ISSN 2007-3380

REVISTA BIO CIENCIAS

http://revistabiociencias.uan.mx

Review/Artculo de Revisin

Application of agave subproducts for production of microbial

inulinases
Aplicacin de subproductos del agave para la produccin de
inulinasas microbianas
Huerta Alcocer, S.A.*, Larralde Corona, C.P., Narvez Zapata, J.A.
Instituto Politcnico Nacional, Genmica, Laboratorio de Biotecnologa, Laboratorio de Biotecnologa Industrial.
Blvd. del Maestro s/n esq. Elas Pia, Col. Narciso Mendoza, C.P. 88710, Reynosa Tamaulipas, Mxico.

ABSTRACT

RESUMEN

Mexico is the center of origin of the genus

Agave spp. with 159 endemic species, 75 % of all known
species. The main use of these plants is in the production of alcoholic beverages, mainly tequila, which is obtained from the pines of A. tequilana Weber var. Azul.
During tequila production, a huge amount of waste is
produced, including leaves that are not used. Main compounds found in these subproducts are polysaccharides,
specifically inulin. Current review focuses on the use of
these agricultural wastes to obtain inulinase production,
and in the production of high fructose syrup using these
enzymes in these wastes. Currently, high fructose syrups,
especially oligosaccharides, have prompted much interest
for their benefits to health due to its low glycemic index
and their function as prebiotic in the intestinal flora. The
main microorganisms involved with inulinases production
belong to the genera Aspergillus and Kluyveromyces. The
latter is preferred in the industry due to its high growth
rate, high temperature tolerance (52 C) and by having
the GRAS (Generally Recognized As Safe) status. This
review emphasizes on the advances achieved in the production of inulinases by yeast K. marxianus.

Mxico es el centro de origen del gnero Agave

spp. con un total de 159 especies endmicas, representando
el 75 % de todas las especies conocidas. El principal uso de
estas plantas es la produccin de bebidas alcohlicas, particularmente tequila, el cual se obtiene a partir de las pias
de Agave tequilana Weber var. Azul, produciendo durante su
obtencin una gran cantidad de residuos y de hojas que no
se utilizan, los cuales pueden ser considerados como desechos. Los principales constituyentes de estos subproductos
de Agave son polisacridos, especialmente los de tipo inulina. La presente revisin se enfoca a la utilizacin de estos
desechos para la obtencin de -fructanasas (generalmente
referidas como inulinasas), as como los avances en la produccin de jarabes fructosados mediante el uso de estas
enzimas. La inulina y los jarabes altos en fructosa han despertado mucho inters por sus beneficios a la salud debido a
su bajo ndice glicmico y a su funcin como prebitico en la
flora intestinal. Las inulinasas son producidas principalmente por los hongos del gnero Aspergillus y las levaduras del
gnero Kluyveromyces. Estas ltimas son preferidas en la
industria debido a su alta tasa de crecimiento, por ser capaces de soportar temperaturas altas (52 C) y por tener el estatus GRAS (Reconocido Generalmente como Seguro, por
sus siglas en ingls) para poder ser utilizadas en la industria
alimenticia. La presente revisin hace especial nfasis en
los avances obtenidos en la produccin de inulinasas mediante la levadura K. marxianus.

KEY WORDS
Inulinases, Agave, inulin, fructans, fructose, Kluyveromyces marxianus.
Article Info/Informacin del artculo
Received/Recibido: December 18th 2013.
Accepted/Aceptado: March 19th 2014.

PALABRAS CLAVE
Inulinasas, Agave, inulina, fructanos, fructosa, Kluyveromyces marxianus.

*Corresponding Author:
Sergio A. Huerta Alcocer. Instituto Politcnico Nacional, Genmica, Laboratorio de Biotecnologa. Blvd del Maestro s/n esq.
Elas Pia, Col. Narciso Mendoza, C.P. 88710, Reynosa Tamaulipas, Mxico. Phone Red IPN: +52(55) 5729 6000 ext 87745.
E-mail: sergio_hual@hotmail.com
Revista Bio Ciencias 3(1): 4-16

Julio 2014

Agave subproducts inulinases/Inulinasas subproductos del agave

Introduction

Introduccin

The inulinases (EC. 3.2.1.7) are produced

by diverse microorganisms, whereas the most studied
are the yeasts of the Kluyveromyces genus, since they
can be found in various ambiances, are thermotolerant,
have a high growth rate and are not dangerous for human
beings (Castillo and Chamy, 2010). These enzymes are
responsible for the hydrolisis of the inulin-type fructans
bonds -2-1, which can be found as reserved polysaccharide and can be used in the production of syrups rich
in fructose, oligofructans, partially pure fructose and
others with industrial usefulness. The fructose obtained
by enzymatic hydrolysis presents a 95 % performance
and can be obtained in only one enzymatic step, which
reduces the cost of its production and the presence of
non-wanted subproducts is avoided (Lafuente-Castaeda et al., 2012). Fructose is taking importance due to its
benefits to health as sweetener for the diabetic, and for
raising the absorbance of iron and calcium in the body
(Madrigal and Sangronis, 2007). A characteristic of the
Agave spp. is its large content of fructans, near 65 %
of the total of carbohydrates (Mancilla-Margalli and Lopez, 2006), and from those most are inulin (Huitron et al.,
2008). Most of fructose is used in the fermentation in order
to be transformed in alcohol; this process produces waste
that is not used and that, if not treated correctly, will become pollutants (Barragn-Huerta et al., 2008). A solution to
this problem is the use of the wasted leaf-stalks that are
left in the fields for the production of microorganisms that
produce industrial interest enzymes, such as inulinases.

Las inulinasas (EC. 3.2.1.7) son producidas por

microorganismos diversos, los ms estudiados son las levaduras del genero Kluyveromyces, ya que se pueden encontrar
en ambientes diversos, son termotolerantes, tienen tasa de
crecimiento alta y no son peligrosas para el humano (Castillo
y Chamy, 2010). Estas enzimas son las responsables de la hidrolisis de los enlaces -2-1 de los fructanos del tipo inulina,
el cual se puede encontrar como polisacrido de reserva y se
puede utilizar en la produccin de jarabes ricos en fructosa,
oligofructanos, fructosa parcialmente pura y otros compuestos
con utilidades industriales. La fructosa obtenida por hidrlisis
enzimtica presenta un rendimiento de 95 % y se obtiene en un
solo paso enzimtico, con lo que se reduce el costo de su produccin y se evita la presencia de subproductos no deseados
(Lafuente-Castaeda et al., 2012). La fructosa est tomando
importancia debido a beneficios a la salud como edulcorante
para diabticos y por incrementar la absorcin de hierro y calcio
en el organismo (Madrigal y Sangronis, 2007). Una caracterstica de las plantas de Agave spp., es que contienen una gran
cantidad de fructanos, cerca del 65 % de los carbohidratos totales (Mancilla-Margalli y Lpez, 2006), y de stos la mayora
son inulina (Huitron et al., 2008). La mayor parte de la fructosa
es utilizada en la fermentacin para ser transformada en alcohol, este proceso produce desechos que no se utilizan y que
si no son tratados correctamente se volvern contaminantes
(Barragn-Huerta et al., 2008). Una solucin a este problema
es utilizar las pencas de desecho que se dejan en los campos,
para la produccin de microorganismos productores de enzimas de inters industrial, tales como las inulinasas.

The Agave genus

The Agave spp. plants, also known as magueyes,
have been exploited by man for ages. Its growth and use
dates from the pre-Columbian times. Mexico is the area
with the major diversity of Agave spp. plants from the
entire world, with 159 from a total of 210 species, from
which 119 are endemic (Garcia, 2012). Maguey plants
are found in flatlands, mountains, cliffs, coast dunes or in
mountain peaks, usually between one thousand and two
thousand meters height (Garcia, 2007). The Agave genus
is found in the Agavaceae family and it includes species
of adapted plants in aridity conditions. Their characteristic shape is of a rose and they have ramified roots, thick
cuticle, succulent leaves with sunken stomata and photosynthetic metabolism type CAM (Crassulacean Acid
Metabolism). The Agave genus, which means noble or

Revista Bio Ciencias 3(1): 4-16

El gnero Agave
Las plantas de Agave spp., tambin conocidos
como magueyes, han sido aprovechados por el hombre
durante miles de aos. Su cultivo y aprovechamiento data
desde la poca precolombina. Mxico es el rea con mayor diversidad de plantas de Agave spp., en todo el mundo, con 159 de un total de 210 especies, de las cuales 119
son endmicas (Garca, 2012). Las plantas de maguey se
encuentran en planicies, montaas, acantilados, dunas
costeras o en los picos montaosos, preferentemente entre los mil y dos mil metros de altitud (Garca, 2007). El
gnero Agave se encuentra en la familia Agavaceae e incluye especies de plantas adaptadas a condiciones de aridez. Tienen forma caracterstica de roseta y poseen races
ramificadas, cutcula gruesa, hojas suculentas con estomas
hundidos y metabolismo fotosinttico tipo CAM (Metabolismo cido Crasulceo). El gnero Agave cuyo significado es

Huerta et al., 2014.

admirable, was described by C. Lineo in 1793 (HauadMarroquin et al., 2010).

Chemical composition of the Agave spp. genus
The general composition of the agave plant is: 60
% humidity, 25 % carbohydrates, 10 % fiber and medulla,
2.5 % mineral salt 2.5 % and 2.5 % of other components
such as proteins and inulin (Ibarra-Hernandez, 2010). It is
worth mentioning that the predominant polysaccharide in
this plant is the inulin, which represents between the 85 and
90 % of carbohydrates (Ibarra-Hernandez, 2010).
Uses of agave
Agave plants have had a great variety of use
throughout time, in the production of alcoholic beverages
such as tequila and pozol, in the production of food such
as maguey juice, sweet juice, vinegar, atole, stew, flavorings and fodder (Hidalgo State Government: National
Museum of Popular Cultures, 1988). The fiber of the Agave spp. lumps can also be used in the making of thread,
cord, sack weave, bags, blankets, rugs, satchels, sandals, girdles, hammocks and bed rolls, amongst others.
All of the Agave plant can be used integrally, however,
and even in the industry of alcoholic beverages, the waste vegetable fiber can be reused (Huitron et al., 2008).

noble o admirable, fue dado a conocer por C. Lineo en

1793 (Huad-Marroqun et al., 2010).
Composicin qumica del gnero Agave spp.
La composicin general de la planta de agave es:
humedad 60 %, carbohidratos 25 %, fibra y medula 10 %,
sales minerales 2.5 % y 2.5 % de otros componentes como
protenas e inulinas (Ibarra-Hernndez, 2010). Cabe destacar que el polisacrido predominante en esta planta es
la inulina, que representa entre un 85 y 90 % de los carbohidratos (Ibarra-Hernndez, 2010).
Usos del agave
Las plantas de Agave han tenido una gran variedad de usos a travs del tiempo, en la produccin de
bebidas alcohlicas como el tequila y el pozol, en la produccin de alimentos como aguamiel, jugo dulce, jarabes,
vinagre, atole, guisos, saborizantes y forraje (Gobierno
del Estado de Hidalgo: Museo Nacional de Culturas Populares, 1988). La fibra de las plantas de Agave spp.,
tambin puede ser utilizada en la fabricacin de hilos, cordeles, tejido para costales, bolsas, mantas, tapetes, morrales, sandalias, cinchos, hamacas y petates, entre otros.
Actualmente, su principal uso es la produccin de bebidas
alcohlicas destiladas. Toda la planta de Agave puede ser
aprovechada de manera integral, sin embargo, y an en
la industria de las bebidas alcohlicas, la fibra vegetal de
desecho puede ser reutilizada (Huitron et al., 2008).

Agro-industrial agave waste

The residuals from the Agave spp. plants are accumulated in different stages of the production of alcoholic
beverages; during the jimado process, where the leaves
are removed from the stem, and then after the cooking of
the pines, where the chaff is thrown away after the fermentation. Approximately one million of tons of plants of Agave
tequilana Weber var. Azul are processed annually by the
Mexican tequila industry, generating agricultural residuals
(Huitron et al., 2008), and the mescal industry generates
from 15 to 20 kg of chaff per liter (Chavez, 2010). If such
residuals are not recycled properly, contamination is generated. The subproducts are generally burned or thrown
in trash collectors, which can carry problems due to the
release of CO2, pollution due odor presence, rat proliferation, flies and other insects. Some of these materials are
apt to be reused by its high content of sugar, pigments,
food fiber, polyphenols and lignin, among others. This way,
examples of its utilization in the preparation of food, health
remedies, construction, fodders, fertilizers and fuels are
known (Barragan-Huerta et al., 2008), all of them exam-

Revista Bio Ciencias 3(1): 4-16

Residuos agroindustriales del agave

Los residuos de las plantas de Agave spp., se acumulan en diferentes etapas de la produccin de las bebidas
alcohlicas; durante el proceso de jimado, donde se remueven las hojas del tallo, y despus del cocimiento de las
pias donde los bagazos son desechados despus de la
fermentacin. Aproximadamente un milln de toneladas de
plantas de Agave tequilana Weber var. Azul son procesadas anualmente por la industria tequilera mexicana, generando residuos agrcolas (Huitrn et al., 2008), y la industria
del mezcal tambin genera de 15 a 20 kg de bagazo por
litro (Chvez, 2010). Si estos residuos no son reciclados
o procesados apropiadamente se genera contaminacin.
Los subproductos generalmente son quemados o vertidos
en basureros. Esto ltimo plantea problemas debido a la
liberacin de CO2, contaminacin por presencia de olores,
proliferacin de ratas, moscas y otros insectos. Algunos de
estos materiales son susceptibles de ser reutilizados por
su alto contenido de azcares, pigmentos, fibra alimentaria, protena, polifenoles, lignina, entre otros compuestos.
De esta forma, se conocen ejemplos de su utilizacin en
la preparacin de alimentos, remedios de salud, construccin,

Agave subproducts inulinases/Inulinasas subproductos del agave

ples of direct utilization of low technology. Finally, there has

been an attempt to use these residuals as substrate for the
application of inulinases enzymes of microorganisms such
as Aspergillus niger CH-A-2010 and CH-A-2016 (Huitrn et
al., 2008). Such situation increases the value of the Agave
spp. subproducts and makes its application more profitable
hence more attractive for the elaboration of enzymes, unicellular protein, pigments and antibiotics.
The fructooligosaccharides
The fructooligosaccharides (FOS) are composed carbohydrates formed by fructose monomers with
very few glucose residuals, generally at the end of the
chain; they are also known as fructans. If fructose presents a predominant or exclusive union through the
bond -(2-1)-fructosil-fructose, it receives the generic
name of inulin, derived from the plant Inula helanium or,
if it presents bonds -(2-6) fructosil-fructose, it receives
the name of levane (Figure 1A). The nature of bonds
has biochemical implications; for example, the lineal
structure of fructans allows them to be water soluble,
and it also grants the plant resistance to drought and
temperature changes (Chacon-Villalobos, 2006).
The inulin
Inulin is a polymer formed by fructans joint by
bonds -(2-1)-fructosyl-fructose and a terminal glucose
with bonds -(1-2)-(D-glucopyranosyl) (Figure 1B). These fructans are generally found as storage in the roots,
tubers and rhizomes of certain plants as the tupinambo
(Helianthus tuberosus), the chicory (Cichorium intybus)
and the dahlia (Dahlia spp.) (Singh et al., 2007). In the
inulin, the units of fructose bond to terminal glucose
can vary from very few units up to 70, which means that
inulin is a mixture of oligomers and polymers, defining it
as a polyfructane with polymerization grade (DP) higher
than 30 units (Castillo and Chamy, 2010).

forrajes, fertilizantes, y como combustibles (Barragn-Huerta et

al., 2008), todos ellos ejemplos de utilizacin directa de baja
tecnologa. Finalmente, estos residuos se han tratado de utilizar como sustratos para la aplicacin de enzimas inulinasas
de microorganismos como Aspergillus niger CH-A-2010 y
CH-A-2016 (Huitrn et al., 2008). Esto aumenta el valor de los
subproductos de Agave spp., y hacen ms rentable, por lo tanto
atractiva, su aplicacin en la elaboracin de enzimas, protena
unicelular, pigmentos y antibiticos.
Los fructooligosacridos
Los fructooligosacridos (FOS) son carbohidratos
compuestos formados por monmeros de fructosa con muy
pocos residuos de glucosa casi siempre al final de la cadena; tambin son conocidos como fructanos. Si las fructosas
presentan una unin predominante o exclusiva a travs del
enlace -(2-1)-fructosil-fructosa reciben el nombre genrico de inulina, derivado de la planta Inula helanium bien
si presentan enlaces -(2-6) fructosil-fructosa reciben el
nombre de levano (Figura 1A). La naturaleza de los enlaces
tiene implicaciones bioqumicas; por ejemplo, la estructura
lineal de los fructanos permite que sean solubles en agua,
tambin le confiere a la planta resistencia a sequa y a los
cambios de temperatura (Chacon-Villalobos, 2006).
La inulina
La inulina es un polmero formado por fructanos
unidos por enlaces -(2-1)-fructosil-fructosa y una glucosa
terminal con enlace -(1-2)-(D-glucopiranosil) (Figura 1B).
Estos fructanos se encuentran generalmente como un carbohidrato de almacenamiento en las races, tubrculos y rizomas de ciertas plantas como la tupinambo (Helianthus
tuberosus), la achicoria (Cichorium intybus) y la dalia (Dahlia
spp.) (Singh et al., 2007). En la inulina, las unidades de fructosas enlazadas a la glucosa terminal puede variar desde
algunas pocas unidades hasta 70, lo que significa que la
inulina es una mezcla de oligmeros y polmeros, definindose como un polifructano con grado de polimerizacin (DP)
mayor a 30 unidades (Castillo y Chamy, 2010).

Fructans such as inulin represent the second most common mechanism of energy storage after starch, and can
be produced by bacteria Streptoccocus, Leuconostoc,
Lactobacillus, Weissella; Zymomonas mobilis, Gluconacetobacter diazotrophicus, Bacillus subtilis y Bacillus
polmyxa (Muoz-Gutirrez et al., 2009).
Inulin is a soluble fiber that the body cannot digest and,
therefore, it promotes intestinal movement, favoring the
elimination of toxins; it is a strong stimulator of the growth

Revista Bio Ciencias 3(1): 4-16

Los fructanos como la inulina representan el segundo mecanismo ms comn de almacenamiento de energa despus del
almidn, y pueden ser producidos por bacterias Streptoccocus,
Leuconostoc, Lactobacillus, Weissella; Zymomonas mobilis,
Gluconacetobacter diazotrophicus, Bacillus subtilis y Bacillus polmyxa (Muoz-Gutirrez et al., 2009).
La inulina es una fibra soluble que el cuerpo no es capaz
de digerir y por tanto promueve los movimientos intestina-

Huerta et al., 2014.

Figure 1. Typical structure of a fructan type (a) levan, (B) inulin and (C) agavin. Modified from Muoz-Gutierrez
et al., (2009).
Figura 1. Estructura tpica de un fructano tipo (A) levano, (B) inulina y (C) agavina. Modificado de MuozGutirrez et al., (2009).

of the beneficial intestinal flora, it helps in the correct

assimilation of nutrients such as calcium and magnesium, keeps cholesterol levels low and avoids accumulation of triglycerides; its energy and nutrients supply
is minimum, which makes it recommendable for dieting
(Madrigal and Sangronis, 2007). Nowadays, the presence of certain amounts of inulin in the formulation of a
food product is condition enough for it to be considered
as functional food, by definition the one that contains a
component or nutrient with beneficial selective activity,
which grants it an additional physiological effect to its
nutritional value (Madrigal and Sangronis, 2007).

Revista Bio Ciencias 3(1): 4-16

les, favoreciendo la eliminacin de toxinas; es un potente estimulador del crecimiento de la flora intestinal benfica, ayuda en
la correcta asimilacin de nutrientes como calcio y magnesio,
mantiene los niveles de colesterol bajos y evita la acumulacin
de triglicridos, su aporte de energa y nutrientes es mnimo, y
es por esta particularidad que es recomendable en las dietas
(Madrigal y Sangronis, 2007). En la actualidad, la presencia de
ciertas cantidades de inulina en la formulacin de un producto
alimenticio es una condicin suficiente para que dicho producto
sea considerado como alimento funcional, que por definicin
sera aquel que contiene un componente o nutriente con actividad selectiva beneficiosa, lo que le confiere un efecto fisiolgico adicional a su valor nutricional (Madrigal y Sangronis, 2007).

Agave subproducts inulinases/Inulinasas subproductos del agave

Production of fructose from inulin

Due to the high cost of inulin, between 3 and 4 dollars per kilo (CUCEA IDIT pyme, 2013), more economical
and renewable sources of inulin are apt to be used for the
production of bioethanol, inuloligossaccharides and fructose
syrup (Castillo and Chamy, 2010). The inulin can be hydrolyzed in two ways: through chemical hydrolysis or through
the enzymatic production of microorganisms. Chemical hydrolysis is carried through the process of acid hydrolysis,
even though this method produces unwanted color substances due to the formation of anhydride difructose, such compose lacks of sweetener properties (Singh and Gill, 2006).
For that reason, the production of inulin through the use of
the inulinase enzyme is more recommendable with performance of up to 95 % pure fructose (Chi et al., 2009). This
fructose is found in vegetable tissues forming oligosaccharides of different molecular structure, which gives it biological
and stress resistance properties in the plant, as well as in its
prebiotic and functional potential in the human being (Madrigal and Sangronis, 2007).
Vegetal sources of inulin
Inulin is present in over 36,000 plants belonging
to 10 families (Chi et al., 2011) and it is stored in the aerial
parts as well as in the underground ones. The extraction
of inulin in the aerial part (vegetative) of the plants (in the
Gramineae family, for example) is not recommended due
to its low extraction performance at industrial level (Madrigal and Sangronis, 2007). Therefore, the underground
parts are the most used for the industrial production, the
two main are the Jerusalem artichoke (Helianthus tuberosus) and the chicory (Cichorium intybus). Although, it
can also be obtained from the dahlia root (Dahlia spp),
onion (Allium cepa L), leek (Allium porro L), garlic (Allium
sativum), yacon (Smallanthus sonchifolius) and the asparagus (Asparragus officinalis L). Inulin can also be extracted from the aerial part (pines) of the Agave spp. plants,
mainly from the A. tequilana Weber var. Azul (Madrigal
and Sangronis, 2007).
High fructose agave syrups
The conventional production of fructose happens
from starch, needing at least three enzymatic stages:
-amilasa, glucoamylase and the isomers of glucose,
producing only 45 % of the fructose in starch (Chand
et al., 2012) in contrast to the 95 % produced by the
inulinase. Besides being a low in calories sweetener,

Revista Bio Ciencias 3(1): 4-16

Produccin de fructosa a partir de inulina

Debido al alto costo de la inulina, entre 3 y 4 dlares por kilo (CUCEA IDIT pyme, 2013), se pretende utilizar fuentes de inulina ms econmicas y renovables para
la produccin de bioetanol, inulooligosacridos y jarabe de
fructosa (Castillo y Chamy, 2010). La inulina puede ser hidrolizada de dos maneras: mediante la hidrlisis qumica o
la produccin enzimtica de microorganismos. La hidrlisis
qumica se lleva a cabo por el proceso de hidrlisis cida,
aunque este mtodo produce sustancias de color no deseado debido a la formacin de difructosa anhdrida, este compuesto carece de propiedades edulcorantes (Singh y Gill,
2006). Por esta razn, la produccin de inulina por medio de
la utilizacin de la enzima inulinasa es ms recomendable,
con rendimientos de hasta 95 % de fructosa pura (Chi et al.,
2009). Esta fructosa se encuentra en los tejidos vegetales
formando oligosacridos de diferente estructura molecular,
lo que le confiere propiedades biolgicas tanto de resistencia al estrs en la planta como en su potencial prebitico y
funcional en el humano (Madrigal y Sangronis, 2007).
Fuentes vegetales de inulina
La inulina est presente en ms de 36,000 plantas
pertenecientes a 10 familias (Chi et al., 2011) y es almacenada tanto en las partes areas como subterrneas. La
extraccin de inulina de la parte area (vegetativa) de las
plantas (por ejemplo en la familia Gramineae) no es recomendada debido a sus bajos rendimientos de extraccin a
nivel industrial (Madrigal y Sangronis, 2007). Por lo anterior,
las partes subterrneas son las ms utilizadas para la produccin industrial, siendo las dos principales el tupinambo
(Helianthus tuberosus) y la achicoria (Cichorium intybus),
aunque tambin se puede obtener de la raz de dalia (Dahlia
spp), la cebolla (Allium cepa L), el ajoporro (Allium porro L),
el ajo (Allium sativum), el yacn (Smallanthus sonchifolius)
y el esprrago (Asparragus officinalis L). La inulina tambin
puede extraerse de la parte area (pias) de plantas de
Agave spp., principalmente de A. tequilana Weber var. Azul
(Madrigal y Sangronis, 2007).
Jarabes de alta fructosa de agave
La produccin convencional de fructosa es a partir
de almidn, necesitando al menos tres etapas enzimticas: -amilasa, glucoamilasa y la ismeras de la glucosa,
produciendo slo 45 % del almidn en fructosa (Chand et
al., 2012) en contraste al 95 % producido por la inulinasa.
Aparte de ser un edulcorante bajo en caloras, la fructosa
tambin se utiliza en la produccin de etanol, acetona y
butanol, cido glucnico, sorbitol y fructooligosacridos.

Huerta et al., 2014.

Table 1.
Microorganisms producers of inulinases
Tabla 1.
Microorganismos productores de inulinasas
Microorganism
Aspergillus niger ATCC 20611

Type of mean
pH/ Temp.(C) Performance
Reference
Basal medium with 1 % inulin and 0.5 % of pep6.5/35
3199 U mL-1 Dinarvand
et
tone
(2012)

A. niger AUP19

Inulin at 5 %, galactose as carbon source, corn

liquor and (NH4)H2PO4 as hydrogen source.

al.,

6.5/28

176 U mL-1

Pratap Kumar et al.,

(2005)

Kluyveromyces marxianus YS-1 Inulin, meat extract, CaCl2 and CDS

6.5/30

55.4 U mL-1

Singh et al., (2006)

K. marxianus YS-1

Immobilized in Duolite A568

5.5/55

413 U mg-1

Singh et al., (2007)

K. marxianus ATCC 16045

Sucrose 14 g L , yeast extract 10 g L , peptone

20 g L-1 and K2HPO4 1 g L-1
Simple medium with dahlia extract and yeast extract

3.5*/30

6.4 U mL

4.0/50

25.3 U mL

Yepez Silva-Santisteban et al., (2008)

Chand et al., (2012)

K. marxianus NCYC 587

Agar YMA with yeast extract 3.0, malt extract 3.0,

peptone 5.0, glucose 10.0 and agar 20.0

6.8/30

735 U mL-1

Makino et al., (2009)

K. marxianus NRRL Y-7571.

Agar YMA with yeast extract 3.0, malt extract 3.0,

peptone 5.0, glucose 10.0 and agar 20.0

6.8/30

722 U mL-1

Makino et al., (2009)

K. marxianus NRRL Y-7571

Sugar cane pulp in medium YM sacarose 20.0,

yeast extract 5.0, K2HPO4 5.0, NH4Cl 1.5, KCl
1.15 and MgSO4 7, H2O 0.65.

4.8/36

391.9 U g-1

Mazutti et al., 2006

Pichia guilliermondii 2E00048

Sea water with 4.0 % inulin and 0.5 % yeast extract

8.0/28

61.5 U mL-1

Gong et al., (2007)

Penicillium citrinum ESS

NaNO3 (7.65 g L-1), KH2PO4 (3.04 g L-1), MgSO4

(1.52 g L-1) and KCl (1.52 g L-1) inulin or sucrose
(5.0 g L-1).

5.5/30

1538.0 U L-1 Lafuente-Castaeda et

al., (2012)

Rhizoctonia sp. I-PN4

Saracen wheat flour in liquid medium

5.5/25

1.8 U mL-1

Saccharomyces sp.

Medium with sucrose, yeast extract, K2HPO4,

NH4Cl, KCl, and MgSO4 7H2O

4.5/50

128.3 U g

Streptomyces sp. CP01

Czapeks Dox and 1 % of Jerusalem artichoke

inulin extract

8.0/28

1.60 U mL-1

Laowklom
(2012)

Thermomyces lanuginosus IMI

084400

Jerusalem artichoke extract and peptone

5.5/55

0.09 U mL-1

Nguyen et al., (2012)

T. lanuginosus IMI 140524

Jerusalem artichoke extract and peptone

5.5/55

0.61 U mL-1

Nguyen et al., (2012)

K. marxianus MTCC 3995

-1

the fructose is also used in the production of ethanol,

acetone and butanol, gluconic acid, sorbitol and fructooligosaccharides. The microorganisms, particularly
the filamentous fungi and yeast, have been used for the
commercial production of inulinases (Chi et al., 2009)
due to its high performance with more than 700 and
3000 U mL -1 in K. marxianus NRRL Y-7571 and Aspergillus niger ATCC 20611, respectively (Table 1).
One of the new uses of agave is the production of high
fructose syrups, the most common the one from
agave azul (A. tequilana Weber var. Azul). The Mexican
Norm NMX, 2008 (NMX-FF-110-SCFI-2008) established
the specifications of the product named Agave Syrup 100 %
or Syrup 100 % Agave intended for commercialization in
the United States of Mexico. The agave azul syrup is

Revista Bio Ciencias 3(1): 4-16

-1

-1

-1

-1

Neagu-Bonciu et al.,
(2012)
Oluwaseun Garuba et
al., (2012)
et

al.,

Los microorganismos, y en particular los hongos filamentosos y levaduras, han sido utilizado para la produccin
comercial de inulinasas (Chi et al., 2009) debido sus
altos rendimientos con ms de 700 y 3000 U mL -1 en
K. marxianus NRRL Y-7571 y Aspergillus niger ATCC
20611, respectivamente (Tabla 1).
Uno de los usos novedosos del agave es la produccin de
jarabes de alta fructosa, siendo el ms comn el jarabe de
agave azul (A. tequilana Weber var. Azul). Segn la norma
Mexicana NMX, 2008 (NMX-FF-110-SCFI-2008) se establecen las especificaciones del producto denominado Jarabe de Agave 100 % o Jarabe 100 % de Agave destinado
a su comercializacin en territorio de los Estados Unidos
Mexicanos. El jarabe de agave azul es una sustancia dulce
natural producida por la hidrolisis de fructanos y no debe
contener aditivos alimentarios, almidones, melazas, gluco-

10

Agave subproducts inulinases/Inulinasas subproductos del agave

a natural sweet substance produced by the hydrolysis

of fructans and must not contain food additives, starches, molasses, glucose, dextrins, fructose or any other
sugar from diverse origin. For the elaboration of the
Agave Syrup, mixes from different types of agave are
not allowed. Apart from that, it must fulfill the physicalchemical specifications established in the NMX, 2008
(NMX-FF-110-SCFI-2008) where the percentage of reductive sugars must reach a minimum of 90 % with 80
% of fructose and a maximum bacterium number 100
(UFC g-1), coliform absent, and from fungus and yeast
<10, respectively.
The bioconversion of the vegetal biomass in fermentable sugars uses a wide range of microbian enzymes,
such as celluloses, xylanase, pectinase and inulinases
(Huitron et al., 2008). In the case of fructans from A. tequilana (ATF), agavin (Figure 1C) contains a new structure of inulin where the glucose residual is in the interior
of the ramified chain, combining both types of bonds
(-2,1 and -2,6), and having a polymerization grade
that ranges from the 3 up to the 29 monomers; such
factors change in function of the plants age, the ATF
can be degraded by fructosidase for the optimization
of the fructans and free fructose obtaining processes
(Arrizon et al., 2011).
Fructanases
Fructanases are enzymes responsible of hydrolyzing the bond (-2-1 or -2-6) from the fructans to
release fructose (Muoz-Gutirrez et al., 2009). With
in the latter we can find non-specific -fructosidases,
which can hydrolyze fructans from their extremer reducer
-2-1 or -2-6. Some examples are: exo--fructosidases
(exoinulinases and exolevanases) (EC. 3.2.1.80) and
2,6--fructane-6-levanobiohidrolases

(EC.

3.2.1.64).

These enzymes also include endoinulinasas (EC.

3.2.1.7), which specifically hydrolyze internal bond -26 in the levan (Muoz-Gutirrez et al., 2009).
Particularly,

inulinases

include

non-specific

-fructosidases enzymes such as exo--fructosidases

(exoinulinases) (EC. 3.2.1.80) and enzymes with activity 2,1--D-fructan-fructane hydrolase (EC. 3.2.1.7).
These enzymes can be used in the production of highfructose syrups and oligofructans, which have raised
interest due to their application as functional ingredient

Revista Bio Ciencias 3(1): 4-16

sa, dextrinas, fructosa u otros azucares de origen diferente.

Para la elaboracin del Jarabe de Agave, no se permiten
las mezclas de diferentes tipos de agaves y adems debe
cumplir con las especificaciones fisicoqumicas establecidas en la norma NMX, 2008 (NMX-FF-110-SCFI-2008)
donde el porcentaje de azcares reductores debe llegar a
un mnimo de 90 % con 80 % de fructosa, y con un nmero
(UFC g-1) mximo bacteriano de 100 (con ausencia de coliformes), y de hongos y levaduras <10, respectivamente.
La bioconversin de la biomasa vegetal en azcares fermentables utiliza una amplia gama de enzimas microbianas, tales como celulosas, xilanasas, pectinasas, e inulinasas (Huitron et al., 2008). En el caso de los fructanos
de A. tequilana (ATF), la agavina (Figura 1C) contiene una
estructura nueva de inulina donde los residuos de glucosa
estn en el interior de la cadena ramificada, combinando
los dos tipos de enlaces (-2,1 y -2,6) y teniendo un grado
de polimerizacin que va desde los 3 a los 29 monmeros,
estos factores van cambiando en funcin de la edad de la
planta, los ATF pueden ser degradados por fructosidasas
para la optimizacin de los procesos de obtencin de fructanos y fructosa libre (Arrizon et al., 2011).
Fructanasas
Las fructanasas son las enzimas responsables de
hidrolizar los enlaces (-2-1 o -2-6) de los fructanos para
liberar fructosa (Muoz-Gutirrez et al., 2009). Dentro de
stas se pueden encontrar a las -fructosidasas no especficas, mismas que pueden hidrolizar fructanos desde su
extremo reductor -2-1 o -2-6. Algunos ejemplos de stas
son la: exo--fructosidasas (exoinulinasas y exolevanasas)
(EC. 3.2.1.80) y 2,6--fructano-6-levanobiohidrolasas (EC.
3.2.1.64). Estas enzimas tambin incluyen a las Endoinulinasas (EC. 3.2.1.7), las cuales hidrolizan especficamente los
enlaces internos -2-1 de la inulina. Finalmente, estas enzimas incluyen tambin a las Endolevanasas (EC. 3.2.1.65)
que hidrolizan especficamente los enlaces internos -2-6 en
el levano (Muoz-Gutirrez et al., 2009).
Particularmente,
las
inulinasas
incluyen
enzimas
-fructosidasas no especficas como las exo--fructosidasas
(exoinulinasas) (EC. 3.2.1.80) y enzimas con actividad 2,1--Dfructan-fructano hidrolasa (EC. 3.2.1.7). Estas enzimas pueden
ser utilizadas para la produccin de jarabes de alta fructosa
y de oligofructanos, estos ltimos han despertado el inters
debido a su aplicacin como ingrediente funcional (Golunski
et al., 2011). Para su aplicacin en la industria de alimentos y
bebidas, las enzimas microbianas requieren un cierto grado

11

Huerta et al., 2014.

(Golunski et al., 2011). For its application in the industry

of food and beverages, microbial enzymes require certain grade of purification. The isolation and purification of
an enzyme produced by microorganisms is not an easy
task, taking into account both economical and technical
aspects, since the purification stage can reach the 70 or
90 % from the total cost of production. The purification of
an enzyme from a fermentation method generally implies
a combination of techniques that separate enzymes according to its size, load, hydrophobicity or capacity to join
certain compounds (Golunski et al., 2011). Several studies
developing enzymatic processes to reduce the consumption of energy and to increase sugar recovery have been
made in order to optimize the hydrolysis of ATF (MuozGutirrez et al., 2009). Therefore, the selection of enzymes with specificity ATF is necessary due to its grade of
ramifications for the industrial application. The yeasts of
the K. marxianus species are producers of inulinases that
present better activity using ATF as substrate in comparison to the commercial enzyme Fructozyme (Arrizon et
al., 2011). Furthermore, the capacity of enzymes to discriminate between different structures of fructans can also
be used to characterize the changes in the derived specificity of mutations. In order to characterize completely
the specificity and kinetic of fructosidases, it is important
to study their activity by using different substrates. The ramification grade is an important factor for the enzymatic
activity, since most of fructans have a different grade of
ramification and this determines the velocity in which they
act. However, the industrial applications in these enzymes
would only be possible if they were at a competitive price.
The production of inulinases is affected by the components in the environment and the type of organism used
for fermentation. In order to compensate the cost of
the inulin reactive grade, diverse vegetal materials are
used in the enrichment of the environment (Chand et
al., 2012). In such situation lies the interest of their study to produce, purify and characterize them from microbial culture in synthetic environments, being the yeast
K. marxianus the most studied (Castillo and Chamy,
2010). Recently, production studies of inulinase through
fermentation of K. marxianus in yacon, asparagus and
dahlia tuber extracts with enzymatic activity performances, have been published.
Microorganisms producers of inulinases
The selection of an adequate microorganism
is an important issue for enzyme production. The mi-

Revista Bio Ciencias 3(1): 4-16

de purificacin. El aislamiento y la purificacin de una enzima

producida por microorganismos es una tarea difcil, teniendo
en cuenta tanto los aspectos econmicos como tcnicos, ya
que las etapas de purificacin pueden llegar a un 70 o 90 % de
los costos totales de produccin. La purificacin de una enzima a partir de un medio de fermentacin por lo general implica una combinacin de tcnicas que separan las enzimas de
acuerdo a su tamao, carga, hidrofobicidad o capacidad para
unirse a ciertos compuestos (Golunski et al., 2011). Para la
optimizacin de la hidrlisis de ATF, se han realizado algunos
estudios desarrollando procesos enzimticos para reducir el
consumo de energa y para aumentar la recuperacin de azcar (Muoz-Gutirrez et al., 2009). Por lo tanto, es necesaria la
seleccin de enzimas con especificidad a ATF debido a su grado de ramificaciones para la aplicacin industrial. Las levaduras de la especie K. marxianus son productoras de inulinasas
que presentan una mejor actividad utilizando ATF como sustrato en comparacin con la enzima comercial Fructozyme
(Arrizon et al., 2011). Aunado a esto, la capacidad de las enzimas para discriminar entre diferentes estructuras de fructanos
tambin puede ser utilizada para caracterizar los cambios en la
especificidad derivada de mutaciones. Para caracterizar completamente la especificidad y la cintica de las fructosidasas,
es importante estudiar su actividad utilizando diferentes sustratos. Cabe destacar que el grado de ramificacin es un factor
importante para la actividad enzimtica, pues la mayora de
los fructanos tienen un grado de ramificacin diferente y ste
determina la velocidad en la que actan. Las aplicaciones industriales de estas enzimas, sin embargo, slo sern factibles
si estuvieran disponibles a un precio competitivo.
La produccin de inulinasas se ve afectada por los
componentes del medio y el tipo del organismo utilizado para la fermentacin. Para compensar el costo de la
inulina grado reactivo, diversos materiales vegetales se
emplean en el enriquecimiento del medio (Chand et al.,
2012). De ah el inters por su estudio para producirlas,
purificarlas y caracterizarlas a partir de cultivos microbianos en medios sintticos, siendo la levadura K. marxianus la ms estudiada (Castillo y Chamy, 2010). Recientemente se han publicado estudios de produccin de
inulinasa por fermentacin de K. marxianus en extractos
de yacn, de esprragos y de tubrculos de dalia, con
rendimientos de actividad enzimtica.
Microorganismos productores de inulinasas
La seleccin de un microorganismo adecuado es un
aspecto importante para produccin de enzimas. El microorganismo debe ser capaz de crecer abundantemente de

12

Agave subproducts inulinases/Inulinasas subproductos del agave

croorganism must be capable of preferably growing abundantly, and be classified as GRAS and being accepted by
the FDA (Food and Drug Administration) of the United States
of America (Mazutti et al., 2006). Fungi, yeast and bacterial
strains are capable of producing inulinases and several of
them have been cultivated with success, and the enzyme
extracted, concentrated and purified. The most commonly
used microorganisms for the production of inulinases are
the fungi strains such as Aspergillus spp. and yeasts such
as Kluyveromyces spp. (Castillo and Chamy, 2010). The latter is especially adequate for industrial application for two
reasons: the first its growth velocity and the second its ability to grow in temperatures of up to 52 C, which indicates
that it is thermotolerant and can be used in industrial scales,
besides of having the capacity to assimilate different sugars
and secrete lytic enzymes to the environment. In Table 1
some microorganisms with inulinase activity and two of the
most important physicochemical factors (pH and temperature), optimized in each case, are observed.
The yeast Kluyveromyces marxianus
The yeast K. marxianus was described for the first
time in 1888 by E.C. Hansen, which by the time was called Saccharomyces marxianus in honor to Marx, who originally isolated this yeast from grapes. This yeast forms
butyrose colonies of white to cream color; its reproduction
is vegetal by budding , with facility to elaborate pseudophyphae, with evanescent ascii that contain up to 4 smooth
ascospores that can be round, oval or kidney-shaped; it
does not conjugate or it happens from cell to cell or from
cell to bud, both in agar YM as well as in acetate McClary
agar. The yeast K. marxianus has been isolated from a
great variety of environments that range from dairy, fermented drinks, vegetal material in decomposition, diverse
effluent residuals to infected human tissues (Barnett et al.,
2000). Hence, in order to survive in these environments,
the production of enzymes such as -galactosidases,
-glucosidases, inulinase and polygalacturonases, only for
mentioning some, must take place.
Other interesting technological characteristics of the K.
marxianus are its ability to produce aromatic composes
and ethanol (included in the processes of simultaneous
sacarification fermentation of high temperature); as the
reduction of content of lactose in food products, the production of ingredients of specialty from whey, bioremediation, as cholesterol lowering agent and as host for the
production of heterologous proteins, has been reported
(Fonseca et al., 2008).

Revista Bio Ciencias 3(1): 4-16

preferencia, y estar clasificado como GRAS y ser aceptado

por la FDA (Food and Drug Administration) de los Estados
Unidos de Norteamrica (Mazutti et al., 2006). Cepas de
mohos, levaduras y bacterias son capaces de producir inulinasas y varias de ellas han sido cultivadas con xito, y la
enzima extrada, concentrada y purificada. Los microorganismos ms comnmente utilizados para la produccin de
inulinasa son las cepas de mohos como el Aspergillus spp.
y levaduras como Kluyveromyces spp. (Castillo y Chamy, 2010). Esta ltima es especialmente adecuada para
la aplicacin industrial por dos motivos, el primero es su
velocidad de crecimiento y el segundo es su habilidad de
crecer en temperaturas de hasta 52 C, lo que indica que
es termotolerante y puede ser utilizada a escala industrial,
adems de tener capacidad de asimilar diferentes azcares y de secretar enzimas lticas al medio. A continuacin
(Tabla 1) se observan algunos microorganismos con actividad inulinasa y dos de los factores fisicoqumicos ms
importantes (pH y temperatura) optimizados en cada caso.
La levadura Kluyveromyces marxianus
La levadura K. marxianus fue descrita por primera
vez en 1888 por E.C. Hansen, que en esos momentos se
llamaba Saccharomyces marxianus en honor a Marx, quien
aisl originalmente esta levadura a partir de uvas. Esta levadura forma colonias butirosas de color blanco a cremoso, su
reproduccin es vegetativa por gemacin, con facilidad para
elaborar pseudohifas, con ascas evanescentes que contienen
hasta 4 ascosporas lisas que pueden ser redondas, ovaladas
o reniformes; no se conjuga o esto ocurre de clula a clula
o de clula a gemacin, tanto en agar YM como en agar de
acetato de McClary. La levadura K. marxianus ha sido aislada
de una gran variedad de ambientes, que van desde productos
lcteos, bebidas fermentadas, material vegetal en descomposicin, efluentes residuales diversos, hasta tejidos humanos
infectados (Barnett et al., 2000). Esto nos hace suponer que
para sobrevivir en estos ambientes debe darse la produccin
de enzimas tales como -galactosidasas, -glucosidasas, inulinasa y poligalacturonasas por mencionar algunas.
Otras de las caractersticas tecnolgicas interesantes de K.
marxianus es que es capaz de producir compuestos aromticos y etanol (incluidos los procesos de sacarificacin - fermentacin simultneas de alta temperatura); al igual que se ha
reportado la reduccin del contenido de lactosa en los productos alimentarios, produccin de ingredientes de especialidad a partir de suero de leche, biorremediacin, como agente
reductor del colesterol, y como hospedero para la produccin
de protenas heterlogas (Fonseca et al., 2008).

13

Huerta et al., 2014.

The yeast K. marxianus has been partially studied in a

molecular level and has been adopted by the industry for
applications that go from the production of biomass to the
bioremediation; industrial applications given to this yeast
agree on its accelerated growth properties, its thermotolerant capacity and its production or secretion of enzymes, as
well as its production of ethanol in minor range (Lane et al.,
2011). Many of the applications of K. marxianus are based
in its capacity to produce ethanol in different and specific
sugar, such as inulin and lactose.
One way to make the enzyme process much more efficient and proficient is its immobilization. Regarding the
latter, inulinases can be immobilized and keep 90 % of
their original activity after being incubated at 60 C by
3 h. in contrast with its free form, where losses of up to
10 % of its activity in the same condition are observed,
due to the fact that when the inulinase is immobilized its
thermal stability improves according to Singh and Lotey
(2010). In the latter, the enzyme was reused in 55 runs,
from these, in the 4 cycle 10 % of its stability was lost,
in the 7 cycle 20 % and after that, a constant loss was
kept of up to 50 % of its activity in the 23 run, proving
an increase in the production of the fructanes produced.
It was also proved that there is no difference in the use
of reactive grade inulin or natural source inulin such as
the artichoke root of Jerusalem (Singh and Lotey, 2010).
This indicates that inulin that comes from agroindustrial
residuals could be used for the production of fructanes.

Conclusions
The waste in the industry of Agave possesses characteristics of composition that allow its use as
source of carbon for microorganisms producing inulinases. Due to the benefits for health and the importance
that products coming from oligofructanes have, the optimization in the production of these enzymes is necessary. The yeast K. marxianus has proven to be a high
resistant to process conditions and metabolic capacity
microorganism to use natural inulin products for the optimization and reduction in the costs of production of
these enzymes. Due to the complexity of the substrates
utilized, it is necessary to run further investigations for
the search of new producing strains of inulinases, optimizing the use of agroindustrial waste, as well as for
finding reutilization systems of enzymes such as their

Revista Bio Ciencias 3(1): 4-16

La levadura K. marxianus se ha estudiado parcialmente

a nivel molecular y ha sido adoptada por la industria para
aplicaciones que van desde la produccin de biomasa hasta la biorremediacin; las aplicaciones industriales que se
le dan a esta levadura van de acuerdo con sus propiedades de crecimiento acelerado, su capacidad termotolerante
y su produccin secrecin de enzimas, as como su produccin de etanol en menor medida (Lane et al., 2011). Muchas de las aplicaciones de K. marxianus estn basadas en
su capacidad de producir etanol con azcares especficos
tales como inulina o lactosa.
Una manera de hacer ms eficiente y rentable el procesamiento mediante enzimas es su inmovilizacin. A este respecto, las inulinasas pueden ser inmovilizadas y mantener
el 90 % de su actividad original despus de ser incubadas
a 60 C por 3 h. en contraste con su forma libre, donde se
observan prdidas de hasta el 10 % de su actividad en las
mismas condiciones, esto debido a que al inmovilizar la inulinasa se mejora su estabilidad trmica en 5 C segn Singh
y Lotey (2010). Estos investigadores reutilizaron la enzima
en 55 corridas, de stas en el cuarto ciclo se perdi un 10 %
de su actividad, en el ciclo 7 se perdi un 20 % y despus
de esto se mantuvo una prdida constante de hasta el 50 %
de su actividad en la corrida 23, probando un aumento en la
produccin de fructanos producidos, en el estudio tambin
se demostr que no hay diferencia si se utiliza inulina grado reactivo o inulina de fuentes naturales como la raz de
tupinambo (Singh y Lotey, 2010). Esto indica que se podra
utilizar inulina proveniente de residuos agroindustriales para
la produccin de fructanos.

Conclusiones
Los desechos de la industria del Agave poseen
caractersticas de composicin que permiten su utilizacin
como fuentes de carbono para microorganismos productores de inulinasas. Debido a los beneficios a la salud, y a
la importancia que estn tomando los productos provenientes de los oligofructanos, es necesaria la optimizacin de
la produccin de estas enzimas. La levadura K. marxianus
ha demostrado ser un microorganismo de alta resistencia a
condiciones de proceso y capacidad metablica para utilizar
productos naturales de inulina para la optimizacin y reduccin de los costos de produccin de estas enzimas. Debido a
la complejidad de los sustratos utilizados, es necesario realizar ms investigaciones tanto para la bsqueda de nuevas
cepas productoras de inulinasas, optimizar el uso de los residuos agroindustriales, y encontrar sistemas de reutilizacin
de las enzimas como lo es la inmovilizacin de las mismas,

14

Agave subproducts inulinases/Inulinasas subproductos del agave

immobilization, in order to effectively influence in the

con el fin de poder incidir efectivamente en el aprovecha-

exploitation of all the productive chain of agave.

miento de toda la cadena productiva del agave.

Acknowledgements

Agradecimentos

The authors wish to thank the support of project FOMIX Tamaulipas 193682, the Instituto Politcnico
Nacional (projects SIP2014-4029 and SIP2014-4002)
and CONACyT for the scholarship to S.A.H.A.

Los autores agradecen el apoyo del proyecto FOMIX Tamaulipas 193682, al Instituto Politcnico
Nacional (proyectos SIP2014-4029 y SIP2014-4002) y
al CONACyT por la beca a S.A.H.A.

References
Arrizon, J., Morel, S., Gschaedler, A. and Monsan, P. 2011. Purification and substrate specificities of a fructanase
from Kluyveromyces marxianus isolated from the fermentation process of mezcal. Bioresource Technology 102: 32983303.
Barnett, J.A., Rayne, R.W. and Yarrow, D. 2000. In Yeast: characteristics and identification. 3rd Edition, Cambridge U.K.
Chapter 3. How yeasts are classified. Chapter 7. Description of the species 21: 421.
Barragn-Huerta, B.E., Tllez Daz, Y.A. and Laguna Trinidad, A. 2008. Utilizacin de residuos agroindustriales. Revista
Sistemas Ambientales 2: 44-50.
Castillo, A. and Chamy, R. 2010. Produccin de inulinasa por levaduras Kluyveromyces marxianus. Scientia Agropecuaria 1: 235-245.
Chacon-Villalobos, A. 2006. Perspectivas agroindustriales actuales de los oligofructosacridos (FOS). Agronoma Mesoamericana 17: 265-286.
Chand, S., Jain, P.C. and Kango, N. 2012. Production of inulinase from Kluyveromyces marxianus using dahlia tuber extract.
Brazilian Journal of Microbiology 1: 62-69.
Chvez, L. 2010. Uso de bagazo de la industria mezcalera como materia prima para generar energa. Ingenieras 8: 8-16.
Chi, Z-M., Chi, Z., Zhang, T., Liu, G. and Yue, L. 2009. Inulinase-expressing microorganisms and applications of inulinases.
Applied Microbiology and Biotechnology 82: 211220.
Chi, Z-M., Zhang, T., Cao, T-S., Liu, X-Y., Cui, W. and Zhao, C-H. 2011. Biotechnological potential of inulin for bioprocesses.
Bioresource Technology 102: 42954303.
CUCEA IDIT pyme. 2013. Reporte de inteligencia competitiva IDIT pyme: Anlisis coyuntural: Inulina y jarabe de agave
mexicano. Instituto para el desarrollo y la innovacin de la tecnologa en la pequea y mediana empresa.
Universidad Autnoma de Guadalajara. En: http://iditpyme.cucea.udg.mx/sites/default/files/IDITpyme.Inulina_0.
pdf, ltima consulta: 14 de marzo de 2014.
Dinarvand, M., Ariff, A.B., Moeini, H., Masomian, M., Mousavi, S.S., Nahavandi, R., et al. 2012. Effect of extrinsic and intrinsic
parameters on inulinase production by Aspergillus niger ATCC 20611. Electronic Journal of Biotechnology 15: 1-11.
Fonseca, G.G., Heinzle, E., Wittmann, C. and Gombert, A.K. 2008. The yeast Kluyveromyces marxianus and its biotechnological potential. Applied Microbiology Biotechnology 79: 339354.
Garca, A.J. 2007. Los agaves de Mexico. Ciencias 87: 14-23.
Garca, A.J. 2012. Mxico pas de magueyes y mezcales. Tecnoagave 17: 22-24.
Gobierno del Estado de Hidalgo: Museo Nacional de Culturas Populares. 1988. El Maguey, el rbol de las maravillas. Edicin Ilustrada, Gobierno del Estado de Hidalgo, Universidad de Texas 178.
Golunski, S., Astolfi, V., Carniel, N., de Oliveira, D., Di Luccio, M., Mazutti M. A., et al. 2011. Ethanol precipitation and ultrafiltration of inulinases from Kluyveromyces marxianus. Separation and Purification Technology 78: 261-265.
Gong, F., Sheng, J., Chi, Z. and Li, C. 2007. Inulinase production by a marine yeast Pichia guilliermondii and inulin hydrolysis
by a crude inulinase. Journal Industrial Microbiology Biotechnology 34: 179185.
Huad-Marroqun, L.A., Prez-Lin, A., Resendez-Prez, D., Moreno, C., Lara Vsquez, S., Lzaro Lpez, D., et al. 2010. Determinacin qumica y estudio teraputico de Agave tequilana weber. Revista Salud Pblica y Nutricin 5: 254-265.

Revista Bio Ciencias 3(1): 4-16

15

Huerta et al., 2014.

Huitron, C., Perez, R., Sanchez, A.E., Lappe, P. and Rocha Zavaleta, L. 2008. Agricultural waste from the tequila industry as
substrate for the production of commercially important enzymes. Journal of Environmental Biology 29: 37-41.
Ibarra-Hernndez, E.B., Botero Gonzalez, J.F. and Cortez Amador, C. 2010. Ingenieria de tequila 1 Edicion. Bogota,
Colombia. 12-37 pp.
Lafuente-Castaneda, C., Martinez, G., Contreras-Esquivel, J.C., Rodriguez-Herrera, R., Prado-Barragan, A. and Aguilar, C.N.
2012. Inulinase production by Penicillium citrinum ESS in submerged and solid-state cultures. American Journal of
Agricultural and Biological Sciences 7: 129-134.
Lane, M.M., Burke, N., Karreman, R., Wolfe, K.H., OByrne, C.P. and Morrissey, J.P. 2011. Physiological and metabolic diversity
in the yeast Kluyveromyces marxianus, Antonie van Leeuwenhoek 100: 507519.
Laowklom, N., Chantanaphan, R. and Pinphanichakarn, P. 2012. Production, purification and characterization of inulinase from a
newly isolated Streptomyces sp. CP01. Natural Resources 3: 137-144.
Madrigal, L. and Sangronis, E. 2007. La inulina y derivados como ingredientes claves en alimentos funcionales. Archivos Latinoamericanos de Nutricin. rgano Oficial de la Sociedad Latinoamericana de Nutricin 57: 387-396.
Makino, Y., Treichel, H., Mazutti, M.A., Maugeri, F. and Rodrigues, M.I. 2009. Inulinase bio-production using agroindustrial residues: screening of microorganisms and process parameters optimization. Journal of Chemistry
Technology Biotechnology 84: 10561062.
Mancilla-Margalli, N.A. and Lpez, M.G. 2006. Water-soluble carbohydrates and fructan structure patterns from Agave and Dasylirion species. Journal of Agricultural Food Chemistry 54: 7832-7839.
Marchetti, G. 1993. Inulin and falcons. Industrys Alimentary 32: 945949.
Mazutti, M., Bender, J.P., Treichel, H. and Di Luccio, M. 2006. Optimization of inulinase production by solid-state fermentation
using sugarcane bagasse as substrate. Enzyme and Microbial Technology 39: 5659.
Muoz-Gutirrez, I., Rodriguez-Alegria, M.E. and Lopez Munguia, A. 2009. Kinetic behaviour and specificity of -fructosidases in
the hydrolisis of plant and microbial fructans. Process Biochemistry 44: 891-898.
Neagu Bonciu, C., Constantin, O. and Bahrim, G. 2012. Increase in extracellular inulinase production for a new Rhizoctonia ssp. strain by using buckwheat (Fagopyrum esculentum) our as a single carbon source. Letters
in Applied Microbiology 55: 195-201.
Nguyen, Q.D., Sujt, N.M., Bujna, E., Hoschke, . and Rezessy-Szab, J.M. 2012. Effects of medium composition and process parameters on the production of Extracellular inulinase by Thermomyces lanuginosus. Food Technology
and Biotechnology 51: 3644.
NMX-FF-110-SCFI-2008. Norma Mexicana. Alimentos-Jarabe de Agave 100%- Especificaciones. Fecha de aprobacin y publicacin Marzo, 2008. En: http://200.77.231.100/work/normas/nmx/2007/proy-nmx-ff-110-scfi-2008.pdf, ltima consulta: 1 de diciembre de 2012.
Oluwaseun Garuba, E. and Abiodun Onilude, A. 2012. Characterization of crude thermostable exoinulinase produced by Saccharomyces sp. Journal of Thermoelectricity 16(2): 81-88.
Pratap Kumar, G., Kunamneni, A., Prabhakar, T. and Ellaiah, P. 2005. Optimization of process parameters for the production of inulinase from a newly isolated Aspergillus niger AUP19. World Journal of Microbiology & Biotechnology 21: 13591361.
Singh, P. and Gill, P.K. 2006. Production of inulinases: Recent advances. Food Technology Biotechnology 44: 151162.
Singh, R.S., Dhaliwal, R. and Puri, M. 2007. Production of high fructose syrup from Asparagus inulin using immobilized exoinulinase from Kluyveromyces marxianus YS-1. Journal of Industries Microbiology Biotechnology 34: 649655.
Singh, R.S. and Lotey, S. 2010. Enhanced exoinulinase Production from Kluyveromyces marxianus YS-1 using response surface
methodology. Brazilian Archives of Biology and Technology 53: 1005-1013.
Singh, R.S., Singh Sooch, B. and Puri, M. 2006. Optimization of medium and process parameters for the production of inulinase
from a newly isolated Kluyveromyces marxianus YS-1. Bioresource Technology 98: 25182525.
Yepez Silva-Santisteban, B.O., Converti, A. and Maugeri Filho, F. 2008. Effects of carbon and nitrogen sources and oxygenation
on the production of inulinase by Kluyveromyces marxianus. Applied Biochemistry Biotechnology 152: 249261.

Cite this paper/Como citar este artculo: Huerta Alcocer, S.A., Larralde Corona, C.P., Narvez
Zapata, J.A. (2014). Application of agave subproducts for production of microbial inulinases. Revista
Bio Ciencias 3(1): 4-16. http://editorial.uan.edu.mx/index.php/BIOCIENCIAS/article/view/109/84

Revista Bio Ciencias 3(1): 4-16

16