1.

Antecedentes
El rotavirus es la principal causa de gastroenteritis en
nios de 6-24 mes de edad. Por 5 aos de edad, casi
todos los nios tendrn un episodio de gastroenteritis
por rotavirus, el 20% va a visitar una clnica, un 1,5%
sera hospitalizado, y aproximadamente el 0,3% morir.
Los nios en pases ms pobres representan el 82% de
las muertes por rotavirus
Los rotavirus son virus ARN sin envoltura que consiste
en una ncleo interior esfrico y dos cpside externa.
Siete serogrupos (A-G) dentro del gnero Rotavirus
han sido identificados, siendo el serogrupo A los ms
comnmente asociados con la diarrea
Aunque las vacunas de rotavirus humanos muestran
una excelente eficacia en la prevencin de la
enfermedad por rotavirus grave (ms del 95%), la
infeccin carga tasa y las enfermedades asociadas con
la infeccin por rotavirus son todava altas. Por lo
tanto, el diagnstico preciso de la infeccin por
rotavirus sigue siendo necesario para la gestin clnica
adecuada del paciente y para control de la enfermedad.
Los rotavirus se desprenden en gran cantidad en las
heces. Por lo tanto, el diagnstico de la infeccin sigue
normalmente encontrar el virus en las heces del nio
En los entornos del laboratorio clnico el diagnstico
se lleva a cabo normalmente usando pruebas de

aglutinacin de ltex, pruebas de inmunocromatografa

o enzima inmunoensayos ligados. Varias compaas
han desarrollado comercialmente ensayos disponibles
para la deteccin de rotavirus. Sin embargo, puesto
pueden existir discrepancias entre el rendimiento de la
prueba anunciada por el fabricante y los resultados
obtenidos por las evaluaciones independientes, la
evaluacin por partes independientes es una necesidad

2. Objetivos
En este estudio, la evaluacin de una novela, segunda
generacin, comercial pruebas de ltex (PastorexTM
Rotavirus prueba de aglutinacin de ltex, BioRad,
Marnes-La-Coquette, Francia), para la deteccin de
rotavirus grupo A en muestras fecales humanas se
inform.

3. Estudio de diseo
La prueba de aglutinacin de ltex PastorexTM
rotavirus se basa en partculas de ltex recubiertas con
anticuerpo anti-rotavirus que son aglutinadas en
presencia de heces que contienen antgeno de
rotavirus. Los ensayo incluye ltex de control negativo
para ser utilizado en paralelo para controlar para
reacciones de aglutinacin no especficos. Un panel de
166 muestras fecales recogida de los nios <5 aos de
edad se utiliz con diarrea aguda espordica. Todas las
muestras se ensayaron para rotavirus por ELISA.

Setenta y ocho de las muestras se tomaron como

rotavirus positivos desde que dieron como resultado
positivo al menos dos veces por un ELISA rotavirus
comercial (ProSpecTTM, Oxoid Ltd, Basingstoke,
Reino Unido). Entre los 88 rotavirus muestras
negativas, 15 fueron positivos para astrovirus como se
determina por un ELISA comercial, 20 fueron
positivos para el norovirus, determinado por RT-PCR y
11 fueron negativos para todos los patgenos entricos
probado. Las muestras seleccionadas tambin fueron
analizadas por PAGE y rotavirus genomas visualizados
por tincin con plata. Se recogieron muestras y se
almacen a -70 C hasta su transformacin.
Para la prueba de ltex, las muestras se procesaron de
acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Brevemente, suspensiones fecales 1:10 se prepararon
en el tampn de muestra diluyente proporcionado con
la prueba. Despus de mezclar vigorosamente por
vrtice, las muestras se clarificaron por centrifugacin
a baja velocidad (3.000 g durante 5 min). Quince ul
sobrenadante se aadieron dentro de los crculos de la
tarjeta de aglutinacin, donde una gota de reactivo de
ltex o ltex control negativo fueron dispensadas
previamente.
Las muestras se mezclaron con el ltex en un
movimiento circular usando aplicadores separados
provistos de la prueba. Tarjetas hicieron girar
suavemente manualmente durante 5 minutos; a
continuacin, se registr la aparicin de cualquier
aglutinacin visible en un intervalo de 5-7 minutos.
Las muestras se consideraron positivos slo si se
observ aglutinacin en el crculo prueba de ltex, y
no en el crculo de control negativo. Los datos fueron
analizados utilizando el software SPSS Estadsticas 17
(http://ibm-spss-statistics.softonic.com) para generar
intervalos de confianza del 95% (IC). La
reproducibilidad entre los resultados obtenidos por las
diferentes pruebas se analiz calculando el valor
kappa.

4. Resultados
PastorexTM Rotavirus prueba de aglutinacin de ltex
detectado como positivo 67 de 78 muestras positivas
por rotavirus. Adems, la prueba dio una reaccin
positiva con 2 (2,3%) de las 88 muestras negativas de
rotavirus. Las 13 muestras con resultados discrepantes
entre la prueba de ELISA y el ltex se analizaron por
PAGE. Siete de los 11 muestras positivas por ELISA y
negativo por el ltex se confirmaron como positivos
por PAGE.
Mientras tanto, las 2 muestras positivas por el ensayo
de ltex y negativo por ELISA resultaron negativas por
PAGE. Por lo tanto, la sensibilidad global calculada y
la especificidad de la prueba de aglutinacin de ltex
PastorexTM Rotavirus es 85,9% [IC del 95%, 78,1793,62%] y el 97,7% [IC del 95%, 94,61 a 100,12%],
respectivamente, con una eficiencia del 92,2%.
Basndose en estos resultados, los valores predictivos
positivos y negativos para la prueba son 97,1% y
88,7%, respectivamente. Los resultados se resumen en
la Tabla 1. Ninguna de las muestras positivas
calicivirus y astrovirus fueron detectados como
positivos por el ensayo de ltex, lo que sugiere que
PastorexTM Rotavirus prueba de aglutinacin de ltex
no produce reaccin cruzada con cualquiera de estos
dos virus. Por otra parte, las muestras fecales positivos
para Escherichia coli (n = 2), Shigella sp. (n = 2) y
Salmonella sp. (n = 2) fueron probados por duplicado,
y ninguna de las muestras result en una reaccin
positiva. Un muy buen resultado se obtuvo entre la
prueba de ltex y los resultados de ELISA (valor kappa
= 0,84).
Con el fin de evaluar el lmite de deteccin de la
prueba de aglutinacin de ltex rotavirus PastorexTM,
diez diluciones seriadas dobles de una muestra de cepa
de rotavirus Rhesus cultivadas en clulas MA104, con
un ttulo de 1x108UFF / ml se ensayaron en paralelo
por el ELISA comercial y la prueba de aglutinacin de
ltex rotavirus PastorexTM. Mientras que la prueba
ELISA dio clara reaccin positiva a los / las diluciones
ml 1107 y 1106 ffu, y una reaccin lnea de frontera
en 1105 uff / dilucin ml, la prueba de aglutinacin de

ltex rotavirus PastorexTM dio una reaccin positiva

slo en la dilucin de 1107 ffu / ml, lo que indica que
la prueba de aglutinacin de ltex rotavirus
PastorexTM es unas cien veces menos sensible que la
prueba ELISA comercial.

Este trabajo fue parcialmente financiado por el

CONACYT (Mxico) subvencin los nmeros 103783
y 154767 a J.A.I.L. y A.L.G., respectivamente.

5. Discusin

La aprobacin tica
No requerido.

Varias pruebas comerciales de aglutinacin de ltex

para la deteccin de rotavirus en heces estn
disponibles en el mercado (Abbot, Orion Diagnostica,
Biomrieux y BIORAD) o se estn desarrollando. En
general, ensayos de aglutinacin de ltex para el
diagnstico de rotavirus son rpidos (5-10 min), de
bajo costo y no requieren equipo especializado.
Sin embargo, la especificidad de los ensayos de ltex
para la deteccin de patgenos fecales ha mostrado
debilidad, presumiblemente debido a las aglutininas no
especficas presentes en las heces. En este estudio, la
prueba de aglutinacin rotavirus PastorexTM ltex
mostr una muy buena especificidad y valor predictivo
negativo y no pudo detectar muestras conocidas
positivo para otros virus o bacterias entricas comunes.
Adems, se obtuvo una buena especificidad y una
buena concordancia entre el ltex y los resultados de
las pruebas de ELISA. Por otro lado, aunque el lmite
de deteccin de la prueba de aglutinacin de ltex
rotavirus PastorexTM era aproximadamente 10-100
veces menos sensible que el de ELISA comercial
utilizado, esto puede no representar una desventaja
marcada dada la alta carga viral de rotavirus en
muestras clnicas. Una limitacin de esta evaluacin es
que se llev a cabo bajo condiciones relativamente
ideales de laboratorio y por un operador experto, bien
familiarizado con la prueba de aglutinacin. Por lo
tanto, el rendimiento de esta prueba en condiciones de
campo o con personal menos Familiarizado es
desconocida.
En resumen, estos resultados sugieren que la
PastorexTM Rotavirus prueba de aglutinacin de ltex
nueva generacin puede ser usado como una buena
alternativa para el diagnstico de rotavirus en entornos
clnicos y epidemiolgicos.

Financiamiento

Conflicto de intereses
Ninguno declarado.

Reconocimiento
Las pruebas de aglutinacin de ltex Pastor XTM
rotavirus utilizados en este estudio fueron
proporcionados por BIORAD-Mxico.