Práctica 6: Fundamentos de Espectrofotometría

UNIVERSIDAD
NACIONAL
AUTNOMA DE
MXICO
FACULTAD DE QUMICA
CONOCIMIENTO DE TCNICAS
ANALTICAS: FUNDAMENTOS DE
ESPECTROFOTOMETRA
EQUIPO 3
INTRODUCCIN
Cada compuesto qumico absorbe, transmite o refleja luz (radiacin electromagntica) a lo
largo de un cierto rango de longitud de onda. La espectrofotometra es una medida de la
cantidad que una sustancia qumica absorbe o transmite.
Un espectrofotmetro es un instrumento que mide la cantidad de fotones (la intensidad de
la luz) absorbida despus de que pasa a travs de una solucin de muestra. Con el
espectrofotmetro, la cantidad de una sustancia qumica conocida (concentraciones)
tambin se puede determinar mediante la medicin de la intensidad de luz detectada.
Dependiendo de la gama de longitud de onda de la fuente de luz, se puede clasificar en dos
tipos diferentes:
UV-visible espectrofotmetro: usa luz en el rango ultravioleta (185-400 nm) y el rango

visible (400-700 nm) del espectro de radiacin electromagntica.
IR espectrofotmetro: usa luz en el rango del infrarrojo (700-15000 nm) del espectro de
radiacin electromagntica.
En espectrofotometra visible, la absorcin o la transmisin de una cierta sustancia se puede

determinar por el color observado. Por ejemplo, una muestra de solucin que absorbe la luz
en todos los rangos visibles (es decir, no transmite ninguna de las longitudes de onda
visibles) aparece negro. Por otro lado, si se transmiten todas las longitudes de onda visibles
(es decir, no absorbe nada), la muestra de solucin aparece blanca. Si una muestra de
solucin absorbe la luz roja (~ 700 nm), parece ser verde porque el verde es el color
complementario del rojo. Espectrofotmetros visibles, en la prctica, utilizan un prisma
para reducir un cierto rango de longitud de onda (para filtrar las otras longitudes de onda),
de modo que el haz particular de la luz se hace pasar a travs de una muestra de solucin.
OBJETIVOS
Conocer los fundamentos de la espectrofotometra y las variables involucradas en la

ley de Lambert-Beer-Bourger.
Seleccionar la longitud de onda apropiada para las mediciones de absorbancia
Construir una curva patrn de soluciones de yodo (serie tipo)
DISEO EXPERIMENTAL
Espectro de absorcin
Lo que queremos hacer es saber a partir de que longitud de onda, una disolucin, a una
concentracin constante, tiene una absorbancia constante.
Lo vamos a hacer variando la longitud de onda, para as poder construir el espectro de
absorcin y elegir la longitud de onda que ms se adecue.
Curva patrn
Lo que queremos hacer es conocer y aplicar los fundamentos de la espectrofotometra para
la determinacin de concentraciones en soluciones, y lo haramos variando las
concentraciones, a una longitud de onda constante, para despus crear la curva patrn.
METODOLOGIA EMPLEADA
Calibracin del espectrofotmetro y barrido del espectro de absorcin
1) Encender el espectrofotmetro
2) Esperar 15 minutos
3) Calibracin: oprimir la tecla MODE, hasta que la luz roja se encuentre en A
(absorbancia)
4) Seleccionar la longitud de onda girando la perilla
5) Introducir la celda con el blanco (con un volumen por arriba de la mitad; nunca
llena) en la porta-celda, oprime la tecla (0A/100 %T) y esperar a que se ponga
en ceros la absorbancia
6) Tomar la lectura de absorbancia de la solucin propuesta a una longitud de onda
baja ( nm). Utilizar como blanco agua destilada.
7) Repetir el procedimiento desde el punto 4 dando incrementos regulares a la
longitud de onda. Registrar los datos en la tabla 1
Curva patrn
8) Preparar soluciones de distinta concentracin a partir de la solucin de
referencia I2 KI (0.0002M - 0.2M) (Serie tipo)
9) Seleccionar una longitud de onda adecuada para hacer las lecturas de
Absorbancia para las soluciones de la serie tipo. (Se sugiere 460 nm)
10) Introducir la celda con el blanco (agua destilada), con un volumen por arriba de
la mitad; nunca llena, en la porta-celda, oprimir la tecla (0A/100 %T) y
esperar a que se ponga en ceros la absorbancia
11) Tomar la lectura de absorbancia de las soluciones propuestas para la serie tipo, a
la longitud de onda seleccionada ( nm).
12) Registrar las lecturas de absorbancia y concentracin de la serie tipo en la tabla
2
RESULTADOS.
A continuacin se muestran en la tabla 1 los datos obtenidos del barrido del espectro de
absorcin.
Disolucin de I2-KI [2x10-4M]
Longitud de onda (nm)
Absorbancia
320
1.774
340
1.969
350
360
370
380
1.305
390
0.896
400
0.576
410
0.433
420
0.335
430
0.250
440
0.192
450
0.156
460
0.093
470
0.079
480
0.063
490
0.030
500
0.024
510
0.021
Tabla 1. Barrido de espectro de absorcin.
Estos datos se utilizaron para realizar la grfica 1, que nos permite visualizar de mejor
manera a qu longitud de onda la absorbancia del Yodo es mxima.
Tambin mostramos en la tabla 2 los datos registrados de absorbancia para mezclas de

KI-I2 a una misma longitud de onda (460 nm) pero a diferentes concentraciones:
Mezcla
I2(0.002M) [mL]
H2O [mL]
I2 [M]
Absorbancia
1
10
0
2
8
2
3
6
4
4
4
6
5
2
8
Tabla 2. Absorbancia a distintas concentraciones.
0.002
0.0016
0.0012
0.0008
0.0004
1.112
0.862
0.655
0.417
0.228
vs A (para I2 2x10-4 M)
2.5
2
1.5
Absorbancia
1
0.5
0
300
350
400
450
500
550
(nm)
Grfica 1. Absorbancia de la solucin de I2 a distintas .

Los datos de la tabla 2 nos sirven para observar una relacin entre la absorbancia y la
concentracin de la disolucin mediante el grfico 2.
Qu datos podemos obtener del grfico 2? Podemos relacionar la ecuacin que representa
nuestro grfico con la ecuacin de la ley de Beer-Lambert-Bouguer:
A= lC
Donde
es la absorbancia de la muestra,
es el coeficiente de absorcin molar o
coeficiente de extincin, l es la longitud que atraviesa la luz (en ste caso l es el

radio del tubo de ensaye donde se coloc la muestra) y C
es la concentracin de la
muestra analizada. Ntese que la ecuacin de Beer-Lambert-Bouguer se asemeja a la

ecuacin de la recta y=mx +b donde b en nuestra grfica solo es una correccin a
600
nuestra grfica, pues tericamente debera ser 0. Dada esta analoga de ecuaciones tenemos
entonces que la pendiente:
m=l=553.75[
1
]
M
Sabiendo que la longitud l=1 cm podemos conocer el coeficiente
de nuestra
sustancia con un vil despeje, obteniendo que:

=553.75 [ M 1 cm 1 ]
Absorbancia vs concentracin
Curva Patrn
1.2
1
f(x) = 553.75x - 0.01

R = 1
0.8
Absorbancia [Sin unidades]
0.6
0.4
0.2
0
0
Concentracin [M]
Grfico 2. Curva patrn, ley de Beer-Lambert-Bouguer.

ANLISIS DE RESULTADOS.
1- A qu longitud de onda se localiza el mximo de absorbancia de la solucin de
yodo 2x10-4 M?
A = 350 nm
2- Qu longitud de onda empleaste para construir la curva patrn y por qu?
Utilizamos una = 460 nm porque a esa la absorbancia de la disolucin de yodo es
mnima, y el aparato an alcanza a medir el rayo transmitido despus de ser absorbido por
la disolucin.
3- Qu representa la pendiente de la grfica de la curva patrn?

m=l
La pendiente es igual al coeficiente de absorcin molar
multiplicado por la longitud
l que atraviesa la radiacin.
4- Qu relacin presenta la absorbancia con la concentracin en la curva patrn?

Son directamente proporcionales entre s, es decir que mientras ms concentrada est la
dilucin la absorbancia de la misma es mayor.
CONCLUSIONES
Nos percatamos la relacin que existe entre la concentracin de una sustancia y su
absorbancia entre mayor es la concentracin mayor es la absorbancia y mayor es la
longitud de onda necesaria para realizar una lectura satisfactoria en el espectrofotmetro.
Con esta relacin es posible determinar la concentracin de una sustancia usando solamente
el espectrofotmetro.
Con los resultados de la prctica fue posible construir una curva patrn de las diferentes
soluciones de yodo con las que experimentamos.
APLICACIONES
La espectrofotometra se usa en la industria de los textiles para poner a prueba los
cargamentos de soluciones de colorantes. Esto resulta ms exacto que las pruebas
tradicionales que solo eran visuales.
En tecnologa mdica la espectrofotometra se usa para determinar qu tan serio es un
ataque al corazn, esto se hace tomando una enzima de la sangre del paciente haciendo
pruebas y comparando los resultados a una curva estndar.

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UV-visible espectrofotmetro: usa luz en el rango ultravioleta (185-400 nm) y el rango

En espectrofotometra visible, la absorcin o la transmisin de una cierta sustancia se puede

Conocer los fundamentos de la espectrofotometra y las variables involucradas en la

Calibracin del espectrofotmetro y barrido del espectro de absorcin

Tambin mostramos en la tabla 2 los datos registrados de absorbancia para mezclas de

Grfica 1. Absorbancia de la solucin de I2 a distintas .

es el coeficiente de absorcin molar o

coeficiente de extincin, l es la longitud que atraviesa la luz (en ste caso l es el

muestra analizada. Ntese que la ecuacin de Beer-Lambert-Bouguer se asemeja a la

Sabiendo que la longitud l=1 cm podemos conocer el coeficiente

sustancia con un vil despeje, obteniendo que:

f(x) = 553.75x - 0.01

Grfico 2. Curva patrn, ley de Beer-Lambert-Bouguer.

3- Qu representa la pendiente de la grfica de la curva patrn?

La pendiente es igual al coeficiente de absorcin molar

multiplicado por la longitud

l que atraviesa la radiacin.

4- Qu relacin presenta la absorbancia con la concentracin en la curva patrn?

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