Bioinsecticidas

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UNIVERSIDAD AUTONOMA DE NUEVO LEON

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS
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UNIVERSIDAD AUTONOMA DE N U E V O LEON

DIVISION DE ESTUDIOS DE POSGRADO

Bacillus thuringiensis Y EXTRACTO DE Agave lechuguilla
PARA EL CONTROL DE Spodoptera frugiperda (J. B. Smith).
TESIS
PRESENTADA COMO REQUISITO PARCIAL PARA
OBTENER EL GRADO DE
DOCTOR EN CIENCIAS
CON ESPECIALIDAD EN MICROBIOLOGIA
POR
MONTERREY, N. L. MEXICO
JUNIO DE 1994
UNIVERSIDAD AUTONOMA DE NUEVO LEON

DIVISION DE ESTUDIOS DE POSTGRADO

PARA EL CONTROL DE Spodoptera frugiperda (J. B. Smith)
TESIS
PRESENTADA COMO REQUISITO PARCIAL PARA OBTENER DEL GRADO DE
DOCTOR EN CIENCIAS CON ESPECIALIDAD EN MICROBIOLOGIA
POR
APROBADA
COMISION DE TESIS
DR. J<
vfARADO
PRESIDENTE
DR. LUIS J. GALAN WONG

SECRETARIO
V.
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DR. ARTURO GALLEGOS DEL TEJO
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FONDO TESIS

PARA EL CONTROL DE Spodoptera frugiperda (J. B. Smith)
Este trabajo se realiz en el Departamento de Microbiologa de la Facultad de Ciencias

Biolgicas de la Universidad Autnoma de Nuevo Len y en el Laboratorio de Biotecnologa
de la Unidad Regional Universitaria de Zonas Aridas de.la Universidad Autnoma Chapingo,
bajo la direccin del Dr. Jos Santos Garca Alvarado y la asesora del Dr. Luis J. Galn Wong y
del Dr. Arturo Gallegos del Tejo.
A MI QUERIDA ESPOSA
ROCO ELVIRA AGUAYO
CON TODO MI AMOR Y RESPETO POR SU
PACIENCIA Y APOYO SIN EL CUAL NO
HUBIERA PODIDO LLEGAR A LA META QUE
ME PROPUSE
A MIS HIJOS
OZUKY
YARETH
RAFAEL
BENDICION QUE ME DIO
MI DIOS
A MI PADRE (Q.P.D.)
JESUS CASTRO CONTRERAS
COMO UN TRIBUTO POSTUMO
ASUMEMORIA
A MI MADRE
CONCEPCION FRANCO VDA DE CASTRO
POR SU INFINITO AMOR
AL PUEBLO DE MEXICO
VIVID EN EL TRANQUILO AMBIENTE DE LOS

LABORATORIOS V LAS BIBLIOTECAS
PREGUNTAOS ANTE TODO
QUE HE HECHO P O R MI PATRIA?
ASI ALCANZAREIS QUIZA LA
DICHA DE SABER QUE CONTRIBUISTEIS
AL BIENESTAR DE LA HUMANIDAD
LUIS PASTEUR
AGRADECIMIENTOS
A la Universidad Autnoma de Nuevo Len, por haberme permitido que dentro de sus aulas,
laboratorios y bibliotecas tuviera la oportunidad de realizar mis estudios doctorales, en ella arde
siempre la ama de la verdad.
A la Universidad Autnoma Chapingo, por su patrocinio econmico y moral para la realizacin
de mis estudios doctorales. En especial a los directivos de la URUZA, Ph D. Rubn Melndez
Gonzlez, M. Se. Buenaventura Reyes Chacn y M. C. Ricardo Trejo Calzada, al C. Rector de
la UACH Ing. Carlos Orozco Alam , y al ex-director Acadmico de la UACH M. C. Ornar
Arana Muoz.
Al Instituto "18 de Marzo" de Gmez Palacio, Dgo. por haberme inculcado el espritu de lucha,
estudio y superacin acadmica; por permitirme pasar los mejores aos de mi vida estudiantil, y
en l aprender a querer y respetar a mi Patria.
Al Dr. Jos Santos Garca Alvarado, quien siempre encontr tiempo disponible para atender mis
dudas. Sus valiosos consejos, su desinterado apoyo y sincera amistad, me permitieron mantener
el nimo necesario para cumplir con el compromiso contrado.
Al Dr. Luis J. Galn Wong, quien preocupado por lograr un alto nivel en esta investigacin,
estableci contactos con cientficos de vanguardia para intercambio de experiencias; sus
consejos, y las discusiones sostenidas con l, permitieron mantener un ritmo siempre ascendente
en el desarrollo de este trabajo. Mi ms sincero reconocimiento y gratitud.
Al Dr. Arturo Gallegos del Tejo, quien pendiente por encontrar un valor agregado a las plantas
del desierto, me otorg parte de su original idea de investigar actividad insecticida en la
lechuguilla, sustento de este trabajo, por su amistad, consejos, apoyo y asesora.
Al personal del Laboratorio del Microbiologa Industrial y del Suelo de la FCB por su
solidaridad en la realizacin de este trabajo, y muy especialmente a las M.C. Katiuska Arvalo
Nio y Patricia Tamz Guerra, en ellas encontr siempre apoyo tcnico desinteresado y
oportuno.
A mis compaeros de estudio y al personal no acadmico de la Facultad de Ciencias Biolgicas.
La convivencia y lazos de amistad desarrollados durante mi estancia, el intercambio de opiniones
en los seminarios y plticas informales complementaron grandemente mi formacin cientfica.
Muchas de las ideas que surgieron en esos intercambios, estn plasmadas en este documento.
Para todos ellos mi agadecimiento sincero.
INDICE
PAGINA
LISTA DE ABREVIATURAS
LISTA DE FIGURAS
LISTA DE TABLAS
DEDICATORIA
RESUMEN
EN ESPAOL
RESUMEN EN INGLES (ABSTRACT)

INTRODUCCION
OBJETIVOS e HIPOTESIS
ANTECEDENTES
MATERIAL Y METODOS
RESULTADOS
DISCUSION
CONCLUSIONES
PERSPECTIVAS SOBRE FUTURAS
INVESTIGACIONES EN EL TEMA
LITERATURA CITADA
LISTA DE ABREVIATURAS
ADN
Acido desoxiribonuclelco
ARN
Acido ribonucleico
cm
Centmetros
Cry
Toxinas proteicas
DL
Dosis letal media
afl
Gramo (s) por litro <s)
Hora (s)
ha
Hectrea (s)
Kda
Kilodaltones
Km2
Kilmetro (s) cuadrado (e)
Ib
Libra (s)
Metros
Molar
mi
Mililitro (8)
mm
Milmetros
m8nm
Metros sobre el nivel

del mar
N
%
Normal
Porciento
peso
PH
Logaritmo negativo de la
concentracin de iones H *
PsCi
Protenas cristal insecticida
serovar
Ser ovari edad
Spp.
Especie desconocida
Subesp
Subespecie
Ul
Unidades internacionales
UV
Utrsvioleta
Var.
Variedad
RESUMEN
El objetivo de este trabajo consisti en desarrolllar un bioinsecticida a partir de las
inclusiones y esporas de Bacillus thuringiensis serovariedad aizawai (cepa GM-10) y extracto
de guishe (subproducto del procesamiento de Agave lechuguilla) para el control del gusano
cogollero del maz (Spodoptera frugipeda, Smith). Para determinar la toxicidad del extracto
sobre las plantas, se instal un experimento en invernadero con cultivos suceptibles a los cuales se
les impregn el producto en las hojas, y se determin el peso seco final. Para establecer el efecto
de ese producto sobre S. frugiperda se realizaron bioensayos encontrndose que el extracto
alcohlico mostr una actividad insecticida de 20 % de mortalidad a una concentracin de 100
lig/ml en la dieta. Posteriormente se procedi a hacer una mezcla del extracto con las inclusiones
y esporas de B. thuringiensis, encontrndose un efecto sinrgico entre los componentes y
obtenindose un 100 % de mortalidad al utilizar una mezcla de 236 fig/ml del complejo
inclusion-espora ms 100 (ig/ml del extracto en la dieta para insectos.
Como soporte de las formulaciones se analizaron la harina de maz cruda, la
pregelatinizada y la nixtamalizada, encontrndose que la harina de maz nixtamalizada fu la ms
efcz ya que se polimeriz en fro y form redes matriciales adecuadas. Como agentes
protectores de luz solar se probaron los compuestos verde de malaquita, rojo congo y carbn
vegetal, resultando el verde de malaquita el mejor protector en pruebas de laboratorio. Se
utilizaron aceites de maz crudo y comestible como estimulantes del apetito de insectos.
Con estos antecedentes se realiz un experimento en campo con cultivo de maz (Zea
maiz variedad H-507). Al emerger las plantas y que estas alcanzaron una altura de 90 cms, se hizo
un conteo de larvas de S. frugiperda a 100 cogollos por tratamiento antes de aplicar el
bioinsecticida y despus de siete das.
La evaluacin del rendimiento del grano cosechado (en Kg/Ha) entre los diferentes
tratamientos, mostr una diferencia estadstica altamente significativa; observndose tres grupos,
el primero abarc aquellos donde el rendimiento medio fu desde 3211 hasta 2440, el segundo de
2284 y el tercero de 1083, ste ltimo correspondi al control absoluto.
Se concluy que: a) La cepa GM-10 de B. thuringiensis var. aizawai, sola y combinada
con extractos de guishe, mostr ser efectiva para el control de S. frugiperda, b) el extracto
alchlico del guishe mostr ser un magnfico coadyuvante al actuar como agente sinrgico tanto
en pruebas de laboratorio como en campo; c) el compuesto verde de malaquita actu como un
buen protector solar de la d-endotoxina de B. thuringiensis; d) el formulado encapsulado en
matriz de harina de maz result ser altamente eficiente como cebo para el combate de S.
frugiperda, y e) fu posible incrementar el rendimiento de maz hasta en 2.0 Ton/Ha de grano al
hacer uso de este formulado.
INTRODUCCION
Es posible que los antiguos agricultores observaran que las plagas eran uno de los
tantos factores que incidan sobre la produccin agrcola, ya en la biblia se menciona una de las
plagas agrcolas que azot a Egipto durante la poca de Moiss, sin embargo es obscura la pgina
de la historia que mencione alguna forma de combate. Posiblemente se necesit de ms de 5,000
aos para que el hombre estableciera mtodos de produccin capaces de satisfacer las necesidades
de una sociedad cada vez ms compleja. Los detalles ms antiguos de la era moderna con
respecto al combate de insectos-plaga, se encuentran plasmados en la enciclopedia de horticultura
recopilada por J. C. Loudon en 1S24, en ella se encuentran los ms variados mtodos de control
biolgico (enemigos naturales de los insectos, control con plantas repelentes, cultivos trampa y
control con otros compuestos naturales) que datan de ms de 1700 aos en el sureste asatico y
de ms de 100 aos en los Estados Unidos de Amrica (131).
Con la introduccin de la agricultura y de la ganadera, el hombre no volvi a verse
obligado a depender del medio, ya que empez a modificarlo para sus-propios fines, y a menudo,
desgraciadamente con la misma rapidez, a degradarlo, a destruirlo hasta hacer imposible la misma
vida humana en algunas zonas. A pesar de la dramtica urgencia, la preocupacin por el medio
ambiente es reciente y comprendida por pocos. De aqu la necesidad de buscar la forma de
mantener el equilibrio entre el hombre y su medio ambiente, si la sociedad necesita productos
agrcolas, estos deben obtenerse con mtodos eficaces y seguros, sin exponer a la destruccin el
patrimonio fsico y bitico de las futuras generaciones, concepto que hoy se llama desarrollo
sostenible.
Para aumentar los rendimientos unitarios se desarrollaron compuestos txicos para el
combate de plagas y con ello se inici la produccin masiva de los llamados plaguicidas qumicos.
Es tal la demanda de esos productos, que actualmente se conocen 1500 variedades en el mundo,
los cuales han elevado en espiral el costo econmico y energtico del producto agrcola final
(107).
Aunque en Mxico, el consumo de insecticidas qumicos se hizo frecuente sobre todo en
agricultores empresariales en la dcada de los aos 50, la demanda de estos ha aumentado
anualmente en un 15% , en tanto que el rendimiento de los cultivos ha disminuido en un 15 al

25% debido al ataque de plagas; posiblemente esto se deba a que hayan aumentado los
mecanismos de defensa en los insectos (153). Este problema va asociado a los efectos nocivos
que causan los plaguicidas, entre los ms notables estn: la contaminacin, el incremento en la
resistencia de las plagas, la supresin de los enemigos naturales de las plagas y consecuentemente
la resurgencia de plagas secundaras, lo que constituye un circulo vicioso: resurgencia-mayor
cantidad de plaguicidas-resurgencia.
El enfoque ecolgico en el control de plagas cobra cada da ms adeptos debido a que en
este contexto se analizan las relaciones biticas entre especies y los peligros que encierran el uso
de agentes qumicos inespecificos. Esto ha promovido la necesidad de desarrollar una tecnologa
que involucre el uso de medidas de control que no dejen residuos peligrosos en el medio
ambiente. En este contexto el uso de bioinsecticidas y de coadyuvantes naturales ofrece una
alternativa ms fcil y segura para la salud del humano y para la estabilidad del agroecosistema
(60,141,159).
Es por eso que en este trabajo desarrollamos un formulado con accin insecticida para el
control de S. frugiperda en el cultivo de maz a base del microorganismo B. thuringiensis
serovar. aizawi cepa GM-10 y extractos de guishe, el cual es un subproducto del
procesamiento de la lechuguilla (Agave lechuguilla) durante la obtencin de fibras, para lo cual
originalmente se plante la siguiente:
HIPOTESIS
Una formulacin a base de B. thuringiensis y extractos de A. lechuguilla es efectiva para
el control de S. frugiperda en cultivos de maz (Zea maiz)
OBJETIVOS
Objetivo Genera]
Desarrollar un formulado altamente txico utilizando B. thuringiensis serovar aizawi y
extractos de A. lechuguilla para el control de S. frugiperda en el cultivo de maz.
Objetivos Particulares
1. Probar a nivel de laboratorio la eficacia de las combinaciones: 5-endotoxina de B. thuringiensis
y extractos de guishe en bioensayos contra S. frugiperda.
2. Determinar a nivel de campo la eficacia de la formulacin del bioinsecticida contra S.
frugiperda en el cultivo de maz.
3. Demostrar que el uso del extracto de guishe como coadyuvante incrementa la actividad
txica del formulado.
4. Demostrar que el extracto del guishe no produce efectos fitotxicos o alelopticos.

5. Seleccionar una harina de maz para la encapsulacin efectiva de la endotoxina de B.
thuringiensis.
6. Escoger un compuesto cromgeno capz de proteger las toxinas de B. thuringiensis de la

exposicin a la radiacin solar.
ANTECEDENTES
HISTORIA DE R thuringiensis
El nombre de B. thuringiensis fu introducido primeramente por el bilogo alemn E.
Berliner en 1911 (16), cuando describi una bacteria patgena encontrada en una pupa de la
mariposa harinosa del mediterrneo (Ephestia kuefmiella) y otras larvas de insectos no
especificadas que viven en graneros en la ciudad de Thuringen. La descripcin de B. thuringiensis
hecha por berliner fue la siguiente: "Un bacilo esporulado gram (+), con flagelos pertricos, que al
terminar el crecimiento vegetativo, contiene adems de la espora una inclusin a la cual designa
como un cuerpo de desecho".
Esta bacteria ya haba sido previamente reconocida por el bilogo japons S. Ishiwata en
1901 (91) como un agente causal de la enfermedad de sotto de las mariposas de la seda (Bombyx
mor), el cual denomin B. sotto (103). En 1915, Aoki y Chigasaki demostraron que cultivos
viejos de B. sotto contenan una toxina que causaba la muerte de insectos. Posteriormente, en
1927, Mattes confirm la observacin de Berliner, estableciendo adems que el crecimiento del
cuerpo de desecho en la bacteria cambiaba tambin la posicin de la espora.(l,49).
Posteriormente B. thuringiensis se describi como una variedad dentro de B. cereus,
porque con excepcin de su patogenicidad para ciertos insectos y la forma oblicua de la espora en
las clulas, resultaba indistinguible de B. cereus (154,). Fue hasta en 1951 en que se aisl una
cepa, la cual fue denominada B. cereus serovar. alesti, que era causante de toxemia y septicemia
en larvas del gusano de seda, adems se observ que estos sntomas variaban con la cantidad de
cultivo ingerido por la larva. (81).
En 1953, mediante el uso de la microscopa electrnica se observaron cultivos esporulados
de B. thuingiensis y se encontr la presencia de inclusiones las cuales tenan forma de diamante,
refirindose a stos como un cuerpo paraesporal. Hasta ese tiempo, nadie relacionaba esto con
una funcin de patogenicidad. Sin embargo, Hannay sugiri que los cristales al encontrarse en el
intestino medio del insecto, estaban relacionados con la formacin de una toxina que induca una
sfcpticepiia en las larvas (66,82).
La relacin entre la inclusin y la patogenicidad hacia el insecto, fue confirmada entre

1953-1954, aunque se observ que la primera requera ser solubilizada en lcali diluido o jugo
intestinal del insecto para ser activo (4). La patogenicidad de esta bacteria para las larvas de
insectos est basada principalmente en las protenas txicas que contiene el cuerpo paraesporal,
sin embargo, la patogenicidad de las cepas de B. thuringiensis est restringida a cierto grupo
taxonmico de insectos (92).
En 1969, H.T. Dulmage aisl una cepa de B. thuringiensis, la cual denomin HD-1, que
result entre 20 y 200 veces ms potente que todas las cepas conocidas. Esta cepa de B.
thuringiensis var. kurstaki (HD-1) es actualmente la base comercial de la mayora de este tipo de
productos contra diversas plagas de lepidpteros de importancia agrcola comercial (46,47).
La primera clasificacin serolgica en base a los antgenos flagelares para este grupo de
bacterias fue hecha por De Baijac (36). En 1977 se aisl la primera cepa de B. thuringiensis
patgena para larvas de mosquitos (8,72) y otras especies de dpteros, la cual tambin implic el
descubrimiento de un nuevo serotipo (37). Ms recientemente, se aisl una cepa denominada (B1
256-82) que fu activa contra larvas de colepteros, esta cepa correspondi al serotipo 8a 8b
(38,97,98).
ECOLOGIA DE R thuringiensis
Distribucin y frecuencia. Esta es una bacteria con una amplia distribucin y alta frecuencia de
aislamiento en la naturaleza, ya que ha sido encontrada a partir de muestras de suelo (40,125,
130,158), de granos almacenados, (66,119) de insectos, (49,138) as como de sitios infestados
con estos ltimos (8).
En un anlisis de 8,916 muestras de suelo de varios hbitats, incluyendo aquellos con
diferentes nmeros de insectos, los resultados indicaron que la presencia de insectos no predice la
presencia de B. thuringiensis en una muestra de suelo particular (110). Estos estudios tambin
mostraron que esta bacteria tiene una extensa distribucin mundial en diversos suelos incluyendo
suelos forestales, de savanas, y de desiertos. Sin embargo, en la fraccin de muestras
provenientes de ambientes abiertos y naturales, se aisl al microorganismo en 115 muestras, de un
total de 785 analizadqs Estas ltimas fueron obtenidas tanto en Estados Unidos como en otros 29
pases. Por otra parte se encontr que la densidad relativa de esta bacteria es mucho mas bajo en
los suelos que la encontrada en almacenes de granos (111).
Otros investigadores sugieren que B. thuringiensis puede habitar en tan solo dos
ecosistemas separados: tierras arables y almacenes de granos. Las esporas pueden sobrevivir por
muchos aos pero no germinan ni se multiplican como clulas vegetativas en los suelos naturales,
esta observacin indica que esta bacteria no est adaptada al ambiente del suelo (41).
Persistencia de B. thuringiensis en el medio ambiente. La baja duracin de la actividad de la
toxina es una desventaja de B. thuringiensis, esta ha sido calculada de 1 a 2 das en el campo y de
dos semanas si se aplica forestalmente, esto debido a que la toxina se destruye por accin de la
luz ultravioleta. El hecho de que sea mejor su actividad para plagas forestales que de campo, es
debido en parte a la alta suceptibilidad que tienen las plagas forestales a las toxinas del
microorganismo (15).
TOXINAS DE ACCION INSECTICIDA DE B. thuringiensis

Esta bacteria y sus variedades sintetizan 7 tipos de toxinas, entre los que se encuentran la
a y 0 exotoxinas, la -endotoxina, "el factor piojo", una bacteriocina (thuricina) y dos inhibidores
de la respuesta inmune de los insectos denominados InA e InB.(51). Las dos primeras toxinas
presentan efecto plaguicida sobre un amplio espectro de artrpodos,(96) mientras que la
6-endotoxina acta sobre un grupo reducido de insectos, nemtodos, protozoarios (52,118,157) y
clulas tumorales (136,137), adems de presentar otras actividades biolgicas como el
incrementar la respuesta inmune y actuar como un coadyuvante en mamferos (135).
a-exotoxina: Esta toxina, tambin denominada lecitinasa o fosfolipasa (99), es una enzima
termolbil que se acumula durante la fase de crecimiento exponencial de algunas variedades, es
capaz de romper muchos tipos de clulas y es txica para Galleriae mellonella y la mosca
aserrada de los pinos (43). Esta protena tambin puede ser sintetizada por B. cereus (100).
0-Exotoxina (Factor Mosca): Esta es una toxina termoestable, secretada durante el crecimiento
exponencial por algunas variedades de B. thuringiensis como la serovar. thuringiensis
(145,150,151). Qumicamente, la /3-exotoxina es una adenina con un residuo de glucosa y cido
alrico (58,164). Es altamente txica para moscas y varios otros tipos de insectos (22,152).
Aunque el modo de accin de esta toxina no es muy claro, se ha demostrado que bloquea la
mitosis, e inhibe a la ARN polimerasa dependiente de ADN de clulas de mamferos y de bacterias
causando mutaciones (25). Se ha encontrado que en clulas sanguneas humanas provoca
incremento de las aberraciones cromosomales. Tambin se ha demostrado que inhibe la mitosis en
meristemos de raz, simulando el efecto de la colchicina y vinblastina (151). Por las anteriores
propiedades mutagnicas y teratognicas, su uso como insecticida no est permitido en
Norteamrica y Europa, sin embargo, s es producido y usado en Rusia (64).
Asimismo, B. thuringiensis produce enzimas extracelulares, ya que en estas residen
tambin su patogenicidad, estas enzimas daan la membrana pertrfica y facilitan el acceso de la
-endotoxina o de bacterias al epitelio del intestino, produciendo otras enzimas de tipo proteasas
que se sintetizan durante el inicio de la esporulacin y son necesarias para el completo xito del
proceso de toxicidad. Todas estas enzimas muestran en conjunto una accin de virulencia junto
con la /3-exotoxina y la 5-endotoxina (84,85,88,95).
5-Endotoxina. De las toxinas producidas por B. thuringiensis, esta es la ms importante para el
control biolgico de insectos plaga (59). Esta protena es sintetizada en forma de protoxina
durante el proceso de esporulacin dentro de la clula vegetativa y aparece como inclusin
cristalina, considerndose una caracterstica constante para las variedades de esta bacteria (28). A
esta inclusin se le adjudican algunos sinnimos, tales como cuerpo paraesporal o cristal proteico,
sin embargo, solamente la porcin activa debe ser considerada -endotoxina (23,108,127,154). A
esta parte txica se le denomina PsCI. Generalmente, las PsCI son codificadas por genes que se
localizan en megaplsmidos, pero algunas tambin se han localizado en el cromosoma bacteriano
(103).
La estructura primaria de la 5-endotoxina de B. thuringiensis vara con la codificacin del
gen, la gran mayora de estos ltimos ya han sido identificados y clasificados (87), Se ha
demostrado que los genes pueden ser transferidos en forma natural entre diferentes cepas de B.
thuringiensis. Este proceso explica la combinacin de diferentes inclusiones parasporales.
Adems, algunos de los genes han mostrado tener elementos de transposicin alguno de los cuales
pueden ser "cortados" y redistribuidos en el genoma bacterial. La estructura terciara de la
protenas vara segn las subespecies, y por otra parte, la habilidad que presenta esta bacteria para
producir sus toxinas vara de cepa en cepa y puede depender tambin de las condiciones del
cultivo (26,48,124).
La mayora de las inclusiones contienen ms de una protena; p. ej. la inclusin de B.
thuringiensis kurstaki HD-1 contiene 5 diferentes polipeptidos, tres Cryl y dos Cryll. Existen
varas interacciones complejas, incluyendo ligaduras hidrofobicas, puentes de hidrgeno, y
disulfuro que ligan a la protena junto a el cuerpo parasporal (21). Posiblemente la estructura
principal de las inclusiones sean glicoprotenas de estructura primara, adems de que esta
estructura tiene un papel muy importante en el efecto txico, porque estas toxinas de B.
trhuringiensis cuando son clonadas en K coli son generalmente equitxicas a las toxinas de las
que fueron derivadas (123).
Las ligaduras disulfuro de la protena son importantes para el mantenimiento de la
estructura parasporal. Por ejemplo., en las toxinas Cryl, el C-terminal, una cuarta parte de la
protena contiene cisterna, que usualmente son encontrados como cistina, el contenido de 1.1. a
1.9% es suficiente para 7 a 12 ligaduras disulfuro, aunque aparentemente no son necesarias para
las toxicidad en lepidpteros (6). La estructura tridimensional y domino de la toxina ha sido
explorada inmunolgicamente, las protenas Cryl y Cryll mostraron ser antigenicamente distintas.
En parte el modo de accin puede ser atribuido a una estructura diferente, ya que algunas
regiones del C-terminal son especficamente necesarias para las clulas receptoras. Mientras que la
conformacin estrucutral de la la protena se mantenga inalterada, la heterogeneidad en la
secuencia de los aminocidos puede tener poca importancia en la toxicidad (95).
Las protoxinas mayores, de aproximadamente 130-140 Kda requieren de un
procesamiento para activarse. Esta accin es mediada por el pH alcalino y las proteasas del
intestino medio del insecto, dando como resultado una toxina de 60 a 70 Kda que son derivados
del ltimo cuarto del C-terminal de la protoxina (21). La actividad de la toxina bajo condiciones
naturales ocurre como sigue: a) es solubilizada en el pH alcalino del intestino medio y b) es
procesada por proteasas especficas.
La degradacin de la protena CryIA ocurre en una secuencia de siete ordenes especificas
desde el comienzo hasta el C-terminal de la protoxina y procediendo a travs de la regin
N-tenninal. Los fragmentos producidos de C-terminal son de aproximadamente de 10 Kd, y
rpidamente proteolizados en pequeos pptidos (33). No se conoce el mecanismo exacto de

como ocurre esta desgradacin tan precisa. Las protenas resistentes producidas de B.
thuringiensis de 125 a 135 Kda son las menos estables como toxinas contra lepidpteros,
probablemente porque el fragmento del C-terminal en la formacin de la inclusin paraporal es
mucho mas estable (6).
El tamao de los fragmentos activos de protena-resistente, vara con la cepa de B.
thuringiensis. En general para las protoxinas Cryl, solamente ocurre una proteolisis limitada en la
N-terminal mientras que son removidos alrededor de 500 aminocidos del C-terminal. Por
ejemplo, en la CiylA el fragmento txico se encuentra entre los aminocidos 29-35 y 599-607
(86) en tanto que en el CryIVb se encuentra entre el aminocido 30 al 695. En contraste los Cryll,
Cryll CryIVD no sucede esto ya que aparentemente la protena se encuentra rota (163).
Dominio y toxicidad.
La toxina activada puede ser dividida en tres regiones estructurales: la regin N-terminal;
el dominio txico (aminocidos del 1 al 279); que consiste en diversas regiones hidrofbicas
conservadas; una regin conservada C-terminal (aminocidos del 461 al 695) y una regin
variable entre estas dos regiones que contiene la mayora de las diferencias entre aminocidos
(33).
MODO DE ACCION DE LAS TOXINAS CON ACCION INSECTICIDA DE

R thuringiensis.
Mecanismos de accin de la Delta-endotoxina. Los cambios estructurales en el intestino medio
de los insectos causados por la toxina de las serovaredades san diego y kurstaki de B.
thuringiensis muestran que la hinchazn causada en dicha parte del intestino, es muy semejante
en ambas cepas (128). Entre las diferencias que se han observado entre ellas, se indican las
siguientes: ausencia de lesiones de membranas y dao mi ero villar en la serovar. san diego (128).
En tanto que la serovar. kurstaki causa trastornos en el plasma, en las membranas mitocondrales
y en la membrana nuclear, as como prdida de la estructura interna de los microvellos del
intestino de los insectos lepidpteros despus de 15 min de haber sido ingerida (102).
Para explicar la causa de la hinchazn causada por la elta-endotoxina de B. thuringiensis

serovar. san diego, ha sido propuesto un modelo de lisis osmtico coloidal. Sin embargo esta
serovariedad no produce lesiones de membrana, daos moleculares y es de respuesta lenta en el
epitelio, esto hace suponer que existen mecanismos diferentes de accin para la elta-endotoxina
de este microorganismo entre variedades. Estas diferencias resultantes se deben a variaciones en
el ambiente del intestino del husped, solubilidad de la toxina Cry, estructura de la toxina e
interaccin de sta con receptores de la membrana o bicapa lipdica (53).
Despus de que una larva de insecto ingiere el cuerpo paraesporal de B. thuringiensis,
diferentes accciones pueden ocurrir. Debido a que el medio ambiente alcalino del intestino de la
mayora de las larvas es desfavorable para la germinacin y multiplicacin de esta bacteria, es ms
probable que las esporas ingeridas permanescan intactas, pero la inclusin es solubilizada y
fragmentada en porciones txicas, causando una deformacin estructural en las clulas epiteliales
del intestino desintegrando la membrana microvillar, y produciendo por consecuencia la
destruccin del intestino. Esto provoca que se paren las funciones del intestino, baje el pH del
fluido intestinal y los nutrientes sean liberados, los cuales permiten la germinacin de las esporas
de la bacteria y la multiplicacin de las clulas vegetativas (32). En estas condiciones, el
microorganismo invade los tejidos del cuerpo de la cavidad larval. Eventualmente la larva para de
comer y muere. Una invasin microbiana secundaria puede acelerar la muerte, cerrando un ciclo
de vida cuando el cadaver es consumido y la bacteria es liberada al medio ambiente como esporas.
La exacta cronologa de los eventos probablemente diera en varios insectos, dependiendo del pH
y otros parmentros del tracto intestinal (5).
Recientemente han sido propuestas tres hiptesis con respecto al modo de accin de las
toxinas de B. thuringiensis, la primera es que las toxinas de la bacteria inhiben las ATPasas de la
membrana plasmtica; la segunda indica que las toxinas del microorganismo incrementan la
permeabilidad selectiva de K+; y la tercera que las toxinas forman un poro inespecfico
(45,71,155).
ESTRATEGIAS PARA EL DESARROLLO Y MEJORAMIENTO DE EFECTIVIDAD

DE CEPAS DE & thuringuiensis.
La alta especificidad de la toxina producida por B. thuringiensis puede ser una desventaja
cuando un cultivo agrcola es atacado por diferentes tipos de insectos. Esta limitante se puede
contrarrestar de tres formas:
a) mediante el aislamiento y la seleccin de cepas con amplio espectro de huspedes,
b) por la transferencia de genes entre diferentes cepas para producir cepas nuevas con mayor
espectro insecticida, y
c) transferencia de genes a otras especies (24,73).
La seleccin de una cepa silvestre efectiva de un microorganismo entomopatgeno y la
manipulacin gentica para mejorarla, junto con los requerimientos nutricionales de la misma,
desempean un papel muy importante para el desarrollo de un insecticida microbiano.
Las estrategias generales de desarrollo de productos de segunda generacin se podran
resumir como sigue: a) la expresin del gen de delta-endotoxina de B. thuringiensis en cepas
relativamente cercanas (v.g. B. cereus, B. megaterium); b) insercin del gen de la
delta-endotoxina dentro de plantas-inhabitables epfitas o endofitas; c) insercin del gen de la
delta-endotoxina dentro de sistemas capaces de proliferar en medios acuaticos (v.g. algas
verde-azul, para controlar mosquitos); y d) insercin del gen de la delta-endotoxina dentro del
genoma de las plantas, haciendo que ellas mismas elaboren su insecticida.
La baja estabilidad de la delta-endotoxina en el medio ambiente se debe a que
diversos factores ambientales, tales como la luz solar (139) y el contenido y tipos de taninos del
follaje de los cultivos, actan negativamente sobre ella (109). Una de las posibles alternativas para
incrementar la presencia de la toxina es la clonacin del gen de esta protena en otra bacteria con
elfinde obtener microcpsulas biolgicas con la clula recombinante dndole proteccin a la
toxina (162).
DESARROLLO DE RESISTENCIA
La resistencia a los plaguicidas por los insectos ha sido considerada un impedimento en la
produccin agrcola pero no ha sido tratada como un caso econmico, en otras palabras los
agricultores empresariales prefieren gastar ms dinero en el combate de plagas resistentes,

utilizando plaguicidas qumicos que buscar alternativas.
Comparado con los agentes de control qumico, el uso de B. thuringiensis debe ser
considerado como un agente de biocontrol de bastante utilidad y seguro para utilizarse en el
manejo integral de insectos plagas (27,56,68). Esto se apoya en que el fenmeno de resistencia es
casi nulo para los insectos blanco (69,76,113,160), y adems, porque las cepas de de esta bacteria
se dispersan ampliamente e invitan a desarrollar menos resistencia de los insectos plaga (103).
Actualmente se conoce que a varias especies de insectos plaga, dentro de las cuales se
incluyen H. virescens, Leptinotarsa decemlineata, P. interpunctella y P. xylostella, les ha sido
demostrada a nivel de laboratorio su habilidad para adaptarse a las toxinas de B. thuringiensis y
desarrollar resistencia. P. xylostella se ha encontrado ampliamente resistente a nivel de campo,
por lo cual se ha propuesto la alternativa del manejo integral de plagas (114,93).
B. thuringiensis produce varias toxinas que tienen una alta resistencia pasiva a los sistemas
inmunes de los huspedes (51), aunque la literatura solamente contiene tres reportes sobre el
desarrollo de resistencia a la delta-endotoxina. Uno es el desarrollo de resistencia de hasta 100
veces ms a una formulacin comercial utilizada para la palomilla del granero P. interpunctella,
que fue observada despus de 15 generaciones (42).
Dentro de las especies de insectos blanco no todas son igualmente sensibles a las toxinas
de B. thuringiensis (PsCI), por ejemplo el gusano soldado es menos susceptible que el falso
medidor. Entre las desventajas de la exposicin de larvas de insectos a altas dosis de un toxico
est el desarrollo a la resistencia. El expresar las PsCI es considerada como una herramienta muy
til en los programas de manejo integrado de plagas (103).
Algunos investigadores han llamado la atencin acerca del desarrollo de la resistencia de
plantas modificadas genticamente (78), ya que esto prolongara la efectividad y traera como
consecuencia un desarrollo de la resistencia para PsCI; para esto se ha sugerido que las
poblaciones de insectos debern ser expuestas a una combinacin de diferentes toxinas. Otras
medidas debern ser la restriccin de la expresin de la toxina en cuanto a tiempo o limitando
stas a los rganos econmicamente importantes de la planta.
VENTAJAS Y DESVENTAJAS DEL USO DE Bacillus thuringiensis EN EL CONTROL

BIOLOGICO DE PLAGAS.
Varios factores influyen para incrementar significativamente el uso de B. thuringiensis en
el control biolgico de plagas:
a) la mayora de los insectos plaga de importancia econmica y salud humana est desarrollando
resistencia a varas clases diferentes de insecticidas qumicos utilizados contra ellos; por otra
parte, la toxina de B. thuringiensis no promueve un desarrollo rpido de resistencia.
b) el costo social asociado con el uso de insecticidas qumicos, est incrementndose debido a
daos al ambiente y salud humana; y
c) los costos directos del desarrollo y produccin de los insecticidas qumicos derivados de la
petroqumica estn en constante escalamiento.
La investigacin de B. thuringiensis se ve favorecida por tres grandes tendencias a nivel
mundial:
1) una mayor demanda para el control biolgico de insectos plagas (94,101).
2) la relativa inestabilidad en el medio ambiente de los productos de B. thuringiensis; y
3) la frecuencia de xito de actividad insecticida encontrada.
En comparacin con los compuestos qumicos sintticos.(45) El producto aplicado es de
10-50 g alrededor de 20 x 10E40 molculas por hectrea. La potencia molecular de las toxinas de
B. thuringiensis comparada con otros plaguicidas es 300 veces ms alta que los piretroides
sintticos, ya que se aplican 6 x 10E22 molculas por hectrea y 80,000 veces ms alta que los
organofosforados, de los cuales aplican 20 x 10E24 molculas por hectrea (61).
Las ventajas y desventajas del control biolgico se discuten a continuacin:

Ventajas:
a) Alta especificidad. Ejemplos: ausencia de efectos txicos en organismos no blanco y
mamferos; uso permitido hasta fechas cercanas a la cosecha de los cultivos.
b) Bajas espectativas a desarrollar resistencia en los insectos observados.
c) Adaptable a mltiples tipos de formulaciones; potencial de incorporarle a estimulantes que

incrementen el apetito, o cebos para hacerlos mas atractivos en las formulaciones contra
insectos.
d) Probabilidad de producir formulaciones ms potentes y bajar los costos de produccin a
travs de sistemas nuevos de tecnologa de fermentacin.
e) Altas probabilidades de que la cepa seleccionada y/o modificada genticamente pueda ser
utilizada como mejor control sobre el insecto plaga que la cepa silvestre de la que provino; o bien,
crear cepas de B.thuringiensis que tengan nuevos espectros de actividad contra el husped o
incrementar la actividad txica (126).
Desventajas:
a) Espectro de husped reducido.
b) Carecer de proteccin en las patentes para las cepas silvestres.
c) Se requiere un cabal tiempo de aplicacin y adems, sus efectos son mas lentos que los
insecticidas qumicos.
d) La actividad txica depende de la ingestin, por lo tanto, la actividad de alimentacin es vital
para su accin, la cual depende de las condiciones ambientales.
e) Costos relativamente ms altos comparados con los insecticidas qumicos, lo cual provoca que
su distribucin y uso est limitado.
f) Baja persistencia en el medio ambiente.
Por otra parte, los factores que afectan la viabilidad econmica del control biolgico de
insectos (145), comparados con los mtodos qumicos tradicionales dependen de las
caractersticas del insecto plaga, del agente de biocontrol, del cultivo y de los factores
socioeconmicos que se enumeran a continuacin: 1) rendimiento contra efectos de calidad, 2)
espectro de la plaga, 3) la relatividad de ser menos efectivos tcnicamente que los agentes de
control qumico, 4) riesgos, 5) precios relativos de los agentes de control y 6) costo de
implementacin. Finalmente, el costo del desarrollo de un plaguicida microbiano es menor que el
de los plaguicidas qumicos, ya que se requieren dos millones de dlares y de uno a dos aos para
su registro, mientras que para un plaguicida qumico se requieren 40 millones de dlares y siete
aos para su registro (143).
FORMULACIONES DE BIOINSECTICIDAS.
Son pocos los casos en que los insecticidas se emplean como producto qumico puro o
tcnico, sin formulacin alguna, lo ms comn es emplearlos debidamente formulados, o sea
acondicionados para que rindan la mayor efectividad en su uso. En toda formulacin
(pulverizacin o aspersin), se distinguen tres clases de componentes: el principio activo, los
disolventes y diluyentes, y los coadyuvantes.
Principio Activo El principio activo es la materia realmente eficz contra la plaga que se trata de
combatir. De los bioinsecticidas, el ms popular en la actualidad es el que se fabrica a base del
cristal proteico txico de B. thuringiensis^ 5 ).
Disolventes y Diluyentes: Estos actan como vehculos de la materia activa, y que permiten usar
el formulado tal cual o diluyndolo posteriormente en otro vehculo de aplicacin, como el agua.
Estos materiales son inertes frente a la plaga (65).
Coadyuvantes: Pueden ser materiales inertes o aquellos que potencialzan al principio activo
mejoranado su accin propia, entre estos encontramos algunas feromonas o extractos de plantas
(65).
Las ectohormonas o ms comunmente feromonas, han sido usadas para el control de
insectos, las ms valiosas son las feromonas sexuales. Estos compuestos podran ser tiles en
estudios preliminares de reconocimiento y la preparacin de insecticidas a base de
delta-endotoxina de B. thuringiensis (105).
De entre los insecticidas derivados de extractos de plantas los ms conocidos se encuentra
el de piretro, tambin llamado polvo insecticida persa o polvo de dlmata, se elabora de un
extracto de flores molidas de la planta Cryscmthemum cinerariaefolium que pertenece a la familia
matrcaria o del crisantemo, ste material causa una parlisis en la mayora de los insectos,
generalmente se utiliza en forma comercial como agente sinrgico, tiene la desventaja de que se
deteriora rpidamamente cuando es expuesto a la luz solar (131).
De la semilla de la Sabadilla sp. se obtiene un extracto que acta como veneno al ponerse
en contacto con el estomago de muchos insectos, aunque particularmente no tiene efectos con
mamferos, s causa irritacin en los ojos y en el tracto respiratorio, generalmente se usa
asperjando este polvo disuelto en agua del 5 a 20 % (54).
Durante la primera dcada del siglo XIX se utiliz jabn de aceite de pescado y ballena
para el control de insectos, recientemente se ha retomado esta tcnica utilizando detergentes en
solucin del 1 a 2% y algunos jabones, aunque se sabe que ocasionan daos foliares en algunas
plantas. Los jabones ms efectivos para el control de insectos son aquellos de 12 a 18 carbones en
cadena; el lauril (C-12) es uno de los de ms uso comn cuya fuente principal es el aceite de coco
(54).
El guishe como se le conoce en Mxico, es un producto de desecho del procesamiento de
la lechuguilla (Agave lechuguilla), esta planta contiene de 8 a 12 % en peso seco de sapogeninas,
la mayora de estas ultimas tienen propiedades de detergencia. Este producto ha sido utilizado por
algunos productores agrcolas del desierto chihuahuense del pas con varios propsitos: a) como
mejorador del suelo (materia orgnica); b) para el control de insectos-plaga, en este caso se deja
remojar en agua durante aproximadamente 12 h y se aplica por aspersin al follaje de cultivos
como el maz y; c) como nematicida aplicado al suelo en la misma forma que se hace para insectos
areos (67).
En la seleccin del material inerte o coadyuvante ms adecuada para la formulacin que se
realiza, hay que tener en cuenta principalmente la estabilidad qumica del principio activo, la
capacidad de absorcin de agua, la abrasividad del material inerte, la solubilidad y los efectos de
potencializacin (65).
Material encapsulante: En las ltimas 4 dcadas la formulacin de plaguicidas qumicos a

recibido un notable inters y recientemente la de la microencapsulacin de bioplaguicidas. Esta
ltima es una tecnologa relativamente reciente, ideal para empacar lquidos, slidos y gases en
pequeos recipientes o cpsulas. La microcpsula es en esencia una estructura que envuelve una
cantidad discreta de materia. El tamao de la cpsula depende arbitariamente del objeto a
encapsular, del material encapsulante y del proceso de elaboracin, sin embargo, se da el nombre
de microcpsula <a aquellas que solo tienen de dimensin desde micrometros hasta unos cuantos
milmetros de dimetro (62).
B. thuringiensis se encpsula en matrices de almidn, esta tcnica tiene las siguientes
ventajas: a) es ui*a carnada que permanece en la hoja, b) estimula la alimentacin y c) el almidn
es econmico. L a mayora de los formulados encapsulados son elaborados con almidn de miz.
Este material proviene de la pregelatinizacin del almidn con productos patentados tales como
Mira-gel y Mira-sperse (115,117).
Al respecto, Mxico cuenta con una tradicin milenaria en el uso del maz, ya que
culturalmente los habitantes de mesoamrica desarrollaron la nixtamalizacin del maz, ste, tiene
la propiedad de gelatinizarse con molculas que se arreglan en forma de red o matriz. La
nixtamalizacin consiste en un tratamiento alcalino del grano de maz, una coccin y molienda;
Los cambios fisicoqumicos que alteran las molculas primarias da como resultado una masa
compuesta de 80-90% de almidn pregelatinizado, y algunas modificaciones de los aminocidos
formndose compuestos nuevos como el del aminocido N-(DL-2-Amino-2-Carboxy
Etyl)-L-Lisma que le dan una mayor probabilidad de formar enrejados anistropos durante la
nixtamalizacin (13,18,34,35,90,104,120).
El mtodo ms corriente de modificacin de las sustancias protenicas naturales para dar
productos artificiales o semi-sintticos consiste en el tratamiento con formaldehdo. Este proceso
qumico produce un "endurecimiento" de las protenas por reticulacin tridimensional de sus
cadenas peptidicas. Se trata esencialmente de un proceso qumico de policondensacin (112).
El mecanismo completo de las reaciones entre las protenas y el formaldehdo se
desconoce con detalle. Se supone que la reticulacin tridimensional tiene lugar principalmente por
formacin de puentes de metileno del formaldehdo entre grupos imino de la protena:
...CO-N-..
-CO-NH-..
+ CH2O
...-CO-NH-..
CH2
...CO-N-...
+ H2O
Tambin son posibles procesos como:
...-NH2+ CH2O
...-NH-CH2OH
Seguidos de:
...-NH-CH2OH + NH2-...
..-NH-CH2-NH-...
+ H2O
Se han desarrolado formulados encapsulados de B. thuringiensis utilizando almidn de

maz, el cual es un material barato y mantiene en la matriz una humedad relativa mayor a 80%,
aunque el tiempo en que sta disminuye a un 10% es tan solo de 24 horas (50). Simultneamente
se han elaborado formulados de alta viscosidad buscando una mayor persistencia sobre la
superficie foliar de los cultivos. Se ha demostrado que la actividad insecticida de la formulacin
con agentes reolgicos no encapsulados decrece significativamente en un perodo de dos semanas
cuando se compara con los encapsulados. Esto indica una mayor persistencia de B. thuringiensis
bajo condiciones encapsuladas (116).
Un material que se encuentra en la naturaleza en forma de polmero es el alginato, este tiene
muchos usos comerciales en alimentos, farmacia, e industrias textiles; por su capacidad de formar
agregados enrejados muy estables fu probado para usos agrcolas encpsulando clulas de
hongos especficos para el control de malezas (161). A partir de esta tcnica, se desarrollaron
encapsulados de clulas microbianas en soluciones acuosas de alginato de sodio y Pyrax. Esta
solucin se gote en cloruro de calcio 0.25 M., o gluconato de caldo 0.1 M. para formar
microcpsulas esfricas. Al ser probada la sobrevivencia del microoorganismo en el medio
ambiente, se mostr que esta fu de 12 semanas(63). Posteriormente se utiliz el alginato
proveniente de aislados de Azotobacter vinelandii para formular agentes para el biocontrol de
hongos como Talaromyces flavus y Gliocladium virens, esta tcnica mejorada con manuronato
di como resultado que se encontrara una sobrevivencia de 84 das, adems se obrserv que el
alginato microbiano result ser ms barato que el comercial (39).
Estimulantes del Apetito: Una de las interacciones qumicas entre los insectos y las plantas con
significancia prctica en agricultura es sin duda la de los estimulantes del apetito, ovopositacin o
instalacin de huevecillos (142).
Las larvas de la mariposa de cola caf que se alimenta escencialmente de Stellaria spp.,
puede ser inducida a alimentarse de otras plantas al impregnar hojas con una pasta conteniendo
taninos, los cuales son uno de los constituyentes de Stellaria (79). La cucurbitacias contienen
productos txicos para muchos insectos y vertebrados, estas substancias qumicas son
clasificadas qumicamente como triterpenos tetracclicos, sin embargo estimulan el apetito del
insecto Diabrotica undecimpunctata howardi, el cual se alimenta vorazmente de la sanda
variedad Hawkesbury que contiene cantidades elevadas de estos qumicos (30).
Al probar como estimulantes del apetito a ms de 100 compuestos no alimenticios en la
superfamilia Acridoidea, se encontr que la sapogenina diosgenina y los alcaloides Hordenina y
Lobelina componentes de Schistocera spp. actan como estimulantes del apetito an en
concentraciones muy bajas (17).
Existen formulaciones para el control de lepidpteros a base de B. thuringiensis en la que
se incluyen estimulantes del apetito para insectos. De stos se han probado el follaje de maz, el
aceite de maz y un estimulante comercial del apetito llamado Coax, adems de dietas especiales
de mezclas de carbohidratos, lpidos y protenas, los resultados indican que la adicin del
fagoestimulante comercial Coax podra permitir utilizar una menor cantidad de B. thuringiensis en
la mezcla sin reducirse la mortalidad (9, 117).
Protectores de Radiacin: En general las esporas del genero Bacillus son considerablemente
ms resistentes a la luz ultravioleta que las clulas vegetativas, el dao que la luz UV ocaciona
est relacionada directamente con la alteracin en la conformacin del ADN y la aparicin de
diferentes tipos de fotoproductos, especficamente la formacin de dimeros de pirimidina (44).
por la exposicin a los rayos UV. (44). Uno de los factores que contribuyen a la resistencia de la
espora a los rayos UV es la baja cantidad de agua y el alto contenido de cido dipicolnico
depositado en sta (70).
Debido a que las formulaciones de B. thuringiensis contienen esporas e inclusiones de

protenas estas estn sujetas a un perodo de actividad que puede desaparecer rpidamente en el
ambiente, esto ha sido atribuido en parte a la sensibilidad que experimentan las esporas e
inclusiones de la bacteria a las exposiciones de luz UV (80).princialmente debido a la inactivacin
o destruccin causada en la molcula de triptofano (134), ya esta es la molcula de con absorcin
ms intensa de energa en la regin del ultravioleta de 250 nm (12).
Se han aadido compuestos cromforos como el rojo congo, cido flico y cido
para-amino-benzico en formulaciones de B. thuringiensis con fines de aumentar la persistencia
de la actividad de la delta-endotoxina en el ambiente. Estos compuestos funcionan como
protectores contra la luz solar y ms especficamente contra los rayos ultravioleta; su aplicacin a
los cultivos ha sido probada en formulados a razn de 1.0 jig/ml, los resultados muestran que el
rojo congo fu el mejor protector contra los rayos ultravioleta en un perodo de 12 das de
exposicin (50).
Tambin se han realizado pruebas de campo con protectores solares para formulaciones de
bioplaguicidas con compuestos ya comercializados Adjuvant, San-285, Melazas P/yac, Lufilm,
Tritin X-100 y ADWNP 66 y algunos polmeros sintticos que, adems de funcionar como
protectores solares, minimizan la desecacin (121). De la misma manera, se sabe que el uso de
partculas de arcilla impiden el paso de los rayos utravioleta que afectan la viabilidad de muchos
microorganismos que habitan en el suelo, de aqu la razn de utilizar este material como protector
para clulas vegetativas o esporas en aplicaciones comerciales de agentes microbianos para
biocontrol (3).
INSECTO BLANCO.
El gusano cogollero Spodoptera frugiperda {S.B. Smith) del orden: lepidoptera y familia:
noctuidae, es un insecto que parece ser nativo de Mxico y constituye la principal plaga del maz
en este pas. Se encuentra ampliamente distribuido, registrndose los mayores daos en
Michoacn, Guerrero, Morelos, Oaxaca, Veracruz, Yucatn y Quintana Roo. Ataca
principalmente al maz y al sorgo, pero tambin se ha encontrado en algunas ocasiones causando
daos de importancia econmica en otros cultivos, se han reportado ms de 60 plantas huspedes
para este organismo, entre las ms importantes tenemos: el algodonero, la caa de azcar, el
trigo, la avena, el chile, la cebolla, el camote y la papa (153).
El insecto adulto es una palomilla de color caf grisceo que mide aproximdamente 2 cm
de largo por 3.5 cm de expansin alar. Las alas anteriores son de color caf grisceo moteando
con pequeas manchas, unas ms claras y otras ms oscuras; en el ngulo apical de estas alas se
encuentra una mancha blanquecina notoria. Las alas posteriores son de color claro. El insecto
adulto es de hbitos nocturnos; durante el da permanece escondido en las grietas del suelo, y
donde es difcil localizarlo debido a que su color se confunde fcilmente con este; tambin se
puede encontrar bajo el follaje. Cada hembra deposita alededor de 1000 huevecillos, estos son de
color verde plido y de forma esfrica; son depositados en el envs de las hojas en masas de 50 a
100 huevecillos, quedando cubiertos por un material algodonoso de color blanco; su periodo de
incubacin es de 4 a 5 das. La larva es de color caf con tres bandas longitudinales de color claro
en el dorso a todo lo largo de su cuerpo, quedando stas colocadas una en la regin media dorsal
y las dos restantes en la regin latero-dorsal. La larva completamente desarrollada mide alrededor
de 3.5 cm de longitud (153).
Las larvas neonatas se alimentan juntas en el envs de la hoja en que nacieron, sin
embargo, pocos das despus se dispersan en las plantas vecinas y penetran al cogollo, donde
ocasionan el dao principal alimentndose de las hojas tiernas, las cuales al desarrollarse presentan
perforaciones (153).
El ataque de esta plaga se presenta generalmente desde que nace la planta hasta que
alcanza una altura aproximada de 5 cm. Las plantas atacadas se reconocen fcilmente por las
perforaciones en las hojas y en el cogollo, donde adems es caracterstica la presencia de
abundante excremento de las larvas, ya que stas son muy voraces. Las larva atraviesa por seis
estadios en un periodo de tres semanas, despus de lo cual se introduce en el suelo para pupar, de
donde emerge el adulto una semana mas tarde. La pupa es de color caf rojizo y tiene una
longitud de 2 cm aproximadamente. Este insecto inverna en estado de pupa en el suelo (153).
La presencia de ste insecto en el maz causa anualmente prdidas que pueden fluctuar del
10 al 90 % de la produccin en campo (153). Su combate se ha basado exclusivamente en la
aplicacin de insecticidas qumicos, sin lograrse resultados satisfactorios, en parte debido a la
habilidad de la plaga para localizar a su planta hospedera y a la relacin con la composicin de

especies vegetales asociadas a los cultivos de maz. El gusano cogollero del maz es una plaga de
diferentes cultivos en Amrica Latina (83,153). El control del gusano cogollero a base de
productos qumicos y la liberacin de insectos parsitos del huevo no ha sido del todo efectivo
(148). Se estima que con un 58 % de dao, este insecto reduce los rendimientos en 1,148 Kg en
parcelas con una densidad de 45,000 plantas por hectrea (65).
EL USO DE BIOINSECTICIDAS BASADOS EN R thuringiensis

Es un hecho que los agentes de control biolgico (bioinsecticidas) han alcanzado muy
poca incursin dentro del mercado comercial de los plaguicidas. Tomando en cuenta el total de
las ventas mundiales de plaguicidas, se estima que a los agentes de control biolgico les
correspondi menos del 1 % y en donde B. thuringiensis alcanz el 0.6 % (140). En 1980 el
mercado mundial de los productos a base de esta bacteria alcanzaron una venta de 24 millones de
dlares a nivel mundial (19).
Actualmente se producen 2,400 millones de toneladas de plaguicidas a nivel mundial,(245)
para los cuales, en 1988, el mercado mundial de productos fitosanitarios fue alrededor de 20,000
millones de dlares, de los cuales corresponde un 43.5 % para herbicidas, un 30 % para
insecticidas, un 20.5 % para fungicidas y 6 % en productos diversos (hormonas reguladoras de
crecimiento, etc.). Del total de ventas para este mercado, 64 millones de dlares correspondieron
para los bioinsecticidas a base de B. thuringiensis (140). Es importante sealar que en 1989, se
sembr en Estados Unidos un total de 28 millones de hectreas de maz (0.27 millones de Km2),
para lo cual se utilizaron 9,090 toneladas de diversos productos qumicos para el control de los
insectos plagas en esa superficie (130), razn que justifica ms la bsqueda de nuevas cepas
bioinsecticidas a base de B. thuringiensis (74).
El algodn en las regiones sureas y del oeste en E.UA. fu cultivado en una superficie de
4,700 millones de hectreas, dejando en 1990 un valor estimado de cuatro mil millones de dlares
en ganancias, mientras que el dao por insectos caus prdidas por 645 millones de dlares. En el
caso, fueron responsables particularmente los lepidpteros de las especies de Heliothis (zea y
virescens), a las cuales se les atribuyen prdidas por 216 millones de dlares (129). Otro es el
gusano rosado Pectinophora gossypiella, que caus un promedio de prdidas menor por 71
millones de dlares (148).
Productos comerciales disponibles y compaas productoras: En la tabla N" 1 se enumeran los

principales productos comerciales basados en diferentes cepas de esta bacteria, los cuales se
encuentran disponibles comercialmente a nivel mundial bajo diferentes nombres de marcas
comerciales. (64).
Bioseguridad en el uso de B. thuringiensis: Entre los costos sociales por la aplicacin de

insecticidas en general se incluyen costos de salud, de hospitalizacin y por consiguiente, prdida
de trabajos de los pacientes y daos al ambiente, reduccin de la cosecha debido a la prdida de
abejas polinizadoras; muerte de ganado, peces, pjaros y mamferos; prdida por depredadores
naturales de plagas; efectos adversos sobre la fisiologa de la planta de cosecha y desarrollo de
resistencia de plaguicidas en las poblaciones de plagas. Existen datos que indican el costo social
del uso de plaguicidas en Estados Unidos, el cual asciende a dos mil millones de dlares anuales.
Esta cantidad es ms o menos lo que se gasta en plaguicidas agrcolas (2.2 mil millones de
dlares) y alcanza el 25 % de los beneficios netos privados de 8.7 mil millones de dlares que
resultan del uso de plaguicidas. As mismo se calculan en 200 las muertes humanas por ao,
causadas por plaguicidas. (132,133).
TablaN 1. Formulaciones comerciales a partir de B. thuringiensis.

Nombre comercial
Beta exotoxina
Biotoxksybacillin
Eksotoksin
Toxobacterin
Delta endotoxina
Agritol
Bakthane
Bactospeine
Compaa
All Union Inst. Agr. Microbiol. (Rusia)

Glavmikrobioprom (Rusia)
Merck & Co. (USA)
Rohm & Hass (USA)
Roger Bellon (Francia)
Bathurin
Biospor
Biotrol BTB
Dendrobacillin
Dipel
Entocterin
Insektin
Parasporin
Sporeine
Truicide
Chemapol-Biokymia (Checo-slovakia)
Farbwerkw Hoechst (Alemania)
Nutrilite Prod. (USA)
Abbott Labs. (USA)
Grain Poe. Lab. (USA)
Libec Laboratoire (Francia)
Sandoz-Inc. (USA)
Han pasado poco ms de tres dcadas desde que se empezaron a utilizar las primeras
preparaciones comerciales de B. thuringiensis, (57) y a la fecha, la bioseguridad es una de las
ventajas principales que estos insecticidas microbianos ofrecen en relacin a los insecticidas
qumicos. Diversas razones, entre las que destacan especificidad, virulencia y potencia contra
insectos blanco, han convertido a esta bacteria en uno de los candidatos mas atractivos para el
desarrollo comercial (143).
Se han reportado casos raros de patogenicidad en mamferos por B. thuringiensis, como el
de una salpicadura accidental de Dipel-R en el ojo de un agricultor, el cual di como resultado
una lcera en la crnea; despus de un cultivo de la lesin se confirmo la presencia de B.
thuringiensis serovar. kurstaki. (146,147) As mismo, existe un reporte de una mastitis bovina
fetal causada por este microorganismo (77).
Otros reportes de bacteriemias no infecciosas, muestran la presencia de esta bacteria en
tejidos de vertebrados despus de haber sido inoculados con dosis altas de esta (89). Por otra
parte, se han encontrado efecto de daos por la administracin directa de la beta-exotoxina
disuelta en soluciones amortiguadoras,donde se ha demostrado que puede ser citotxica para 5
lneas de clulas de cultivos de mamferos, causando hemolisis de eritrocitos de mamferos
(31,156).
Dosis de aplicacin contra plagas agrcolas, forestales, mosquitos y moscas negras.

a.- Aplicaciones agrcolas:
B. thuringiensis ha sido usado con xito contra insectos que se alimentan de hojas. Las dosis
recomendadas son de 0.28 a 2.2 Kg/ha (0.25 a 2 lbs por acre), en formulaciones de polvos
humectables (145).
El plaguicida-OneR formulado con B. thuringiensis serovar. san diego cuando fue
utilizado para el combate de Plagiodera versicolora, se encontr que realmente suprime el
crecimiento del estado larval; sin embargo, se requieren repetidas aplicaciones para los adultos.
Las larvas del segundo estadio resultaron ms susceptibles que las de tercer estadio y que los
adultos de un da (10,11).
b.- Aplicaciones forestales:
En una extensa revisin efectuada en este tpico se menciona que las preparaciones
humectables de B. thuringiensis son efectivas contra los insectos plaga forestales, entre los cuales
destaca la palomilla gitana (122,124,154).
c.- Aplicaciones en plantas ornamentales:
En la agencia de proteccin del medio ambiente de los Estados Unidos han sido
registradas 124 formulaciones de B. thuringiensis que sirven para controlar hasta 15 especies de
lepidpteros y otras especies que daan plantas ornamentales. Mucho de este material es usado
para proteger del ataque de plagas a los sistemas de jardines de las carreteras estatales (145).
d- Aplicaciones contra mosquito y mosca negra:
Diferentes cepas de B. thuringiensis var. israelensis ha mostrado ser altamente activo
contra 72 especies de larvas de mosquitos y 22 especies de moscas negras. Los niveles de
aplicacin basados en polvos primarios y preparaciones de esporadelta-endotoxina secas sin diluir,
son utilizados en dosis de 1 mg/ml para mosquitos y de 0.2 mg/1 y para moscas negras (14,20,36).
Control de S. frugiperda por medio de Bioinsecticidas.

En un estudio para encontar plantas con actividad bioinsecticida contra el gusano
cogollero del maz (S. frugiperda), se realizaron bioensayos con 9 plantas a una dosis de 15 % en
peso seco en dieta artificial, los resultados mostraron que las especies de Solanun spp. pueden
reducir la poblacin hasta en un 50% a la dosis experimentada (2).
Otros investigadores obtuvieron extractos de 4 plantas diferentes, probaron tanto la fase

liquida como la slida, a partir de estos, se desarrollaron bioensayos usando como indicador
biolgico larvas neonatas de S. Jrugiperda; los resultados obtenidos mostraron que algunas larvas
perdan la capacidad de pupar, aunque el trabajo realizado no fue concluyente (144).
En otra investigacin se utilizaron los extractos de las siguientes plantas colectadas
Argemone ochroleuca y Baccharis salicifolia, de las cuales se necesitaron dos aplicaciones por
semana para el control de la plaga, en tanto que los extractos de Salpiantus macrodontus,
Covotvulus alsinoides, Ambrosia psilostachya, Franseria ambrosoides y Guazuma ulmifolia
solo necesit una aplicacin semanal para tal propsito. Sin embargo, los resultados no muestran
diferencias significativas entre tratamientos con respecto al rendimiento en grano de maz (55).
En una prueba para determinar la efectividad de varios insecticidas pertenecientes a
diferentes familias de grupos toxicolgicos para el control de gusano cogollero del maz, se
evaluaron los siguientes tratamientos en gramos de ingrediente activo/ha. (gia/ha). 1) B.
thuringiensis (MICR) 32 gia/ha; 2) Metamidofs (FA.OM) 600 gia/ha; 3) AC303630 120 gia/ha;
4) Lambda cyhalotrina (PIR) 21 gia/ha; 5) Triflumorn (RC) 96 gia/ha; 6) Clorpirifs (FH-SE)
480 gia/ha, 7) Deltametrina (PIR) 12.5 gia/ha; 8) carbofiirn (CH-MM) 750 gia/ha; 9)
cypermetrina (PIR) 60 gia/ha; Metamidofs (FA-OM) 900 gia/ha; 11)5. thuringiensis (MICR)
100 gia/ha; 12) Cloropirifs GR (EI-SE) 200 gia/ha; (13 Triflumurn (RC) 48 gia/ha, 14) L.
cyhalotrina (PIR) 21 gia/ha y 15 control sin aplicacin, se realizaron una o dos aplicaciones segn
se requiri, dependiendo de la efectividad del producto, se evalu el nivel de infestacin y cinco
das despus de la segunda aplicacin. Los resultados indicaron que la media de plantas infestadas
con gusano cogollero al inicio de los tratamientos fue de 77.8% Los productos que protegieron
eficientemente al cultivo an a los 26 das despus de la aplicacin fueron los tratamientos 4, 5,
7,9,12, 13 y 14, con una infestacin menor del 10%. Los tratamientos 3 y 6 registraron una
infestacin del 15.8 y 11.8% respectivamente. En tanto que el resto rebas el umbral econmico
regional de 20% de larvas de gusano cogollero, por lo qe requirieron de una segunda aplicacin
con el consecuente incremento en los costos de produccin (106).
En resumen, los formulados que se encuentran en el mercado hechos a base de la
delta-endotoxina de B. thuringiensis var. kurstaki (HD-1) carecen de atrayentes especficos, son
poco persistentes, algunos son encapsulados, otros son slidos y otros ms tienen
fagoestimulantes, pero el comn denominador es que su formulacin se encarece
substancialmente.
Ante este panorama la necesidad de desarrollar formulados especficos y con alta
persistencia en el agroecosistema es evidente. Por esta razn en este trabajo proponemos el uso
de la serovariedad aizawi de B. thuringiensis cepa GM-10, desechos agrcolas como el guishe
del Agave lechuguilla y harina de maz nixtamalizada para el desarrollo de nuevas
formulaciones, con el fin de ofrecer alternativas a los productores agrcolas para el control
biolgico de plagas insectiles.
MATERIAL Y METODOS
Obtencin del extracto del guishe.
El bagazo de Agave lechuguilla (guishe), se obtuvo de una procesadora de fibra de este
vegetal.
1. La muestra se prepar de la siguiente manera: el bagazo de la lechuguilla se sec a la
temperatura ambiente durante 30 das; una vz en estas condiciones, se moli en un molino Wiley
con tamiz de malla 20, se tomaron 100 g de material seco y molido para cada uno de los
siguientes procedimientos:
a) Extraccin acuosa: La muestra se coloc en un recipiente de plstico con agua suficiente para
cubrir el material, y se dejo en reposo a la temperatura ambiente durante 24 h; b)Extraccin
alcohlica: el material muestra se coloc en un extractor de reflujo continuo durante 8 h con
alcohol etlico al 98% en cantidad suficiente para cubrir el material; c) Extraccin cida: La
muestra se coloc en un extractor de reflujo continuo cubirendose con una solucin de cido
clorhdrico 0.1 M durante 4 h; d) Extraccin alcalina, se hicieron los mismos pasos que la
extraccin anterior solo que la solucin extractora fu hidrxido de sodio 0.1 M.
2. Separacin de los extractos. Una vz hecha la extraccin, a cada una de las soluciones, se
filtraron por separado con papel Watman 40 para remover pequeas partculas. El filtrado se
concentr por evaporacin hasta la formacin de un polvo, el cual se resuspendi en agua

destilada al 30 % (p/v).
3. Extraccin del compuesto activo. El mtodo empleado para obtener el compuesto activo
consisti en tomar una muestra de 5 g. del extracto alcohlico seco del guishe e hidrolizarlo con
cido clorhdrico 1.5 N durante 5 h en un extractor de reflujo continuo, se desech la fase lquida
y se separ el slido, este se lav tres veces con agua destilada,, en seguida se paso a un
extractor de reflujo continuo y se extrajo el compuesto activo con una solucin de cido
actico:acetato de etilo:acetona (2:1:10) durante 4 h, el residuo se desech y el liquido se destil
con elfinde concentrarlo, de esta manera se coloc en un cristalizador y se sec en una estufa de
circulacin forzada durante 24 h a una temperatura de 40C. El residuo se pulveriz en mortero .
Fitotoxicidad de extractos de guishe.
Se instalaron en un invernadero macetas de 1.0 Kg de capacidad, que contena suelo molido,
tamizado y fumigado con bromuro de metilo procedente de un predio agrcola. En ellas se
cultivaron plantas de algodonero var. Deltapine (Gossypium hirsutum L.G.). lechuga (.Lactuca
sativa D. L.) variedad mesa 659 y papa comercial {Solanum tuberosum D L.), los cuatrro se
sometieron a extractos alcoholicos, acuosos y alcalinos de guishe, en concentraciones de 10, 25,
50 y 100 % (pv). El diseo de tratamientos fu un factorial de 4 x 4 y un testigo con un diseo
experimental al azar con tres repeticiones, dejando 2 plantas por unidad experimental. Las
soluciones se aplicaron con un rociador para pelo despus de cuatro semanas de que las plantas
emergieron, la aplicacin se hizo uniformemente sobre la superficie foliar hasta cubrirla
totalmente, se realizaron por tratamientos subsecuentes dos veces por semana. No se aplicaron
fertilizantes, ni plaguicidas en los cultivos. El riego se hizo con una probeta aplicando una lamina
de 1.5 cm para cada uno de los tres cultivos. Se determin la presencia de plagas y
enfermedades, los cultivos mostraron una sanidad aceptable. Al transcurir 10 semanas despus de
la emergencia se procedi a cortar las plantas, secarlas y pesarlas en una balanza analtica.
Actividad insecticida de R thuringiensis cepa GM-10 contra S. frugiperda.
La cepa GM-10 de B. thuringiensis se cultiv en 100 mi de medio de cultivo basal en

matraces Erlenmeyer de 500 mi de capacidad durante 72 hrs a 25 C, el paquete celular se separ
por centrifugacin y se precipit con lactosa-acetona. El precipitado se sec en una estufa de
circulacin forzada (48). Con la mezcla de esporas-inclusiones se formularon los tratamientos en
dsis de 0, 50, 100, 250 y 500 pg/ml.
Actividad biolgica de los extractos de guishe contra S. frugiperda.

Los extractos de guishe fueron puestos en recipientes de vidrio (cristalizador) y se secaron en
una etufa de circulacin forzada durante 24 hrs a una temperatura de 60C. El residuo de cada
uno de ellos se pulverizo en mortero y con el se prepar un ensayo teniendo como insecto blanco
a S.frugiperda,se probaron 4 tratamientos y un testigo con cuatro repeticiones y un diseo
experimental al azar.
Bioensayos.
Los bioensayos de la actividad de los extractos del guishe (A. lechuguilla), y de la
delta-endotoxina de B. thuringiensis contra S. frugiperda se hicieron utilizando el mtodo de A.
Burgeijon (22).
Los extractos se administraron a los insectos mezclados en las dietas, de la siguiente
manera: La composicin de la dieta usada para cra y bioensayos de S. frugiperda, como se
nuestra a continuacin: Agua destilada 3,000.00 mi, Harina de soya 241.80 g, Germen de trigo
108.00 g, Sal Wesson's 36.00 g, Azcar 43.80 g, Para-metilhidroxibenzoato 5.40 g, Acido
srbico 3.24 g, Aureomicina 0.48 g, KOH (22 porciento) 18.00 mi, Solucin vitamnica* 12.00
mi, Cloruro de colina (15 porciento) 24.90 mi, Formaldehdo (10 porciento) 15.00 mi, Acido
actico (25 porciento) 39.90 mi, Agar-agar 34.80 g. La preparacin se efecto mezclando los
slidos y los lquidos en el medio total de agua destilada a excepcin del agar, el cual se disolvi
por separado con calor, y cuando este tuvo una temperatura de 60 C se mezclaron ambas partes,
para evitar la descomposicin de la solucin vitamnica. Una vez preparada la dieta, se le agreg
el extracto disuelto en solucin amotiguadora a pH 7 y se mezcl en una licuadora. De igual
forma se preparo el estandar HD-1S-1980 parausarse como punto de referencia.
El efecto de la exposicin de las larvas al extracto fu medida por la variable muerte; si

las larvas tratadas retardaban su crecimiento o estaban moribundas pero se movan con un
estmulo se consideraron vivas. Una vez preparada la dieta con el extracto incorporado, se
colocaron 25 larvas neonatas o primer estadio en copas individuales por tratamiento bajo
condiciones controladas: temperatura 28C2, humedad relativa, 50-60 %; fotoperodo de 12 h
Se determin la mortalidad a los 7 das posteriores a la exposicin, evalundose en porcentaje de
mortalidad.
Determinacin de la presencia de sapogeninas en el extracto de guishe.

La determinacin de estos compuestos se realiz por medio de cromatografa lquida de
alta presin (HPLC), espectrografa infraroja y ultravioleta, y resonancia magntica nuclear. Para
tal efecto se pidi la colaboracin del Departamento de Farmacia de la Universidad de Arizona en
Tucson, Estados Unidos.
Desarrollo de la Formulacin.
Cepa de Microorganismo. Las cepa de B. thuringuiensis serovar aizawai GM-10 se obtuvo de
la coleccin internacional del Laboratorio de Microbiologa Industrial y del Suelo de la Facultad
de Ciencias Biolgicas de la U.A.N.L. La bacteria fue propagada en un medio basal hasta la
formacin del cuerpo paraesporal o toxina . Posteriormente se hizo una extraccin mediante
(precipitacin con lactosa-acetona (46). De la manera mencionada previamente.
Insecto Blanco. Los bioensayos se hicieron con larvas del primer estadio del insecto S.
frugiperda obtenido del Laboratorio de Biotecnologa de la Unidad regional Universitaria de
Zonas Aridas de la Universidad Autnoma Chapingo. El insecto fue reproducido con la dieta ya
mencionada.
Coadyuvante. Como coadyuvante se utiliz el extracto alcoholico del guishe seco y molido a una
concentracin de 100 jig /g de formulado.
Material encapsulante. Se utiliz harina de maz nixtamalizada con alto contenido de almidn
(del 80 a 90%). Para la polimerizacin en fro se modific el mtodo de McGuire y Shasha (14).
Se adicionaron 10 mi de alcohol isoproplico a 100 g de harina de maz pregelatinizada, se dej
reposar la masa durante 30 mn y se pas la pasta formada por una tamiz de malla 20. El
fbrmaldehdo fu adicionado a la mezcla en concentraciones de 0.1,0.2,0.4,0.8 % (v/p).
Fagoestimulante. Como fagoestimulante se utiliz el aceite vegetal crudo de algodn (Ac) y
aceite vegetal de maz comercial (Am). Para probar cual de los dos produca un efecto de
estimulacin del apetito, se mont un experimento para estimar el porcentaje de preferencia. As,
se colocaron 10 microcpsulas conteniendo uno de los aceites en 10 cajas petri, cada una de las
cuales se dividi en cuatro secciones o reas; en dos de estas se colocaron las cpsulas con el
fagoestimulante y en una se colocaron cpsulas sin fagoestimulantes. Posteriormente, en la
seccin libre se inocularon 10 larvas neonatas de S. frugiperda, y se observ el desplazamiento
de las larvas hacia cada seccin y se contaron el nmero de larvas que ingirieron el alimento sin
cambiar de seccin. Al nmero resultante se le denomin porcentaje de preferencia.
Protectores de luz solar, se probaron tres protectores de luz solar: el rojo congo (Re), el verde
de malaquita (Vm) y el carbn vegetal (Cv), todos a una concentracin de 0.05 %. De acuerdo a
esto se hicieron tres grupos de formulados y se expusieron por 4, 8 16, 24, 32, 48, 96 h a una
lampara de rayos TJV en un cuarto obscuro. Posteriormente se efectu un bioensayo con larvas
neonatas de S. frugiperda y se determin porcentaje de sobrevivencia colocando
aproximadamente 100 grnulos del formulado en una caja petri, las microcpsulas fueron
humedecidas con agua y se dejaron reposar durante 4 horas hasta que visualmente no se apreci
exceso de humedad, entonces se colocaron 10 larvas y se dejaron comer ad libium durante 24 h,
despus esas fueron colocadas individualmente en recipientes de plstico conteniendo dieta
normal. Al transcurrir 7 das, se contaron el nmero de larvas vivas, y con ello se obtuvo el
porcentaje de sobrevivencia.
Procedimiento de Formulacin. Para preparar los microcapsulas cada mezcla se hizo con la
harina de maz incoporando el ingrediente activo a razn de 3% (p/p) (60% de espora-inclusin y
40 % de extracto de guishe), isopropanol al 10% (v/p), aceite vegetal al 0.5 % (v/p) y agua
destilada al 10% (v/p), y protector de luz solar al 0.05 % (p/p). La mezcla se dej reposar
durante 2,4, 8,16 y 24 h a la temperatura ambiente en una bolsa de plstico y posteriormente se
pas por un tamiz de malla 20. Cada tratamiento se pes antes y despus de la operacin y se
determin el porciento de humedad residual en la microcpsula por el mtodo gravimtrico.
Persistencia en el Ambiente del Formulado. Cada uno de los formulados fue colocado con un
aplicador manual de granulados en el cogollo de plantas de maz en la temporada de lluvia,
durante este ensayo se presentaron 3 dis de lluvia intermitente, al trmino de los cuales se
determin la permanencia de las microcapsulas hacindose una apreciacin visual para no destruir
las hojas de la planta.
Anlisis de la Estructura del Formulado. Con el objeto de conocer la estructura de la
microcpsula, se hicieron observaciones en el microscopio estereoscpico de luz de 40X y en el
microscopio electrnico de barrido de las microcapsulas, y verificar si estas presentaban redes
matriciales.
Prueba en Campo.
Descripcin del Area de Estudio.
Localizacin geogrfica: Este trabajo se realiz en una parcela de un productor en la granja
Esther sita en No, Dgo. Municipio de Gmez Palacio, Dgo. Localizado cartogrficamente
aproximadamente en el paralelo 25 52' 54" de latitud norte y en el meridiano 103 54' 37" de
longitud oeste, con una altitud aproximada de 1130 msnm. (SARH), el cual presenta las siguientes
caractersticas:
Clima: de acuerdo con el sistema de clasificacin de Kopen modificado por Garca (1973),
corresponde a un BWhw" (e) que indica un clima muy seco con lluvias en verano y porcentaje de
precipitacin pluvial en invierno entre 5 y 10 mm.
Temperatura: La temperatura promedio en los ltimos 20 aos es de 20.3 C y un mnimo de 5.7

C (SARH, 1994), los meses ms calurosos son de mayo a agosto con una temperatura promedio
de 23 C y los ms fros son en diciembre y enero con una temperatura promedio de 15 C.
Precipitacin pluvial: El promedio aproximado en los ltimos 20 aos es de 240 mm, fluctuando
entre 160 mm. en aos secos, hasta 430 mm. en aos hmedos, los meses ms lluviosos son en
jumo con 54 mm., julio con 125 mm., agosto con 46 mm. y septimebre con 36 mm.
Humedad relativa: La humedad relativa varia de acuerdo con las estaciones del ao,
encontrndose para cada una los valores porcentuales siguientes: primavera 32, verano 45, otoo
52 e invierno 45.
Suelos: Los suelos predominantes en el rea son de origen aluvil predominando los xerosoles
clcicos y lvicos, as como yermosoles de igual tipo, los cuales son caractersticos de las zonas
ridas y semiridas. Estos presentan ms de 100 cm de profundidad que muestran horizontes
A-ocrco y B-arglico bien definidos, con estructura moderadamente desarrollada en forma de
bloques y bloques subangulares, presenta adems, buen drenaje interno, considerndose
ligeramente salinos con una conductividad elctrica de 2.0 msiems y un pH de 7.9. el contenido de
materia orgnica es 0.8 % y su capacidad de intercambio catinico total es de 12.8 meq/100 g de
suelo.
Agua para riego: El agua que se utiliz fue la del pozo profundo que se encuentra en dicha
localidad cuyas caractersticas son de agua de buena calidad para el riego.
Semilla de maz: En la realizacin el presente trabajo se utilizo el hbrido de maz H-507, el cual
fue adquirido en la Productora Nacional de Semillas (PRONASE).
Procedimiento Experimental.
Diseo de tratamientos y experimental: el diseo de tratamientos fUe un factorial de 3 x 2 x 2
- 3 protectores solares x 2 niveles de guishe (0 y 100 pg/ml) x 2 niveles de aceite comestible (0 y
0.05 % p/p) y dos testigos (testigo sin protector, sin aceite y sin guishe, y un testigo absoluto),
dando un total de 14 tratamientos que se muestran en la tabla 2 , en un diseo experimental de
bloques al azar, con cuatro repeticiones.
Tabla N 2. Relacin de tratamientos de tres factores:

protectores de luz solar, coadyuvante y atrayente.
como componentes del formulado.
Tratamiento
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
Protector
CA
CA
CA
CA
VM
VM
VM
VM
RC
RC
RC
RC
Guishe
Maz
G
G
S
S
G
G
S
A
N
A
N
A
N
A
N
A
N
A
N
s
G
G
S
TS
TA
En donde:
CA es carbn vegetal
VM es verde de malaquita
RC es rojo congo
G es con guishe
S es sin guishe
A es con aceite de maz
N es sin aceite de maz.
TS es el testigo sin guishe y sin aceite de maz
TA es el testigo absoluto.
Tamao de la unidad experimental: El tamao de la parcela fu de 5 hileras con una distancia
entre hileras de 90 cm. y una longitud de 10 m., la parcela til fue de 3 hileras centrales con una
longitud de 6 m. dejando 2 m. al principio y alfinalpara evitar efectos de orilla. En total el

tamao fu de 16.2 m2.
Establecimiento del experimento: El barbecho se realiz durante enero de 1993, se nivel el
terreno con una escrepa y se surc a 90 cm entre cada uno de ellos, se di un riego de presiembra
el 15 de abril de 1993 y se procedi a sembrar el 27 de ese mismo mes con una sembradora en
tractor. Despus de emergidas las plantillas, se hizo un aclareo dejando una distancia entre
plantas de 25 cm y al mismo tiempo se hizo una escarda para romper la costra formada, se
realizaron dos deshierbes manuales con azadn para eliminar malezas.
Cosecha:. Una vez que las plantas estuvieron suficientemente maduras y secas el 29 de julio, se
procedi a cosecharlas manualmente. Las plantas cosechadas se introdujeron en costales
previamente etiquetados por tratamiento. Posteriormente a la cosecha se dejaron secar al aire para
proceder al desgrane y limpieza manual del grano. El contenido de humedad del grano al pesarse
fue de 2.5%.
Rendimiento por parcela: conforme se determin el peso por parcela til y se hizo la
transformacin en kilogramos por hectrea para su anlisis correspondiente.
Anlisis Estadstico.
Los resultados de ensayos, fueron sometidos a un anlisis de varianza con el
procedimiento ANOVA del paquete computacional SAS (149), y prueba de rango mltiple de
Duncan.
RESULTADOS
Fitotoxicidad de los extractos del guishe.
La adicin de extractos de guishe a las plantas analizadas no produjo un efecto
significativo (P>F 0.05) sobre el rendimiento en peso seco (g) de estas ltimas (tabla 3),
indicando que esos compuestos no mostraron tener efectos alelopticos o fitotxicos.
Tabla No. 3. Efecto de extractos de guishe sobre el peso de Gossypium hirsitum L. G.,
Lactuca sativa D. L., y Solanum tuberosum L. G.
TIPO
DE
PLANTA
TIPO
DE
EXTRACCION
Concentracin %
1.5
0.75
0.3
ACUOSA
0.454a* 0.523a 0.516a 0.573a
ALCOHOLICA
0.534a 0.484a 0.519a 0.393a
ALGODON ACIDA
0.479a 0.566a 0.478a 0.497a
ALCALINA
0.434a 0.540a 0.482a 0.536a
CONTROL
0.540a CV=19.3 DMS=0.217
ACUOSA
ALCOHOLICA
LECHUGA ACIDA
ALCALINA
CONTROL
PAPA
ACUOSA
ALCOHOLICA
ACIDA
ALCALINA
CONTROL
3.904a
3.821a
3.543a
4.751a
3.409a
4.834a 3.760a 4.173a

4.731a 3.247a 4.044a
4.060a 4.299a 3.468a
4.385a 4.445a 3.823a
CV=25.69 DMS=2.333
7.743a 8.322a 7.615a 7.443a

5.895a 8.653a 8.410a 8.854a
7.736a 8.373a 7.424a 7.216a
8.435a 7.346a 7.043a 8.111a
7.885a CV= 17.57 DMS=3.055
*: Agrupacin de Duncan, letras iguales son estadsticamente similares.

Actividad de B. thuringiensis cepa GM-10 contra S. frugiperda.
En los resultados del ensayo de la actividad de la toxina de este microorganismo contra
S. frugiperda, se obsev que el tratamiento que mostr una mayor mortalidad fu el de 500 pg
de la mezcla de esporas-inclusiones, donde se obtuvo un 100 % de mortalidad del insecto a un
nivel de P>F 0.01, con un aceptable coeficiente de variacin de 8.3 % (tabla 4).
Para determinar la dosis letal de la bacteria se realiz una prueba de bondad de ajuste entre
la probabilidad de mortalidad en porciento contra dosis (anlisis Probit), utilizando para este fin el
paquete computacional SAS, los resultados obtenidos se muestran en la tabla N 5 , en donde, se
observa que la DLso corresponde a 83.71 ng/ml, en tanto que la DL90 corresponde a 300 |ig/ml.
Tabla 4 . Actividad de la cepa GM-10 de

B. thuringiensis, contra S. frugiperda. en
porciento de mortalidad.
Dosis Rep. Rep. Rep. Media Agrup.
Duncan
I
n
ni
Hg/ml
500
100
100
250
100
50
98
73
50
30
82
65
87
60
93.3
80.6
58.3
28
36
0
31.3
0
A
B
C
D
E
etras iguales son estadsticamente similares.
Actividad de B. thuringiensis cepa GM-10 ms extracto de guishe contra S. frugiperda:

El extracto del guishe por si solo mostr una actividad insecticida del 20 % de mortalidad
contra el insecto blanco (tabla 6), sin embargo, al adicionarlo al complejo espora-inclusin de B.
thuringiensis, se demostr un marcado efecto sinrgico como se puede apreciar en la misma
tabla.
Con los resultados anteriores se determinaron las dosis letales, mediante un anlisis probit.
Los resultados obtenidos de este procedimiento se encuentran en la tabla N 7. en el se observa
que el valor de la LDso corresponde a 140 jig/ml, en tanto que el valor de la LD90 es de 236
Hg/ml.
Tabla N 5. Valores de probabilidad de mortalidad de

B. thuringiensis cepa GM-10, contra
S.frugiperda con
lmites de confianza al 95% .
PROBABILIDAD DE DOSIS LIMITE
LIMITE
MORTALIDAD
Hg/ml INFERIOR SUPERIOR
0.01
8.23
0.01
26.23
0.05
16.23
23.32
36.17
0.1
0.2
0.3
49.62
65.03
0.4
0.5
0.15
0.51
40.12
50.74
2.1
5.7
12.93
68.51
86.99
110.16
145.21
212.38
26.32
0.6
83.71
107.78
0.7
141.22
0.8
0.9
193.77
300.47
78.16
114.48
885.25
167.04
3,366
48.27
376.93
Tabla N 6. Actividad de B. thuringiensis cepa GM-10

mas extracto alcohlico de guishe contra S. frugiperda.
Hg/ml Hg/ml Rep Rep Rep Media Agrup.
Bt
II
ni
Trat Duncan
Guishe I
A
500
100 100 100 100 100
250
100
100
100
100
78
100
90
100
60
100
76
A
AB
50
100
59
20
0
100
0
60
27
72
0
0
45
20
15
C
D
letras iguales son estadsticamente similares
Tabla N 7. Valores de probabilidad de mortalidad para

la mezcla del complejo espora-inclusin de
B. thuringiensis ms el extracto alcohlico
de guishe contra S. frugiperda.
Probabilidad
de mortalidad
0.01
0.05
0.10
0.20
0.30
0.40
0.50
0.60
0.70
0.80
0.90
0.99
Lmites de confianza al 95%

Dosis
Bajo
Superior
54.5
71.9
83.4
99.7
113.5
126.7
140.5
155.7
173.9
197.8
236.6
361.9
18.4
32.1
43.1
61.2
78.1
95.2
112.5
130.0
147.4
166.5
192.4
261.2
78.8
95.6
106.2
121.5
135.0
149.3
166.9
191.0
226.9
284.9
400.2
930.8
Ingredientes del formulado.

a). Material encapsulante. Se analizaron la harina de maz pregelatinizada (Mp), harina de maz
cruda (Me) y harina de maz nixtamalizada (Mn), se observ que la harina de maz crudo no se
gelatinizaba en fro al agregar el isopropanol, la harina de maz pregelatinizado (tipo mazena) si
form una masa moldeable pero al secar form cpsulas muy duras, difcil de humedecer y no
tenan adherencia sobre la superficie de hojas vegetales; mientras que, la harina de maz
nixtamalizado, form microcpsulas que fueron fcilmente moldeables, adherentes e
higroscpicas. Los resultados del porcentaje de humedad residual en las microcpsulas en funcin
del tiempo de secado y la relacin de formaldehdo y tipo de secado se encuentran en la tabla N
8. En l se puede observar que despus de 24 h el porcentaje de prdida de humedad es de 57 %,
es decir que se tiene 43 % de humedad residual a 24 horas despus de elaboradas las cpsulas.
Tabla N 8. Prueba de Rango Mltiple, agrupacin de Duncan en

la variable tiempo de secado de las microcpsulas,
en relacin con el porcentaje de prdida de humedad.
Agrupacin de
Medias
% de humedad
Chinean
TIEMPO
horas
57.226
16
24
54.788
16
16
42.808
16
42.053
16
Medias con la misma letra son estadsticamente similares.

De acuerdo con los resultados del anlisis de varianza, se puede observar que existen dos
grupos de porcentaje de prdida de humedad, correspondientes al grupo A: 24 h con 57.2 % de
prdida de humedad y 16 h con 54.7 % ; y el grupo B: de 8 h con 42.8 % y 4 h con 42.0 % ..
En cuanto a la forma del secado, entre el tratamiento al aire y en la estufa, no se mostraron
diferencias significativas P(= 0.98). En cuanto al porcentaje de formaldehdo utilizado como
endurecedor de la microcpsula mostr ser significativo P(=0.029), lo que indica que es posible
utilizar el nivel ms bajo de 0.1 % (v/p) de este reactivo.
>). Ensayo de Fagoestimulante. Los resultados del ensayo con aceite de maz como
fagoestimulante se encuentran en la tabla N 9, en donde se puede apreciar que en base a la
preferencia por el aceite de maz crudo (Ac) Mediante la prueba de X2 se probo la hiptesis de
preferencia por Ac. En este caso X2o= 12.542 y X^O.OS, 2)= 5.9915, se rechaza la hiptesis de
preferencia por Ac de que Pi= 0.59 y se infiere que el experimento no es concluyente
c). Protectores de Luz solar. Se probaron los colorantes verde de malaquita (Vm), rojo congo
(Re) y carbn vegetal (Cv), cuyo resultado del ensayo con stos, se encuentran en las tablas N
10, y II-
c). Protectores de Luz solar. Se probaron los colorantes verde de malaquita (Vm), rojo congo
(Re) y cabn vegetal (Cv), cuyo resultado del ensayo con stos, se encuentran en las tablas N
10, y 11Tabla N 9. Fagoestimulacin con dos aceites comestibles, sobre
la preferencia hacia uno de ellos, con larvas
neonatas de S. frugiperda
Tratamientos
I
Repeticiones
II
III
IV
% de preferencia
Aceite crudo
78
56
40
62
Aceite de maz
22
44
60
38
Tabla N 10. Prueba de rango mltiple. Agrupacin de Duncan de

la variable porciento de actividad, para cada
tipo de protector solar.
Agrupacin de Duncan
Media
PROT
78.429
21
Vm
70.286
21
Re
45.857
21
Cv
Medias con la misma letra son estadsticamente similares
c) Protectores de Luz solar. Se probaron los colorantes verde de malaquita (Vm), rojo congo
(Re) y carbn vegetal (Cv), cuyo resultado del ensayo con stos, se encuentran en las tablas N
10, y 11.
Tabla N 11. Prueba de rango mltiple de la variable tiempo de

exposicin a los rayos UV. contra porcentaje de
sobrevivencia de larvas neonatas de S. jrugiperda
Agrupacin de Duncan
Media
% de sobv.
TIEMPO
horas
100.00
96.22
85.22
71.55
16
59.00
24
51.00
32
46.77
48
44.22
96
Medias con la misma letra son estadsticamente similares.

d). Ensayo de Persistencia en el Medio Ambiente. Las microcpsulas humedecidas pudieron
permanecer en el portaobjetos invertido hasta por un perodo mayor de 12 das lo que indica que
el formulado tena propiedades adhesivas aceptables con lafinalidadde ser utilizado en superficies
do rugosas.
Al colocar el formulado en el cogollo de la planta, y permanecer durante tres das de lluvia
intermitente, se pudo apreciar que hay una pequea prdida del material, aunque ste por ser muy
pequeo (no mayor del 15 %), no represent una cantidad significativa, lo cual indica que sus
propiedades adherentes en la superficie foliar del cultivo de maz es bastante aceptable.
e) Estructura de las Microcpsulas: Estas estructuras formaron redes matriciales, con una
superficie irregular caracterstica de una masa gelatinizada. En observaciones al microscopio
electrnico de barrido se demostr que las microcpsulas posean poros y que las inclusiones de
B. thuringiensis quedaban atrapadas en el interior (Fig. 2 - 6).
f) presencia de sapogeninas en el extracto de guishe: Se demostr la presencia de estos

compuestos en el extracto alcohlico. El anlisis de la estructura qumica revel una familia de
sapogeninas esteroidales que correspondi a la de la esmilagienina (Fig. 7.)
PRUEBA EN CAMPO.
De acuerdo con el resultado del anlisis de varianza de la variable dependiente poblacion
larvaria de S. jrugiperda,
despus de la aplicacin del bioinsectida, se muestra una diferencia
altamente significativa de los tratamientos Pr>0.0001,

Fu necesario hacer un ajuste por mnimos cuadrados entre la poblacin inicial y la final
del insecto blanco debido a que bajo condiciones naturales en el campo, existe la probabilidad de
encontrar valores muy diferentes an en plantas contiguas, adems de que los hbitos canbales
del gusano cogoero, hacen ms difcil de interpretar los datos obtenidos in situ. En la tabla N 12
se muestran los valores ajustados de antes (X) y despus (Y) de la aplicacin de los diferentes
formulados del bioinsecticida, en ella podemos observar que el valor ms bajo de la poblacin
ajustada correspondio a 17.25 larvas por tratamiento (lv/tr) antes de la aplicacin AA y para
despus de la aplicacin DA del mismo tratamiento correspondi a 1.75 lv/tr, mientras que para la
poblacin mas grande fu de 34.75 lv/tr AA y 5.25 lv/tr DA; en tanto que el testigo tuvo 19.25
lv/tr AA y 14.5 DA, lo que da una clara muestra del efecto de la aplicacin del bioinsecticida
sobre las poblaciones de S. jrugiperda en el cultivo del maz.
Tabla N 12.
TRAT
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
Valores ajustados por el mtodo de mnimos cuadrados,

de las poblaciones larvarias de S. frugiperda antes y
despus de aplicado el bioinsectida.
Despus
Media
DS
9.2
8.5
4.0
3.7
4.0
2.2
1.7
5.2
2.0
3.5
3.7
3.5
4.5
14.5
7.3
2.3
2.7
1.7
1.6
0.5
0.5
2.2
1.4
2.3
1.5
1.7
2.3
4.5
Antes
Media
DS
21.5
20.0
18.2
20.7
27.2
30.0
17.2
34.7
21.7
21.2
34.5
22.0
26.5
19.2
12.7
8.1
8.0
3.2
12.8
22.3
4.5
13.7
10.2
14.9
17.5
9.3
9.4
11.2
De acuerdo con la tabla N 13. donde se muestran el efecto en el rendimiento en grano de

maz, por la aplicacin de diferentes formulados, se aprecia que el valor superior del rendimiento
con una media de 3211.8 kg/ha correspondi al tratamiento CAGN, es decir aquel que contiene
como protector solar el carbn vegetal, el extracto alcohlico de guishe y sin el aceite de maz
comestible como atrayente, en tanto que el valor ms bajo correspondi al testigo absoluto TA
con un valor medio de 1083.2 kg/ha. Los valores obtenidos en campo fueron sometido aun
anlisis de varianza de la aportacin por grupo a la suma de cuadrados, que muestra que no hubo
diferencias significativas entre bloques, mientras que si mostr diferencias altamente significativas
Pr> 0.0001 entre tratamientos, los cuales en prueba de rango mltiple de Duncan, mostr la
agrupacin que se encuentra en la tabla N 14, en ella se aprecian tres grupos de medias desde
3211.8 kg/ha hasta 2440 kg/ha, el segundo grupo lo constituye la media del tratamiento CASN,
es decir aquel que tiene carbn vegetal como protector, sin guishe y sin atrayente; el tercer grupo
es el la media del testigo absoluto correspondiente a 1083.2 kg/ha. Los tratamientos CAGN,
RCGA, VMSA, CAGA, CAGA, CASA, RCSA, VMSN, superaron al testigo con el tratamiento
correspondiente a TS es decir aquel que tenia la toxina de B. thuringiensis, pero que no contena
protector solar, extracto alcohlico de guishe, ni aceite vegetal como atrayente. El testigo
absoluto, con un valor medio de 1083.2 kg/ha, fu superado por los tratamientos. Aparentemente
no hay efecto de los protectores ni del atrayente, sin embargo de acuerdo con el anlisis de
varianza del factorial en prueba, segn se muestra en el cuadro N 15 se encontr significancia en
el factor Atrayente con un Pr > 0.0409, mientras que para Protector solar x Coadyuvante es de Pr
>0.0032.
Tabla N 13. Efecto de la aplicacin de la aplicacin de diferentes
formulados de bioinsecticida sobre el rendimiento de maz
en Kg/ha.
Tratamiento
Repeticiones
i
CAGA
CAGN
CASA
CASN
VMGA
VMGN
VMS A
VMSN
RCGA
RCGN
RCSA
RCSN
TS
TA
2243 2810
3215 2880
3014 2640 2870
2580 1670
2338 1962
2390 2604
2670 3335
3282 2940
3085 3484
2770 2787
2487 3421
2590 2739
2996 2645
1905 672
IV
3780 2806
3648 3104
3190
2727 2160
3096 2364
2240 2783
3216 2940
2656 2286
3260 3016
2770 2670
2849 2930
2390 2770
2770 2840
796
960
Tabla N 14. Prueba de Rango Mltiple y agrupacin de Duncan del

efecto en el rendimiento de maz debido a la aplicacin
de diferentes formulados de bioinsecticida.
Agrupacin de Duncan
A
A
BA
BA
BA
BA
BAC
BAC
BAC
BAC
BC
BC
C
D
Media
3211.8
3211.3
3040.3
2959.8
2928.5
2921.8
2791.0
2767.8
2749.3
2622.3
2504.3
2440.0
2284.3
1083.2
TRAT
CAGN
RCGA
VMSA
CAGA
CASA
RCSA
VMSN
TS
RCGN
RCSN
VMGN
VMGA
CASN
TA
alfe = 0.05 GL= 39 CME= 133147.2
Tabla N 15.
Aportacin a la suma de cuadrados de los factores

Protector (PROT), Caodyuvante (COAD), atrayente
(ATRA) e interacciones de primer orden.
Fuente
REP
PROT
COAD
ATRA
PROT*COAD
PROT* ATRA
COAD* ATRA
GL
Suma de
Cuadrados
cuadrados
medios
3
2
1
1
2
2
1
382327.729
305492.542
79462.6870
597417.187
1799980.12
170550.125
365577.521
127442.576
152746.271
79462.687
597417.187
899990.062
85275.062
365577.521
F Cale Pr > F
0.96 0.4215
1.15 0.3274
0.60 0.4439
4.51 0.0409
6.79 0.0032
0.64 0.5315
2.76 0.1056
DISCUSION
Los resultados del experimento para determinar si la aplicacin de extractos de guishe podan
presentar efectos alelopticos o fitotxicos, nos indic que no se aprecia efecto en el rendimiento
en masa seca a una P>F de 0.5 sobre plantas de algodonero, lechuga y papa. Por lo que se puede
inferir que la adicin de esos extractos no mostraron tener efectos alelopticos o fitotxicos en
ninguno de las plantas estudiadas. Hay que aclarar, que el hecho de que no se encontrara
alelopata con los extractos no indica de ninguna manera que sta se pueda presentar cuando
alguna de las plantas blanco se encuentre coahabitando con el A. lechuguilla en condiciones
naturales.
La dosis de espora-inclusin de B. thuringiensis que mostr una mayor mortalidad contra
S.frugiperda fu el de 500 ng, a un nivel de P>F 0.01, con un aceptable coeficiente de variacin
de 8.3 % . La DLsoobtenida por anlisis probit en el paquete SAS correspondi a 83.71 (ig/ml
con un intervalo de confianza de 26.3 - 145.21 jig/ml; en tanto que la DL90 fu de 300 (ig/ml con
un intervalo de confianza de 167.0 - 3366 ig/ml, esta ltima estimacin queda fuera del rango de
estudio, por lo que puede dar origen a errores de sobrestimacin en cuanto a tomar esta dosis
para posibles usos en aplicaciones en campo, ya que el factor de heterogeneidad estimado fue
H=8.12, el cual se considera aceptable en los lmites superiores, es posible que este valor se
debiera a factores de manejo tanto de la espora-inclusin como a la dilusin en la dieta y ms an
a factores escondidos de variabilidad gentica del insecto blanco.
De acuerdo con el efecto de la mezcla del complejo espora-inclusin de B. thuringuiensis
ms el extracto alcohlico de guishe contra S. frugipeda se puede inferir que el extracto del
guishe no parece tener gran actividad (alrededor del 20 % de mortalidad), pero adicionado al
complejo espora-inclusin de B. thuringiensis, ste tiene un efecto sinrgico que debe ser
estudiado cuidadosamente con otras cepas y otros insectos. La DLso correspondi a 140 ng/ml
del complejo espora-inclusin con extracto alcohlico de guishe, a una proporcin de 100 ^g de
espora-inclusin + 100 |g del extracto alcohlico del guishe con un intervalo de confianza de
112.58 a 166.97 jig/ml de la mezcla espor-inclusin + extracto de guishe, en cuanto alaDL9<>
estimada por anlisis probit a 236.61 con un intervalo de confianza de 192.43 a 400.25 ig/ml de
is mezcla mencionada arriba. En cuanto al factor de heterogenidad ste fu estimado en H=4.48,

valor que nos indica que no hubo factores externos que influyeran en los datos estimados por este
tipo de anlisis, adems de que los valores estimados no quedan fuera del rango de estudio, lo que
nos da seguridad en cuanto a posibles usos en ensayos en campo.
Estudios realizados con otra sapogenina (la diosgenina) muestran que sta acta como
fagoestimulante, aunque tanto la diosgenina como la sapogenina del guishe (esmilagenina) son de
estructura esteroidal, cabe la posibldad de que los mecanismos de accin en insecto sean
diferentes, ya que no se menciona que la diosgenina tenga efectos sinrgicos.
Una observacin adicional fue de que el extracto alcohlico de guishe parece tener una
fuerte adhesividad sobre la superficie foliar de los cultivos estudiados, ya que se encontraron
residuos de ste en la superficie foliar despus de 10 das de haber sido aplicado.
La confirmacin de la estructura qumica de este compuesto, muestra que se trata de una
familia de sapogeninas con propiedades detergentes, lo que le confiere la propiedad de disminuir
la tensin superficial y con ello, al estar en el formulado, permite tener una mayor adheriencia a la
superficie foliar de los cultivos.
Algunos extractos de plantas ensayados que han sido analizados para encontrar actividad
insecticida contra plagas agrcolas han sido utilizados como agentes sinrgicos, ms que como
agentes de control, an cuando stos hayan mostrado tener este tipo de actividad (54,67,131); en
el caso del extracto alcohlico del guishe, nosotros consideramos que por las propiedades de
superficie que ste pueda tener, debe ser utilizado ms como coadyuvante que como insecticida.
Como material encapsulante de los tres materiales probados maz pregelatinizado Mp,
maz crudo y molido Me y maz nixtamalizado Mn, se observ que la harina de maz cruda no se
gelatiniza al agregar isopropanol, ya que no forma una masa moldeable, es posible que la falta de
un tratamiento con lcali y la coccin influyan directamente sobre la formacin del material
gelatinizado y los cambiosfisicoqumicosque este procedimiento involucra, como la alteracin de
las molculas primarias en almidn pregelatinizado y algunas modificaciones en los aminocidos
que le dan probabilidades de enrejados anistropos (13,34,35,90,104,120).
Por otra parte la harina de maz pregelatinizado (tipo maizena) si forma una masa
gelainizable pero al secar forma cpsulas muy duras, difcil de humedecer y no tienen adherencia
sobre la superficie de hojas vegetales.
En tanto que, la harina de maz nixtamalizada forma microcpsulas
las que son
fcilmente moldeables, adherentes e higroscpicas, esta propiedad se debe a la pregelatinizacin

dlos almidones y protenas del maz y a su proceso de hidrlisis alcalina.
El ensayo en portaobjetos indic que las microcpsulas tienen adherencia a la superficie
del portaobjetos, cuando este ltimo se encuentra humedecido con agua, el ensayo en hojas de
maz mostr la misma caracterstica. Una observacin hecha en microscopio estereoscpico nos
mostr que la microcpsula sufre una alteracin en su forma, ya que la superficie de la cpsula en
contacto con el portaobjetos adopta la forma de esta ltima. Por otra parte, las microcpsulas no
se solubilizan en agua, aunque hay que aducir, que sta pudiera presentarse en forma coloidal.
En cuanto a las observaciones de las cpsulas hechas en microscopio electrnico de
barrido, nos indic que el grado de reticulacin no fu muy alto, ya que se forman poros que
permiten la difusin de liqudos o gases con el exterior de la cpsula, sto tiene importancia, ya
que a medida que aumenta la reticulacin la solvatacin es insuficiente (112). Por tal motivo, en
lo sucesivo se utiliz nicamente en la formulacin harina de maz nixtamalizada (Mn).
Una vez seleccionada la harina de maz nixtamalizada las pruebas efectuadas con ella nos
permiti efectuar algunas pruebas adicionales como la de la prdida de humedad en funcin del
tiempo, los resultados del anlisis de varianza nos indican que existen dos grupos de porcentaje de
humedad, correspondientes al grupo A: 24 h con 57.2 % de prdida de humedad y 16 h con 54.7
%; y el grupo B: de 8 h con 42.8 % y 4 h con 42.0 % , sto indica que la cpsula tiene la
propiedad de aumentar hasta el doble de su peso en base seca y por tener el espacio poroso
suficiente para soportar la incorporacin de un lquido en su interior.
En tanto que el nivel de formaldehdo utilizado como endurecedor de la
microcpsula y protector contra el ataque microbiolgico a la cpsula para los niveles 0.1, 0.2, 0,4
y 0.8 mostr no ser significativo a un nivel de P>0.01, lo que nos indica que es posible utilizar el
nivel ms bajo de formaldehdo 0.1 % de este reactivo. El coeficiente de variacin obtenido para
todo este experimento fue de 11 % , valor que podemos considerar aceptable por tratarse de un
material heterogneo y de tamao variable.
De los resultados del ensayo con aceite de maz como fagoestimulante se puede apreciar
que en base a la preferencia por el aceite de maz crudo (Ac), la proporcin estimada por Ac se
estima en cada repeticin mediante 0.78, 0.56, 0.40 y 0.62. El promedio aritmtico de estos
valores es 0.59. Mediante la prueba de X2 se puede probar la hiptesis de que la proporcin de
preferencia por Ac en cada repeticin es Pi=0.59 para i= 1, 2, 3, 4. En general la prueba establece
que el criterio de rechazo de Ho con un nivel de significancia es : Rechazar Ho s X2 es igual o
mayor que X2, gl. En este caso X3o= 12.542 y X2(0.05, 2)= 5.9915, se rechaza la hiptesis de
preferencia por Ac de que Pi= 0.59 para i=l,2,3,4. y se infiere que el experimento no es
concluyente. Estos resultados no difieren de los encontrados por Bartelt y col en 1990, por lo que
fu posible seleccionar para futuras formulaciones al aceite de maz comercial Am, por ser ste de
fcil obtencin y de bajo precio en el mercado.
Hay que sealar que la adicin de el extracto alcohlico de A. lechuguilla est formado
por la sopogenina esmilagenina, la cual tiene estructura esteroidal, de la misma manera que la
hordenina, lobelina y diosgenina, estas tres ltimas tienen propiedades fagoestimulantes en
diversas especies de insectos (17) y no sera nada remoto que la esmilagenina pudiera actuar de la
misma forma.
En la seleccin de un compuesto cromgeno capaz de proteger a la toxina de B.
thuringieneis de entre los compuestos que probamos se observa que existen diferencias altamente
significativas entre tratamientos (protectores de luz solar) y entre el tiempo de exposicin y % de
sobrevivencia. En el primer caso el orden de importancia es Verde de Malaquita (Vm) con 78%
de sobrevivencia en promedio, Rojo Congo (Re) con 70 % de sobreviviencia en promedio y
Carbn Vegetal (Cv) con 45 % de sobrevivencia en promedio.
En la seleccin de un bloqueador solar, pensamos que el verde de malaquita rene las
caractersticas apropiadas para el objetivo planteado, ya que este compuesto contiene electrones
de valencia que pueden ser excitados a niveles de energa ms altos, que desaparece a travs de
algunos de los diferentes procesos de relajacin (12). Por otra parte la proteccin que recibe la
espora por este compuesto, es posible que aumente su capacidad de resistencia en el medio
102112264
ambiente, ya que en la espora el dao ocacionado por la accin de la luz UV esta relacionado
directamente con la formacin de dimeros de piridina, en nuestro estudio no encontramos indicios
de que pudieran presentarse cambios genticos visibles (3,12,70,80,134).
Despus de la aplicacin de los diferentes tratamientos del bioinsectida en la prueba de
campo, se muestra una diferencia altamente significativa de los tratamientos PrXJ.0001. Es
necesario aclarar que se hizo un ajuste por mnimos cuadrados entre la poblacin inicial y la final
debido a que bajo condiciones naturales en el campo, existe la probabilidad de encontrar valores
muy diferentes an en plantas contiguas, adems de que los hbitos canbales del gusano
cogollero, hacen ms difcil de interpretar los datos obtenidos in situ.
De acuerdo con los resultados del rendimiento en grano de maz, como un efecto de la
aplicacin de diferentes formulados, se aprecia que el valor superior del rendimiento con una
media de 3211.8 kg/ha correspondi al tratamiento CAGN, es decir aquel que contiene como
protector solar el carbn vegetal, el extracto alcohlico de guishe y sin el aceite de maz
comestible como atrayente, en tanto que el valor ms bajo correspondi al testigo absoluto TA
con un valor medio de 1083.2 kg/ha. lo que da una clara muestra del efecto de la aplicacin del
bioinsecticida sobre las poblaciones de S. jhtgiperda en el cultivo del maz.
Aparentemente no hay efecto de los protectores ni del atrayente, sin embargo de acuerdo
con el anlisis de varianza del factorial en prueba, muestra significancia en atrayente con un Pr >
0.0409, mientras que para protector solar x coadyuvante es de Pr > 0.0032, sto indica que el
efecto en el rendimiento, a causa del combate del gusano cogollero fil ms efectivo el aceite de
maz como cebo, en tanto que la interaccin protector solar x coadyuvante aunque fueron
inferiores al testigo sin protector y sin coadyuvante, muestra una sinergia positiva; por otro lado
% que resaltar que estos pertenecen a la misma agrupacin de Duncan, por lo que entre ellos no
hay diferencias significativas. De este experimento nosotros consideramos que an cuando los
resultados no sean del todo excluyentes, es posible hacer una descriminacin de tratamientos de
acuerdo a los datos obtenidos en pruebas de laboratorio e invernadero.
Por tal motivo el formulado realizado con extracto de guishe, el colorante verde de
Malaquita y la adicin de aceite vegetal es una alternativa para el biocontrol del gusano cogollero
S-frugiperda, por las siguientes observaciones hechas de esta discusin:
a). Existen varios factores importantes que favorecen la utilizacin de formulado a base de la B.
ihuringiensis serovar. aizawi GM-10, extracto de guishe y aceite vegetal en ellos se encuentran de
que no tienen antecedentes de desarrollar resistencia en este insecto; b). la habilidad de la plaga
para localizar a sus plantas hospederas, imposibilita hacer uso de enemigos naturales (153), por
tal motivo es posible utilizar esta alternativa para un combate ms efectivo (106); c). los datos de
experimentos realizados con extractos de plantas contra S. frugiperda solo se han realizado a
nivel de bioensayo y no son concluyentes (2, 55,144); y d). la estimacin de que esta plaga reduce
los rendimientos en 1,148 kg en parcelas con una densidad de 45,000 plantas por hectrea (7) y
con la aplicacin de este formulado es posible incrementar el rendimiento en 2,000 kg con
respecto al control absoluto, sto nos dara un incremento adicional de casi 800 kg/ha con
respecto al uso de insecticidas qumicos, adems de los beneficios propios de los bioinsecticidas..
CONCLUSIONES
En base al objetivo general de este trabajo de desarrollar un formulado altamente txico
utilizando Bacillus thuringiensis, Aizawi. y extractos de Agave lechuguilla para el biocontrol de
S. frugiperda en el cultivo de maz, de los resultados obtenidos en laboratorio, invernadero y
campo; y la discusin de los mismos, se concluye lo siguiente:
1. La formulacin de una mezcla de B. thuringiensis y extracto de guishe, mostr ser altamente

efectiva para el control de S. frugiperda en el cultivo de maz,
2. El uso del del extracto alcohlico del guishe mostr ser un magnfico coadyuvante,
incrementando sinrgicamente la actividad txica del formulado de B. thuringiensis contra S.
frugiperda.
3. Los extractos analizados de guishe carecieron de efectos fitotxicos o alelopticos en las

plantas probadas.
4. La harina de maz nixtamalizada es un material adecuado propio para encapsular los
compuestos activos de este formulado de B. thuringiensis., ya que se puede polimerizar en fro
y forma redes matriciales; adems de que permite la difusin de gases y lquidos y conserva un 10
% de humedad residual en el interior de las cpsulas que se elaboran con ella.
p
5. El compuesto cronigeno verde de malaquita es un magnfico protector contra la exposicin a

los rayos ultravioleta.
6. Es posible que el aceite vegetal influya como cebo del gusano cogollero an cuando los
resultados de laboratorio no hayan mostrado ser consistentes segn el experimento de preferencia
desarrollado.
PERSPECTIVAS SOBRE FUTURAS INVESTIGACIONES EN EL TEMA
1.- Existen otros compuestos como el gosypol, o la misma esmilagenina extrada del guishe a los
que se les debe determinar su actividad fagoestimulante.
2.- Es importante determinar la potencialidad de uso como material encapsulante de la grenetina,
la quitina y otros compuestos similares.
3.- Otros compuestos como la dihidroxiacetona pudieran ofrecer alternativas como protector
solar.
4.- El bioinsecticida desarrollado en este trabajo deber probarse contra otras plagas de este y
otros cultivos.
5.- La metodologa para la fabricacin del formulado podra ser usada para el encapsulamiento de
otras toxinas o cepas de esta bacteria y de otras especies de microorganismos.
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1

UNIVERSIDAD AUTONOMA DE NUEVO LEON

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DESARROLLO DE UN BIOINSECTICIDA A PARTIR DE

PRESENTADA COMO REQUISITO PARCIAL PARA

RAFAEL CASTRO FRANCO

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UNIVERSIDAD AUTONOMA DE N U E V O LEON

DESARROLLO DE UN BIOINSECTICIDA A PARTIR DE

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DR. LUIS J. GALAN WONG

DESARROLLO DE UN BIOINSECTICIDA A PARTIR DE

Este trabajo se realiz en el Departamento de Microbiologa de la Facultad de Ciencias

VIVID EN EL TRANQUILO AMBIENTE DE LOS

RESUMEN EN INGLES (ABSTRACT)

Dosis letal media

Gramo (s) por litro <s)

Kilmetro (s) cuadrado (e)

Metros sobre el nivel

Protenas cristal insecticida

Ser ovari edad

anualmente en un 15% , en tanto que el rendimiento de los cultivos ha disminuido en un 15 al

4. Demostrar que el extracto del guishe no produce efectos fitotxicos o alelopticos.

6. Escoger un compuesto cromgeno capz de proteger las toxinas de B. thuringiensis de la

La relacin entre la inclusin y la patogenicidad hacia el insecto, fue confirmada entre

TOXINAS DE ACCION INSECTICIDA DE B. thuringiensis

rpidamente proteolizados en pequeos pptidos (33). No se conoce el mecanismo exacto de

MODO DE ACCION DE LAS TOXINAS CON ACCION INSECTICIDA DE

Para explicar la causa de la hinchazn causada por la elta-endotoxina de B. thuringiensis

ESTRATEGIAS PARA EL DESARROLLO Y MEJORAMIENTO DE EFECTIVIDAD

agricultores empresariales prefieren gastar ms dinero en el combate de plagas resistentes,

VENTAJAS Y DESVENTAJAS DEL USO DE Bacillus thuringiensis EN EL CONTROL

Las ventajas y desventajas del control biolgico se discuten a continuacin:

c) Adaptable a mltiples tipos de formulaciones; potencial de incorporarle a estimulantes que

Material encapsulante: En las ltimas 4 dcadas la formulacin de plaguicidas qumicos a

Tambin son posibles procesos como:

Se han desarrolado formulados encapsulados de B. thuringiensis utilizando almidn de

Debido a que las formulaciones de B. thuringiensis contienen esporas e inclusiones de

habilidad de la plaga para localizar a su planta hospedera y a la relacin con la composicin de

EL USO DE BIOINSECTICIDAS BASADOS EN R thuringiensis

Productos comerciales disponibles y compaas productoras: En la tabla N" 1 se enumeran los

Bioseguridad en el uso de B. thuringiensis: Entre los costos sociales por la aplicacin de

TablaN 1. Formulaciones comerciales a partir de B. thuringiensis.

All Union Inst. Agr. Microbiol. (Rusia)

Dosis de aplicacin contra plagas agrcolas, forestales, mosquitos y moscas negras.

Control de S. frugiperda por medio de Bioinsecticidas.

Otros investigadores obtuvieron extractos de 4 plantas diferentes, probaron tanto la fase

concentr por evaporacin hasta la formacin de un polvo, el cual se resuspendi en agua

Actividad insecticida de R thuringiensis cepa GM-10 contra S. frugiperda.

La cepa GM-10 de B. thuringiensis se cultiv en 100 mi de medio de cultivo basal en

Actividad biolgica de los extractos de guishe contra S. frugiperda.

El efecto de la exposicin de las larvas al extracto fu medida por la variable muerte; si

Determinacin de la presencia de sapogeninas en el extracto de guishe.

Temperatura: La temperatura promedio en los ltimos 20 aos es de 20.3 C y un mnimo de 5.7

Tabla N 2. Relacin de tratamientos de tres factores:

longitud de 6 m. dejando 2 m. al principio y alfinalpara evitar efectos de orilla. En total el

4.834a 3.760a 4.173a

7.743a 8.322a 7.615a 7.443a

*: Agrupacin de Duncan, letras iguales son estadsticamente similares.