Ingenieria Genetica
Ingenieria Genetica
Ingenieria Genetica
2. QU ES?
La ingeniera gentica es una parte de la biotecnologa que se basa en la manipulacin
gentica de organismos con un propsito predeterminado, aprovechable por el hombre:
se trata de aislar el gen que produce la sustancia e introducirlo en otro ser vivo que sea
ms sencillo de manipular. Lo que se consigue es modificar las caractersticas
hereditarias de un organismo de una forma dirigida por el hombre, alterando su material
gentico.
El proceso puede utilizarse ya en bacterias y en clulas eucariotas vegetales o animales.
Una vez adicionada o modificada la carga cromosmica, el organismo en cuestin
sintetiza la protena deseada y el aumento del rendimiento de la produccin puede
obtenerse mediante el aumento en la poblacin portadora. Las bases de la ingeniera
gentica han consistido en resolver el problema de la localizacin e insercin de genes y
la multiplicacin redituable de las factoras logradas.
Las tcnicas utilizadas por la ingeniera gentica son varias, y cada una atiende un
aspecto de la tarea de preparacin y solucin de los problemas especficos de esta
tecnologa, sin embargo muchas de ellas ha tenido xito en otros campos
tecnocientficos.
La ingeniera gentica es el conjunto de tcnicas utilizadas en la manipulacin del ADN.
De esta forma podemos:
Quitar uno o ms genes.
Aadir uno o ms genes.
Aumentar el nmero de molculas de ADN.
Clonar clulas.
Clonar individuos.
Crear organismos genticamente modificados (OGM).
La tcnica para obtener una protena por ingeniera gentica se realiza en varios pasos:
Seleccin y obtencin del gen.
Seleccin de un vector.
Formacin de un ADN recombinante.
Seleccin de una clula anfitriona.
Sntesis y obtencin de protenas correspondientes al gen manipulado.
2.1 La gel-electroforesis
El problema de encontrar, separar y analizar los fragmentos de ADN correspondiente a un
gen especfico se logr resolver sobre la base de los estudios de Linus Pauling que
demostraron que las molculas migran a distintas velocidades hacia los polos
magnticos: se colocan porciones de ADN sobre un gel de agarosa y se les permite que
migren hacia los polos del campo magntico. La senda seguida por el ADN y las manchas
formadas se tornan visibles en una pelcula de rayos X como el cdigo de bandas de un
producto en el supermercado.
Esta tcnica permite tratar con bajas concentraciones de ADN, de hasta 100 nanogramos
y su objetivo es mediante un mtodo bioqumico, basado en reacciones enzimticas
poder analizar de forma rpida la variabilidad gentica que se puede encontrar en una
poblacin determinada. La prctica de la electroforesis de enzimas en gel aplica la
afirmacin terica de que el producto de un gen, ser una protena que tendr actividad
enzimtica.
El mtodo consiste en obtener las enzimas del material que se desea conocer
empaparlas en papel secante, e introducir estos papeles en el gel. Posteriormente habr
que someterlo a la electroforesis para lograr la migracin de las protenas que ser
diferencial dependiendo de la carga elctrica de la protena.
2.2 ADN recombinante
Hasta las despus de 1970, el ADN era una molcula que presentaba amplias dificultades
para su anlisis bioqumico. Su gran longitud y monotona hacan que la secuencia de
nucletidos pudiese slo ser estudiada mediante mecanismos indirectos. Para esto se
recurra a la determinacin de la secuencia de las protenas o del ARN.
Hoy la situacin ha cambiado por completo y el ADN ha pasado a ser una de las
molculas ms fciles de estudiar. Mediante las tcnicas que desarrollaremos en este
captulo, veremos que es factible separar regiones determinadas del ADN, obtenerlas en
grandes cantidades y determinar su secuencia de nucletidos a una velocidad de varios
cientos de nucletidos al da. Tambin se nos hace posible alterar un gen (sometido a
ingeniera) y transferirlo a clulas en cultivo o a la lnea germinal de animales, donde el
gen modificado se incorpora como parte funcional y permanente del genoma.
La tecnologa del ADN recombinante constituye una suma de tcnicas siendo las ms
importantes:
_ La rotura especfica del ADN mediante nucleasas de restriccin, que facilita el
aislamiento y la manipulacin de los genes individuales.
_ La secuenciacin rpida de todos los nucletidos de un fragmento purificado de
ADN, que posibilita determinar los lmites de un gen y la secuencia de aminocidos que
codifica.
_ La hibridacin de los cidos nucleicos que hace posible localizar secuencias
determinadas de ADN o ARN, utilizando la capacidad que tienen estas molculas de
unirse a secuencias complementarias de otros cidos nucleicos.
_ La clonacin del ADN, mediante la cual se puede conseguir que un fragmento de
ADN se integre en un elemento gnico autorreplicante (plsmido o virus) que habita en
una bacteria, de tal manera que una molcula simple de ADN puede ser producida
generando muchos miles de millones de copias idnticas.
_ La ingeniera gentica mediante la cual se pueden alterar secuencias de ADN
produciendo versiones modificadas de los genes, los cuales se pueden insertar a clulas
u organismos.
El desarrollo de la tecnologa del ADN recombinante fue posible gracias a varias lneas de
investigacin
el conocimiento de las enzimas de restriccin
la replicacin y reparacin de ADN
la replicacin de virus y plsmidos
la sntesis qumica de secuencias de nucletidos.
2.3 Vectores
Cuando se pretende que las factoras biotecnolgicas (o una clula) produzca un
material especfico, debe drsele la orden especfica, esto es proveerle de los genes
necesarios. Para ello se debe agregar a su ADN natural un complemento gnico
(previamente determinado y aislado), lo que es posible por medio de un vector o
transportador.
Estos vectores permiten obtener mltiples copias de un trozo especfico de ADN, lo que
proporciona una gran cantidad de material fiable con el que trabajar. El proceso de
transformacin de una porcin de ADN en un vector se denomina clonacin.
Estos biochips son dispositivos miniaturizados en los que se pueden depositar decenas de
miles de sondas de material gentico conocido en posiciones predeterminadas,
constituyendo una matriz. En los estudios, se ponen en contacto los biochips con material
gentico marcado, obtenido de una muestra de un paciente o experimento. En ese
momento, generan un patrn de seales particular cuya lectura se realiza con un escner
y posteriormente se interpretan con un ordenador.
3. APLICACIONES DE LA INGENIERA GENTICA
La aplicacin de las tcnicas utilizadas por la Ingeniera Gentica ha permitido elevar la
calidad de vida del ser humano. Los organismos transgnicos han pasado a ocupar una
posicin central en la biotecnologa moderna, porque permiten hacer modificaciones muy
especficas del genoma que vale la pena analizar con detalle, debido a sus importantes
aplicaciones presentes y futuras.
- obtencin de rganos animales (cerdos) con genes humanos para no ser rechazados en
trasplantes.
- animales con carnes y huevos con menos colesterol y grasas
- pollos sin plumas
Vegetales
- resistentes a insectos: maz y algodn con un gen que produce una toxina para orugas y
escarabajos
- resistentes a herbicidas: soja, algodn, maz, resisten a altas concentraciones de
herbicidas que se echan en los campos para erradicar malas hierbas
- resistentes a condiciones ambientales: fro, sequa, alta salinidad, etc.
Artritis reumtica
Diabetes
SIDA
4. VENTAJAS E INCONVENIENTES
4.1 Ventajas
El principal avance de la Ingeniera Gentica consiste en la capacidad para crear especies
nuevas a partir de la combinacin de genes de varias existentes, combinando tambin
por lo tanto sus caractersticas. Cultivos con genes de insectos para que desarrollen
toxinas insecticidas o tomates con genes de pez para retrasar la marchitacin, han
dejado hace tiempo de ser ciencia-ficcin para constituir una realidad en nuestros das.
Permitir el cultivo de hortalizas en reas desrticas hasta ahora estriles o aumentar el
tamao de los frutos cultivados son algunos de los adelantos que la utilizacin de este
tipo de tcnicas puede aportar a la Humanidad, con los logros que supone hacia la
erradicacin del hambre en el Mundo. Lo que no se ha definido todava es cmo
compatibilizar estos objetivos con los intereses econmicos de las empresas de
biotecnologa que los desarrollan.
Gracias a la ingeniera gentica, los cientficos pueden hacer ciertas combinaciones
entre genes de diferentes especies, para as solucionar problemas y mejorar el
rendimiento econmico-comercial de las explotaciones.
Se pueden buscar curas a enfermedades genticas para que las nuevas
generaciones nazcan ms sanas.
Al tomate por ejemplo se le ponen genes antisentido (en sentido inverso a un gen
concreto) para as retrasar el proceso de reblandecimiento.
Gracias a esto, la ciencia ha conseguido que se cultiven plantas con mayor
tolerancia a la sequa o protegidos frente a virus.
En algunos cultivos, se han puesto genes de bacterias para que desarrollen
protenas insecticidas y reducir el empleo de insecticidas.
Tambin se pueden insertar genes humanos responsables de la produccin de
insulina en clulas bacterianas para obtener insulina de gran calidad a bajo coste.
Estas clulas pueden producir mucha cantidad ya que se reproducen a una gran
velocidad.
4.2 Inconvenientes
Los expertos advierten que detrs de estas mejoras y nuevas aplicaciones se esconden
tambin riesgos y peligros de notable importancia.
Como sucede siempre, las desventajas provienen o pueden proceder del mal uso de las
tcnicas mencionadas, lo cual es motivo de preocupacin por los riesgos e implicaciones
que pueden derivarse. A ello ha dado respuesta el Comit Internacional de Biotica de la
Unesco fijando unos objetivos que pueden concretarse en dos:
a) evitar aspectos del progreso que atenten contra la dignidad humana
b) que las posibilidades cientficas no generen peligrosidad por falta de definiciones
ticas.
motivos ecolgicos, sanitarios, morales, sociales, polticos... y en concreto se trata sobre
todo de la salvaguarda de la dignidad y los derechos humanos, de no dar posibilidad a la
discriminacin social ni ideolgica de evitar desastres ecolgicos y de impedir el
desarrollo o aparicin de enfermedades que pudieran ser incontrolables.
Uno de estos peligros es el hecho de que detrs de los proyectos de manipulacin
gentica estn las compaas multinacionales muy preocupadas por el inters
econmico.
Tambin pueden contaminar otras plantas no transgnicas.
TIPOS DE CLONACIN
CLONACIN MOLECULAR
Este tipo de clonacin es uno de los mtodos ms conocido. Se basa especficamente en
extraer una parte del ADN y luego insertarlo en donde sea conveniente (precisamente un
plsmido o algo en donde sea posible la clonacin). A travs de la clonacin se pueden
obtener mltiples copias de un ser vivo, gracias a la accin de la DNA polimerasa.
Podemos especificar el hecho de que la clonacin sirve para ampliar fragmentos cuyo
contenido son los genes (esenciales para el anlisis del subsecuente).
Toda clonacin debe seguir ciertos pasos para que sta resulte efectiva:
Primero, est la fragmentacin, en donde se retira un pedazo de ADN relativamente
importante para poder contar con los genes necesarios para la clonacin. Este proceso
puede realizarse a travs de la digestin con enzimas de restriccin.
Luego, encontramos la ligacin, que es el proceso por donde se une el pedazo de ADN
con un vector generalmente circular para que as se forme una secuencia para ser
incubado. Es importante contar con la enzima llamada ADN ligasa para que sta logre
unirlos de buena manera.
Tercero, la transfeccin. Aqu una vez unido el vector con el gen de inters se
transfecta a una clula, es decir se incorpora en una clula para que sta obtenga la
informacin necesaria para que se cumpla la clonacin.
Para finalizar, encontramos la seleccin que es donde las clulas transfectadas se
cultivan.
CLONACIN CELULAR
Se destaca este tipo de clonacin debido a que de una sola clula se puede formar una
cierta poblacin de esta misma. Este proceso destaca porque su uso es a partir de aros o
cilindros de clonacin en donde a partir del procedimiento in Vitro se cultivan los distintos
tejidos. Se utiliza un agente mutagnico para proporcionar la seleccin de las colonias y
para que stas sean expuestas a la clula de la cual se desea clonar. Los aros o cilindros
de clonacin sirven para recolectar las clulas clonadas para que crezcan en un mejor
ambiente de proteccin.
CLONACIN DE ORGANISMOS
Este tipo de clonacin tiene una caracterstica fundamental; es un tipo de reproduccin
asexual en donde se reproduce o se forma una copia de un organismo ya existente con la
misma formacin gentica. Las amebas son un ejemplo de esto, ya que solo existe un
progenitor y la fecundacin no existe.
Los hongos tambin se reproducen asexuadamente.
Hoy en da, encontramos la posibilidad de obtener un gemelo idntico naturalmente o
artificialmente. La manera de hacer esto es alterando el desarrollo embrionario o
realizando una separacin voluntaria de los blastmeros, debilitando las uniones
celulares.
El mapeo gnico nos permite conocer la relacin de ligamiento entre genes es decir, la
relacin de proximidad o cercana entre ellos. Dos genes estrechamente ligados se
heredarn juntos. Caracteres de inters productivo se podrn seleccionar en forma
indirecta mediante el gen de una enzima o protena ligada a la caracterstica de inters.
Anlisis de familias. Es un mtodo que permite realizar el seguimiento de una
caracterstica heredable (enfermedad, caracterstica productiva, reproductiva) mediante
marcadores genticos. Los marcadores se testan por segregacin en sucesivas
generaciones, realizando el seguimiento del o los alelos ligados al gen de inters. Estas
familias son llamadas familias de referencia. En bovinos, se pueden realizar anlisis
de ligamiento en Centros de Transferencia de Embriones, donde se cuantifican los alelos
en medias hermanas, o hermanos enteros creados por ovulacin mltiple.
A qu llamamos haplotipo?
HAPLOTIPO: Llamamos as a la combinacin de alelos de dos o ms loci sobre un mismo
cromosoma. Debido a cortas distancias fsicas entre los loci, stos pueden heredarse
como una unidad.
A nivel molecular un haplotipo corresponde a una regin especfica del genoma donde
existen combinaciones de bases particulares identificadas como sitios de restriccin por
la tcnica del RFLP, o polimorfismos de di o trinucletidos (microsatlites).
Sera: un genotipo en miniatura. Este concepto se ha extendido para describir la
combinacin particular de alelos o sitios de restriccin que se encuentran en reas
definidas del genoma.
Para conocer los grupos de ligamiento y asignar en l un nuevo marcador altamente
Vpolimrfico, debemos utilizar el criterio de lo que es el LOD SCORE.
Este se define como el log10 de la relacin entre la probabilidad de que los datos
obtenidos de los loci estn ligados frente a la probabilidad de que no estn ligados. Un
LOD score >3.0 corresponde a una relacin de 1000:1, a favor del ligamiento. Un LOD
score de 4.0 presenta una probabilidad de error de solamente 1 en 200.
TIPOS DE MUTACIONES
Puntuales y pseudopuntuales
* cambios de base
_ transiciones: Purina por purina y pirimidina por pirimidina
_ transversiones: Purina por pirimidina y pirimidina por purina
* desfases (cambio en el nmero)
_ delecin
_ insercin
Cromosmicas
_ deleciones
_ duplicaciones
_ inversiones
_ translocaciones
Las mutaciones pueden ser espontneas mediante varios mecanismos diferentes,
incluyendo errores de replicacin del DNA y lesiones fortuitas de ste; o mediante
mutgenos. Los mutgenos son agentes que MUTACIONES ESPONTNEAS
Errores en la replicacin del DNA .Durante la sntesis del DNA puede producirse un error
en la replicacin porque se forme un emparejamiento ilegtimo de nucletidos como A-C
que da lugar a la sustitucin de una base por otra.
Cada una de las bases aparece en el DNA en una de varias formas llamadas tautmeros
que son ismeros que se diferencian en las posiciones de sus tomos y en los puentes
que se forman entre ellos. Esas formas estn en equilibrio. La forma ceto es la que se
encuentra normalmente en el DNA mientras que las formas imino o enol son menos
frecuentes. La capacidad del tautmero menos frecuente de una base de emparejarse
errneamente y producir mutaciones durante la replicacin del DNA fue puesta de
manifiesto por primera vez por Watson y Crick. A estos emparejamientos errneos se
lesaumentan la frecuencia de mutagnesis, generalmente alterando el DNA y en este
caso son inducidas. llama cambios tautomricos.
Tambin pueden ocurrir emparejamientos errneos cuando una de las bases se ioniza,
esto sucede con ms frecuencia que los cambios tautomricos.
Transiciones
Todos los emparejamientos errneos anteriores producen mutaciones por transicin,
en las que una purina es sustituida por otra purina y una pirimidina es sustituida por
otra
pirimidina.
Transversiones
No pueden realizarse por emparejamientos errneos como los debidos a cambios
tautomricos. Pero s pueden realizarse si una base sufre un cambio tautomrico
mientras que la otra base rota sobre su enlace glucosdico y quedan enfrentadas sus
cargas.
Desaminacin
Es una de las ms frecuentes debido a la inestabilidad qumica, afectando gravemente
a la replicacin del ADN provocando transiciones. En este caso la base se modifica
antes de la replicacin debido a los radicales que provoca el metabolismo.
La desaminacin de citosina produce uracilo, as los resduos de uracilo que no sean
reparados se emparejarn con adenina durante la replicacin produciendo la
conversin de un par GC en uno AT, se produce una transicin.
Cambios de fase
Estas mutaciones pueden ser inserciones o deleciones.
Las inserciones se producen por un deslizamiento o "resbaln" de la cadena
sintetizada con lo que se forma un lazo de varios pares de bases. En la siguiente
ronda de replicacin se aadirn tantas bases como comprenda el lazo ya que cuando
se produce el "resbaln" sigue replicndose por donde se qued antes del "resbaln".
sntesis del DNA no sigue ms all de una base que no puede especificar una
complementaria mediante puentes de hidrgeno. Este fallo es replicado por el
mecanismo SOS.
Radiaciones
UV que producen dmeros de timina, rayos X y las radiaciones gamma que rompen el
DNA.