kravetz, 1991; Salanitro, 1995).
Se han realizado experimentos con NPEO a las concentraciones iniciales: 5, 25 y 50
mg/L. El NPEO utilizado en este trabajo presenta una cadena hidrofbica formada por 9
tomos de carbono y una cabeza polar con un promedio de 9.5 molculas de xido de
etileno. La concentracin de tensioactivo residual se midi utilizando el mtodo
colorimtrico del yodo-yoduro (apartado 3.4.1.3.).
Los resultados obtenidos se muestran en la Figura V. 40 donde la concentracin de
tensioactivo se ha expresado como tanto por ciento de tensioactivo residual. Los puntos
representan los porcentajes medios experimentales (dos rplicas). Para comprobar la
calidad del inculo, junto con los ensayos de biodegradacin, se llevaron a cabo ensayos de
biodegradacin con un tensioactivo aninico (LAS) como patrn blando. En todos los
casos la biodegradacin del LAS fue mayor del 90% a los cinco das, aceptando as la
validez de los ensayos (apartado 3.3.1.6.), (UNE 55-844-91).
323
TESIS DOCTORAL
120
5 mg/L
25 mg/L
100
% NP E O RE S IDUAL
50 mg/L
80
60
40
20
0
0
50
100
150
200
250
300
350
t, h
Figura V. 40.- Evolucin del porcentaje de NPEO residual en los ensayos de
biodegradacin para diferentes concentraciones de materia tensioactiva
En la Tabla V. 26 se muestran los parmetros caractersticos de los perfiles de

biodegradacin del NPEO (apartado 5.2.3.): concentracin inicial de tensioactivo (S0),
tiempo total de duracin del ensayo (tT), biodegradabilidad (B), tiempo de aclimatacin
(tL), tiempo de vida media (t1/2), velocidad media de biodegradacin (VM) y concentracin
residual (SR).
A 5 mg/L el tiempo de adaptacin fue de 1.6 das, la biodegradacin se alcanz a
los 7.6 das de iniciado el ensayo y fue del 99%. Al aumentar la concentracin del ensayo a
25 mg/L los valores fueron respectivamente de 1.7 das, 13 das y 98%. Si la concentracin
se duplica a 50 mg/L el tiempo de aclimatacin aumenta a 1.8 das, la biodegradacin
disminuye al 95% y el ensayo dura 14 das.
Tabla V. 26.- Parmetros caractersticos de los perfiles de biodegradacin para el NPEO
324
S0, mg/L
tT, h
B, %
tL, h
t1/2, h
VM, %/h
SR, mg/L
5
25
50
182.50
328.50
334.25
58
17.5
49
38.489
38.757
42.563
52.740
64.498
60.763
1.41
0.89
0.44
0.053
0.528
2.439
TESIS DOCTORAL
En todos los perfiles de biodegradacin obtenidos y a todas las concentraciones

estudiadas, se observa un ligero aumento de la concentracin de tensioactivo durante el
perodo de aclimatacin o fase de latencia. Este efecto se intent reducir al mnimo
agitando muy bien la disolucin de tensioactivo antes de proceder a la toma de muestras.
Los tensioactivos son agentes de superficie y tienden a acumularse en las interfases,
adsorbindose preferentemente en las paredes del matraz y en la interfase agua-aire. Es
muy probable que la adsorcin en las interfases sea la causa del aumento de la
concentracin del NPEO durante la fase de aclimatacin de los microorganismos. En el
estudio de la biodegradacin primaria de alcoholes etoxilados (Jurado, 2002) y del LAS
(Jurado, 2004) tambin se ha observado este comportamiento. Parece ser que este efecto es
ms acusado cuanto menor es la tensin superficial del tensioactivo.
Para comprender mejor lo que ocurre durante el proceso de biodegradacin, junto
con los perfiles de biodegradacin primaria, se han obtenido las curvas de crecimiento de
microorganismos. El nmero de microorganismos viables se obtuvo mediante recuento
hetertrofo en placa (apartado 3.4.2.), expresndose el resultado como unidades
formadoras de colonias por ml (UFC/ml). En la Tabla V. 27 se muestran los parmetros
caractersticos de las curvas de crecimiento para las concentraciones estudiadas. k e Yap se
han obtenido de acuerdo con el procedimiento descrito en el apartado 5.2.5.
Tabla V. 27.- Parmetros caractersticos de las curvas de crecimiento para el NPEO

S0, mg/L
5
25
50
X0, UFC/ml
.
5.80 10
4.50.102
1.75.103
UFC/ml max
.
6.95 10
3.24.106
5.47.106
k, h-1
Yap, UFC/g sustrato
0.146
0.190
0.144
1.92.105
1.95.105
2.15.105
La Figura V. 41 muestra las curvas de crecimiento de los microorganismos a las

tres concentraciones estudiadas junto con sus perfiles de biodegradacin correspondientes.
325
TESIS DOCTORAL
5 mg/L
25 mg/L
30
8,0E+05
4,5
4,0
3,5E+06
Conc
7,0E+05
Conc
25
3,0E+06
UFC/ml
UFC/ml
3,5
6,0E+05
2,5E+06
4,0E+05
2,0
3,0E+05
Conc, m g/L
2,5
UFC/m l
Conc, m g/L
5,0E+05
2,0E+06
15
1,5E+06
UFC/m l
20
3,0
10
1,5
1,0E+06
2,0E+05
1,0
5,0E+05
1,0E+05
0,5
0,0
0,0E+00
0
25
50
75
t, h 100
125
150
0,0E+00
0
175
50
100
150
t, h
200
250
300
50 mg/L
50
7,0E+06
Conc
45
UFC/ml
6,0E+06
40
Conc, mg/L
30
4,0E+06
25
3,0E+06
20
15
UFC/ml
5,0E+06
35
2,0E+06
10
1,0E+06
5
0
0
50
100
150
t, h 200
250
300
0,0E+00
350
Figura V. 41.- Curvas de crecimiento de microorganismos y perfiles de biodegradacin
primaria para el NPEO a diferentes concentraciones iniciales de ensayo
Un anlisis preliminar de las curvas de biodegradacin (Figura V. 40) confirma que

la concentracin de NPEO afecta a la forma de la curva obtenida, a la velocidad media de
biodegradacin (Tabla V. 26) y al porcentaje de biodegradacin alcanzado (Figura V. 40).
Sin embargo, no afecta significativamente al tiempo de aclimatacin de los
microorganismos, variando ste entre 38.48 horas para el ensayo de 5 mg/L y 42.56 horas
para el ensayo de 50 mg/L.
Los perodos de aclimatacin para NPEO suelen ser inferiores que los encontrados
por otros autores para otros tensioactivos tales como el LAS (Larson, 1981). La causa es
que probablemente las enzimas activas para el NPEO son enzimas hidrolticas que ya estn
presentes en el medio o son sintetizadas relativamente rpido, mientras que en el caso del
LAS, las enzimas son mas especficas y el tiempo para sintetizarlas es mayor.
326
TESIS DOCTORAL
Para el ensayo de 5 mg/L la curva de biodegradacin presenta una forma sigmoidal

y la curva de crecimiento tiene forma de campana, alcanzndose el mximo de UFC/ml
justo cuando se completa la biodegradacin (a los 3 das de iniciado el ensayo). Este
comportamiento recuerda a las curvas tpicas del modelo de Monod (Monod, 1949).
Para el ensayo de 25 mg/L la curva de biodegradacin tambin es sigmoidal,
recordando las cinticas de Monod con un cambio brusco de la concentracin de
tensioactivo residual tras el perodo de adaptacin. El 64 % de la biodegradacin primaria
se produce en apenas 24 horas (entre el segundo y tercer da de ensayo). Durante este
perodo de cada brusca de la concentracin las curvas de crecimiento de los
microorganismos muestran un crecimiento exponencial y posteriormente una fase en la que
la densidad de poblacin se mantiene constante en torno a 2.90.106 UFC/ml, al mismo
tiempo que se produce una cada lineal de la concentracin que sugiere una cintica de
orden cero. Se puede asumir que durante este perodo se est produciendo una inhibicin
de los microorganismos cuando an no se ha completado la biodegradacin del
tensioactivo. Este hecho apunta a una inhibicin del crecimiento de los microorganismos
debido a la acumulacin de los subproductos de biodegradacin. Asumiendo que el
mecanismo que tiene lugar es la hidrlisis no oxidativa del NPEO (Jonkers, 2004) para dar
cadenas cortas de nonilfenol etoxilado (nonilfenol dietoxilado, nonilfenol monoetoxilado y
nonilfenol) esto hace pensar que estos subproductos de degradacin resultan txicos para
los microorganismos del ensayo.
Cuando se aumenta la concentracin a 50 mg/L se reproduce el mismo patrn de
comportamiento. El 40% de la biodegradacin primaria tiene lugar en apenas 24 horas
(durante el segundo y tercer da de ensayo) y contina con una disminucin lineal de la
concentracin del tensioactivo residual, perodo durante el cual la densidad de poblacin se
mantiene constante. Tanto para el ensayo de 25 mg/L como para el de 50 mg/L se observa
que finalizada la biodegradacin primaria del tensioactivo, la curva de crecimiento
evidencia una segunda etapa de crecimiento exponencial en la que se inicia la
biodegradacin de los metabolitos resultantes del proceso de biodegradacin, posiblemente
debido a la adaptacin de nuevos microorganismos.
327
TESIS DOCTORAL
5.3.2. ESTUDIO CINTICO DE LA BIODEGRADACIN PRIMARIA DEL NPEO
Frecuentemente para analizar los perfiles de biodegradacin correspondientes a

tensioactivos no inicos se utiliza una cintica de primer orden (Zhang, 1999), sin embargo
la aplicacin de este modelo a los perfiles de biodegradacin del NPEO no justifica la
dependencia experimental observada por dos razones: no se contempla la existencia de un
periodo inicial de adaptacin de los microorganismos al sustrato y la funcin exponencial
del tipo e-kt no explica la disminucin de la concentracin observada.
Este hecho es lgico si tenemos en cuenta que los procesos de primer orden
responden a modelos en los que slo se tiene en cuenta la sustancia ensayada del tipo:
A B
Sin embargo, para que tenga lugar el proceso de biodegradacin es necesaria la

intervencin sobre la sustancia a ensayar de una serie de microorganismos (X) que
transformen el tensioactivo de partida (S) en nuevos microorganismos, anhdrido carbnico
y agua si la biodegradacin es total, o microorganismos, anhdrido carbnico, agua y
metabolitos, si la biodegradacin es parcial:
S + X CO2 + H 2 O + X + (metabolitos )
Un anlisis preliminar de los perfiles de biodegradacin primaria obtenidos (Figura

V. 40) demuestra que las funciones de tipo sigmoidal justifican bien la dependencia
experimental observada, y esto nos lleva a buscar modelos que tengan en cuenta la tasa de
crecimiento especfica de los microorganismos.
Para comprobar la hiptesis de Gaden se aplica la Ecuacin V. 39 hasta la primera
etapa de crecimiento exponencial de los microorganismos utilizando los parmetros X0 e
Yap mostrados en la Tabla V. 27. Los resultados se presentan en la Figura V. 42 donde se
328
TESIS DOCTORAL
observa que puede considerarse vlida la expresin propuesta por Gaden en nuestras
condiciones experimentales.
NPEO. 5 mg/L
NPEO. 25 mg/L
4,0E+06
7,0E+05
3,5E+06
6,0E+05
3,0E+06
5,0E+05
2,5E+06
X , U FC /m l
X , U FC /m l
8,0E+05
4,0E+05
3,0E+05
2,0E+05
2,0E+06
1,5E+06
1,0E+06
1,0E+05
5,0E+05
0,0E+00
0
10
20
30
40
50
60
0,0E+00
70
-1,0E+05
20
40
60
80
t, h
t, h
NPEO. 50 mg/L
6,0E+06
5,0E+06
X, UFC/ml
4,0E+06
3,0E+06
2,0E+06
1,0E+06
0,0E+00
0
20
40
60
80
-1,0E+06
t, h
crecimiento de microorganismos para el NPEO a diferentes concentraciones iniciales
Para el nonilfenol polietoxilado se ha aplicado el modelo cintico para sustratos que

soportan el crecimiento de microorganismos, modelo de Monod considerando una
concentracin de tensioactivo residual (Ecuacin V. 58). Los resultados obtenidos se
presentan en la Tabla V. 28 donde se muestra tambin el valor de KS teniendo en cuenta la
relacin:
329
TESIS DOCTORAL
S =
KS
S0
Tabla V. 28.- Parmetros cinticos del modelo propuesto (Ecuacin V. 58) para el NPEO
a diferentes concentraciones iniciales

NPEO
S0, mg/L
5
25
50
-9
8.42 10
3.49.10-5
2.38.10-2
m, h-1
KS, mg/L
xm
0.341
0.074
0.152
0.130
0.013
0.010
1.709
1.852
7.605
0.956
0.915
0.826
0.986
0.994
0.970
S0, mg/L
m, h-1
KS, mg/L
xm
5
25
1.01.10-8
3.50.10-5
0.356
0.071
0.134
0.012
1.780
1.780
0.959
0.915
0.986
0.994
En la Figura V. 43 se comparan los valores experimentales y los calculados con el

modelo, se observa un buen ajuste del modelo aplicado para las concentraciones de 5 y 25
mg/L, y un valor de la constante KS prcticamente coincidente para estas concentraciones,
aunque la velocidad especfica mxima de crecimiento disminuye considerablemente con
la concentracin de tensioactivo ensayada as como la conversin mxima alcanzada, lo
que implica una inhibicin del crecimiento de microorganismos por efecto de la
concentracin.
Se ha tomado un valor medio de Ks para las concentraciones de 5 y 25 mg/L, se
impone este valor y se recalculan de nuevo el resto de los parmetros cinticos. Para estas
concentraciones, los resultados obtenidos se muestran tambin en la Tabla V. 28. Para la
concentracin de 50 mg/L, el ajuste es peor y la constante Ks diferente, lo que implica un
comportamiento cintico distinto para estas concentraciones de tensioactivo (concentracin
superior a la CMC, Tabla III. 1.), al igual que ocurra con los tensioactivos alcoholes
grasos etoxilados (apartado 5.2.6.2).
330
TESIS DOCTORAL
NONILFENOL. 25 mg/L
NPEO. 5 mg/L
1,2
1,0
1,0
0,8
0,8
0,6
0,6
1,2
0,4
0,4
0,2
0,2
0,0
0,0
-0,2
-0,2
50
100
150
200
50
100
150
t, h
200
250
300
t, h
NPEO. 50 mg/L
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
-0,2
0
100
200
300
400
t, h
el modelo propuesto para el NPEO a diferentes concentraciones iniciales

biodegradacin (Tabla V. 28) se ha aplicado el modelo cintico para evaluar tL y t1/2
segn se indica en el apartado 5.2.6.2. (Ecuacin V. 62) y se comparan los parmetros
experimentales obtenidos de los perfiles de biodegradacin, observando buena
concordancia entre ellos. Los resultados se muestran en la Tabla V. 29 en la que tambin se
indica el valor de la velocidad especfica de crecimiento () calculada segn la Ecuacin
V. 71 a partir de los perfiles de biodegradacin primaria (apartado 5.2.6.2.).
331
TESIS DOCTORAL
Tabla V. 29.- Comparacin entre los parmetros experimentales y los calculados segn el
modelo propuesto para el NPEO a diferentes concentraciones iniciales

NPEO
Parmetros experimentales
Parmetros modelo
S0, mg/L
tL, h
t1/2, h
, h-1
tL, h
t1/2, h
m, h-1
5
25
38.48
38.75
52.74
64.49
0.119
0.097
44.71
49.46
50.87
63.45
0.134
0.012

calculados con el modelo propuesto para las tres concentraciones ensayadas y los
parmetros indicados en la Tabla V. 28, obtenindose una desviacin relativa media de
7.29 % para los ensayos de 5 mg/L y 25 mg/L y 12.92 % para el ensayo de 50 mg/L.
NPEO
1,2
5 mg/L y 25 mg/L
1,0
x experimental
50 mg/L
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
x terico
segn el modelo propuesto para el NPEO a diferentes concentraciones
332
TESIS DOCTORAL
En la Tabla V. 30 se muestran los parmetros cinticos resultantes de la aplicacin

del modelo de Andrews (modelo general y con una concentracin de sustrato no
biodegradable, Tabla V. 24) para el ensayo de 50 mg/L. La aplicacin de este modelo nos
proporciona la constante de inhibicin Ki que se ha obtenido utilizando el valor de i
obtenido en el ajuste a partir de la siguiente expresin:
i =
S0
Ki
Tabla V. 30.- Parmetros cinticos del modelo de Andrews para el NPEO a 50 mg/L
NPEO
S0, mg/L
50
94.457
m, h-1
Ki, mg/L
xm
67.739
0.400
125
0.978
0.970
6.90 10
-2
333
TESIS DOCTORAL
5.4. BIODEGRADACIN DE TENSIOACTIVOS DURANTE EL ENSAYO

DINMICO
Para comprobar la biodegradabilidad de los tensioactivos alcoholes grasos

etoxilados se realizaron experimentos de confirmacin mediante el ensayo dinmico para
los tensioactivos Findet 1618A/18 y Findet 1214N/23. La estructura y modo de operacin
del ensayo aparecen descritos en el apartado 3.3.2. Los resultados de concentracin de
tensioactivo, biodegradabilidad, oxgeno disuelto, concentracin de slidos en suspensin,
DBO y DQO obtenidos durante estos ensayos aparecen en la Tabla IV. 5 y Tabla IV. 11
para los tensioactivos ensayados.
El ensayo dinmico o de confirmacin, un ensayo continuo que simula las
condiciones de operacin de una planta biolgica que opera mediante fangos activados, fue
desarrollado por Husmann en 1962 (Husmann, 1962) para la determinacin de la
biodegradabilidad de detergentes. Posteriormente ste mtodo se convirti en el ensayo
recomendado por la OCDE (OECD, 1971; 1976). Adems en las correspondientes guas de
ensayo (CEE, 1982) el ensayo de confirmacin aparece como uno de los ensayos para la
determinacin de la biodegradabilidad de tensioactivos.
5.4.1. PUESTA EN MARCHA DE LA INSTALACIN
Para la puesta en marcha de la instalacin se inocul el agua de alimentacin con

agua residual procedente del clarificador secundario de la estacin depuradora de aguas
residuales urbanas Los Vados de Granada (EDAR Los Vados) a razn de 200 ml por
litro de agua residual sinttica. El agua tratada de la EDAR proporciona una amplia
variedad de microorganismos aerobios necesarios para que el proceso biolgico tenga
lugar.
Una vez que se ha preparado el agua de alimentacin, se pone en marcha la bomba
de alimentacin al reactor, la aireacin y la recirculacin. Los parmetros de operacin del
reactor se fijan en los siguientes valores:
334
Caudal de alimentacin de 1 L/h.
TESIS DOCTORAL
Caudal de recirculacin del 100% (medido respecto del caudal de

alimentacin).
Caudal de aire suficiente para que la concentracin de oxgeno sea mayor de

2 mg/L.
Se deja funcionando el sistema hasta que se alcanza una concentracin de fangos en

el reactor de 30.5 g/L. Llegado a este punto se empieza a extraer fango para mantener la
concentracin de ste en el valor deseado.
En estas condiciones de funcionamiento los valores de la carga msica y del tiempo
de retencin hidrulico del reactor son, respectivamente, 0.53 y 3 horas (Apartado
3.3.2.4.).
Durante la fase de puesta en marcha de la instalacin se midieron peridicamente el
pH, la DQO, la DBO5 y los slidos en suspensin (SS) del agua de alimentacin (de ahora
en adelante agua bruta, AB) y del agua de salida (de ahora en adelante agua tratada, AT).
En el reactor se midi la concentracin de fangos como slidos en suspensin (MLSS), el
oxgeno disuelto y la temperatura. De igual forma se comprob tanto el caudal de
alimentacin como el de recirculacin. Los datos concretos del seguimiento de la puesta en
marcha se presentan en la Tabla V. 31.
Como puede apreciarse en la Tabla V. 31, las condiciones de operacin del reactor
se alcanzan en los 24 primeros das de funcionamiento. La concentracin de fango aumenta
progresivamente desde un valor inicial de 18 p.p.m. a 2400 p.p.m. el da 24. Como era de
esperar, el aumento de la concentracin de fango en el reactor es paralelo a un aumento del
rendimiento de eliminacin de DQO (RDQO) que pasa de un valor inicial del 10% a un
valor del 96% cuando se ha alcanzado el estado estacionario. La temperatura del sistema se
mantuvo en un valor aproximadamente constante de 25C.
Antes de proceder al estudio de la biodegradacin del tensioactivo se deja funcionar
un tiempo el sistema en estado estacionario y el da 49 se inicia el ensayo de
biodegradacin con la adicin del tensioactivo a una concentracin de 10 mg/L.
335
TESIS DOCTORAL
Tabla V. 31.- Valores diarios de DQO, DBO5, SS y pH del agua bruta y del agua tratada
correspondientes al ensayo dinmico. Variacin del oxgeno disuelto, T y MLSS del

reactor
Da
AGUA BRUTA
Q(L/h) pH DQO DBO5
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
336
1.14
1.18
1.13
1.29
0.51
0.86
1.06
0.99
0.81
0.52
1.00
1.10
1.05
0.97
1.01
1.06
1.09
1.11
0.98
1.01
1.20
0.94
0.82
1.09
-
7.57
7.84
7.66
7.2
7.52
7.62
8.07
7.74
7.68
8.1
8.17
7.44
7.91
7.83
7.37
7.54
7.47
8.16
8.57
7.6
7.8
8.2
8
7.7
-
297
364
321
281
284
210
334
310
271
228
284
261
271
248
208
191
301
281
325
251
268
288
321
215
242
172
-
AGUA TRATADA
SS
pH
11
24
10
12
10
12
16
40
16
8
8
22
16
18
14
20
12
12
12
6
10
35
14
8
-
7.56
7.76
8.30
7.40
7.90
8.20
8.00
8.00
8.20
8.30
8.30
7.90
7.80
7.90
8.20
8.10
8.30
8.60
8.30
8.20
8.40
8.50
8.40
8.20
-
DQO DBO5
267
201
111
107
214
94
160
254
35
151
41
38
25
85
111
41
55
115
71
44
61
65
10
13
7
5
-
REACTOR
RDQO
SS
pH
O2
MLSS
16
23
18
12
20
10
38
36
62
12
18
14
46
23
13
12
56
14
22
24
6
-
8
8
8.2
7.3
7.6
8
7.4
7.9
7.5
8.3
7.8
7.8
7.6
7.6
8.1
8.1
8.1
8.3
7.8
7.8
8.2
7.7
8.2
7.9
-
7.1
4.2
5.5
1.8
3.4
3.6
3.0
3.2
3.8
7.9
6.2
3.1
0.3
4.7
6.2
6.7
4.8
4.5
6.2
5.6
5.4
4.3
4.4
6.5
6.2
6.1
6.9
7.3
5.8
5.9
23.8
23.8
24.4
22.6
25.6
-
18
50
45
240
270
870
880
840
950
730
1060
1490
1540
2090
2300
2270
2400
1980
1870
1900
2390
2360
2350
3530
3880
4100
1750
2653
3467
2400
2730
2800
10.1
44.8
65.4
61.9
24.6
55.2
52.1
18.1
87.1
33.8
84.3
86.0
89.9
59.1
41.9
86.4
80.4
64.6
71.7
83.6
78.8
79.8
-
TESIS DOCTORAL
El porcentaje de biodegradacin primaria de los tensioactivos ensayados se

determin diariamente a partir de las concentraciones de tensioactivo en el agua residual
sinttica que entra en la planta y en el efluente acumulado en el depsito de recogida
durante 24 horas. El mtodo analtico aplicado para la determinacin de la concentracin
de tensioactivo residual fue el mtodo de Wickbold, expresndose la concentracin como
BiAS. Para el tensioactivo Findet 1214N/23 se utiliz el mtodo espectrofotomtrico, y
para el tensioactivo Findet 1618A/18 la medida de la concentracin se realiz mediante el
mtodo potenciomtrico.
En la Figura V. 45 aparece representado el porcentaje de biodegradacin calculado
diariamente segn la Ecuacin III. 3 y la concentracin residual expresada como mg/L de
BiAS. La concentracin residual para los dos tensioactivos ensayados es muy baja, lo cual
indica una excelente biodegradabilidad primaria para estos tensioactivos. El nivel de
concentracin residual permaneci prcticamente constante durante todo el experimento.
Adems es muy significativo el hecho de que la biodegradabilidad primaria no requiere
ningn perodo de adaptacin de los microorganismos al tensioactivo. Resultados similares
fueron obtenidos por Szymanski y col., (Szymanski, 2000) en un ensayo con alcoholes
grasos etoxilados en el que por contra s se obtuvo un perodo de adaptacin para los
metabolitos.
Los valores de biodegradacin se mantienen aproximadamente constantes,
resultando una biodegradacin media del (98.760.49) % (n=21) para el Findet 1214N/23
y (98.220.55) % (n=21) para el Findet 1618A/18. El tiempo total de duracin del ensayo
fue de 23 das para el tensioactivo Findet 1214N/23 y 24 das para el tensioactivo Findet
1618A/18.
337
TESIS DOCTORAL
0,5
98
0,4
BIODEGRADACIN, %
100
Biodegradacin, %
96
Conc, mg/L
0,3
94
0,2
92
0,1
90
Conc, m g/L
FINDET 1214N/23
0
0
10
15
20
25
t, dias
0,5
98
0,4
BIODEGRADACIN, %
100
Biodegradacin, %
96
Conc, mg/l
0,3
94
0,2
92
0,1
90
Conc, m g/L
FINDET 1618A/18
0,0
0
10
15
20
25
t, dias
Figura V. 45.- Evolucin de la concentracin de tensioactivo y del porcentaje de
biodegradacin en el ensayo dinmico
La comprobacin de la eficacia del proceso de biodegradacin durante el ensayo

dinmico se realiz determinando la diferencia entre los valores de la DQO, al menos dos
veces por semana, y la DBO correspondientes al agua residual sinttica inicial y al filtrado
del efluente contenido en el colector. En la Figura V. 46 se presenta la evolucin de la
DQO y DBO para el tensioactivo Findet 1214N/23, ambos expresados en mgO2/L. La
338
TESIS DOCTORAL
DQO mostr una disminucin media del 96% y el valor de disminucin para la DBO fue
del 97%. Se observa una disminucin importante de los niveles de contaminacin del agua
una vez que sta ha sido tratada durante el ensayo dinmico de biodegradacin que simula
el comportamiento de una EDAR.
350
350
300
300
250
250
200
200
150
150
100
100
50
50
DBO, mg O2/L
DQO, mg O2/L
FINDET 1214N/23
0
0
10
15
20
25
30
35
40
45
t, dias
DQO A. BRUTA
DQO A. TRATADA
DBO A. TRATADA
DBO A. BRUTA
Figura V. 46.- Evolucin de la DBO y DQO con el tiempo para el tensioactivo Findet
1214N/23 durante el ensayo dinmico
La materia seca existente en el lodo activo contenido en el recipiente de aireacin

debe determinarse, en gramos por litro, dos veces por semana. Si hay ms de 3 g/L, el
exceso de lodo activo debe retirarse purgando en el decantador la cantidad de fango que
sea necesaria. En Figura V. 47 se presenta la evolucin los slidos en suspensin y del
oxgeno disuelto para los dos tensioactivos ensayados. Durante el ensayo dinmico se
mantiene una velocidad de flujo de la corriente de aire que entra en el recipiente de
aireacin tal que la concentracin de oxgeno disuelto se mantenga superior a 2 mg/L y
entre 3-4 mg/L.
Tanto el nivel medio de oxgeno disuelto como la concentracin de slidos en
suspensin para el experimento realizado con el tensioactivo Findet 1214N/23 se han
mantenido constantes en 4.70 mg/L y 2.55 g/L respectivamente. Para el experimento
339
TESIS DOCTORAL
realizado con el tensioactivo Findet 1618A/18 los valores medios alcanzados han sido 3.74
mg/L y 2.77 g/L respectivamente. Se trata de niveles adecuados para el buen
funcionamiento de la instalacin en ambos casos.
FINDET 1214N/23
10
3500
2500
6
mg O2/L
S.S., mg/L
3000
2000
4
1500
2
1000
S.S., mg/L
mg O2/L
500
0
0
10
12
14
16
18
t, dias
FINDET 1618A/18
7000
10
6000
8
4000
3000
mg O 2/L
S.S., mg/L
5000
2000
2
1000
S.S., mg/L
mg O2/L
0
0
10
15
20
25
30
35
40
45
50
t, dias
Figura V. 47.- Evolucin de los slidos en suspensin y el oxgeno disuelto con el tiempo
para los tensioactivos Findet 1214N/23 y Findet 1618A/18 durante el ensayo dinmico
340
TESIS DOCTORAL
5.5. BIODEGRADACIN DE ALQUILPOLIGLUCSIDOS
Los alquilpoliglucsidos pertenecen a una familia de tensioactivos no inicos cuyo

resto apolar es una cadena hidrocarbonada y cuya cabeza polar est formada por un
polmero de molculas de glucosa. El nmero de unidades de D-glucosa vara entre 1 y 5.
La cadena alqulica contiene entre 6 y 18 tomos de carbono. Durante los ltimos 15 aos
ha aumentado mucho el inters por estos tensioactivos debido a su compatibilidad y efecto
sinrgico cuando se combinan con otros tensioactivos, as como a su baja toxicidad y
mnimo impacto ambiental. Por tanto, dado el potencial futuro que pueden alcanzar y su
amplia distribucin en el medio ambiente acutico, es esencial que este grupo de
tensioactivos sean compatibles con los sistemas de tratamiento de aguas residuales para
que no causen efectos adversos en el medio ambiente.
La biodegradacin es el principal mecanismo de eliminacin de los compuestos
orgnicos en el medio ambiente. El conocimiento de la biodegradabilidad y toxicidad de
tensioactivos es una necesidad para la decisin de su inclusin en formulaciones
detergentes, ya que estos compuestos estn siendo sometidos cada vez a controles
medioambientales ms estrictos. Al tratarse de una nueva clase de tensioactivos, son muy
escasos los estudios encaminados a conocer la biodegradabilidad de los APG.
Aunque los APG son tensioactivos no inicos, no se comportan como sustancias
activas al yoduro de bismuto, por lo tanto el criterio de la legislacin europea para
considerar un tensioactivo biodegradable ( 80% de eliminacin de BiAS), no es aplicable
para este tipo de tensioactivos.
Para el estudio de la biodegradabilidad de los APG se han seleccionado dos tipos de
ensayos, el mtodo de la botella cerrada y el mtodo manomtrico respiromtrico. En el
primero se sigue la evolucin de la biodegradacin a partir de medidas de oxgeno disuelto
(apartado 3.3.4.) y en el segundo se mide la DBO utilizando la tcnica de respirometra
manomtrica (apartado 3.3.3.). La medida de la DBO tiene la ventaja de que es un
parmetro biolgico que mide directamente la degradacin aerobia, (Reuschenbach, 2003).
Este ltimo mtodo se utiliza para determinar la biodegradabilidad final o mineralizacin
de los APG. En la Tabla V. 32 se muestran y comparan los diferentes mtodos utilizados.
Adems se describen las principales caractersticas del ensayo esttico que se utiliz para
obtener las curvas de crecimiento de microorganismos.
341
TESIS DOCTORAL
Tabla V. 32.- Diferentes mtodos de ensayo para medir la biodegradabilidad de APG
MTODO DE ENSAYO
CONDICIONES Y CARACTERSTICAS
Tensioactivo: nica fuente de carbono
ENSAYO ESTTICO
Inculo: poblacin mixta no adaptada

25 C
Oscuridad
Concentracin < 10 mg/L (2-5 mg DOT/L)
MTODO DE LA
BOTELLA CERRADA
Ensayo limitado por las bajas concentraciones

25 C
Oscuridad
Densidad celular inicial: 1.36.103 y 3.17.103
UFC/mL
Condiciones de difcil biodegradacin
MTODO
RESPIROMTRICO
MANOMTRICO

Concentracin ~ 100 mg/L (50-100 mg DOT/L)
25 C
Oscuridad
En todos los mtodos se utiliza una disolucin nutriente de tensioactivo que es la

nica fuente de carbono y como inculo una poblacin mixta de microorganismos no
adaptados procedentes del efluente secundario de una EDAR que opera principalmente con
aguas residuales urbanas.
Para el estudio de la biodegradacin de los APG se han utilizado tres tensioactivos
comerciales: GCP 215 CS UP, GCP 600 CS UP y GCP 650 EC. Las propiedades de estos
tensioactivos comerciales se muestran en la Tabla III. 1. del apartado 3.1. de Materiales y
Mtodos.
342
TESIS DOCTORAL
5.5.1. BIODEGRADACIN DE APG POR EL MTODO DE LA BOTELLA

CERRADA
En la Figura V. 48 se representan la curvas de biodegradacin obtenidas para los

APG ensayados cuando se someten al ensayo de la botella cerrada. Las concentraciones
estudiadas han sido: 12 mg/L para todos los APG, 20 mg/L para el GCP 650 y 100 mg/L
para el GCP 600.
En la Tabla V. 34 se proporciona la equivalencia entre la concentracin de
tensioactivo expresada en mg/L, y su concentracin expresada como demanda terica de
oxgeno (mg DOT/L) y en miligramos de carbono por litro (mg C/L). La demanda terica
de oxgeno y la cantidad de carbono se han calculado teniendo en cuenta la humedad
(Tabla III. 1. de Materiales y Mtodos) y utilizando las frmulas empricas de los
tensioactivos que aparecen en la Tabla V. 33, donde n es el valor medio del grupo alqulico
y n el grado de polimerizacin medio de las unidades de glucosa (Bravo, 2005).
En la Tabla V. 34 tambin se muestran las concentraciones iniciales de oxgeno
disuelto ([O2]i) en cada uno de los ensayos. Se asume como concentracin inicial la
alcanzada una vez finalizada la disminucin brusca de concentracin de oxgeno disuelto
debido a la atemperacin de la muestra a las condiciones del ensayo (25C).
Tabla V. 33.- Frmulas empricas de los APG (Bravo, 2005)

Tensioactivo
GCP 215
9.32
1.4
GCP 600
11.71
1.2
GCP 650
10.99
1.3
343
TESIS DOCTORAL
GCP 215. 12 mg/L
GCP 600. 12 mg/L
10
9
8
7
6
m g O 2 /L
m g O 2 /L
5
4
3
2
1
0
0
0
50
100
150
200
50
100
150
200
t, h
t, h
GCP 650. 12 mg/L
GCP 650. 20 mg/L
m g O 2 /L
mg O 2 /L
6
5
4
3
3
3
2
2
1
0
0
0
50
t, h
100
150
200
50
100
150
200
t, h
GCP 600. 100 mg/L
8
7
6
mg O 2/L
5
4
3
2
1
0
0
10
20
30
40
50
60
70
80
t, h
Figura V. 48.- Curvas de degradacin para los APG mediante el mtodo de la botella
cerrada
344
TESIS DOCTORAL
Tabla V. 34.- Equivalencia entre la concentracin de los APG en mg/L y su concentracin
expresada como demanda terica de oxgeno y en mg C/L. Tambin se indica la

concentracin de oxgeno inicial en los ensayos
S 0,
mg/L
12
20
100
GCP 215
mg
DOT/L
14.42
---
mg C/L
4.27
---
GCP 600
[O2]i,
mg/L
4.0
---
mg
DOT/L
13.19
-109.91
mg C/L
3.92
-32.65
GCP 650
[O2]i,
mg/L
5.9
-5.2
mg
DOT/L
12.09
20.15
--
mg C/L
3.49
5.81
--
[O2]i,
mg/L
5.2
4.0
--
Se observa que la concentracin de oxgeno inicial es inferior a la DOT del

tensioactivo, por lo que en principio no es posible estudiar la biodegradacin total (
ltima) del tensioactivo en estos ensayos, sin embargo el estudio preliminar de la
biodegradacin de los APG por el mtodo de la botella cerrada puede servir de referencia
para evaluar la biodegradabilidad primaria de estos tensioactivos.
Como se aprecia en la Figura V. 48, todas las curvas de biodegradacin obtenidas
tienen forma sigmoidal (de s invertida) y estn precedidas por una fase de latencia
inicial. Finalizada la etapa de biodegradacin del compuesto, la concentracin de oxgeno
disuelto se mantiene constante y en un valor superior a los 0 mg/L en todos los casos a
excepcin de las curvas obtenidas a 20 mg/L (GCP 650) y a 100 mg/L (GCP 600).
A partir de los perfiles obtenidos se ha estimado el tiempo de latencia (tL), tiempo
transcurrido desde que se alcanza la concentracin inicial de oxgeno y el inicio del
proceso de biodegradacin, y el tiempo de degradacin (tD), tiempo transcurrido desde que
finaliza la fase de latencia hasta que finaliza la degradacin (cuando la concentracin de
oxgeno disuelto se mantiene constante). Tambin se estima el % de mineralizacin
alcanzado (Min) a partir de la expresin:
Min(% ) =
[O2 ]i [O2 ] f
DOT
100
Ecuacin V. 82
Donde [O2]i y [O2]f son la concentracin de oxgeno disuelto inicial y final de la

curva de biodegradacin.
345
TESIS DOCTORAL
Tambin se han calculado los parmetros caractersticos de los perfiles de

biodegradacin B y VM a partir de las curvas de oxgeno disuelto, expresando stas en
forma de conversin de acuerdo con:
x=
(Oi Ot )
(O
Of )
Ecuacin V. 83
donde Ot es la cantidad de oxgeno disuelto consumido en un tiempo t, y Oi y Of el

oxgeno disuelto consumido al inicio y final del ensayo respectivamente. En la Figura V.
49 se muestra a ttulo de ejemplo la curva de oxgeno disuelto en forma de conversin para
el tensioactivo GCP 600 a 12 mg/L.
GCP 600. 12 mg/L
1,0
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0,0
0
25
50
75
100
125
150
175
200
t, h
Figura V. 49.- Curvas de oxgeno disuelto en forma de conversin por el mtodo de la
botella cerrada
346
TESIS DOCTORAL
En la Tabla V. 35 se muestran los parmetros obtenidos del anlisis de las curvas de

oxgeno disuelto: biodegradabilidad (B) y la velocidad media de biodegradacin (VM)
obtenidos tal como se describe en el apartado 5.2.3. Para el clculo de B se tiene en cuenta
la conversin que se alcanza a las 50 horas de ensayo, y para el clculo de VM se considera
un valor de conversin de 0.85. Se observa que el tiempo de latencia es prcticamente
constante para todos los ensayos realizados y no se modifica de forma apreciable ni con el
tensioactivo ni con la concentracin. Sin embargo, el tiempo de degradacin s parece
depender del tensioactivo ensayado, siendo ms elevado para el GCP 650. El porcentaje de
mineralizacin es mayor para el alquilpoliglucsido de mayor cadena carbonada GCP 600
afectndole considerablemente la concentracin de tensioactivo ensayada.
Tabla V. 35.- Parmetros obtenidos de las curvas de oxgeno disuelto

GCP 215
S0, mg/L
tL, h
t D, h
Min (%)
VM, h-1
12
26.50
44.50
17.34
58
1.328
GCP 600
S0, mg/L
tL, h
t D, h
Min (%)
VM, h-1
12
100
26.0
23.0
69.25
47.00
30.90
4.60
65
27
1.148
1.370
GCP 650
S0, mg/L
tL, h
t D, h
Min (%)
VM, h-1
12
20
22.25
24.25
51.25
70.50
23.15
15.38
74
30
1.181
1.049
Aunque la DOT del tensioactivo sea mayor que la concentracin de oxgeno

disuelto disponible, la evolucin de las curvas de biodegradacin obtenidas por este
mtodo parece sugerir que la biodegradacin observada podra corresponder a la
biodegradacin primaria del tensioactivo, esto es, a una ruptura parcial de la molcula y no
a una mineralizacin del compuesto a CO2 ms H2O. Para comprobar este hecho se
analizan las curvas de crecimiento de microorganismos obtenidas en los ensayos estticos
de biodegradacin.
347
TESIS DOCTORAL

BIODEGRADACIN
Simultneamente a los ensayos de biodegradacin por el mtodo de la botella

cerrada, se estudi el crecimiento de microorganismos, para lo cual se realizaron una serie
de ensayos estticos de biodegradacin (apartado 3.3.1.) con concentraciones iniciales de
tensioactivo entre 12 y 100 mg/L y se analiz el crecimiento de la biomasa durante el
proceso de biodegradacin. La densidad de poblacin se midi mediante el recuento
hetertrofo en placa (apartado 3.4.2.).
En la Figura V. 50 se recogen las curvas de crecimiento para cada uno de los APG
y a las concentraciones ensayadas.
De la misma forma que para los AGE, las curvas experimentan un crecimiento
inicial rpido y una disminucin brusca cuando se biodegrada el tensioactivo, llegando a
ser prcticamente despreciable la biomasa existente. Posteriormente, tras un proceso de
aclimatacin de los microorganismos a los productos intermedios formados, se inicia de
nuevo el crecimiento de los mismos. Tambin se detecta que a concentraciones de
tensioactivo altas y en los tiempos ensayados no se observa una disminucin importante de
las unidades formadoras de colonias durante el proceso de biodegradacin.
348
TESIS DOCTORAL
GCP 600
GCP 215
1,6E+06
8,E+05
6,E+06
100 mg/L
12 mg/L
1,4E+06
5,E+06
UFC/ml
8,0E+05
5,E+05
3,E+06
4,E+05
6,0E+05
UFC/ml
6,E+05
4,E+06
1,0E+06
UFC/ml
7,E+05
12 mg/L
1,2E+06
3,E+05
2,E+06
4,0E+05
2,E+05
1,E+06
2,0E+05
0,0E+00
1,E+05
0,E+00
0
50
100
150
200
50
t, h
t, h
100
150
0,E+00
200
GCP 650
8,E+05
7,E+05
12mg/L
20 mg/L
6,E+05
UFC/ml
5,E+05
4,E+05
3,E+05
2,E+05
1,E+05
0,E+00
0
50
100
150
200
t, h
para los APG estudiados a diferentes concentraciones iniciales
En la Figura V. 51 se comparan los resultados del crecimiento de biomasa

obtenidos para los diferentes APG ensayados a la concentracin inicial de 12 mg/L. Se
observa que las curvas de crecimiento presentan valores mximos cuando la longitud de la
cadena carbonada es menor (GCP 215), no existiendo diferencias importantes entre GCP
650 y GCP 600.
349
TESIS DOCTORAL
12 mg/L
1,6E+06
UFC/ml
1,4E+06
GCP 215
1,2E+06
GCP 600
1,0E+06
GCP 650
8,0E+05
6,0E+05
4,0E+05
2,0E+05
0,0E+00
0
50
t, h
100
150
200
Figura V. 51.- Curvas de crecimiento de biomasa para los diferentes APG ensayados a la
concentracin inicial de 12 mg/L
En la Figura V. 52 se representan las curvas de crecimiento de biomasa junto con

los perfiles de oxgeno disuelto correspondientes. Se observa que existe un acoplamiento
perfecto entre los resultados de los dos ensayos. Las curvas de crecimiento tienen forma de
campana, con una fase de latencia, una etapa de crecimiento exponencial que alcanza su
mximo justo cuando finaliza la etapa de degradacin del tensioactivo, para continuar una
disminucin exponencial cuando no hay ms sustrato disponible. Transcurrido un tiempo
que oscila entre 54 y 167 horas, dependiendo del tensioactivo, se observa un repunte del
crecimiento. Estos resultados demuestran que el sustrato, que es la nica fuente de carbono
disponible, soporta el crecimiento de los microorganismos y que cuando no hay ms
sustrato se produce una disminucin de la poblacin inicial. Finalizada esta etapa, son los
metabolitos los que pasan a soportar el crecimiento de los microorganismos requiriendo
para ello un nuevo periodo de adaptacin. Estos resultados ponen de manifiesto que las
curvas de degradacin obtenidas por el mtodo de la botella cerrada corresponden a una
ruptura parcial de la molcula (biodegradacin primaria) y no a su mineralizacin total.
350
TESIS DOCTORAL
GCP 215. 12 mg/L
1,6E+06
UFC/ml
1,4E+06
GCP 600. 12 mg/L
8,E+05
7,E+05
UFC/ml
Oxgeno Disuelto
10
Oxgeno Disuelto
6,E+05
1,2E+06
UFC/ml
8,0E+05
mg O 2 /L
U FC/ml
5,E+05
4,E+05
5
4
3,E+05
6,0E+05
2
4,0E+05
2,E+05
2
1
2,0E+05
1,E+05
0,0E+00
0
0
50
100
150
0,E+00
200
0
0
50
t, h
100
150
200
t, h
GCP 600. 100 mg/L
6,E+06
UFC/ml
5,E+06
8,E+05
7,E+05
GCP 650. 12 mg/L
9
8
UFC/ml
Oxgeno Disuelto
Oxgeno Disuelto
6,E+05
5,E+05
4,E+06
UFC/ml
3,E+06
5
4,E+05
4
3,E+05
2,E+05
2,E+06
mg O 2 /L
mg O 2 /L
UFC/ml
mg O2 /L
4
1,0E+06
3
2
1,E+06
0,E+00
50
100
1,E+05
0,E+00
150
1
0
0
50
150
200
t, h
t, h
GCP 650. 20 mg/L
7,0E+05
5,0
4,5
UFC/ml
6,0E+05
Oxgeno Disuelto
4,0
5,0E+05
UFC/ml
100
3,5
3,0
4,0E+05
2,5
3,0E+05
2,0
mg O2 /L
1,5
2,0E+05
1,0
1,0E+05
0,5
0,0E+00
0,0
0
50
100
150
200
t, h
Figura V. 52.- Curvas de crecimiento de microorganismos y curvas de oxgeno disuelto
para los APG ensayados a diferentes concentraciones iniciales
351
TESIS DOCTORAL
En la Tabla V. 36 se muestran los parmetros caractersticos de las curvas de

crecimiento de microorganismos durante el proceso de biodegradacin. UFC/ml,max
representa el valor mximo de UFC/ml que aparecen en la primera fase de crecimiento
exponencial.
Tambin se ha determinado la velocidad especfica de crecimiento (k), el
rendimiento (Yap) y la concentracin inicial de microorganismos (X0) para los APG
ensayados (Tabla V. 36). Se observa que el mayor valor de UFC/ml,max corresponde al
tensioactivo con menor longitud de cadena carbonada GCP 215, y la menor velocidad
especfica de crecimiento es la obtenida para el tensioactivo GCP 600.
La relacin entre la cantidad de microorganismos producidos y la cantidad de
sustrato consumido viene dado por la ecuacin de Gaden (Ecuacin V. 39). Para obtener el
valor de Yap se ha representado el valor de X (UFC/ml) frente a los valores de (S0-S),
donde S0 es la concentracin de oxgeno inicial y S la concentracin de oxgeno en cada
instante. Si se cumple la hiptesis de Gaden, los datos deben ajustarse a una lnea recta de
pendiente Yap. En la Figura V. 53 se presentan estos resultados para los APG ensayados
observndose que los puntos se alinean en una lnea recta. El valor de Yap se muestra en la
Tabla V. 36.
352
TESIS DOCTORAL
GCP 600. 12 mg/L

8,0E+05
1,2E+06
7,0E+05
1,0E+06
6,0E+05
X, UFC/ml
X, UFC/ml
GCP 215. 12 mg/L

1,4E+06
8,0E+05
6,0E+05
5,0E+05
4,0E+05
3,0E+05
4,0E+05
2,0E+05
2,0E+05
1,0E+05
0,0E+00
0,0
0,5
1,0
1,5
0,0E+00
2,0
0,0
0,5
1,0
(S0-S), mg/L
GCP 650. 12 mg/L
2,0
GCP 650. 20 mg/L
8,0E+05
8,0E+05
7,0E+05
7,0E+05
6,0E+05
6,0E+05
5,0E+05
5,0E+05
X , U F C /m l
X , U FC /m l
1,5
(S0 -S), mg/L
4,0E+05
3,0E+05
2,0E+05
4,0E+05
3,0E+05
2,0E+05
1,0E+05
1,0E+05
0,0E+00
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
0,0E+00
0,0
(S0-S), mg/L
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
(S0-S), mg/L
Figura V. 53.- Comprobacin de la hiptesis de Gaden para los APG
Tambin se ha calculado la concentracin de microorganismos (biomasa) en mg/L,

asumiendo la frmula emprica celular generalmente propuesta para los microorganismos
(Roels, 1983):
CH1.79O0.50N0.20
y el % de carbono fijado en forma de biomasa a partir de la expresin:
C(%) =
Cbiomasa
*100
Ctensioactivo
Ecuacin V. 84
353
TESIS DOCTORAL
Tabla V. 36.- Parmetros caractersticos de las curvas de crecimiento para los APG
GCP 215
S0,
mg/L
12
X0,
UFC/ml
.
1.37 10
UFC/ml
max
1.32.106
k, h-1
Yap, UFC/g
sustrato
[biomasa],
mg/L
%C fijado en forma de
biomasa
0.161
8.50.105
5.38.10-11
1.25.10-11
GCP 600
S0,
mg/L
12
100
X0,
UFC/ml
.
1.51 10
2.45.103
UFC/ml
max
6.95.105
5.18.106
k, h-1
Yap, UFC/g
sustrato
[biomasa],
mg/L
biomasa
0.114
0.108
3.01.105
1.82.106
2.83.10-11
2.11.10-10
7.21.10-12
6.46.10-12
GCP 650
S0,
mg/L
X0,
UFC/ml
UFC/ml
12
20
3.17.103
1.75.103
6.90.105
6.65.105
max
k, h-1
Yap, UFC/g
sustrato
[biomasa],
mg/L
biomasa
0.175
0.156
2.39.105
8.36.105
2.81.10-11
2.71.10-11
8.05.10-12
4.67.10-12
La pequea cantidad de biomasa formada, del orden de 10-11 de la concentracin

inicial de C en el tensioactivo, evidencia una ruptura parcial de la molcula y permite
confirmar que estamos observando en las curvas de biodegradacin la biodegradacin
primaria del tensioactivo.
5.5.3. BIODEGRADACIN DE APG POR EL MTODO MANOMTRICO

RESPIROMTRICO
La biodegradacin ltima de los APG se ha medido utilizando el mtodo

respiromtrico, que mide la demanda biolgica de oxgeno (DBO) del compuesto en
funcin del tiempo. Este mtodo se ha aplicado para estudiar el efecto de la concentracin
de estos tensioactivos sobre el proceso de biodegradacin ltima.
En la Figura V. 54 se representan las curvas de DBO para los APG ensayados a
concentraciones iniciales de sustrato comprendidas entre 15 y 100 mg/L. Las curvas de
degradacin obtenidas presentan una forma sigmoidal lo que evidencia un mecanismo de
eliminacin biolgica de los APG.
354
TESIS DOCTORAL
GCP 215
50
100 mg/L
45
100 mg/L
80
75 mg/L
70
50 mg/L
(D B O/D O T )*100
50 mg/L
35
25 mg/L
30
15 mg/L
25
20
25 mg/L
60
15 mg/L
50
40
30
15
10
20
10
0
0
40
80
120
160
200
240
280
320
t, h
GCP 600
50
100
150
t, h
200
250
300
350
GCP 600
18
16
100 mg/L
100 mg/L
75 mg/L
12
50 mg/L
(D B O/D O T )*100
16
14
D B O , m gO 2 /L
GCP 215
75 mg/L
40
D B O , m g O 2 /L
90
25 mg/L
10
15 mg/L
75 mg/L
14
12
50 mg/L
10
25 mg/L
8
6
0
0
100
200
t, h
300
400
100
200
t, h
300
400
Figura V. 54.- Curvas de DBO y biodegradabilidad ltima por el mtodo respiromtrico
para el GCP 215 y el GCP 650
Los resultados de la Figura V. 54 se expresan como DBO y como porcentaje de la

demanda terica de oxgeno ((DBO/DOT)*100).
En la Figura V. 55 se comparan las curvas respiromtricas obtenidas a la
concentracin inicial de 50 mg/L para los tres APG ensayados.
355
TESIS DOCTORAL
50 mg/L
50 mg/L
40
70
GCP 650
GCP 600
35
GCP 650
GCP 600
60
GCP 215
(DBO/DO T )*100
DBO, mgO2/L
GCP 215
30
25
20
15
50
40
30
10
20
10
0
0
100
200
t, h
300
400
500
0
0
100
200
t, h
300
400
500
para diferentes APG a 50 mg/L
La Tabla V. 37 recoge la equivalencia entre las distintas formas de expresar la

concentracin de tensioactivo: en mg/L, como demanda terica de oxgeno (mg DOT/L) y
en mg C/L. Tambin se incluye la concentracin de tensioactivo (Sreal) teniendo en cuenta
la humedad del mismo (Tabla III. 1. de Materiales y Mtodos).
expresada como demanda terica de oxgeno y en mg C/L para el ensayo respiromtrico

S 0,
mg/L
15
25
50
75
100
GCP 215
Sreal,
mg/L
9.45
15.75
31.50
47.25
63.00
mg
DOT/L
18.03
30.05
60.11
90.16
120.22
GCP 600
mg
C/L
5.33
8.89
17.79
26.68
35.58
Sreal,
mg/L
8.01
13.35
26.70
40.05
53.40
mg
DOT/L
-27.47
54.95
82.43
109.91
GCP 650
mg
C/L
-8.16
16.33
24.5
32.67
Sreal,
mg/L
--24.80
---
mg
DOT/L
--50.39
---
mg
C/L
--14.54
---
Se observa que en el proceso de biodegradacin del GCP 215 tiene una gran
influencia la concentracin de tensioactivo ensayada disminuyendo la biodegradacin a
medida que aumenta la concentracin de tensioactivo, en cambio al tensioactivo GCP 600
356
TESIS DOCTORAL
no le afecta de forma significativa la concentracin ensayada durante el proceso de

biodegradacin.
La comparacin de los tres tensioactivos a la misma concentracin (Figura V. 55)
muestra de forma clara que el tensioactivo GCP 215 de menor cadena carbonada, mayor
contenido de molculas de glucosa y mayor HLB (Tabla III. 1.) es el ms biodegradable, y
el menos biodegradable el GCP 650 de mayor peso molecular medio que los anteriores.
Estimacin de los parmetros de los perfiles de biodegradacin
En todas las curvas de degradacin obtenidas si se representa el cociente

(DBO/DOT) en funcin del tiempo, se observa que existe una fase de latencia o
aclimatacin, una fase de degradacin (de incremento exponencial) y una zona de
mineralizacin. (Figura V. 56).
Fase mineralizacin
Fase exp.
tiempo
Figura V. 56.- Curva tpica de consumo de oxgeno. Determinacin de los parmetros
cinticos de acuerdo con Blok y col. (Blok, 1996)
357
TESIS DOCTORAL
De acuerdo con Blok y col. (Blok, 1996) los parmetros cinticos de crecimiento
del modelo de Monod, y KS se pueden calcular a partir de los perfiles respiromtricos tal
como se describe a continuacin. Se ha utilizado a ttulo de ejemplo el perfil del GCP 215
a 50 mg/L (Figura V. 54).
Los valores de la tasa especfica de crecimiento de los microorganismos () se
obtienen de la parte exponencial del perfil respiromtrico de acuerdo con:
ln( DBOt 2 / DBOt1 )

t 2 t1
Ecuacin V. 85
donde t1 y t2 son dos puntos cualquiera de la fase exponencial, y DBOt1 y DBOt2 sus
valores correspondientes.
La constante de mineralizacin de primer orden (Kmin) se calcula utilizando la
ltima parte de la curva, a partir de la pendiente de la siguiente representacin:
ln (DBO/DO T)*100)
4,1
y = 0,1103x + 3,0618
2
R = 0,9859
4,0
3,9
3,8
3,7
3,6
0
10
t, d
Figura V. 57.- Representacin de ln DBO frente al tiempo para la obtencin de Kmin
Para estimar la constante de saturacin (KS) es necesario separar la etapa de

mineralizacin de la etapa de degradacin (Figura V. 56). Para su clculo se utiliza la
siguiente expresin:
358
TESIS DOCTORAL
KS =
DBOc (t m ) DBOc (t KS )
DBOc (t m )
S0
Ecuacin V. 86
donde:
DBOC es la DBO corregida por la fase de mineralizacin de acuerdo con la

expresin: DBOC = DBOtotal DBOmin. DBOmin corresponde a la demanda de
oxgeno de mineralizacin.
En la siguiente figura se muestran los resultados para el Glucopn 215 a 50 mg/L:
70
DBO/DOT*100
60
Mineralizacin
DBOc
(DBO/DO T)*100
50
40
30
20
10
0
0
10
15
t, d
Figura V. 58.- Representacin de DBO frente al tiempo para la obtencin de KS
tm: es el tiempo a partir del cual la velocidad de mineralizacin es de primer orden

(Figura V. 59). Para calcularlo se estudia a partir de que momento la zona de la
curva no responde a una cintica de primer orden.
359
TESIS DOCTORAL
70
60
(DBO/DOT)*100
50
40
30
DBO/DOT*100
20
mineralizacin
10
0
0
tm
10
15
t, d
Figura V. 59.- Obtencin de tm a partir de la curva de mineralizacin
tKS: es el tiempo donde la concentracin de sustrato residual es igual a KS. En este

punto se cumple que:
a tKS
dDBOc / dt 1 (dDBOc / dt )ti

=
DBOc t K S
2 DBOc (ti )
( )
Ecuacin V. 87
expresin que se utiliza para el clculo de tKS utilizando la herramienta Solver de la

hoja de clculo Excel.
Para estimar tKS es necesario calcular la DBO corregida y su derivada en un tiempo
ti, que es el punto de inflexin de la curva de crecimiento exponencial debido a la
limitacin de sustrato. Para su determinacin se ha tenido en cuenta la fase logartmica. Se
ha buscado ajustando la curva a un polinomio de tercer grado y localizando el mnimo de
la derivada de ese polinomio (Figura V. 60).
360
TESIS DOCTORAL
20
y = 22,92x 3 - 173,3x 2 + 441,63x - 368,56
R2 = 1
35
30
d((DBO/DO T)*100)
(DBO/DOT)*100
15
10
25
20
15
10
5
0
0
0
t, d
ti
t, d
Figura V. 60.- Localizacin del punto de inflexin para la obtencin de KS
En la Tabla V. 38 se muestran los valores de y Kmin obtenidos para los APG

ensayados y a todas las concentraciones estudiadas. Tambin se muestran los valores del
tiempo de latencia (tL), el porcentaje de biodegradacin ltima alcanzado (Min) y el valor
de KS para los perfiles en los que se ha podido obtener.
En la Figura V. 61 se ha representado como vara frente a la concentracin de
sustrato para los tensioactivos GCP 215 y GCP 600. Los resultados indican la existencia de
inhibicin del crecimiento por sustrato.
361
TESIS DOCTORAL
Tabla V. 38.- Parmetros cinticos caractersticos del proceso de biodegradacin para los
APG por el mtodo respiromtrico

GCP 215
S0, mg/L
15
25
50
75
100
tL, d
Min, %
, d-1
Kmin, d-1
KS, mg/L
0.89
0.89
0.89
1.04
0.89
84.84
85.52
62.88
42.48
36.43
6.11
7.78
6.23
3.44
3.62
0.055
0.040
0.110
0.120
0.095
6.25
14.95
26.80
64.81
50.62
GCP 600
S0, mg/L
25
50
75
100
tL, d
Min, %
, d-1
Kmin, d-1
KS, mg/L
6.3
5.1
4.0
2.1
15.65
15.83
13.95
13.37
1.40
1.11
1.02
0.77
0.048
0.049
0.025
0.020
--6.35
2.65
GCP 650
S0, mg/L
50
tL, d
Min, %
, d-1
Kmin, d-1
KS, mg/L
8.53
1.00
--
--
GCP 215
GCP 600
1,6
1,4
1,2
-1
, d
-1
, d
1,0
0,8
0,6
3
2
0,4
0,2
0,0
0
20
40
60
80
100
120
S0, mg/L
20
40
60
80
100
S0, mg/L
Figura V. 61.- Representacin de frente a la concentracin de sustrato para el GCP 215
y el GCP 600
Se observa que el tiempo de latencia o de adaptacin de los microorganismos al

tensioactivo es considerablemente mayor que los obtenidos en el caso de los alcoholes
grasos etoxilados, esto debe estar motivado por la escasa utilizacin de estos tensioactivos
actualmente en los productos comerciales, ya que el inculo utilizado proviene del
tratamiento de aguas residuales urbanas. El tiempo de latencia menor es el obtenido para el
362
120
TESIS DOCTORAL
GCP 215, y sin influencia de la concentracin, tambin se observa para este tensioactivo el
mayor porcentaje de mineralizacin. Para el GCP 600 se observa una disminucin del tL al
aumentar la concentracin de tensioactivo. El tensioactivo que necesita un mayor tiempo
para su adaptacin a los microorganismos y presenta el menor porcentaje de
mineralizacin es el GCP 650.
De acuerdo con la OCDE una sustancia se considera fcilmente biodegradable si el
tanto por ciento de mineralizacin alcanzado es al menos del 60% en un plazo de 28 das
cuando se somete al ensayo respiromtrico. Los resultados obtenidos indican que este
requisito en las condiciones ensayadas slo lo cumple el GCP 215 y a concentraciones
inferiores iguales a 25 mg/L. De acuerdo con este criterio los otros dos tensioactivos no
seran fcilmente biodegradables a concentraciones mayores de 25 mg/L, no obstante las
concentraciones reales existentes de estos tensioactivos en el medio ambiente son siempre
menores de 5 mg/L.
De acuerdo con Blok y col. los valores de obtenidos por el mtodo
respiromtrico, y que no dependen del tiempo total en el que se ha realizado el ensayo,
tambin permiten clasificar los tensioactivos como recalcitrantes ( < 0.1 d-1), con
biodegradabilidad inherente (0.1 < < 1.5 d-1) y fcilmente biodegradables para ( > 1.5
d-1) (Blok, 1996).
Segn esta clasificacin el tensioactivo de menor cadena carbonada y mayor grado
de polimerizacin de los ensayados, GCP 215, se podra clasificar como fcilmente
biodegradable, ya que tiene un valor comprendido entre 3.62 y 6.11 d-1, los tensioactivos
GCP 600 y GCP 650 se podran clasificar como tensioactivos con biodegradabilidad
inherente.
No obstante, numerosos estudios existentes revelan que los APG en comparacin
con otros tensioactivos son fcilmente biodegradables, por lo que se degradarn de
forma rpida y extensa cuando se descarguen en entornos ambientales (Steber, 1995;
Madsen, 1996; Garca, 1997). Adems en experimentos en los que se somete a los mismos
ensayos de biodegradacin al LAS y a los APG, estos resultan con un potencial de
biodegradacin significativamente mayor (Eichhorn, 1999).
363
TESIS DOCTORAL
Biodegradacin del tensioactivo FINDET 1618A/18 por el mtodo respiromtrico
Para comparar la biodegradabilidad de los tensioactivos AGE y los APG en las

mismas condiciones tambin se ha realizado un ensayo mediante respirometra
manomtrica para el tensioactivo Findet 1618A/18. Los resultados obtenidos (perfiles
respiromtricos, y parmetros cinticos) para este tensioactivo pueden observarse en la
Figura V. 62 y en la Tabla V. 39 respectivamente.
FINDET 1618A/18
30
FINDET 1618A/18
30
50 mgL
25
50 mgL
25
25 mg/L
(D B O/D O T )*100
D B O, m g O 2/L
25 mg/L
20
15
10
20
15
10
0
0
50
100
150
200
250
300
350
t, h
50
100
150
t, h
200
250
300
350
para el Findet 1618A/18
Tabla V. 39.- Parmetros cinticos caractersticos del proceso de biodegradacin para el
Findet 1618A/18 por el mtodo respiromtrico

S0, mg/L
25
50
FINDET 1618A/18
tL, d
Min, %
, d-1
Kmin, d-1
KS, mg/L
2.9
4.0
33.30
20.30
1.31
4.84
0.397
0.171
12.94
5.80
Se observa que los valores de obtenidos por el mtodo respiromtrico son

superiores a los valores de m obtenidos aplicando el modelo propuesto para los resultados
obtenidos de los ensayos estticos de biodegradacin (Tabla V. 22), por lo tanto no son
valores comparables. Si tenemos en cuenta el criterio de Blok y col. (Blok, 1996), este
tensioactivo puede considerarse fcilmente biodegradable incluso a concentraciones
elevadas.
364
TESIS DOCTORAL
5.6. BIODEGRADACIN DEL LAS
Los LAS son uno de los tensioactivos ms estudiados en los ltimos aos, sobre
todo en aspectos relacionados con su biodegradabilidad primaria y total. Alguno de los
motivos por los que los LAS han alcanzado tanta importancia son, entre otros: la
preocupacin acerca de que el anillo bencnico de la molcula pueda ser biorresistente y
acumularse en el agua, y por lo tanto que el compuesto no sea totalmente biodegradable, y
adems el elevado volumen que este tensioactivo alcanza en el medio natural.
En la Tabla V. 40 se recogen los resultados obtenidos por diversos autores para
ensayos de fcil biodegradabilidad en los que se emplean medios sintticos con
concentraciones de inculo relativamente bajas (102-103 bacterias/ml). El porcentaje de
biodegradacin se ha calculado midiendo la concentracin de tensioactivo residual como
MBAS.
Tabla V. 40.- Algunos resultados de biodegradacin de LAS en ensayos con medio
sinttico y bajas concentraciones de inculo (Perales, 2001)
Compuesto
S0 (mg/L)
% Biodeg.
t, das
Referencia
LAS
100*
Swisher (1966)
JNQ sulfonato
15
90-97
10
Painter (1978)
JNQ sulfonato
20
75
Brown (1976)
Marlon A
20
99
93
28
7
Brown (1976)
LAS
100
21
Sengul (1980)
LAS
(2 - 5)
91
96
5
10
Hrsak (1981)
C12-LAS
30
95
Kravetz (1982)
C13-LAS
30
95
28
Kravetz (1982)
LAS
5.5
95
28
Gerike (1987)
LAS
32
99
Boatman (1986)
sin adicin de inculo en un medio no esterilizado. Marlon A: mezcla comercial de
homlogos de LAS.
365
TESIS DOCTORAL
Incluso en ausencia de inculo, Swisher (Swisher, 1966) encontr que el 100% de

MBAS fue eliminado en 7 das con una concentracin inicial de LAS de 5 mg/L, slo con
los microorganismos que puedan pasar al reactor provenientes de la atmsfera. Los grados
de biodegradacin ms elevados (99% en 4 das) se deben probablemente a la
preaclimatacin del inculo y a que la concentracin de ste es mucho ms elevada que
para el resto de ensayos.
El LAS se ha empleado en esta investigacin como patrn blando en todos los
ensayos de biodegradacin realizados por sus caractersticas de biodegradabilidad. Slo se
han aceptado como vlidos aquellos ensayos en los que la biodegradacin del LAS ha sido
mayor del 90% a los cinco das del ensayo (apartado 3.3.1.6.), (UNE 55-844-91).
Para el estudio de la biodegradabilidad primaria del LAS se modific la
concentracin inicial del ensayo. Los valores de concentracin estudiados fueron: 5 mg/L,
25 mg/L, 50 mg/L y 100 mg/L. El seguimiento de la biodegradacin se realiz aplicando el
mtodo simplificado de anlisis para determinacin de tensioactivos aninicos (MBAS)
desarrollado en esta Tesis Doctoral (apartado 3.4.1.1.).
Los resultados obtenidos se muestran en la Figura V. 63 donde, para su
comparacin, la concentracin de tensioactivo se ha expresado como tanto por ciento de
tensioactivo residual. Se observ que durante el periodo de aclimatacin de los
microorganismos exista un ligero aumento de la concentracin de tensioactivo debido a su
acumulacin en la interfase, fenmeno que intent reducirse al mnimo agitando
enrgicamente la disolucin de tensioactivo antes de proceder a la toma de muestra.
A medida que se incrementa la concentracin de tensioactivo se requiere un mayor
tiempo para conseguir el mismo nivel de biodegradacin; a concentraciones de
tensioactivo bajas, hasta 25 mg/L, se produce una rpida biodegradacin aproximadamente
a los 2 das del ensayo; para concentraciones mayores, 50 mg/L, el proceso de
biodegradacin es ms lento y se requiere un mayor tiempo de adaptacin de los
microorganismos al medio (8 das). En experimentos realizados a 100 mg/L, durante 9 das
no se observ biodegradacin alguna.
366
TESIS DOCTORAL
% LAS RESIDUAL
100
5 mg/L
25 mg/L
50 mg/L
80
60
40
20
0
0
10
15
20
t, das
Figura V. 63.- Perfiles de biodegradacin del LAS a 5, 25 y 50 mg/L
En la Tabla V. 41 se presentan los parmetros caractersticos de los perfiles de

biodegradacin. Para este tensioactivo se observa un mayor tiempo de adaptacin de los
microorganismos, lo que motiva que la biodegradabilidad alcanzada a las 50 horas sea
mucho ms baja que para los tensioactivos no inicos etoxilados. El t1/2 y VM determinan
una disminucin de la velocidad de biodegradacin con la concentracin de tensioactivo y
la concentracin residual aumenta con la concentracin de tensioactivo ensayada.
Tabla V. 41.- Parmetros caractersticos de los perfiles de biodegradacin para el LAS

S0, mg/L
tT, h
B, %
tL, h
t1/2, h
VM, %/h
SR, mg/L
5
25
50
366.75
334.50
408.00
18
5
17
38.50
96.23
182.61
78.23
142.74
251.44
0.710
0.342
0.214*
0.098
1.426
9.167
(*) calculada para un valor de biodegradacin del 60%
Durante los ensayos de biodegradacin tambin se estudi el crecimiento de

microorganismos junto con los perfiles de biodegradacin primaria. El nmero de
microorganismos viables se obtuvo mediante recuento hetertrofo en placa (apartado
3.4.2.), expresndose el resultado como unidades formadoras de colonias por ml (UFC/ml).
En la Tabla V. 42 se muestran los parmetros caractersticos de las curvas de crecimiento
367
TESIS DOCTORAL
para las concentraciones estudiadas, donde se aprecia la disminucin de la velocidad de

crecimiento (k) y una menor cantidad de unidades formadoras de colonias con la
concentracin de tensioactivo ensayada. El parmetro Yap se ha obtenido de acuerdo con el
procedimiento descrito en el apartado 5.2.5.
Tabla V. 42.- Parmetros caractersticos de las curvas de crecimiento para el LAS

S0, mg/L
5
25
50
X0, UFC/ml
.
1.51 10
1.60.104
72
UFC/ml max
.
3.00 10
2.97.106
7.16.105
k, h-1
Yap, UFC/g sustrato
0.031
0.026
0.013
2.23.104
1.38.105
8.39.104
La Figura V. 64 muestra las curvas de crecimiento de los microorganismos a las

tres concentraciones estudiadas junto con sus perfiles de biodegradacin correspondientes.
Se observa que las curvas de crecimiento tienen forma de campana, con una fase de
latencia, una etapa de crecimiento exponencial que alcanza su mximo justo cuando
finaliza la etapa de degradacin del tensioactivo, para continuar una disminucin
exponencial cuando no hay ms sustrato disponible. Nuevamente se pone de manifiesto
que el sustrato, que es la nica fuente de carbono disponible, soporta el crecimiento de los
microorganismos y que cuando no hay ms sustrato se produce una disminucin de la
poblacin inicial.
368
TESIS DOCTORAL
5 mg/L
25 mg/L
5,0
3,5E+04
35
3,0E+04
30
4,5
3,0E+06
Conc.
Conc
2,0E+04
2,5
1,5E+04
2,0
1,5
UFC/ml
25
2,5E+06
2,0E+06
20
1,5E+06
UF C/ml
3,0
2,5E+04
Co n c, mg /L
UFC/ml
3,5
UFC/ml
4,0
Conc, mg/L
3,5E+06
15
1,0E+06
1,0E+04
10
5,0E+03
0,0E+00
400
5,0E+05
1,0
0,0E+00
0,5
0,0
0
50
100
150
200
250
300
350
-5,0E+05
50
100
150
200
250
300
350
t, h
t, h
50 mg/L
60
8,0E+05
7,0E+05
50
40
5,0E+05
4,0E+05
30
20
Conc
3,0E+05
UFC/ml
2,0E+05
UFC/ml
Conc, mg/L
6,0E+05
1,0E+05
10
0,0E+00
0
0
50
100
150
200
250
300
350
400
-1,0E+05
450
t, h
primaria para el LAS a diferentes concentraciones iniciales de ensayo
5.6.1. ESTUDIO CINTICO DE LA BIODEGRADACIN PRIMARIA DEL LAS
La cintica de la biodegradacin primaria del LAS ha sido estudiada por diversos

autores. Yakabe y col. (Yakabe, 1992) estudian en agua dulce, a una concentracin inicial
de 2.44 mg/L y en presencia de bacterias aclimatadas, la biodegradacin del LAS, obtienen
que la concentracin de tensioactivo residual disminuye de acuerdo con una cintica de
orden cero.
En agua de mar y a una concentracin inicial de 4 mg/L, Quiroga y col. (Quiroga,
1991) proponen un modelo representado por una ecuacin polinomial de segundo orden
369
TESIS DOCTORAL
que ajusta bien los datos experimentales y justifica el periodo de adaptacin de los
microorganismos al medio estimando la concentracin de tensioactivo residual.
En aguas residuales, estudios de biodegradacin realizados por Moreno y col.
(Moreno, 1990) y Berna y col. (Berna, 1989), determinan que la concentracin de
tensioactivo residual disminuye de acuerdo con una cintica de orden uno.
En la Tabla V. 43. se muestran algunos parmetros cinticos estimados para el LAS
en diferentes condiciones experimentales.
Tabla V. 43.- Parmetros cinticos para el LAS

S0
(mg/L)
Ensayo
Condiciones
Modelo
Parmetros
Referencia
20
River
dieaway
20 C
Agua de mar
Bacterias no
aclimatadas
Logstico
B0 = 0.421 mg/L
K = 0.016 mg.L-1.d-1
Perales
(2001)
10
River
dieaway
20 C
Agua de mar
Bacterias
aclimatadas
Primer
Orden
k = 0.628 d-1
Perales
(2001)
En principio se puede concluir que dependiendo de las condiciones del ensayo, la

concentracin inicial de tensioactivo, la adaptacin de las bacterias utilizadas, etc., los
modelos utilizados y los parmetros cinticos obtenidos pueden ser muy diferentes.
En el estudio de la influencia de la concentracin sobre la cintica de
biodegradacin del LAS se han aplicado diferentes modelos cinticos: de orden cero, de
primer orden, el modelo de Quiroga y col., el modelo logstico y modelo cintico para
sustratos que soportan el crecimiento de microorganismos, modelo de Monod
considerando una concentracin de tensioactivo residual. A continuacin se muestran los
resultados obtenidos de la aplicacin de estos modelos cinticos a las cinticas de
biodegradacin primaria del LAS.
A valores bajos de concentracin (5 mg/L) y sin tener en cuenta el perodo de
adaptacin de los microorganismos, la cintica de biodegradacin primaria del LAS es de
orden cero (Ecuacin V. 88), con un valor de k0=1.54 mg/Ld.
370
TESIS DOCTORAL
k
S
=1 0 t
S0
S0
Ecuacin V. 88
A concentraciones mayores de tensioactivo (25 y 50 mg/L), la cintica de

biodegradacin se ajusta a un modelo de orden uno (Ecuacin V. 89) y la concentracin de
tensioactivo puede seguirse mediante la expresin:
S
= exp( k1 t )
S0
Ecuacin V. 89
con un valor de k1 de 0.25 d-1 (a 25 mg/L) y de 0.17 d-1 (a 50 mg/L).
Las constantes cinticas k0 y k1 se han obtenido mediante regresin no lineal del

ajuste de la Ecuacin V. 88 y la Ecuacin V. 89 a los perfiles de biodegradacin (Figura V.
63), una vez finalizada la fase de aclimatacin de los microorganismos. La comparacin de
resultados experimentales y calculados con la Ecuacin V. 88 y Ecuacin V. 89 se
muestran en la Figura V. 65, donde se han simulado mediante lneas de trazo discontinuo.
371
TESIS DOCTORAL
30
5 mg/L
20
C o n c, m g /L
Conc, mg/L
25 mg/L
25
15
10
0
0
10
15
20
25
t, das
10
15
20
t, das
50
50 mg/L
Conc, mg/L
40
30
20
10
0
0
10
15
20
25
t, das
Figura V. 65.- Comparacin entre los resultados experimentales y los calculados por
diferentes modelos para el LAS a las concentraciones de 5, 25 y 50 mg/L respectivamente

La disminucin de la constante de velocidad de orden uno pone de manifiesto una
ralentizacin del proceso de biodegradacin con el aumento de la concentracin.
Asimismo, concentraciones superiores a 100 mg/L producen un efecto inhibidor de los
microorganismos del ensayo.
Sin embargo, para predecir el comportamiento cintico en todo el intervalo de
tiempo ensayado, la forma sigmoidal de los perfiles de biodegradacin obtenidos sugiere el
uso de modelos basados en el crecimiento de los microorganismos para justificar la
dependencia experimental observada. Quiroga y col. (Quiroga, 1991) han propuesto un
modelo cintico para la degradacin de tensioactivos representado por una ecuacin
polinmica de 2 grado del tipo:
372
TESIS DOCTORAL
dS
= K2 S 2 + K1 S + K0
dt
Ecuacin V. 90
La integracin de la ecuacin anterior proporciona la siguiente relacin para la

dependencia de la concentracin de tensioactivo con el tiempo:
h (S0 q) q (S0 h) e pt
S=
(S0 q) (S0 h) e pt
Ecuacin V. 91
donde p representa la velocidad mxima de crecimiento de los microorganismos; q

la concentracin de sustrato no biodegradable; h la mxima concentracin de sustrato
invertible en formacin de biomasa; K1, K2, y K0 los coeficientes del polinomio de
segundo grado; S0 la concentracin inicial de tensioactivo; y t el tiempo (apartado 2.4.3.5.).
En la Figura V. 65 tambin se muestran los ajustes del modelo propuesto por
Quiroga y col. para todas las concentraciones de tensioactivo ensayadas (lnea de trazo
continuo), y en la Tabla V. 44 se resumen los parmetros cinticos del modelo.
Tabla V. 44.- Parmetros del modelo de Quiroga y col. para el LAS a diferentes
concentraciones
S0, mg/L
h, mg/L
q, mg/L
p, h-1
5
25
50
4.495
25.907
44.563
0.115
2.634
6.085
0.079
0.032
0.019
0.999
0.992
0.963
Como se aprecia en la Figura V. 65, el modelo justifica bien la dependencia

experimental observada para todos los puntos experimentales, incluyendo el periodo de
adaptacin de los microorganismos. Los parmetros evaluados tambin justifican este
modelo ya que el parmetro q (concentracin de sustrato no biodegradable) aumenta con
la concentracin inicial de tensioactivo, y p (velocidad mxima de crecimiento de los
microorganismos) es inversamente proporcional a dicha concentracin.
373
TESIS DOCTORAL
Si se tiene en cuenta la Ecuacin V. 52, Ecuacin V. 53 y Ecuacin V. 54 que

expresan la relacin entre los parmetros del modelo de Quiroga y col. y las constantes
cinticas del modelo propuesto en esta investigacin (Ecuacin V. 58), se puede
determinar la relacin entre la velocidad mxima de crecimiento y la constante KS (m/KS)
a las diferentes concentraciones ensayadas. Se observa que esta relacin, que debe ser
constante, disminuye con la concentracin de sustrato. Los valores obtenidos de m/KS
son: 1.58.10-2, 1.35.10-3 y 4.6.10-4 para las concentraciones de 5, 25 y 50 mg/L
respectivamente.
Tambin se ha aplicado el modelo logstico propuesto por (Simkins, 1984) segn la
ecuacin:
S=
(S 0 + B0 )
B
1 + 0
S0
[K ( S0 + B0 )t ]
e
Ecuacin V. 92
Se trata de un modelo con un menor nmero de parmetros: B0 y K. B0 es la

cantidad de sustrato requerido para producir una densidad celular X0 y K, si tenemos en
cuenta la ecuacin del modelo cintico desarrollado en el apartado 2.4.3.2., viene
expresada por la relacin:
K=
max
KS
En la Tabla V. 45 se presentan los parmetros cinticos del modelo logstico a

diferentes concentraciones iniciales. Se observa como el valor de K disminuye al aumentar
la concentracin inicial del ensayo. En la Figura V. 66 se comparan los valores
experimentales y los calculados con el modelo logstico.
374
TESIS DOCTORAL
Tabla V. 45.- Parmetros cinticos del modelo logstico para el LAS a diferentes
concentraciones iniciales
LAS
S0, mg/L
B0, (mg /L)
K (mg/L h)
5
25
50
0,008
3,251
0,719
0,017
6.00.10-4
3.00.10-4
0,998
0,992
0,962
LAS. 5 mg/L
LAS. 25 mg/L
35
30
4
25
Conc, mg/L
Conc, mg/L
20
15
10
1
5
100
200
300
400
100
200
300
400
t, h
t, h
LAS. 50 mg/L
50
40
Conc, mg/L
30
20
10
100
200
300
400
t, h
el modelo logstico para el LAS a diferentes concentraciones iniciales
375
TESIS DOCTORAL
Para el LAS tambin se ha aplicado el modelo cintico para sustratos que soportan
el crecimiento de microorganismos considerando una concentracin de tensioactivo
residual, modelo de Monod (Ecuacin V. 58), para lo cual se han calculado las
conversiones segn la Ecuacin V. 25. Los resultados obtenidos se presentan en la Tabla
V. 46 donde se muestra tambin el valor de KS teniendo en cuenta la relacin:
S =
KS
S0
Se observa que el valor de m es prcticamente constante con la concentracin de

tensioactivo, y KS no depende de la concentracin ensayada. Se ha tomado un valor medio
para m y KS y se han recalculado el resto de los parmetros que tambin se muestran en la
Tabla V. 46.
Para comprobar que se cumple la hiptesis de Gaden se ha representado el valor de
X (UFC/ml) frente a los valores de (S0-S), donde S0 es la concentracin de sustrato inicial
y S la concentracin de sustrato en cada instante, se han utilizado los perfiles de
biodegradacin y las curvas de crecimiento de microorganismos. Esta representacin se
muestra a ttulo de ejemplo para el ensayo a 50 mg/L (Figura V. 67) observndose que los
puntos se alinean correctamente. Los valores de Yap utilizados son los que se muestran en
la Tabla V. 42.
Tabla V. 46.- Parmetros cinticos del modelo propuesto para el LAS a diferentes
concentraciones iniciales
LAS
S0, mg/L
5
25
50
-3
1.70 10
1.92.10-3
9.00.10-4
m, h-1
KS, mg/L
xm
0.746
0.462
0.145
0.060
0.053
0.049
3.73
11.55
7.26
0.974
0.981
0.799
0.999
0.999
0.966
376
S0, mg/L
m, h-1
KS, mg/L
xm
5
25
50
1.70.10-3
1.91.10-3
9.11.10-4
0.663
0.182
0.093
0.054
0.054
0.054
4.171
4.171
4.171
0.974
0.981
0.799
0.999
0.990
0.966
TESIS DOCTORAL
LAS. 50 mg/L
5,0E+05
4,5E+05
4,0E+05
X , U F C /m l
3,5E+05
3,0E+05
2,5E+05
2,0E+05
1,5E+05
1,0E+05
5,0E+04
0,0E+00
0,0
1,0
2,0
3,0
4,0
5,0
6,0
7,0
8,0
9,0
(S0-S), mg/L
Figura V. 67.- Comprobacin de la hiptesis de Gaden para el LAS a 50 mg/L
En la Figura V. 69 se comparan los valores experimentales y los calculados con

este modelo, se observa un buen ajuste del modelo aplicado para las tres concentraciones
ensayadas. Para comprobar que el modelo reproduce satisfactoriamente los resultados
experimentales se representa el parmetro S frente a la concentracin, observndose una
disminucin de este parmetro con la concentracin de tensioactivo en el ensayo tal y
como caba esperar (Figura V. 68).
Es de destacar que la aplicacin del modelo propuesto (Ecuacin V. 58) permite el
clculo de la constante de saturacin KS para los diferentes tensioactivos, parmetro
necesario para el diseo de sistemas de depuracin de aguas residuales donde estn
presentes dichos tensioactivos.
377
TESIS DOCTORAL
LAS
0,7
0,6
0,5
0,4
y = -0,0123x + 0,6405
R2 = 0,817
0,3
0,2
0,1
0
0
10
20
30
40
50
60
S0
Figura V. 68.- Representacin de S frente a la concentracin inicial de tensioactivo

LAS. 25 mg/L
LAS. 5 mg/L
1,2
1,2
1,0
1,0
0,8
0,8
0,6
0,6
0,4
0,4
0,2
0,2
0,0
0,0
-0,2
-0,4
-0,2
0
100
200
300
400
100
200
300
t, h
t, h
LAS. 50 mg/L
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
-0,2
0
100
200
300
400
t, h
el modelo propuesto para el LAS a diferentes concentraciones iniciales

378
TESIS DOCTORAL

biodegradacin (Tabla V. 46) se ha aplicado el modelo cintico para evaluar el tL y el t1/2
segn se indica en el apartado 5.2.6.2. (Ecuacin V. 62). La velocidad especfica de
crecimiento () se ha obtenido a partir de los perfiles de biodegradacin primaria segn la
Ecuacin V. 71. Los resultados se muestran en la Tabla V. 47. donde se comparan los
parmetros experimentales obtenidos de los perfiles de biodegradacin con los parmetros
cinticos calculados segn el modelo de Monod, se observa buena concordancia entre
ellos.
modelo propuesto para el LAS a diferentes concentraciones iniciales

LAS
Parmetros experimentales
Parmetros modelo
S0, mg/L
tL, h
t1/2, h
, h-1
tL, h
t1/2, h
m, h-1
5
25
50
38.50
96.23
182.61
78.23
142.74
251.44
0.082
0.010
0.021
52.79
31.65
179.69
80.53
119.93
270.43
0.054
0.054
0.054

calculados con el modelo propuesto para las tres concentraciones ensayadas y los
parmetros indicados en la Tabla V. 46, obtenindose una desviacin relativa media del
7.42 %.
379
TESIS DOCTORAL
LAS
1,2
x experimental
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
x terico
segn el modelo propuesto para el LAS a las concentraciones de 5, 25 y 50 mg/L
380
TESIS DOCTORAL
5.7. COMPARACIN DE LA BIODEGRADABILIDAD Y CRECIMIENTO DE

MICROORGANISMOS DE LOS TENSIOACTIVOS ANALIZADOS
En la Figura V. 71, Figura V. 72 y Figura V. 73 se representan los resultados

obtenidos de la comparacin, para todos los tensioactivos ensayados, de los parmetros
caractersticos que se han evaluado a partir de los perfiles de biodegradacin, de las curvas
de crecimiento de microorganismos y los obtenidos de la aplicacin del modelo cintico
propuesto (Ecuacin V. 58) respectivamente.
En la Figura V. 71 se presenta el tiempo de latencia (tL) y la biodegradabilidad (B)
evaluada a las 50 horas del ensayo. En la Figura V. 72 se presenta la comparacin para la
velocidad especfica de crecimiento de microorganismos (k), las unidades formadoras de
colonias (UFC/ml,max) y el rendimiento (Yap) expresado como UFC/g de sustrato,
parmetros obtenidos a partir de las curvas de crecimiento de microorganismos.
Finalmente en la Figura V. 73 se muestran los valores de la velocidad especfica de
crecimiento (m) y la constante de saturacin (KS) obtenidos de la aplicacin del modelo
cintico propuesto.
5 mg/L
200
180
5 mg/L
50 mg/L
140
70
120
60
B, %
80
100
80
25 mg/L
90
160
50 mg/L
50
40
60
30
40
20
20
10
GCP 650
GCP 600
GCP 215
LAS
NPEO
F10/15
F10/18
F1618A/23
F1214N/16
F 1618A/18
0
F 1214N/23
GCP 650
GCP 600
GCP 215
LA S
NP E O
F10/15
F10/18
F1618A /23
F1214N/16
F 1618A /18
0
F 1214N/23
tL , h
100
25 mg/L
Figura V. 71.- Comparacin de tL y B para los diferentes tensioactivos ensayados
381
TESIS DOCTORAL
Los resultados obtenidos ponen de manifiesto que el tiempo de latencia es

prcticamente el mismo para todos los tensioactivos ensayados, excepto para el
tensioactivo LAS que requiere un mayor tiempo de adaptacin de los microorganismos,
siendo este tiempo muy superior para concentraciones altas de tensioactivo (Figura V. 71).
Los resultados de biodegradabilidad a las 50 horas del ensayo indican que para este tiempo
los tensioactivos ms biodegradables son los alcoholes grasos etoxilados, el de menor
biodegradabilidad el LAS, y que a este parmetro le afecta de forma considerable la
concentracin del tensioactivo ensayada, disminuyendo a medida que aumenta la
concentracin de tensioactivo, excepto para el LAS y el NPEO. Los alquilpoliglucsidos
muestran una biodegradabilidad semejante al NPEO.
0,3
2000000
5 mg/L
5 mg/L
1800000
25 mg/L
0,25
Yap, UFC/g sustrato
-1
0,2
k, h
25 mg/L
1600000
50 mg/L
0,15
0,1
50 mg/L
1400000
1200000
1000000
800000
600000
400000
0,05
200000
0
12000000
5 mg/L
25 mg/L
UFC/ml max
10000000
50 mg/L
8000000
6000000
4000000
2000000
GCP 650
GCP 600
GCP 215
LAS
NPEO
F1618A/23
F1214N/16
F 1618A/18
F 1214N/23
Figura V. 72.- Comparacin de k, Yap y UFC/ml, max para los diferentes tensioactivos
ensayados
382
GCP 650
GCP 600
GCP 215
LAS
NPEO
F1618A/23
F1214N/16
F 1618A/18
F 1214N/23
GCP 650
GCP 600
GCP 215
LAS
NPEO
F1618A/23
F1214N/16
F 1618A/18
F 1214N/23
TESIS DOCTORAL
Los parmetros obtenidos de las curvas de crecimiento de microorganismos (Figura

V. 72) indican que las velocidades mayores de crecimiento k, son las obtenidas durante el
proceso de biodegradacin para el tensioactivo Findet 1214N/16, NPEO y los APG, as
como los mayores niveles de UFC/ml,max y los mayores rendimientos (Yap) por gramo de
sustrato. Tambin se observa que los valores mximos de las unidades formadoras de
colonias encontrados aumentan generalmente con la concentracin de sustrato ensayada
excepto para el tensioactivo LAS.
3,5
4,50
4,00
3,0
3,50
KS, mg/L
m , d
-1
2,5
2,0
1,5
3,00
2,50
2,00
1,50
1,0
1,00
0,5
0,50
LAS
NPEO
F10/15
F10/18
F1618A/23
F1214N/16
F 1618A/18
LAS
NPEO
F10/15
F10/18
F1618A/23
F1214N/16
F 1618A/18
F 1214N/23
F 1214N/23
0,00
0,0
Figura V. 73.- Comparacin de m y KS para los diferentes tensioactivos ensayados
En la Figura V. 73 se muestran los parmetros caractersticos del modelo m y Ks

para los diferentes tensioactivos ensayados por el mtodo esttico. Los valores mayores
obtenidos son para los tensioactivos NPEO y LAS. Para poder comparar los criterios de
biodegradabilidad propuestos por Blok (Blok, 1996) para los ensayos respiromtricos se ha
tomado como referencia el tensioactivo Findet 1618A/18 que se ha analizado mediante los
dos ensayos de biodegradacin (ensayo esttico y respiromtrico). Los resultados de esta
aplicacin determinan que los tensioactivos alcoholes grasos etoxilados Findet 1214N/23 y
Findet 1214N/16 con mayor grado de etoxilacin, el NPEO y el LAS pueden considerarse
fcilmente biodegradables, ya que sus velocidades especficas de crecimiento son mayores
383
TESIS DOCTORAL
que las del Findet 1618A/18. Los tensioactivos Findet 1618A/23 de mayor peso molecular,
Findet 10/18 y Findet 10/15 de menor peso molecular y menor grado de etoxilacin pueden
considerarse como tensioactivos de biodegradabilidad inherente en la misma forma que el
GCP 600 y el GCP 650.
384
TESIS DOCTORAL
5.8. BIODEGRADACIN DE MEZCLAS DE AGE Y APG
Los detergentes constan generalmente de uno o varios tensioactivos en su

formulacin, lo que constituye la materia activa, el resto son componentes
complementarios como los coadyuvantes o builders, los aditivos y los auxiliares de
presentacin (Snchez-Leal, 1995). Cuando finaliza el proceso de lavado (domstico o
industrial), el agua de lavado ser una disolucin ms o menos compleja de la suciedad
eliminada y de los componentes del detergente. Se deduce fcilmente que en el medio
receptor, la biodegradacin de un tensioactivo se producir en presencia de otros
tensioactivos que pueden interferir en su proceso de biodegradacin.
Con objeto de evaluar el efecto de los APG sobre la biodegradabilidad de los AGE,
se han llevado a cabo estudios de biodegradabilidad primaria de los AGE en presencia de
APG.
Dado que los tensioactivos alquilpoliglucsidos no reaccionan con el reactivo yodo
yoduro, y que se comprob que los APG no interfieren significativamente en la medida de
tensioactivos etoxilados por el mtodo del yodo yoduro (apartado 5.1.2.4.), ste ha sido el
mtodo utilizado para el seguimiento de la biodegradabilidad en el proceso de
biodegradacin conjunta de estos tensioactivos, donde se evala la concentracin del
tensioactivo alcohol graso etoxilado y se analiza el efecto de la presencia del
alquilpoliglucsido en el proceso de biodegradacin.
Los tensioactivos seleccionados han sido el AGE Findet 1214N/23 y el APG GCP
650, el menos biodegradable de los APG ensayados.
En la Figura V. 74 se representan los perfiles de biodegradacin obtenidos, donde
se incluye el resultado de la biodegradacin del AGE en ausencia de APG. En todos los
perfiles la concentracin se expresa como porcentaje de tensioactivo residual a fin de poder
comparar los diferentes experimentos.
385
TESIS DOCTORAL
120
100
FINDET 1214N/23 (10 mg/L) + GCP 650 (10 mg/L)
80
FINDET 1214N/23 (20 mg/L)
60
40
20
0
0
20
40
60
80
100
120
140
160
180
200
220
t, h
120
100
80
60
40
20
0
0
20
40
60
80
100 120 140 160 180 200 220
t, h
Figura V. 74.- Variacin de la concentracin residual de Findet 1214N/23 en ausencia y
en presencia de GCP 650
Se observa que la presencia de APG no afecta a la forma de la curva de

biodegradacin primaria, pero s la desplaza hacia la derecha incrementndose el tiempo de
latencia cuando en el proceso est presente el alquilpoliglucsido.
Para poder comparar mejor los resultados obtenidos se han calculado los
parmetros caractersticos de los perfiles de biodegradacin (apartado 5.2.3) para cada
386
TESIS DOCTORAL
concentracin utilizada de Findet 1214N/23. Los resultados se recogen en la Tabla V. 48.

en la que tambin se incluyen los parmetros correspondientes a los ensayos de
biodegradabilidad para el tensioactivo Findet 1214N/23 sin GCP 650.
Tabla V. 48.- Parmetros caractersticos de los perfiles de biodegradacin para el Findet
1214N/23 en ausencia y en presencia de GCP 650

S0, mg/L
tT, h
B, %
tL, h
t1/2, h
VM, %/h
SR, mg/L
10
190.75
88
22.68
25.88
2.93
0.55

S0, mg/L
tT, h
B, %
tL, h
t1/2, h
VM, %/h
SR, mg/L
15
215.00
59
29.22
47.06
1.37
1.04
FINDET 1214N/23
S0, mg/L
tT, h
B, %
tL, h
t1/2, h
VM, %/h
SR, mg/L
15
20
159.00
167.50
92
92
22.28
22.52
30.75
27.68
2.17
2.02
0.96
1.76
Como se observa en la Tabla V. 48 el tiempo de latencia (tL) y el tiempo total

alcanzado hasta que la concentracin permanece constante (tT), aumenta cuando est
presente el APG, lo que confirma que se produce un retraso en el proceso de
biodegradacin, del orden de 30 a 40 horas con respecto al ensayo en el que el nico
tensioactivo es el AGE.
Tambin se observa que la biodegradabilidad (B) del AGE es menor en presencia
del APG llegando slo al 59% cuando se utiliza una concentracin de AGE alta y se le
aade APG (para la mezcla 15 mg/L de Findet y 5mg/L de GCP 650), el t1/2 y tT es mayor
respecto al ensayo sin APG y la velocidad de biodegradacin VM es menor.
387
TESIS DOCTORAL

BIODEGRADACIN CONJUNTA DE AGE Y APG
Las curvas de crecimiento de biomasa durante el proceso de biodegradacin se

obtuvieron simultneamente a los perfiles de biodegradacin para las mezclas
tensioactivas. Los resultados se presentan en la Figura V. 75, observndose un mayor
crecimiento de microorganismos cuando se incrementa la presencia de APG y se
disminuye el porcentaje de AGE.
8,0E+06
7,0E+06
6,0E+06
UFC/ml
5,0E+06
4,0E+06
3,0E+06
2,0E+06
1,0E+06
0,0E+00
0
50
100
150
200
250
t, h
Figura V. 75.- Curvas de crecimiento de microorganismos para las mezclas Findet
1214N/23 y GCP 650
En la Figura V. 76 se presentan las curvas de crecimiento de microorganismos para

el Findet 1214N/23 en ausencia y presencia de GCP 650.
388
TESIS DOCTORAL
FINDET 1214N/23 (10 mg/L) + GCP 650 (10 mg/)L

3,5E+07
3,0E+07
UFC/ml
2,5E+07
2,0E+07
1,5E+07
1,0E+07
5,0E+06
0,0E+00
0
50
100
150
200
250
t, h

3,5E+07
3,0E+07
UFC/ml
2,5E+07
2,0E+07
1,5E+07
1,0E+07
5,0E+06
0,0E+00
0
50
100
150
200
250
t, h
Figura V. 76.- Curvas de crecimiento de microorganismos para el Findet 1214N/23 en
ausencia y en presencia de GCP 650
La observacin de los perfiles de crecimiento parece indicar que son dos

parmetros los que afectan al proceso de crecimiento de microorganismos, la presencia del
tensioactivo GCP 650, que determina una menor formacin de UFC, y la concentracin del
tensioactivo AGE empleado que determina una velocidad menor de crecimiento de los
microorganismos, la presencia del APG no parece afectar de forma importante a la
389
TESIS DOCTORAL
velocidad de crecimiento de microorganismos. En la Tabla V. 49 se muestran los

resultados obtenidos de los perfiles de crecimiento de microorganismos observndose que
el experimento realizado con 15+5 es el que implica menor nmero de unidades de
colonias formadas, y el menor rendimiento obtenido.
Tabla V. 49.- Parmetros caractersticos de las curvas de crecimiento para el Findet
1214N/23 en presencia y en ausencia de GCP 650

S0, mg/L
X0, UFC/ml
UFC/ml max
t max, h
k, h-1
10
2.10.103
7.08.106
46.50
0.201
Yap, UFC/g
sustrato
8.34.105

S0, mg/L
X0, UFC/ml
UFC/ml max
t max, h
k, h-1
15
1.20.102
3.74.106
94.75
0.109
Yap, UFC/g
sustrato
2.94.105
FINDET 1214N/23
S0, mg/L
X0, UFC/ml
UFC/ml max
t max, h
k, h-1
15
20
4.30.103
4.98.102
7.50.106
1.57.107
38.75
78.75
0.207
0.116
Yap, UFC/g
sustrato
6.13.105
9.71.105
La comparacin entre el perfil de biodegradacin y las curvas de crecimiento de

microorganismos (Figura V. 77) pone de manifiesto que durante el tiempo de duracin del
ensayo, la biodegradacin del Findet 1214N/23 parece realizarse en primer lugar, y durante
este proceso se inicia la adaptacin de los microorganismos al APG. No se observa la
biodegradacin de los productos intermedios en las curvas de crecimiento cuando estn
presentes los dos tensioactivos, como en el caso del ensayo en el que slo existe AGE. Esto
determina una secuencia en la biodegradacin inicial de los dos tensioactivos existentes en
el proceso.
390
TESIS DOCTORAL
UFC/ml Mezcla 10+10
7,0E+06
100
% Tens. Mezcla 10+10
6,0E+06
% Tens. FINDET 20 mg/L
80
UFC/ml
5,0E+06
60
4,0E+06
3,0E+06
40
2,0E+06
120
8,0E+06
20
1,0E+06
0,0E+00
0
50
100
0
200
150
t, h

4,0E+06
120
100
3,0E+06
80
UFC/ml
2,5E+06
2,0E+06
60
UFC/ml Mezcla 15+5
% Tens. Mezcla 15+5
1,5E+06
1,0E+06
40
20
3,5E+06
5,0E+05
0,0E+00
0
0
50
100
150
200
t, h
Figura V. 77.- Comparacin entre el perfil de biodegradacin y las curvas de crecimiento
de microorganismos para las mezclas tensioactivas
391
TESIS DOCTORAL
5.8.2. ESTUDIO CINTICO DE LA BIODEGRADACIN PRIMARIA DE

MEZCLAS DE AGE Y APG
En la Figura V. 78 se muestran los perfiles obtenidos de la aplicacin del modelo de

Monod que considera una concentracin de tensioactivo residual (apartado 5.2.6.2.,
Ecuacin V. 58) a las mezclas tensioactivas. En la Tabla V. 50 se presentan los parmetros
caractersticos del modelo para las mezclas tensioactivas y para los ensayos de
biodegradacin del tensioactivo Findet 1214N/23 en ausencia de APG.
FINDET 1214N/23 (10 mg/L) + GCP650 (10 mg/L)

1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
-0,2
0
50
100
150
200
t, h

1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
-0,2
0
50
100
150
200
t, h
el modelo propuesto para las mezclas de AGE y APG

392
TESIS DOCTORAL
Tabla V. 50.- Parmetros caractersticos del modelo propuesto para el Findet 1214N/23 en
presencia y en ausencia de GCP 650

S0, mg/L
10
9.84 10
-10
m, h-1
KS, mg/L
xm
0.098
0.081
0.980
0.921
0.980

S0, mg/L
15
1.26 10
-5
m, h-1
KS, mg/L
xm
0.061
0.016
0.915
0.892
0.921
FINDET 1214N/23
S0, mg/L
15
20
-5
3.60 10
1.51.10-6
m, h-1
KS, mg/L
xm
0.067
0.050
0.027
0.027
1.009
1.009
0.897
0.903
0.996
0.997
Para considerar la magnitud del efecto observado sobre los parmetros

determinados, se ha utilizado la siguiente expresin:
i
i
Ef i = APG 0
i0
Ecuacin V. 93
donde:
Efi: efecto observado sobre el parmetro considerado
iAPG: valor del parmetro observado en el ensayo en presencia de APG
i0: valor del parmetro observado en el ensayo en ausencia de APG
En la Figura V. 79 se representan los valores de efecto calculados para el ensayo de
biodegradacin de 15 mg/L de Findet 1214N/23 en presencia de 5 mg/L de GCP 650 para
los parmetros siguientes: tiempo de latencia tL, tiempo de vida media t1/2, velocidad media
de biodegradacin VM, biodegradabilidad B, velocidad mxima de crecimiento de
microorganismos m (evaluada con el modelo propuesto) y la velocidad de crecimiento k
(determinada experimentalmente de los perfiles de crecimiento de microorganismos).
393
TESIS DOCTORAL
Los valores de efecto negativos indican un descenso del valor del parmetro
cintico en el ensayo en presencia de APG, mientras que los valores positivos indican que
el parmetro cintico ha sufrido un aumento en el ensayo realizado en presencia de APG
frente al ensayo en el que solo se emple AGE.
Se confirma que la presencia de APG provoca un aumento del tiempo de latencia y
del tiempo de vida media, una disminucin de la biodegradabilidad y la velocidad media
de biodegradacin, as como un descenso en la velocidad de crecimiento de
microorganismos.
0,60
0,40
Efecto
0,20
0,00
tL
t1/2
VM
m max
-0,20
-0,40
-0,60
Figura V. 79.- Efecto observado para los parmetros caractersticos y cinticos
correspondientes al ensayo de biodegradacin de 15 mg/L de Findet 1214N/23 en

presencia de 5 mg/L de GCP 650
394
TESIS DOCTORAL
5.9. TOXICIDAD DE TENSIOACTIVOS
Desde el punto de vista toxicolgico los efectos de los tensioactivos a largo plazo
no son bien conocidos, aunque s se sabe que pueden provocar irritaciones en la piel y
rganos internos, efectos depresivos, etc. (Llopis, 1987).
Aunque el uso de organismos bioluminiscentes como organismos de prueba en
evaluacin de toxicidad se conoce desde hace ms de 35 aos, no fue hasta 1980 cuando se
desarroll el ensayo Microtox como una tcnica de screening para determinar
rpidamente y de forma fiable la toxicidad de muestras acuosas (Bulich, 1979). Este tipo
de bioensayos al igual que el LumiStox, presenta una gran simplicidad de operacin, es un
ensayo rpido y muy estandarizado, lo que permite la comparacin fidedigna de datos de
toxicidad, adems es un ensayo que da una buena correlacin con resultados obtenidos con
otros bioensayos ms complicados y costosos (Rib, 1992).
Por otra parte existen estudios recientes en los que se compara el ensayo Microtox
con ensayos de inhibicin del consumo de oxgeno mediante fangos activados
(respirometra). En dichos estudios se pone de manifiesto que el ensayo Microtox presenta
mayor sensibilidad, repetitividad y precisin aunque la respirometra caracteriza mejor la
toxicidad de las aguas residuales que se depuran en una EDAR, porque simula el proceso
de tratamiento biolgico (Gutirrez, 2002).
La medida de la toxicidad de tensioactivos se ha realizado mediante el ensayo
LumiStox conforme a la norma NORMA UNE-EN ISO 11348-2 (UNE-EN ISO 11348-2),
utilizando bacterias luminiscentes de la cepa Vibrio fischeri como microorganismos de
prueba (apartado 3.5.). Estas bacterias no patgenas emiten luz como mecanismo de
liberacin de energa en el curso de su metabolismo normal. La intensidad de luz emitida
es, por tanto, una medida de la actividad metablica de las bacterias. Cuando estos
microorganismos estn expuestos a una muestra txica, la emisin de luz disminuye de
forma proporcional a la toxicidad de la muestra. Por tanto es un ensayo basado en la
inhibicin de la actividad enzimtica de la luciferina, que es la enzima responsable de la
bioluminiscencia en estas bacterias (Rib, 1992).
395
TESIS DOCTORAL
5.9.1. DETERMINACIN DE LOS VALORES DE EC20 y EC50
La determinacin de la toxicidad se realiz para distintos tensioactivos: alcoholes y

cidos grasos etoxilados, alquilpoliglucsidos, BEROL (mezcla de AGE y APG), NPEO y
LAS. Las concentraciones iniciales de tensioactivo estn comprendidas entre 5 y 500
mg/L, dependiendo del tensioactivo ensayado.
El valor de la toxicidad en ensayos acuticos se mide como EC50 y EC20 que son,
respectivamente, la concentracin de tensioactivo en mg/L que produce una inhibicin del
50% y del 20% despus de 15 y 30 minutos de exposicin con el txico. Los valores de
EC50 y EC20 se calculan dando a la funcin Gamma, funcin que evala las relaciones
concentracin-efecto, los valores 1 y 0.25, respectivamente (apartado 3.5.5.2.). Esta
funcin Gamma es un indicador de la inhibicin enzimtica, ms correcto y exacto que el
simple porcentaje de disminucin de luz (Rib, 1992). Los valores de EC50 y EC20
dependen de la temperatura, del tiempo de exposicin y, principalmente, de la naturaleza
qumica de los contaminantes en la muestra. Los ensayos se han realizado a una
temperatura de 15 C.
La relacin lineal entre la funcin y la concentracin de tensioactivo empleado
viene dada por:
log(c ) = blog( ) + log(a )
Ecuacin V. 94
La Figura V. 80 muestra las linealizaciones de la concentracin y la funcin

Gamma obtenidas para los tensioactivos ensayados para tiempos de incubacin de 15 y 30
minutos. Los puntos representan los resultados experimentales (valor medio de dos
rplicas) y la lnea el ajuste de la Ecuacin V. 94 a los datos.
396
TESIS DOCTORAL

tiempo de incubacion: 30 min

tiempo de incubacin: 15 min
10
10
log c
log c
0,1
0,1
0,01
0,001
0,001
0,01
0,1
0,01
0,01
0,1
log gama
10

FINDET 1214N/23. 50mg/L

100
100
log c
log c
log gama
10
1
0,01
0,1
10
1
0,01
10
0,1
10
log gama
log gama


10
10
log c
100
log c
100
0,1
0,01
0,1
10
100
0,1
0,01
log gama
0,1
10
100
log gama
Figura V. 80.- Linealizacin entre la funcin gamma y la concentracin para diferentes
tensioactivos
397
TESIS DOCTORAL

tiempo de incubacio: 30 min

100
10
10
log c
log c
100
0,1
0,001
0,01
0,1
10
0,1
0,01
100
0,1
log gama

1000
1000
100
100
log c
log c

10
10
0,1
0,01
10
log gama
0,1
10
100
0,1
0,01
1000
0,1
10
100
1000
log gama
log gama
FINDET 1618A/18. 100 mg/L


100
100
log c
1000
log c
1000
10
1
0,01
10
0,1
1
0,01
log gama
0,1
log gama
Figura V. 80. (Continuacin). Linealizacin entre la funcin gamma y la concentracin
para diferentes tensioactivos

398
TESIS DOCTORAL


100
100
10
log c
log c
10
0,1
0,01
0,1
0,1
0,01
log gama
0,1
log gama
FINDET AR/52. 100 mg/L

FINDET AR/52. 100 mg/L

1000
1000
100
10
log c
log c
100
10
0,1
0,01
0,1
0,1
0,01
0,1
BEROL. 100 mg/L

BEROL.100mg/l
100
log c
100
log c
log gama
log gama
10
1
0,01
0,1
10
10
1
0,01
log gama
0,1
10
log gama
399
TESIS DOCTORAL
NONILFENOL. 500 mg/l

NONILFENOL.500mg/l
100
100
log c
1000
log c
1000
10
10
1
0,01
0,1
1
0,01
10
0,1
log gama
log gama
Glucopon 600. 100 mg/L

Glucopon 600. 100 mg/L

1000
10
1000
100
log c
log c
100
10
10
1
0,1
0,001
0,01
0,1
1
0,01
10
0,1
log gama
10
GLUCOPN 215. 100 mg/l

GLUCOPN 215.100mg/l
100
100
log c
log c
log gama
10
10
1
0,1
10
0,1
10
log gama
log gama
400
TESIS DOCTORAL
GLUCOPN 650.100mg/l
GLUCOPN 650.100mg/l
100
10
10
log c
log c
100
0,1
0,01
0,1
0,1
0,01
10
log gama
0,1
10
log gama
LAS. 100 mg/l

LAS.100mg/l
100
log c
log c
100
10
1
0,01
0,1
10
10
1
0,001
log gama
0,01
0,1
10
log gama
401
TESIS DOCTORAL
Los resultados de EC50 y EC20 obtenidos para los distintos tensioactivos ensayados
se presentan en la Tabla V. 51 y en la Figura V. 81, en orden decreciente de toxicidad y
para tiempos de incubacin de 15 y 30 minutos.
Tabla V. 51.- Valores de EC20 y EC50 en mg/L para distintos tensioactivos

TENSIOACTIVO EC20 (15 min) EC50 (15 min) EC20 (30 min) EC50 (30 min)
FINDET 1214N/16
FINDET 10/15
FINDET 10/18
GLUCOPN 650
FINDET 1214N/23
FINDET 1618A/23
GLUCOPON 600
LAS
GLUCOPN 215
BEROL
FINDET 1618A/18
FINDET AR/52
NONILFENOL
0.47
0.72
1.37
3.86
5.54
6.22
7.46
9.41
10.12
12.81
12.27
12.30
29.29
1.24
2.01
4.76
13.81
12.67
37.18
13.40
27.58
29.05
46.39
146.53
91.38
160.64
0.43
0.71
1.20
3.97
5.93
5.81
7.32
8.29
6.21
17.49
13.16
12.90
26.53
1.42
2.21
4.80
14.41
13.26
35.64
19.53
26.50
25.59
51.88
85.78
83.26
162.90
180
160
140
EC20 (15 min)
EC50 (15 min)
EC20 (30 min)
EC50 (30 min)
C, mg/L
120
100
80
60
40
20
0
Figura V. 81.- Valores de EC20 y EC50 en mg/L para distintos tensioactivos
402
TESIS DOCTORAL
La toxicidad de los AGE presenta un desafo a los investigadores, ya que stos son
mezclas complejas de homlogos, cada uno de los cuales presenta diferentes propiedades
fsico-qumicas individuales diferentes, adems son compuestos que presentan una rpida
biodegradacin que lleva a concentraciones en el medio que son frecuentemente inferiores
a las esperadas (Battersby, 2001). Para los AGE la toxicidad (aguda o crnica) es una
funcin de la longitud de la cadena carbonada y etoxilada. Dos tensioactivos con la misma
media de longitud de cadena alqulica y unidades de OE, pero con distinta distribucin de
homlogos u oligmeros, pueden presentar diferentes valores de toxicidad (Morrall, 2003).
En la Figura V. 82 se presentan los valores de EC50 (15 min) para los AGE en
funcin de las propiedades del tensioactivo: peso molecular (PM), nmero de moles de
xido de etileno (OE), balance hidrfilo-lipfilo (HLB) y parte hidrfila del tensioactivo.
En estas representaciones se ha excluido el Findet 1618A/18 que presenta resultados
60
60
50
50
40
40
E C 50 (15 m in )
EC 50 (15 min)
anmalos.
30
20
10
30
20
10
0
0
200
400
600
800
1000
1200
1400
1600
10
PM
60
20
25
30
60
50
50
40
E C 50 (15 min)
EC 50 (15 min)
15
OE
30
20
10
40
30
20
10
0
5
11
13
15
17
19
HLB
205
405
605
805
1005
Parte hidrfila
Figura V. 82.- Variacin de la EC50 (15 min) de los AGE con diferentes propiedades del
tensioactivo
403
TESIS DOCTORAL
Las relaciones obtenidas y el correspondiente coeficiente de determinacin son las

siguientes:
EC50 (15 min) = 0.032.(PM)-8.482 (R2=0.990).
EC50 (15 min) = 1.670.(OE)-3.867 (R2=0.994).
EC50 (15 min) = 0.008.e0.513.(HLB) (R2=0.932).
EC50 (15 min) = 0.038.(Parte hidrfila)-4.512 (R2=0.994).
De los resultados obtenidos se puede concluir, para los AGE, que la toxicidad
parece ser mayor para menor tamao de la molcula, ya sea por nmero de xidos de
etileno como por longitud de cadena carbonada. De forma general se sabe que la toxicidad
de los tensioactivos no inicos del tipo polietoxilados se ve incrementada al disminuir la
longitud de la cadena etoxilada (Swisher, 1963; Ahel, 1985), adems se cumple que los
tensioactivos ms biodegradables son los menos txicos (Snchez-Leal, 1995). La
toxicidad tambin es mayor para tensioactivos de menor peso molecular y para aquellos
que presentan menor HLB. Esto se cumple para todos los AGE ensayados excepto para el
Findet 1618A/18 que presenta un comportamiento anmalo.
Adems de estos hechos, numerosos estudios encaminados a establecer relaciones
estructura-actividad han concluido que los AGE que presentan mayor hidrofobicidad (ya
sea por mayor tamao de cadena carbonada o menor longitud de cadena etoxilada)
muestran valores ms altos de toxicidad (Roberts, 1991, Wong, 1997), y que por lo tanto la
hidrofobicidad es un buen parmetro para predecir la toxicidad de AGE. Recientemente se
han obtenido datos ms precisos de las relaciones estructura-actividad utilizando modelos
de ecosistemas (mesocosmos), (Belanger, 2000).
El tensioactivo aninico ensayado (LAS) presenta una toxicidad intermedia con un
valor de EC50 (15 min) de 27.58 mg/L. Otros investigadores encontraron para el LAS un
EC50 (15 min) de 35.95 mg/L (Perales, 2001).
Los alquilpoliglucsidos tienen valores de EC50 (15 min) comprendidos entre 14 y
29 mg/L, siendo menos txico el de menor cadena carbonada y menor contenido en
glucosa (GCP 215). Garca y col. (Garca, 1997) determinaron la toxicidad aguda con
Daphnia magna para APG comerciales con tamaos de cadena entre C9-C16 encontrando
que las mezclas de APG ms hidrofbicas, es decir, de mayor cadena carbonada, son los
404
TESIS DOCTORAL
productos ms txicos para el test ensayado, obtenindose valores de EC50 (30 min) entre 7
y 16 mg/L. Estudios similares tambin muestran como los homlogos de APG de mayor
cadena alqulica presentan mayores valores de ecotoxicidad (Steber, 1995).
El tensioactivo BEROL presenta menor toxicidad que los APG ensayados, y el
NPEO sera el tensioactivo menos txico segn el test aplicado.
Si se se compara la toxicidad de los AGE con la de los de los alquilfenoles
etoxilados, estos ltimos resultan menos txicos (Garca, 1994), aunque los productos
resultantes de la biodegradacin (nonilfenol sin etoxilar o con bajo grado de etoxilacin)
parece que son un tanto recalcitrantes, por cuanto su biodegradacin es ms lenta que la
de los correspondientes homlogos de alcoholes grasos sin etoxilar con 1 2 unidades de
xido de etileno.
405
TESIS DOCTORAL

BIODEGRADACIN
Con objeto de eliminar cualquier duda acerca de la labilidad ambiental de un

tensioactivo, se ha estudiado la evolucin de la toxicidad a lo largo del proceso de
biodegradacin. De este modo, se puede comprobar si se producen subproductos de
biodegradacin ms txicos que el tensioactivo original, como ocurre con los tensioactivos
del tipo alquilfenol etoxilados, o si por el contrario, los tensioactivos estudiados presentan
una biodegradabilidad ambientalmente aceptable, esto es: que la toxicidad de los
metabolitos de biodegradacin es inferior a la del tensioactivo de partida y que los
tensioactivos no slo son primariamente biodegradables o mineralizables.
La toxicidad de una sustancia se mide como EC50 o EC20, que expresa la
concentracin que produce una inhibicin de la emisin de luz del 50 % 20 % sobre el
organismo de prueba (ISO 11348-2). En los vertidos de aguas residuales urbanas e
industriales o cuando se trabaja con muestras de composicin desconocida, no es posible
expresar la toxicidad en trminos de concentracin. En estos casos la toxicidad se mide en
unidades de toxicidad (TU). La unidad de toxicidad es el Equitox/m3. Una muestra de agua
que produzca una inhibicin del 50% sobre el organismo de prueba se dice que tiene una
toxicidad de 1 Equitox/m3. Esta forma de expresar la toxicidad presenta la ventaja de que
su valor es mayor cuanto mayor es la toxicidad de la muestra.
En una muestra de composicin conocida su EC50 sera equivalente a una toxicidad
de 1 Equitox/m3 si sta se expresase en unidades de toxicidad. Las unidades de toxicidad
de una muestra se calculan a partir de la dilucin de la muestra (expresada como
porcentaje, D50) que produce una inhibicin del 50% (Rib, 1994):
TU =
1
100, Equitox/m 3
D 50 (%)
Ecuacin V. 95
Cuando la toxicidad de la muestra es inferior a 1 Equitox/m3, no es posible

calcularla por este mtodo porque no existe una dilucin de la muestra que produzca una
406
TESIS DOCTORAL
inhibicin de la emisin de luz del 50 % del organismo de prueba, es decir, la

concentracin de sustancias inhibitorias en las muestras de ensayo es inferior a la necesaria
para producir una inhibicin del 50 % y a la necesaria para que el ensayo LumiStox
proporcione un valor de toxicidad.
Por tanto, para evaluar la toxicidad durante el proceso de biodegradacin
expresaremos el valor de toxicidad de la muestra como tanto por ciento de inhibicin, y la
variacin de la toxicidad durante el ensayo de biodegradacin como la variacin del tanto
por ciento de inhibicin (Jurado, 2004).
El tanto por ciento de inhibicin (efecto inhibidor) de la muestra de ensayo para un
tiempo de incubacin t, se calcula mediante la expresin:
Ht =
( I 0t (c) I t (c))
100
I 0 t (c )
Ecuacin V. 96
donde
I 0 t (c ) = f k I 0 ( c )
Ecuacin V. 97
siendo f k el factor de correccin promedio de las muestras de control, y I0 (c) y

It (c) las lecturas de intensidad luminosa en la cubeta que contiene concentracin c a
tiempo 0 y t.
El efecto inhibidor de las muestras de ensayo se ha calculado para un tiempo de
incubacin de 15 minutos.
En la Figura V. 83 se ha representado la variacin del porcentaje de inhibicin
durante el proceso de biodegradacin para todos los tensioactivos ensayados. En la Figura
V. 84 se ha representado para cada tensioactivo la influencia de la concentracin sobre la
variacin del porcentaje de inhibicin durante el proceso de biodegradacin.
407
TESIS DOCTORAL
FINDET 1214N23. 20 mg/L

70
25
60
20
50
40
H (t)
H(t)
15
30
R2 = 0,7292
10
20
10
R2 = 0,9326
0
0
0
0
10
-10
t, das
t, das

80
60
70
50
60
50
R2 = 0,9325
40
H (t)
H(t)
40
30
30
20
20
R2 = 0,7934
10
10
0
-10
0
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
10
15
t, das
3,0
t, das

40
35
30
25
H (t)
H(t)

4
2
2
20
15
10
R2 = 1
R2 = 0,9404
t, das
t, das
Figura V. 83.- Variacin del tanto por ciento de inhibicin durante el proceso de
biodegradacin para todos los tensioactivos ensayados
408
10
TESIS DOCTORAL
FINDET 1618A18. 50 mg/L
FINDET 1618A23. 5 mg/L
18
40
16
35
14
30
12
H(t)
H (t)
25
10
R = 0,9111
20
8
15
R2 = 0,9225
10
0
0
10
t, das
t, das
NONILFENOL. 5 mg/L
NONILFENOL. 25 mg/L
30
7
6
25
20
R2 = 0,8747
H (t)
H(t)
4
R2 = 0,9453
15
10
0
0,0
0,5
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
-1
t, das
10
t, das
GCP 215. 12 mg/L
NONILFENOL. 50 mg/L
20
30
18
25
16
14
R = 0,8477
20
H(t)
H(t)
12
15
R2 = 0,9069
10
8
10
6
4
10
t, das 4
t, das
Figura V. 83. (Continuacin). Variacin del tanto por ciento de inhibicin durante
el proceso de biodegradacin para todos los tensioactivos ensayados
409
TESIS DOCTORAL
GCP 600. 100 mg/L
GCP 650. 20 mg/L

35
90
80
30
70
25
60
20
R2 = 0,9428
H (t)
H(t)
50
40
15
30
10
R2 = 0,9541
20
5
10
0
0
t, das
t, das
LAS. 50 mg/L
LAS. 25 mg/L
20
40
35
16
30
25
H (t)
H(t)
12
20
15
R = 0.9229
R2 = 0.9639
10
5
0
0
0
10
12
t, das
10
12
14
16
t, das
FINDET 1214N23 15mg/L+GCP 650 5 mg/L
FINDET 1214N23 10 mg/L+GCP 650 10 mg/L

8
H (t)
H(t)
3
3
R2 = 0,9521
0
-1
R2 = 0,7983
t, das
0
0
t, das
Figura V. 83. (Continuacin). Variacin del tanto por ciento de inhibicin durante
el proceso de biodegradacin para todos los tensioactivos ensayados
410
TESIS DOCTORAL
Se observa para los AGE una disminucin importante de la toxicidad durante los
primeros das del ensayo de biodegradacin y a todas las concentraciones ensayadas,
siendo mayor el tiempo necesario para alcanzar valores de toxicidad nulos a medida que
aumenta la concentracin de tensioactivo (Figura V. 83).
Para el NPEO se ha seguido la evolucin de la toxicidad durante el proceso de
biodegradacin a las concentraciones iniciales de 5, 25 y 50 mg/L (Figura V. 84),
encontrndose que la toxicidad durante el proceso de biodegradacin pasa por un mximo,
confirmando as que los metabolitos de biodegradacin resultan ser ms txicos que el
compuesto de partida. Por otra parte el mximo del % de inhibicin se desplaza a tiempos
inferiores (para la concentracin de 50 mg/L) en el perfil de toxicidad. Este
comportamiento es lgico si tenemos en cuenta que cuanto mayor es la concentracin antes
se alcanzan concentraciones inhibitorias.
Para los alquilpoliglucsidos GCP 215, GCP 600 y GCP 650 a las concentraciones
iniciales de ensayo de 12 mg/L, 100 mg/L y 20 mg/L respectivamente, se observa que la
toxicidad durante el proceso de biodegradacin disminuye rpidamente, no observndose
efectos txicos despus de 7 das. Existe una correlacin entre el aumento de la
biodegradacin del tensioactivo y la disminucin de la toxicidad, esto quiere decir que los
efectos txicos detectados son debidos al tensioactivo de partida y no a los subproductos de
biodegradacin. Garca y col. (Garca, 1997) estudiaron la toxicidad aguda de APG
comerciales durante el proceso de biodegradacin para dos ensayos tipo screening y a las
concentraciones iniciales de 2 mg/L y 25 mg/L, encontrando una disminucin rpida de la
toxicidad y ningn efecto txico al cuarto da de ensayo.
Para el LAS se obtienen valores altos de toxicidad durante los primeros 10 das del
ensayo a la concentracin de 50 mg/L, producindose un valor nulo de toxicidad a los 15
das del ensayo.
De forma general podemos afirmar (excepto para el caso del NPEO) que los
metabolitos producidos a lo largo de la biodegradacin presentan una toxicidad muy
inferior a la del tensioactivo original, lo que los clasifica como compuestos de
biodegradabilidad ambientalmente aceptable.
411
TESIS DOCTORAL
FINDET 1214N16
FINDET 1214N/23
40
70
50 mgL
25 mgL
35
25 mgL
60
15 mgL
20 mgL
30
5 mgL
50
25
40
20
H (t)
H (t)
80
30
15
20
10
10
0
0
10
12
14
-10
10
-5
t, das
t, das
LAS
NONILFENOL
30
40
25
35
25 mgL
30
50 mgL
20
H (t)
H (t)
25
15
20
15
10
25 mgL
10
5 mgL
50 mgL
0
10
11
t, das
10
15
t, das
FINDET 1214N23+GCP 650

8
7
FINDET1214N/23 10 mg/L+GCP650 10mg/L
FINDET1214N/23 15 mg/L+GCP650 5mg/L
H(t)
5
4
3
R2 = 0,7983
R2 = 0,9521
1
0
-1
t, das
Figura V. 84.- Evolucin de la toxicidad durante el proceso de biodegradacin para
diferentes tensioactivos
412
20
6. CONCLUSIONES
TESIS DOCTORAL
CONCLUSIONES
Las principales conclusiones obtenidas en este trabajo de Tesis Doctoral son las
siguientes:
1.- Para el estudio de la biodegradabilidad de tensioactivos no inicos etoxilados
realizado siguiendo la NORMA UNE 55-844-91, se ha aplicado y puesto a punto un

procedimiento de anlisis simplificado, basado en la formacin de un complejo coloreado
entre el tensioactivo no inico y el reactivo yodo-yoduro. La bondad del mtodo analtico
depende del nmero de moles de xido de etileno del tensioactivo, ya que tanto el lmite de
deteccin como la sensibilidad del mtodo disminuyen con el nmero de moles de xido
de etileno del tensioactivo ensayado. Este mtodo puede ser aplicado para el estudio de la
biodegradabilidad de tensioactivos no inicos cuyo grado de etoxilacin sea mayor de
cinco en el rango de concentraciones de 0 a 5 mg/L, rango de inters en el estudio de
biodegradacin en aguas residuales.
2.- Se ha comprobado que la presencia de tensioactivos alquilpoliglucsidos no
interfiere de forma importante en la medida de alcoholes grasos etoxilados, por lo que el

mtodo colorimtrico del yodo-yoduro puede utilizarse para el seguimiento de la
biodegradabilidad de mezclas de alcoholes grasos etoxilados y alquilpoliglucsidos.
3.- Se propone una simplificacin del mtodo normalizado para la estimacin de
tensioactivos aninicos MBAS (NORMA UNE EN 903). La simplificacin implica la

extraccin del par inico formado entre el tensioactivo y el azul de metileno en una sola
etapa, desplazando el equilibrio de transferencia del par inico hacia la fase orgnica
(cloroformo) al aumentar la relacin volumen de fase orgnica/volumen de muestra
ensayada en el proceso de extraccin. El procedimiento propuesto elimina las etapas de
filtracin necesarias en el mtodo oficial. Se ha aplicado a la determinacin del LAS
obtenindose resultados ptimos para una relacin volumen de fase orgnica/volumen de
muestra de 5/4, alcanzndose un lmite de deteccin de 0.22 mg/L y un lmite de
cuantificacin de 0.73 mg/L para este tensioactivo.
415
TESIS DOCTORAL
CONCLUSIONES
4.- De los perfiles de biodegradacin obtenidos para los tensioactivos, alcoholes
grasos etoxilados, nonilfenol polietoxilado, y LAS se han definido parmetros

caractersticos
del
proceso
de
biodegradacin
como
el
tiempo
de
latencia,
biodegradabilidad, tiempo de vida media, velocidad media de biodegradacin y

concentracin residual de tensioactivo. Estos parmetros se modifican con la concentracin
de tensioactivo ensayada, indicando que a medida que se incrementa la concentracin de
tensioactivo se produce una disminucin de la velocidad del proceso de biodegradacin, un
incremento del tiempo de vida media, una disminucin de la biodegradabilidad y un
incremento de la concentracin residual de tensioactivo.
5.- La velocidad media de biodegradacin, VM, para los alcoholes grasos
etoxilados, aumenta con el nmero de moles de xido de etileno del tensioactivo y el peso
molecular de ste, siendo este efecto ms acusado para concentraciones mayores de 25
mg/L. Este hecho se confirma con los perfiles de crecimiento de microorganismos
obtenidos donde se observa una mayor concentracin de UFC cuando es mayor el nmero
de moles de OE del tensioactivo.
6.- Se han definido y evaluado parmetros caractersticos de las curvas de
crecimiento de microorganismos durante el proceso de biodegradacin como la velocidad

especfica de crecimiento k, el nmero mximo de unidades formadoras de colonias
UFC/ml
max,
y el rendimiento de produccin de biomasa por gramo de tensioactivo Yap.
Estos parmetros han servido para establecer que los modelos cinticos que explican la
biodegradacin de los tensioactivos ensayados: AGE, APG, NPEO y LAS son aquellos que
soportan el crecimiento de microorganismos.
7.- La cintica de biodegradacin de tensioactivos AGE, APG, NPEO y LAS
puede ser explicada por modelos que soportan el crecimiento de microorganismos

suponiendo Monod y una concentracin de tensioactivo residual y teniendo en cuenta la
ecuacin de Gaden para establecer la relacin entre la disminucin de la concentracin de
sustrato y el crecimiento de microorganismos. Este modelo puede ser aplicado hasta
concentraciones de 25 mg/L para AGE y NPEO, y hasta 50 mg/L para el LAS.
416
TESIS DOCTORAL
CONCLUSIONES
8.- La aplicacin del modelo cintico de Monod para sustratos que soportan el
crecimiento para todos los tensioactivos ensayados ha permitido determinar los parmetros
cinticos caractersticos: la velocidad especfica de crecimiento mxima m y la constante
de saturacin KS, parmetros necesarios para el diseo de sistemas de biodegradacin para
estos productos en estaciones depuradoras y que han permitido la comparacin de todos los
tensioactivos ensayados.
9.- Para concentraciones de tensioactivo elevadas: 50 mg/L para los AGE y NPEO
no es aplicable el modelo cintico de Monod. Para estas concentraciones se produce una

inhibicin de los microorganismos, por lo que se ha evaluado una constante de inhibicin
Ki aplicando el modelo de Andrews, esta constante ha resultado ser mayor para los
tensioactivos de mayor peso molecular y mayor grado de etoxilacin.
10.- La comparacin de la biodegradacin de los tensioactivos alquilpoliglucsidos
y el alcohol graso etoxilado Findet 1618A/18 por el mtodo respiromtrico evaluando la

DBO, ha determinado que el porcentaje de mineralizacin alcanzado y la velocidad
especfica de crecimiento de microorganismos sigue la secuencia GCP 215 > Findet
1618A/18 > GCP 600 > GCP 650. Siendo los tensioactivos GCP 215 y Findet 1618A/18
fcilmente biodegradables, y el GCP 600 y GCP 650 de biodegradabilidad inherente.
11.- La determinacin de la velocidad especfica de crecimiento mxima (m)
obtenida para los tensiactivos AGE, NPEO y LAS aplicando el modelo cintico de Monod,
y admitiendo la clasificacin de biodegradabilidad segn Blok (Blok, 1996), evaluada por
el mtodo respiromtrico y tomando como referencia el tensioactivo Findet 1618 A/18 que
se ha analizado mediante los dos procedimientos, ensayo esttico y mtodo respiromtrico,
ha determinado que los tensioactivos alcoholes grasos etoxilados Findet 1214N/23, Findet
1214N/16 con mayor grado de etoxilacin, el NPEO y el LAS pueden considerarse
fcilmente biodegradables, mientras que el Findet 1618A/23, Findet 10/18 y Findet 10/15
son tensioactivos de biodegradabilidad inherente igual que los tensioactivos GCP 600 y
GCP 650.
417
TESIS DOCTORAL
CONCLUSIONES
12.- La determinacin de la toxicidad por el ensayo Lumistox que utiliza bacterias
marinas luminiscentes de la cepa Vibrio fischeri como microorganismo de prueba, indica

que de los alcoholes grasos etoxilados ensayados el Findet 1214N/16 es el que presenta el
valor de EC50 ms bajo: 1.24 mg/L, por lo que es el ms txico. De los
alquilpoliglucsidos el GCP 650 es el ms txico con un valor de EC50 de 13.81 mg/L. El
menos txico de los tensioactivos ensayados ha sido el NPEO con 9.5 moles de xido de
etileno con una EC50 de 160.6 mg/L.
13.- La toxicidad de los AGE depende de la estructura del tensioactivo
disminuyendo con el tamao de la cadena carbonada y etoxilada. Tambin se ha

establecido una correlacin entre la toxicidad y el balance hidrfilo-lipfilo de los
tensioactivos (HLB) y el peso molecular (PM), encontrndose que disminuye la toxicidad
con el aumento de ambos parmetros.
14.- Las medidas de toxicidad durante el proceso de biodegradacin han
determinado para los AGE y APG una disminucin importante con el tiempo de
biodegradacin, siendo el nivel de toxicidad prcticamente nulo despus de los 10 das del
ensayo para AGE y despus de los 7 das para APG. Para el tensioactivo LAS no se
produce una disminucin de la toxicidad durante los primeros 10 das del ensayo a
concentraciones elevadas de tensioactivo (50 mg/L).
15.- El tensioactivo NPEO, de menor toxicidad, experimenta un aumento de la
toxicidad durante el proceso de biodegradacin a todas las concentraciones ensayadas, lo

que permite afirmar que los metabolitos producidos durante el proceso de biodegradacin
presentan una toxicidad superior a la del tensioactivo de partida.
418
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TESIS DOCTORAL
LISTA DE TABLAS
LISTA DE TABLAS
II. Introduccin:
Tabla II. 1.- Desarrollo histrico de los detergentes............................................................ 23

Tabla II. 2.- Evolucin y perspectiva de los tensioactivos ms utilizados (Bailn, 2003).. 25
Tabla II. 3.- Ventajas e inconvenientes de los NPEO ......................................................... 34
Tabla II. 4.- Ventajas e inconvenientes de los APG............................................................ 38
Tabla II. 5.- Ventajas e inconvenientes de los LAS ............................................................ 40
Tabla II. 6.- Campos de aplicacin de los tensioactivos en la industria (Garca, 1986) ..... 44
Tabla II. 7.- Composicin de algunos detergentes (Bailn, 2003) ...................................... 46
Tabla II. 8.- Concentraciones medias de tensioactivos aninicos (MBAS) y de
tensioactivos no inicos (BiAS) en EDARs y en aguas de ro.................................... 51
Tabla II. 9.- Lista de mtodos para determinar la biodegradabilidad total (mineralizacin)
de compuestos (Karsa, 1995) ...................................................................................... 62
Tabla II. 10.- Algunos de los valores de K1 publicados para tensioactivos en aguas
naturales....................................................................................................................... 74
Tabla II. 11.- Modelos cinticos de biodegradacin usando solamente las variables,
concentracin de sustrato y de biomasa (Simkins, 1984)............................................ 80
Tabla II. 12.- Valores de IC50 (mg/L) de diversos homlogos del LAS frente a Daphnia
Magna ........................................................................................................................ 105

Tabla II. 13.- Datos comparativos de toxicidad frente a bacterias luminiscentes (EC50) y
frente a Daphnia Magna (IC50) para alcoholes grasos y nonilfenoles polietoxilados106
III. Materiales y Mtodos:
Tabla III. 1.- Propiedades de los tensioactivos utilizados ................................................. 118

Tabla III. 2.- Diseo de experimentos para el estudio de la biodegradabilidad de AGE .. 120
439
TESIS DOCTORAL
LISTA DE TABLAS
Tabla III. 3.- Diseo de experimentos para el estudio de la biodegradabilidad del NPEO120
Tabla III. 4.- Diseo de experimentos para el estudio de la biodegradabilidad de APG .. 121
Tabla III. 5.- Diseo de experimentos para el estudio de la biodegradabilidad del LAS . 121
Tabla III. 6.- Diseo de experimentos para el estudio de la biodegradabilidad de mezclas de
AGE y APG............................................................................................................... 121
Tabla III. 7.- Ensayos para el estudio de la toxicidad de diferentes tensioactivos........... 122
Tabla III. 8.- Ensayos para el estudio de la toxicidad durante el proceso de biodegradacin
................................................................................................................................... 123
Tabla III. 9.- Reactivos para la preparacin del agua residual sinttica............................ 133
Tabla III. 10.- Volmenes de muestra y valores de DBO en funcin de la escala elgida en
el equipo respiromtrico............................................................................................ 143
Tabla III. 11.- Recta de calibrado para la determinacin de la DQO................................ 168
IV. Resultados:
del yodo-yoduro ........................................................................................................ 182
de Wickbold .............................................................................................................. 182
del yodo-yoduro ........................................................................................................ 183
Mtodo del yodo-yoduro. Influencia de la concentracin......................................... 184
Tabla IV. 5.- Ensayo dinmico de biodegradacin para el tensioactivo Findet 1618A/18.
Mtodo de Wickbold................................................................................................. 185
Tabla IV. 6.- Ensayo respiromtrico para el tensioactivo Findet 1618A/18. Influencia de la
concentracin ............................................................................................................ 186
Mtodo del yodo-yoduro........................................................................................... 187
440
TESIS DOCTORAL
LISTA DE TABLAS
Mtodo de Wickbold. Influencia de la concentracin............................................... 190
Tabla IV. 11.- Ensayo dinmico de biodegradacin para el tensioactivo Findet 1214N/23.
Mtodo de Wickbold. ................................................................................................ 191
yodo-yoduro. Influencia de la concentracin ............................................................ 192
Wickbold ................................................................................................................... 193
tensioactivo GCP 215. Mtodo del TOC................................................................... 194
tensioactivo GCP 600. Mtodo del TOC. Influencia de la concentracin ................ 195
Tabla IV. 16.- Mtodo de la botella cerrada para el tensioactivo GCP 650...................... 196
Tabla IV. 17.- Esttico y Mtodo de la botella cerrada para el tensioactivo GCP 650 ..... 197
Influencia de la concentracin................................................................................... 198
Influencia de la concentracin................................................................................... 199
Tabla IV. 20.- Ensayo respiromtrico de biodegradacin para el tensioactivo GCP 650 . 200
Tabla IV. 21.- Ensayo esttico de biodegradacin para el LAS. Mtodo simplificado de
anlisis para determinacin de sustancias activas al azul de metileno. Influencia de la
concentracin............................................................................................................. 201
Tabla IV. 22.- Ensayo esttico de biodegradacin para mezclas tensioactivas de AGE y
APG. Mtodo del yodo-yoduro. Influencia de la concentracin............................... 202
441
TESIS DOCTORAL
LISTA DE TABLAS
Tabla IV. 23.- Medida de la inhibicin de la luminiscencia de bacterias Vibrio fischeri para
el tensioactivo Findet 10/15 ...................................................................................... 204
el tensioactivo Findet 10/18 ...................................................................................... 205
el tensioactivo Findet 1618A/18 ............................................................................... 206
el tensioactivo Findet 1618A/23 ............................................................................... 207
el tensioactivo Findet 1214N/16 ............................................................................... 208
el tensioactivo Findet 1214N/23 ............................................................................... 209
el tensioactivo Findet AR/52..................................................................................... 210
el tensioactivo NPEO ................................................................................................ 211
el LAS ....................................................................................................................... 212
el tensioactivo GCP 215............................................................................................ 213
el tensioactivo BEROL LFG 61 ................................................................................ 216
tensioactivo Findet 1618A/18 a 50 mg/L.................................................................. 218
tensioactivo Findet 1618A/23 a 5 mg/L.................................................................... 219
442
TESIS DOCTORAL
LISTA DE TABLAS

tensioactivo Findet 1214N/16 a 5 mg/L .................................................................... 220
tensioactivo Findet 1214N/16 a 25 mg/L .................................................................. 220
tensioactivo NPEO a 5 mg/L ..................................................................................... 224
tensioactivo NPEO a 25 mg/L ................................................................................... 225
tensioactivo NPEO a 50 mg/L ................................................................................... 226
tensioactivo GCP 215 a 12 mg/L............................................................................... 227
tensioactivo GCP 600 a 100 mg/L............................................................................. 228
tensioactivo GCP 650 a 20 mg/L............................................................................... 229
25 mg/L ..................................................................................................................... 230
50 mg/L ..................................................................................................................... 230
mezclas tensioactivas Findet 1214N/23 y GCP 650.................................................. 231
443
TESIS DOCTORAL
LISTA DE TABLAS
mezclas tensioactivas Findet 1214N/23 y GCP 650 ................................................. 231
V. Discusin:
Tabla V. 1.- Parmetros del anlisis de regresin ............................................................. 241

Tabla V. 2.- Valores de precisin obtenidos en el rango de valores de 0 a 2.5 mg/L....... 244
Tabla V. 3.- Parmetros de calidad de las rectas de calibracin obtenidas por el mtodo
colorimtrico del reactivo yodo yoduro para distintos tipos de tensioactivos etoxilados
................................................................................................................................... 249
Tabla V. 4.- Porcentaje de recuperacin de distintos tensioactivos no inicos etoxilados
................................................................................................................................... 252
Tabla V. 5.- Porcentaje de recuperacin para el Findet 1214N/23 sin destilar el acetato de
etilo............................................................................................................................ 253
Tabla V. 6.- Extracciones con acetato de etilo utilizando agua destilada ......................... 253
Tabla V. 7.- Comprobacin de la interferencia del acetato de etilo en el proceso de
extraccin .................................................................................................................. 254
Tabla V. 8.- Equivalencia entre AGE y NP 10 para el mtodo de Wickbold
potenciomtrico......................................................................................................... 255
Tabla V. 9.- Parmetros de calidad para los tensioactivos etoxilados Findet 1214N/23 y
Findet 10/15 por el mtodo de Wickbold espectrofotomtrico................................. 256
Tabla V. 10.- Comparacin de los parmetros de calidad para los tensioactivos Findet
1214N/23 y Findet 10/15 por el mtodo de Wickbold y mtodo del yodo yoduro. 257
Tabla V. 11.- Comparacin de los mtodos de anlisis para tensioactivos no inicos..... 259
Tabla V. 12.- Comprobacin de la interferencia de APG en el mtodo del yodo yoduro 260
Tabla V. 13.- Medida de la cantidad de tensioactivo Findet 1214N/23 en presencia de
cantidades variables de GCP 650 .............................................................................. 261
Tabla V. 14.- Nomenclatura de los AGE utilizados.......................................................... 264
444
TESIS DOCTORAL
LISTA DE TABLAS
Tabla V. 15.- Parmetros caractersticos de los perfiles de biodegradacin para los AGE
................................................................................................................................... 274
Tabla V. 16.- Relacin entre el HLB de los tensioactivos y sus aplicaciones................... 277
Tabla V. 17.- Parmetros caractersticos de las curvas de crecimiento de biomasa para
AGE ........................................................................................................................... 288
Tabla V. 18.- Modelos propuestos por Schmidt y col. (Schmidt, 1985) para sustratos que
no soportan el crecimiento de microorganismos sin considerar una concentracin
residual no biodegradable.......................................................................................... 293
Tabla V. 19.- Modelos de Schmidt y col. (Schmidt, 1985) adaptados a una conversin
mxima ( concentracin de tensioactivo residual) .................................................. 296
Tabla V. 20.- Parmetros cinticos de la ecuacin 5 del modelo que considera crecimiento
exponencial para la biomasa y primer orden para el sustrato.................................... 299
Tabla V. 21.- Modelo cintico de Monod en funcin de la conversin ............................ 307
Tabla V. 22.- Parmetros cinticos del modelo propuesto para los AGE ......................... 309
Tabla V. 23.- Comparacin de los parmetros experimentales y los obtenidos de la
aplicacin del modelo propuesto para diferentes AGE ............................................. 318
Tabla V. 24.- Modelo cintico de Andrews en funcin de la conversin ......................... 321
Tabla V. 25.- Parmetros cinticos del modelo de Andrews para diferentes AGE a 50 mg/L
................................................................................................................................... 322
Tabla V. 26.- Parmetros caractersticos de los perfiles de biodegradacin para el NPEO
................................................................................................................................... 324
Tabla V. 27.- Parmetros caractersticos de las curvas de crecimiento para el NPEO ..... 325
Tabla V. 28.- Parmetros cinticos del modelo propuesto (Ecuacin V. 58) para el NPEO a
diferentes concentraciones iniciales .......................................................................... 330
modelo propuesto para el NPEO a diferentes concentraciones iniciales................... 332
Tabla V. 30.- Parmetros cinticos del modelo de Andrews para el NPEO a 50 mg/L.... 333
445
TESIS DOCTORAL
LISTA DE TABLAS
Tabla V. 31.- Valores diarios de DQO, DBO5, SS y pH del agua bruta y del agua tratada
correspondientes al ensayo dinmico. Variacin del oxgeno disuelto, T y MLSS del
reactor........................................................................................................................ 336
Tabla V. 32.- Diferentes mtodos de ensayo para medir la biodegradabilidad de APG... 342
Tabla V. 33.- Frmulas empricas de los APG (Bravo, 2005) .......................................... 343
expresada como demanda terica de oxgeno y en mg C/L. Tambin se indica la
concentracin de oxgeno inicial en los ensayos....................................................... 345
Tabla V. 35.- Parmetros obtenidos de las curvas de oxgeno disuelto ............................ 347
Tabla V. 36.- Parmetros caractersticos de las curvas de crecimiento para los APG...... 354
expresada como demanda terica de oxgeno y en mg C/L para el ensayo
respiromtrico............................................................................................................ 356
Tabla V. 38.- Parmetros cinticos caractersticos del proceso de biodegradacin para los
APG por el mtodo respiromtrico ........................................................................... 362
Tabla V. 39.- Parmetros cinticos caractersticos del proceso de biodegradacin para el
Findet 1618A/18 por el mtodo respiromtrico ........................................................ 364
Tabla V. 40.- Algunos resultados de biodegradacin de LAS en ensayos con medio
sinttico y bajas concentraciones de inculo (Perales, 2001) ................................... 365
Tabla V. 41.- Parmetros caractersticos de los perfiles de biodegradacin para el LAS 367
Tabla V. 42.- Parmetros caractersticos de las curvas de crecimiento para el LAS ........ 368
Tabla V. 43.- Parmetros cinticos para el LAS ............................................................... 370
Tabla V. 44.- Parmetros del modelo de Quiroga y col. para el LAS a diferentes
concentraciones ......................................................................................................... 373
Tabla V. 45.- Parmetros cinticos del modelo logstico para el LAS a diferentes
concentraciones iniciales........................................................................................... 375
Tabla V. 46.- Parmetros cinticos del modelo propuesto para el LAS a diferentes
concentraciones iniciales........................................................................................... 376
446
TESIS DOCTORAL
LISTA DE TABLAS
modelo propuesto para el LAS a diferentes concentraciones iniciales ..................... 379
Tabla V. 48.- Parmetros caractersticos de los perfiles de biodegradacin para el Findet
1214N/23 en ausencia y en presencia de GCP 650 ................................................... 387
Tabla V. 49.- Parmetros caractersticos de las curvas de crecimiento para el Findet
1214N/23 en presencia y en ausencia de GCP 650 ................................................... 390
Tabla V. 50.- Parmetros caractersticos del modelo propuesto para el Findet 1214N/23 en
presencia y en ausencia de GCP 650 ......................................................................... 393
Tabla V. 51.- Valores de EC20 y EC50 en mg/L para distintos tensioactivos..................... 402
447
TESIS DOCTORAL
LISTA DE FIGURAS
LISTA DE FIGURAS
II. Introduccin:
Figura II. 1. Consumo total de tensioactivos en Espaa en el perodo 1993-2003 ............. 26

Figura II. 2. Evolucin del consumo de tensioactivos por tipos.......................................... 27
Figura II. 3.- Estructura bsica de un tensioactivo (Dorado, 1996)..................................... 29
Figura II. 4.- Estructura molecular de los alcoholes grasos etoxilados ............................... 30
Figura II. 5.- Estructura molecular de los APEO ................................................................ 32
Figura II. 6.- Estructura de los Alquilpoliglucsidos .......................................................... 36
Figura II. 7.- Estructura molecular de los LAS ................................................................... 39
Figura II. 8.- Propiedades de los tensioactivos.................................................................... 41
Figura II. 9.- Principales empresas relacionadas con los tensioactivos............................... 47
Figura II. 10.- Emisin de detergentes al medio ambiente.................................................. 48
Figura II. 11.- Curva tpica de biodegradacin de un ensayo de biodegradacin en
discontinuo .................................................................................................................. 71
Figura II. 12.- Evolucin de la velocidad especfica de crecimiento en funcin de la
concentracin de sustrato ............................................................................................ 76
Figura II. 13.- Modelos cinticos en funcin de la concentracin de sustrato y biomasa
(Simkins, 1984) ........................................................................................................... 81
Figura II. 14.- Curvas de biodegradacin de compuestos de acuerdo con los modelos
cinticos mostrados en Tabla II. 11 ............................................................................. 83
Figura II. 15.- Representacin grfica de la Ecuacin II. 20............................................... 85
Figura II. 16.- Mecanismo de biodegradacin y metabolitos para la degradacin aerobia de
alcoholes grasos etoxilados ......................................................................................... 92
Figura II. 17.- Rutas de biodegradacin del nonilfenol polietoxilado: (A) ruta hidroltica
oxidativa y (B) ruta hidroltica no oxidativa ............................................................... 94
Figura II. 18.- Rutas de biodegradacin de los alquilpoliglucsidos .................................. 96
449
TESIS DOCTORAL
LISTA DE FIGURAS
Figura II. 19.- Esquema de la ruta de biodegradacin aerobia del LAS ............................. 97
III. Materiales y Mtodos:
Figura III. 1.- Protocolo de muestreo para el ensayo esttico de biodegradacin............. 130
Figura III. 2.- Equipo utilizado en el ensayo dinmico de biodegradacin ...................... 134
Figura III. 3.- Equipo para extraccin y concentracin en corriente gaseosa ................... 136
Figura III. 4.- Protocolo de muestreo para el ensayo dinmico de biodegradacin.......... 139
Figura III. 5.- Perfil tpico de biodegradacin para el ensayo dinmico de biodegradacin
................................................................................................................................... 141
Figura III. 6.- Representacin esquemtica del equipo respiromtrico............................. 143
Figura III. 7.- Curva de DBO obtenida por tcnica respiromtrica para el tensioactivo GCP
215 a 100 mg/L ......................................................................................................... 145
Figura III. 8.-
Recta de calibrado para el mtodo simplificado de anlisis para la
determinacin de sustancias activas al azul de metileno........................................... 148

Figura III. 9.- Curva de valoracin potenciomtrica para el tensioactivo Findet 1214N/23
................................................................................................................................... 153
Figura III. 10.- Recta de calibrado por el mtodo espectrofotomtrico para el tensioactivo
Findet 1214N/23........................................................................................................ 155
Figura III. 11.- Recta de calibrado por el mtodo colorimtrico del yodo-yoduro ........... 157
Figura III. 12.- Recta de calibrado por el mtodo del carbono orgnico total .................. 159
Figura III. 13.- Esquema de una cubeta para determinacin del TOC.............................. 160
Figura III. 14.- Representacin esquemtica del mtodo de determinacin del TOC ...... 161
Figura III. 15.- Evolucin de la concentracin residual en funcin del tiempo para el
tensioactivo GCP 600 a una concentracin inicial de 12 mg/L utilizando el mtodo del
TOC........................................................................................................................... 162
Figura III. 16.- Recta de calibrado para la DQO............................................................... 169
450
TESIS DOCTORAL
LISTA DE FIGURAS
Figura III. 17.- Relacin lineal entre la funcin y la concentracin para el tensioactivo
Findet 1214N/23 ........................................................................................................ 176
V. Discusin:
Figura V. 1.- Reaccin de formacin del par inico tensioactivo aninico-azul de metileno
................................................................................................................................... 236
Figura V. 2.- Procedimiento analtico normalizado para la determinacin de tensioactivos
aninicos.................................................................................................................... 237
Figura V. 3.- Procedimiento analtico simplificado para la determinacin de tensioactivos
aninicos.................................................................................................................... 240
Figura V. 4.- Recta de calibrado obtenida para el LAS utilizando el mtodo simplificado de
las sustancias activas al azul de metileno .................................................................. 241
Figura V. 5.- Grfico de residuales ................................................................................... 242
Figura V. 6.- Procedimiento analtico para el mtodo colorimtrico del yodo-yoduro para la
determinacin de tensioactivos no inicos ................................................................ 247
Figura V. 7.- Rectas de calibrado obtenidas para los distintos tensioactivos no inicos
etoxilados utilizando el mtodo colorimtrico del yodo-yoduro............................... 248
Figura V. 8.- Variacin de la sensibilidad analtica y el lmite de deteccin con el nmero
de moles de OE presentes en los tensioactivos no inicos etoxilados....................... 250
Figura V. 9.- Rectas de calibrado obtenidas para los Findet 1214N/23 y Findet 10/15 en el
rango de 200 a 1000 g por el mtodo de Wickbold espectrofotomtrico .............. 256
Figura V. 10.- Comparacin de curvas de biodegradacin para diferentes AGE utilizando
el mtodo de Wickbold y el mtodo del yodo-yoduro .............................................. 258
Figura V. 11.- Efecto de la cantidad de Glucopn 650 adicionado sobre la cantidad de
Findet 1214N/23 medida (derecha). Los valores de cantidad de Findet 1214N/23
medida se obtuvieron por comparacin de las absorbancias con su recta patrn
correspondiente (izquierda) ....................................................................................... 261
451
TESIS DOCTORAL
LISTA DE FIGURAS
Figura V. 12.- Medida de la cantidad de tensioactivos no inicos en el BEROL por el

mtodo de Wickbold espectrofotomtrico y de las adiciones patrn........................ 263
Figura V. 13.- Variacin de la concentracin de tensioactivo residual y del porcentaje de
biodegradacin con el tiempo para los AGE ensayados a 5 mg/L............................ 266
sobre la biodegradabilidad primaria para los AGE ensayados a la concentracin inicial
de 5 mg/L .................................................................................................................. 267
de 25 mg/L ................................................................................................................ 269
de 50 mg/L ................................................................................................................ 269
Figura V. 17.- Influencia de la concentracin de tensioactivo durante el proceso de
biodegradacin: evolucin del porcentaje de tensioactivo residual y el porcentaje de
biodegradacin en funcin del tiempo para diferentes AGE .................................... 271
Figura V. 18.- Determinacin grfica del tiempo de latencia sobre la curva de
biodegradacin .......................................................................................................... 273
Figura V. 19.- Efecto de la concentracin sobre el tiempo de latencia para diferentes AGE
................................................................................................................................... 275
Figura V. 20.- Variacin de la velocidad media de biodegradacin frente al nmero de
moles de OE a diferentes concentraciones iniciales.................................................. 276
Figura V. 21.- Mecanismo simplificado de biodegradacin de alcoholes grasos etoxilados
................................................................................................................................... 276
Figura V. 22.- Biodegradabilidad de los AGE frente al HLB a diferentes concentraciones
iniciales...................................................................................................................... 278
Figura V. 23.- Variacin de los parmetros caractersticos de los perfiles de biodegradacin
para los AGE con la concentracin inicial de materia tensioactiva .......................... 279
para los tensioactivos AGE estudiados a diferentes concentraciones iniciales......... 282
452
TESIS DOCTORAL
LISTA DE FIGURAS

sobre las curvas de crecimiento de biomasa para diferentes AGE ensayados a la
concentracines iniciales de 5, 25 y 50 mg/L............................................................ 283
Figura V. 26.- Curvas de crecimiento y perfiles de biodegradacin para el tensioactivo C1214E4
a 5, 25 y 50 mg/L ............................................................................................... 284

tensioactivo C12-14E11 a 15, 20 y 50 mg/L ................................................................. 285
tensioactivo C16-18E6 a 5 y 25 mg/L........................................................................... 286
Figura V. 29.- Curva de crecimiento y perfil de biodegradacin primaria para el
tensioactivo C16-18E11 a 5 mg/L ................................................................................. 286
Figura V. 30.- Variacin de la velocidad especfica de crecimiento con la concentracin
inicial de ensayo para los AGE C12-14E4 y C12-14E11 .................................................. 288
la ecuacin 5 del modelo que considera crecimiento exponencial para la biomasa y
primer orden para el sustrato ..................................................................................... 298
crecimiento de microorganismos para diferentes AGE............................................. 301
Figura V. 33.- Aplicacin de las diferentes ecuaciones del modelo de Monod para los
tensioactivos C12-14E11 y C16-18E11 ............................................................................. 308
Figura V. 34.- Representacin de S frente a la concentracin inicial de tensioactivo para
C12-14E11 ..................................................................................................................... 310
el modelo propuesto para el tensioactivo C12-14E11 a diferentes concentraciones
iniciales...................................................................................................................... 311
iniciales...................................................................................................................... 312
453
TESIS DOCTORAL
LISTA DE FIGURAS
iniciales...................................................................................................................... 313
el modelo propuesto para los tensioactivos C16-18E11, C10E6 y C10E3........................ 314
segn el modelo de Monod para los AGE a diferentes concentraciones .................. 315
Figura V. 40.- Evolucin del porcentaje de NPEO residual en los ensayos de
biodegradacin para diferentes concentraciones de materia tensioactiva................. 324
primaria para el NPEO a diferentes concentraciones iniciales de ensayo................. 326
crecimiento de microorganismos para el NPEO a diferentes concentraciones iniciales
................................................................................................................................... 329
el modelo propuesto para el NPEO a diferentes concentraciones iniciales .............. 331
segn el modelo propuesto para el NPEO a diferentes concentraciones .................. 332
Figura V. 45.- Evolucin de la concentracin de tensioactivo y del porcentaje de
biodegradacin en el ensayo dinmico...................................................................... 338
Figura V. 46.- Evolucin de la DBO y DQO con el tiempo para el tensioactivo Findet
1214N/23 durante el ensayo dinmico ...................................................................... 339
Figura V. 47.- Evolucin de los slidos en suspensin y el oxgeno disuelto con el tiempo
para los tensioactivos Findet 1214N/23 y Findet 1618A/18 durante el ensayo
dinmico .................................................................................................................... 340
Figura V. 48.- Curvas de degradacin para los APG mediante el mtodo de la botella
cerrada ....................................................................................................................... 344
Figura V. 49.- Curvas de oxgeno disuelto en forma de conversin por el mtodo de la
botella cerrada ........................................................................................................... 346
454
TESIS DOCTORAL
LISTA DE FIGURAS
para los APG estudiados a diferentes concentraciones iniciales ............................... 349
Figura V. 51.- Curvas de crecimiento de biomasa para los diferentes APG ensayados a la
concentracin inicial de 12 mg/L .............................................................................. 350
Figura V. 52.- Curvas de crecimiento de microorganismos y curvas de oxgeno disuelto
para los APG ensayados a diferentes concentraciones iniciales................................ 351
Figura V. 53.- Comprobacin de la hiptesis de Gaden para los APG ............................. 353
para el GCP 215 y el GCP 650 .................................................................................. 355
para diferentes APG a 50 mg/L ................................................................................. 356
Figura V. 56.- Curva tpica de consumo de oxgeno. Determinacin de los parmetros
cinticos de acuerdo con Blok y col. (Blok, 1996).................................................... 357
Figura V. 57.- Representacin de ln DBO frente al tiempo para la obtencin de Kmin ..... 358
Figura V. 58.- Representacin de DBO frente al tiempo para la obtencin de KS............ 359
Figura V. 59.- Obtencin de tm a partir de la curva de mineralizacin ............................. 360
Figura V. 60.- Localizacin del punto de inflexin para la obtencin de KS .................... 361
Figura V. 61.- Representacin de frente a la concentracin de sustrato para el GCP 215 y
el GCP 600 ................................................................................................................ 362
para el Findet 1618A/18 ............................................................................................ 364
Figura V. 63.- Perfiles de biodegradacin del LAS a 5, 25 y 50 mg/L ............................ 367
primaria para el LAS a diferentes concentraciones iniciales de ensayo.................... 369
Figura V. 65.- Comparacin entre los resultados experimentales y los calculados por
diferentes modelos para el LAS a las concentraciones de 5, 25 y 50 mg/L
respectivamente ......................................................................................................... 372
el modelo logstico para el LAS a diferentes concentraciones iniciales.................... 375
455
TESIS DOCTORAL
LISTA DE FIGURAS
Figura V. 67.- Comprobacin de la hiptesis de Gaden para el LAS a 50 mg/L.............. 377

Figura V. 68.- Representacin de S frente a la concentracin inicial de tensioactivo ..... 378
el modelo propuesto para el LAS a diferentes concentraciones iniciales ................. 378
segn el modelo propuesto para el LAS a las concentraciones de 5, 25 y 50 mg/L . 380
Figura V. 71.- Comparacin de tL y B para los diferentes tensioactivos ensayados......... 381
Figura V. 72.- Comparacin de k, Yap y UFC/ml,
max
para los diferentes tensioactivos
ensayados .................................................................................................................. 382

Figura V. 73.- Comparacin de m y KS para los diferentes tensioactivos ensayados..... 383
Figura V. 74.- Variacin de la concentracin residual de Findet 1214N/23 en ausencia y en
presencia de GCP 650 ............................................................................................... 386
Figura V. 75.-
Curvas de crecimiento de microorganismos para las mezclas Findet
1214N/23 y GCP 650 ................................................................................................ 388

Figura V. 76.- Curvas de crecimiento de microorganismos para el Findet 1214N/23 en
ausencia y en presencia de GCP 650......................................................................... 389
Figura V. 77.- Comparacin entre el perfil de biodegradacin y las curvas de crecimiento
de microorganismos para las mezclas tensioactivas ................................................. 391
el modelo propuesto para las mezclas de AGE y APG ............................................. 392
Figura V. 79.- Efecto observado para los parmetros caractersticos y cinticos
correspondientes al ensayo de biodegradacin de 15 mg/L de Findet 1214N/23 en
presencia de 5 mg/L de GCP 650.............................................................................. 394
Figura V. 80.- Linealizacin entre la funcin gamma y la concentracin para diferentes
tensioactivos .............................................................................................................. 397
Figura V. 81.- Valores de EC20 y EC50 en mg/L para distintos tensioactivos ................... 402
Figura V. 82.- Variacin de la EC50 (15 min) de los AGE con diferentes propiedades del
tensioactivo................................................................................................................ 403
Figura V. 83.- Variacin del tanto por ciento de inhibicin durante el proceso de
biodegradacin para todos los tensioactivos ensayados............................................ 408
Figura V. 84.- Evolucin de la toxicidad durante el proceso de biodegradacin para
diferentes tensioactivos ............................................................................................. 412
456
TESIS DOCTORAL
NOMENCLATURA
NOMENCLATURA
Absorbancia
ABS
Alquilbenceno Sulfonato
AE
Alcohol etoxilado
AFNOR
Asociacin francesa de normalizacin
AGE
Alcohol graso etoxilado
APG
Alquilpoliglucsidos
APnEOS
Alquilfenoles polietoxilados
AS
Tensioactivo aninico
BiAS
Sustancias activas frente al bismuto
BOE
Boletn Oficial del Estado
BOJA
Boletn Oficial de la Junta de Andaluca
Concentracin
CEE
Comunidad Econmica Europea
CM
Carga msica
CMC
Concentracin micelar crtica
CO2
Dixido de carbono
COD
Carbono orgnico disuelto
Conc.
Concentracin
CP
Punto de enturbiamiento del tensioactivo
CTAS
Sustancias activas al tiocinato de cobalto
DBO
Demanda biolgica de oxgeno
DL
Lmite de deteccin
Dn
Disolucin
DOCE
Diario oficial de las comunidades europeas
457
TESIS DOCTORAL
NOMENCLATURA
DOT
Demanda terica de oxgeno
DP
Grado de polimerizacin en la molcula del tensioactivo
DQO
Demanda qumica de oxgeno
EC20
Concentracin que provoca efecto sobre el 20% de la poblacin ensayada
EC50
EDAR
Estacin depuradora de aguas residuales
EDTA
cido etiln diamino tetraactico
EMPA
Laboratorios Federales Suizos para el Ensayo e Investigacin de Materiales
F10/15
Tensioactivo comercial Findet 10/15
F10/18
Tensioactivo comercial Findet 10/18
F1214N/16
Tensioactivo comercial Findet 1214N/16
F1214N/23
Tensioactivo comercial Findet 1214N/23
F1618A/18
Tensioactivo comercial Findet 1618A/18
F1618A/23
Tensioactivo comercial Findet 1618A/23
FAEO
Alcoholes grasos etoxilados
FAES
Sulfatos teres de alcoholes grasos
FAR/52
Findet AR/52
FAS
Sulfatos de alcoholes grasos
GC
Cromatografa gaseosa
GCP215
Tensioactivo comercial Glucopon 215
GCP600
GCP650
HLB
Balance hidrfilo-lipfilo del tensioactivo
HPLC
Cromatografa lquida de alta resolucin
IC50

de Daphnia Magna
458
TESIS DOCTORAL
NOMENCLATURA
INE
Instituto nacional de estadstica
ISO
Organizacin internacional para la estandarizacin
IUPAC
International Union of Pure and Applied Chemistry
LAB
Lineal Alquilbenceno
LAS
Lineal Alquilbenceno sulfonatos
LC50
Concentracin que provoca mortalidad sobre el 50% de la poblacin

ensayada
LESS
Lauril eter sulfato sdico
LOF
test de lack of fit
MB
Azul de metileno
MBAS
Sustancias activas al azul de metileno
MITI
Ministerio de Comercio Internacional e Industria de Japn
MLSS
Concentracin de slidos en suspensin
NC
Tamao de la cadena carbonada
NP
Nonilfenol
NP1EO
Nonilfenol monoetoxilado
NP2EO
Nonilfenol dietoxilado
NPEO
Nonilfenol polietoxilado
NPnEC
Nonilfenol carboxilado
NPnEO
Nonilfenol polietoxilado
NTA
Nitriloacetato sdico
O/W
Emulsin aceite en agua
OCDE
Organizacin para la cooperacin y desarrollo econmico
OE
Nmero de unidades de xido de etileno en la molcula del tensioactivo
OLS
Ajuste lineal por mnimos cuadrados ordinario
OPEO
Octilfenol polietoxilado
459
TESIS DOCTORAL
NOMENCLATURA
P.A.
Calidad del reactivo para anlisis
P.A.I.
Calidad del reactivo para anlisis instrumental
P.R.S.
Calidad de reactivo pursimo
PEC
Concentracin de un compuesto en el medio ambiente
PM
Peso molecular del producto
Q.P.
Calidad del reactivo qumicamente puro
QL
Lmite de cuantificacin
Grupo alqulico
Coeficiente de correlacin
r.p.m.
Nmero de revoluciones por minuto
R2
Coeficiente de determinacin
RBT
Ensayos del tipo Ready Biodegradability Test
Residual
Diferencia entre el valor observado y el valor predicho por el modelo de

regresin para la variable respuesta
S.S.
Slidos en suspensin
SAAM
Sustancias actvas al azul de metileno
SCAS
Lodos activados en semicontnuo
SDR
Desviacin estndar relativa
SDS
Sodio dodecilsulfato
Tiempo
TBS
Tetrapropiln benceno sulfonato sdico
TIC
Carbono inorgnico total
TLC
Cromatografa de capa fina
TOC
Carbono orgnico total
TU
Unidades de toxicidad
Potencial
460
TESIS DOCTORAL
UFC
Unidades formadoras de colonias
UNE
Una Norma Espaola
volumen
W/O
Emulsin agua en aceite
Conversin de sustrato
NOMENCLATURA
461

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UNIVERSIDAD DE GRANADA

Granada, Octubre 2005.

BIODEGRADACIN Y TOXICIDAD DE TENSIOACTIVOS COMERCIALES

Fdo. Manuela Mara Lechuga Villena

Fdo. Encarnacin Jurado Alameda

Fdo. Encarnacin Jurado Alameda

Fdo. Mercedes Fernndez Serrano

Catedrtica de Ingeniera Qumica

Profesora Titular de Ingeniera Qumica

Fdo. Josefa Nez Olea

Lo que sabemos es una gota de agua,

2.5.1. INTRODUCCIN .............................................................................................. 103

3.4.1.3. Mtodo colorimtrico del yodo-yoduro........................................................ 155

5.1.2. MTODOS DE ANLISIS PARA DETERMINACIN DE ALCOHOLES

5.8.1. CRECIMIENTO DE LA BIOMASA DURANTE EL PROCESO DE

i) Hidrxido potsico o sdico en proporcin elevada (5-15 %). Su funcin consiste

- Los efectos a largo plazo de los detergentes sobre el organismo humano,

Resolver todos estos problemas mediante la formulacin de un detergente que sea

mtodo colorimtrico del yodo-yoduro puede utilizarse para el seguimiento de la

y el rendimiento de produccin de biomasa por gramo de tensioactivo

explica la biodegradacin de los tensioactivos ensayados, alcoholes grasos etoxilados,

Este modelo no es aplicable para concentraciones de tensioactivo elevadas (50

Las constantes de inhibicin encontradas han sido:

La biodegradacin de los tensioactivos alquilpoliglucsidos ha sido realizada

La determinacin de la velocidad especfica de crecimiento mxima obtenida m

el proceso de biodegradacin presentan una toxicidad superior a la del tensioactivo de

La Industria de detergentes y productos de limpieza en Espaa supone una

Agentes qumicos empleados para limpieza en la industria

Problemas respiratorios/ Irritante/Corrosivo

Eutrfico /Secuestra metales pesados

cido Nitrilo triactico

Eutrfico/ Secuestra metales pesados

Trialquilbenzilamonio halogenado Incompatibilidad con aninicos/presencia de

Productos txicos en la biodegradacin

Los detergentes industriales son productos altamente contaminantes debido a su

Fundamentalmente alcoholes grasos etoxilados y compuestos del grupo de los

depuracin de aguas residuales ocasionando problemas mutagnicos, ya que pueden

En la presente Tesis Doctoral como objetivo fundamental se pretende analizar y

El efecto que sobre la biodegradacin tiene la modificacin de la concentracin de

biodegradacin, crecimiento de microorganismos y modelos cinticos que sirvan de

2.1. ANTECEDENTES HISTRICOS DE LOS DETERGENTES

Dos investigadores norteamericanos, Harkins y Langmuir, descubran casi

Tabla II. 1.- Desarrollo histrico de los detergentes

ERA ANTES DE CRISTO

Tablilla sumeria de arcilla donde se habla de

Ao 1823, Trabajos de CHEVREUL

Extractos de cenizas + grasas para ungentos

Segunda Generacin de Detergentes

Sustancias sintticas equiparables a los

Tercera Generacin de Detergentes

2.2. EVOLUCIN Y TENDENCIA EN LA UTILIZACIN DE TENSIOACTIVOS

En 1994, el consumo mundial total fue de 4.5 millones

Las principales materias primas para la produccin de tensioactivos son aceites y

toneladas con una demanda de 0.8 millones de toneladas. El incremento en la utilizacin de

Consumo (Millones de Kg)

descenso corresponde con una crisis econmica de esos aos.

Figura II. 1. Consumo total de tensioactivos en Espaa en el perodo 1993-2003

La produccin mundial de tensioactivos ascenda a 17-19 millones de toneladas en

tendencia contina as.