Moringa A Nivel Laboratorio PDF
Moringa A Nivel Laboratorio PDF
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Facultad de Ingeniera
Escuela de Ingeniera Qumica
FACULTAD DE INGENIERA
TRABAJO DE GRADUACIN
AL CONFERRSELE EL TTULO DE
INGENIERO QUMICO
1. ANTECEDENTES .................................................................................... 1
I
2.1.6. Valor nutricional....................................................... 13
2.1.7. Composicin qumica .............................................. 15
2.1.8. Actividad biolgica ................................................... 17
2.1.9. Indicaciones teraputicas ........................................ 18
2.1.10. Farmacognosia........................................................ 19
2.1.11. Toxicologa .............................................................. 20
2.2. Caracterizacin de las fracciones extrables ............................ 20
2.2.1. Tamizaje fitoqumico ............................................... 20
2.2.1.1. Aceites esenciales ................................ 21
2.2.1.2. cidos grasos ....................................... 21
2.2.1.3. Agliconas de flavonoides ...................... 22
2.2.1.4. Alcaloides ............................................. 22
2.2.1.5. Amidas ................................................. 22
2.2.1.6. Antocianinas ......................................... 23
2.2.1.7. Antraquinonas ...................................... 23
2.2.1.8. Carotenoides ........................................ 23
2.2.1.9. Compuestos reductores ....................... 24
2.2.1.10. Cumarinas ............................................ 24
2.2.1.11. Esteroles .............................................. 24
2.2.1.12. Flavonoides .......................................... 24
2.2.1.13. Glucsidos cianognicos ...................... 25
2.2.1.14. Muclagos ............................................. 25
2.2.1.15. Polisacridos ........................................ 25
2.2.1.16. Saponinas ............................................ 26
2.2.1.17. Taninos catquicos y taninos glicos ... 26
2.2.1.18. Triterpenos ........................................... 26
2.2.2. Cromatografa ......................................................... 27
2.2.2.1. Cromatografa de gases acoplada a
espectrometra de masas (CG-MS) ..... 28
II
2.2.2.2. Cromatografa lquido-slido (capa
fina) ...................................................... 30
2.2.3. ndice de refraccin ................................................ 30
2.2.4. Densidad ................................................................ 31
2.3. Extraccin slido-lquido .......................................................... 31
2.3.1. Tipos de extraccin slido-lquido........................... 33
2.3.1.1. Extraccin slido-lquido con unidad
de tipo Soxhlet ..................................... 34
2.3.1.2. Extraccin slido-lquido por
maceracin dinmica con reflujo ......... 35
2.3.2. Parmetros de la extraccin slido-lquido ............. 36
2.3.2.1. Tamao de partcula ............................ 36
2.3.2.2. Naturaleza del solvente extractor ........ 36
2.3.2.3. Presin ................................................ 37
2.3.2.4. Temperatura ........................................ 37
2.3.2.5. Agitacin .............................................. 38
2.3.2.6. pH ........................................................ 38
2.3.2.7. Tiempo ................................................. 38
2.4. Tratamiento de la materia prima .............................................. 39
2.4.1. Recoleccin ............................................................ 39
2.4.2. Secado ................................................................... 39
2.4.3. Molienda ................................................................. 40
2.5. Solventes ................................................................................. 41
2.5.1. Clasificacin............................................................ 41
2.5.2. Metanol ................................................................... 43
2.5.3. Hexano ................................................................... 44
2.5.4. Agua ....................................................................... 46
2.6. Anlisis proximal...................................................................... 47
2.6.1. Protena cruda ........................................................ 49
III
2.6.2. Extracto etreo ........................................................ 49
2.6.3. Fibra cruda .............................................................. 50
2.6.4. Humedad ................................................................. 51
2.6.5. Cenizas ................................................................... 51
2.7. Estudio histolgico ................................................................... 51
3. DISEO METODOLGICO.................................................................... 55
3.1. Descripcin de variables .......................................................... 55
3.1.1. Variables independientes ........................................ 55
3.1.2. Variables dependientes directas ............................. 55
3.1.3. Variables del proceso de extraccin
slido-lquido ........................................................... 55
3.2. Delimitacin del campo de estudio ........................................... 56
3.2.1. Seleccin de muestra .............................................. 56
3.2.2. Seleccin de solventes ............................................ 57
3.2.3. Seleccin de tcnicas .............................................. 58
3.2.4. Localizacin............................................................. 58
3.3. Recursos humanos disponibles ............................................... 59
3.4. Recursos materiales disponibles .............................................. 59
3.4.1. Materia prima .......................................................... 59
3.4.2. Reactivos................................................................. 59
3.4.3. Equipo ..................................................................... 59
3.4.4. Cristalera ................................................................ 60
3.4.5. Instrumentos de medicin ....................................... 60
3.4.6. Instalaciones ........................................................... 60
3.5. Tcnica cualitativa o cuantitativa .............................................. 61
3.5.1. Estudio preliminar .................................................... 61
3.5.2. Estudio histolgico y anlisis proximal .................... 61
3.5.3. Preparacin de la muestra ...................................... 62
IV
3.5.4. Estudio experimental .............................................. 62
3.5.5. Evaluacin de rendimiento ..................................... 63
3.5.6. Caracterizacin fitoqumica..................................... 64
3.5.7. Identificacin de compuestos qumicos .................. 64
3.5.8. Interpretacin de resultados ................................... 64
3.6. Recoleccin y ordenamiento de la informacin ....................... 64
3.7. Tabulacin, ordenamiento y procesamiento de la
informacin .............................................................................. 66
3.8. Anlisis estadstico .................................................................. 67
4. RESULTADOS ....................................................................................... 77
5. INTERPRETACIN DE RESULTADOS................................................. 93
5.1. Estudio histolgico ................................................................... 93
5.2. Anlisis proximal ...................................................................... 94
5.3. Rendimiento de extraccin ...................................................... 96
5.4. Identificacin de familias de metabolitos secundarios ........... 100
V
VI
NDICE DE ILUSTRACIONES
FIGURAS
VII
16. Diagrama de caja de densidad (gramos/mililitro) versus solvente
extractor de la fraccin extrable de la semilla de moringa (Moringa
olefera Lam.) ........................................................................................ 69
17. Medias marginales de la densidad de la fraccin extrable de la
semilla de moringa (Moringa olefera Lam.) .......................................... 70
18. Diagrama de caja del ndice de refraccin versus solvente extractor
de la fraccin extrable de la semilla de moringa (Moringa olefera
Lam.) ................................................................................................. 71
19. Medias marginales del ndice de refraccin de la fraccin extrable
de la semilla de moringa (Moringa olefera Lam.) ................................. 72
20. Diagrama de caja de slidos solubles totales (gramos) versus
solvente extractor de la fraccin extrable de la semilla de moringa
(Moringa olefera Lam.)......................................................................... 73
21. Medias marginales de los slidos solubles totales de la fraccin
extrable de la semilla de moringa (Moringa olefera Lam.) .................. 74
22. Diagrama de Schewart para el rendimiento de la fraccin
extrable de la semilla de moringa (Moringa olefera Lam.)
utilizando hexano como solvente, con un nivel de confianza del
99% ................................................................................................. 75
23. Diagrama de Schewart para el rendimiento de la fraccin
extrable de la semilla de moringa (Moringa olefera Lam.)
utilizando metanol como solvente, con un nivel de confianza del
99% ................................................................................................. 76
24. Diagrama de Schewart para el rendimiento de la fraccin
extrable de la semilla de moringa (Moringa olefera Lam.)
utilizando agua como solvente, con un nivel de confianza del 99% .... 76
25. Tejido nutritivo que conforma los cotiledones de la semilla de
moringa (Moringa olefera Lam.), teido con Sudn IV, aumento 4X ... 77
26. Detalle de las clulas conteniendo eleoplastos, aumento 40X ............. 77
VIII
27. Corte del rea central del tejido de reserva, teido con Sudn IV,
aumento 10X ........................................................................................ 78
28. Tejido nutritivo de los cotiledones de la semilla de moringa
(Moringa olefera Lam.) teidos con azul de cresilo, aumento 40X ...... 78
29. Corte longitudinal de los cotiledones teidos con lugol, aumento 4X ... 79
30. Tejido cotiledonar de la semilla de moringa (Moringa olefera Lam.)
teido con reactivo de Dragendorff, aumento 20X ............................... 79
31. Composicin total de la semilla de moringa (Moringa olefera Lam.),
obtenida del anlisis bromatolgico ..................................................... 80
32. Composicin con base seca de la semilla de moringa (Moringa
olefera Lam.), obtenida del anlisis bromatolgico ............................. 80
33. Rendimiento porcentual de la fraccin extractable de la semilla de
moringa (Moringa olefera Lam.), en funcin del solvente utilizado ..... 81
34. Monitoreo de la densidad del extracto de la semilla de moringa
(Moringa olefera Lam.), durante el proceso de decoccin,
utilizando la tcnica Soxhlet y hexano como solvente.......................... 89
35. Monitoreo de los slidos totales disueltos del extracto de la semilla
de moringa (Moringa olefera Lam.), durante el proceso de
decoccin, utilizando la tcnica Soxhlet y hexano como solvente ....... 89
36. Monitoreo de la densidad del extracto de la semilla de moringa
(Moringa olefera Lam.), durante el proceso de decoccin,
utilizando la tcnica Soxhlet y metanol como solvente......................... 90
37. Monitoreo de los slidos totales disueltos del extracto de la semilla
de moringa (Moringa olefera Lam.), durante el proceso de
decoccin, utilizando la tcnica Soxhlet y metanol como solvente ...... 90
38. Monitoreo de la densidad del extracto de la semilla de moringa
(Moringa olefera Lam.), durante el proceso de decoccin,
utilizando la tcnica de extraccin slido-lquido a reflujo y agua
como solvente ...................................................................................... 91
IX
39. Monitoreo de los slidos totales disueltos del extracto de la semilla
de moringa (Moringa olefera Lam.), durante el proceso de
decoccin, utilizando la tcnica de extraccin slido-lquido a reflujo
y agua como solvente .......................................................................... 91
TABLAS
X
XX. Comparacin de Tukey para las medias de los slidos solubles
totales ................................................................................................ 75
XXI. Rendimiento porcentual total de la fraccin extrable con hexano,
de la semilla de moringa (Moringa olefera Lam.) ................................ 81
XXII. Rendimiento porcentual total de la fraccin extrable con metanol,
de la semilla de moringa (Moringa olefera Lam.) ................................ 82
XXIII. Rendimiento porcentual total de la fraccin extrable con agua, de
la semilla de moringa (Moringa olefera Lam.) ..................................... 82
XXIV. Familias de metabolitos secundarios detectados en la fraccin
extrable de la semilla de moringa (Moringa olefera Lam.), al
realizar el tamizaje fitoqumico, para cada solvente ............................. 83
XXV. Metabolitos secundarios detectados en la fraccin extractable de la
semilla de moringa (Moringa olefera Lam.), utilizando
cromatografa capilar de gases acoplada a espectrometra de
masas (CGC/MS/DS) ........................................................................... 84
XXVI. Clasificacin de los metabolitos secundarios encontrados en la
fraccin extractable de la semilla de moringa (Moringa olefera
Lam.), al utilizar cromatografa capilar de gases acoplada a
espectrometra de masas (CGC/MS/DS) ............................................. 85
XXVII. Densidad de las fracciones extrables de la semilla de moringa
(Moringa olefera Lam.), obtenidas con los diferentes solventes ......... 86
XXVIII. ndice de refraccin de las fracciones extrables de la semilla de
moringa (Moringa olefera Lam.), obtenidas con los diferentes
solventes ................................................................................ 87
XXIX. Slidos solubles de las fracciones extrables de la semilla de
moringa (Moringa olefera Lam.), obtenidas con los diferentes
solventes .............................................................................................. 88
XI
XII
LISTA DE SMBOLOS
Smbolo Significado
atm Atmsfera
cm Centmetro
Constante dielctrica
C Grados Celsius
Densidad
F Fisher calculada
g Gramo
h Hora
Hi Hiptesis de investigacin
Ho Hiptesis nula
kg Kilogramo
Media
XIII
m Metro
mm Milmetro
No. Nmero
% Porcentaje
pH Potencial de hidrgeno
s Segundo
XIV
GLOSARIO
XV
Decoccin Procedimiento de extraccin slido-lquido que se
refiere especficamente al uso del disolvente, a su
temperatura de ebullicin.
XVI
RESUMEN
XVII
XVIII
OBJETIVOS
General
Especficos
XIX
HIPTESIS
Hiptesis de trabajo
XX
INTRODUCCIN
XXI
Este trabajo de graduacin busca contribuir a la investigacin de la semilla
del rbol de moringa, cultivado en Guatemala, y as favorecer el desarrollo
econmico de las comunidades rurales y el uso de la medicina natural. Para
lograr este objetivo se recolectaron muestras de la aldea El Obrajuelo,
municipio de Villa Canales, departamento de Guatemala; se realizaron las
extracciones de las fracciones solubles de la semilla de moringa utilizando el
mtodo de extraccin slido-lquido con los solventes a temperatura de
ebullicin (procedimiento de decoccin).
XXII
1. ANTECEDENTES
1
A nivel de tesis se han desarrollado las siguientes investigaciones: La
utilizacin de la semilla de la Moringa olefera como coagulante natural
realizado por el ingeniero Juan Manuel Meja Guilln, como trabajo de
graduacin para optar al ttulo de Mster en Ingeniera Sanitaria de la Facultad
de Ingeniera, en 1986, en donde se concluy que la semilla de moringa tuvo un
mejor comportamiento al compararse con el sulfato de aluminio y un mejor
desempeo como removedor de turbiedad.
2
Determinacin de la accin antiespasmdica in vitro de las infusiones de
las flores, hojas, races, semillas y tallos de Moringa olefera Lam. realizado por
la estudiante Ingrid Sofa Rizzo Jurez, como trabajo de graduacin para optar
al ttulo de Qumico Farmacutico de la Facultad de Ciencias Qumicas y
Farmacia, en 1989, en donde se determin que nicamente las infusiones de
semilla presentaron accin inhibitoria del espasmo intestinal.
3
Efectos de la semilla de Moringa olefera Lam. sobre Staphylococcus
aureus en el tratamiento de piodermias realizado por la estudiante Sandra
Mercedes Floralvia Lpez Girn, como trabajo de graduacin para optar al ttulo
de Qumico Farmacutico de la Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacias, en
1990. Mediante este estudio se concluy que tanto el extracto acuoso como el
aceite obtenido de las semillas de moringa, son efectivos en el tratamiento de
infecciones y se le da validez como antibacteriano.
4
2. MARCO TERICO
2.1.1.1. rbol
5
2.1.1.2. Hojas
2.1.1.3. Flores
El fruto es una cpsula colgante, seca, marrn, con tres ngulos fuertes,
17-55 cm de largo por 2-3 cm de ancho, dehiscente. Las semillas de la moringa
son carnosas, de color pardo oscuro, globulares y de aproximadamente 1 cm de
dimetro, con tres alas y una consistencia papircea; su endospermo es
blanquecino y muy oleaginoso.
6
Figura 1. Forma de frutos y semillas de la moringa
Reino: Plantae
Divisin: Magnoliophyta
Subclase: Dilleniidae
Clase: Magnoliopsida
Orden: Capparidales
Familia: Moringaceae
Gnero: Moringcea
Especie: Moringa olefera
Nombre Cientfico: Moringa olefera Lam.
Variedades: M. arbrea, M. borziana, M. concanensis, M. drouhardii, M.
hildebrandtii, M. longituba, M. ovalifolia, M. peregrina, M. pygmaea, M.
rivae, M. ruspoliana, M. stenopetala (Balbir, 2005)
7
Existe un solo gnero de 14 especies conocidas en todo el mundo. La M.
olefera es una de las especies ms importantes y de mayor uso y cultivo; sta
es originaria de las regiones montaosas de los Himalayas al noreste de la
India.
2.1.3. Distribucin
8
2.1.4. Cultivo
2.1.4.1.1. Clima
9
Por ser una planta de origen tropical, se desarrolla en climas semiridos,
semihmedos y hmedos. La moringa crece bien en alturas que van desde el
nivel del mar hasta los 1,200 m de altitud y prospera en temperaturas altas,
considerndose ptimas para un buen comportamiento las que estn entre 24 y
32 C. En el subtrpico, la moringa tolera heladas ligeras. Una helada puede
matar un rbol maduro hasta las races, pero es capaz de recuperarse.
Rpidamente produce un retoo desde el tronco cuando es cortado, o desde el
suelo cuando se ha congelado.
2.1.5. Usos
10
2.1.5.1. Usos medicinales atribuidos
11
Por siglos, la gente en muchos pases ha usado las hojas de la moringa
como una medicina tradicional para curar enfermedades leves comunes. Los
estudios clnicos han empezado a sugerir que por lo menos algunas de estas
ideas son vlidas.
12
El aceite se usa en perfumera, como fijado y lubricante de maquinaria
fina, es muy resistente al enranciamiento. La goma de la corteza tiene buenas
cualidades para pegar. La mayora de las partes de la planta son comestibles.
La races gruesas y carnosas tienen un sabor parecido al man, otros autores
mencionan que es similar al rbano inclusive en su olor y preparacin.
Un anlisis nutritivo indica que las hojas de moringa contienen una riqueza
de nutrientes esenciales que evitan enfermedades. Adems contienen todo el
aminocido esencial (tablas I y II), algo que es poco comn en una planta. Dado
que las hojas secas son concentradas, contienen grandes cantidades de varios
nutrientes, con excepcin de la vitamina C (Balbir, 2005).
13
Tabla I. Contenido del aminocido de las hojas de moringa
14
2.1.7. Composicin qumica
15
Tabla III. Componentes qumicos de la moringa
16
Tabla IV. cidos grasos contenidos en la semilla de moringa
17
De acuerdo con Cceres (1993) el extracto de corteza de raz tiene
actividad antiinflamatoria medida por tres mtodos de induccin de la
inflamacin, sugirindose un modo de accin similar a la adrenalina; otro
estudio demuestra que inhibe el edema por carragenina en rata, solo en la
inflamacin aguda y presenta aumento de la actividad tensil, de la lisiloxidasa y
del contenido de hexosamina; lo que indica una actividad cicatrizante.
18
2.1.10. Farmacognosia
19
Por fraccionamiento bioguiado se han aislado del extracto etanlico de las
hojas, al menos nueve glicsidos completamente acetilados con grupos
tiocarbamato, carbamato o nitrilo, los cuales son muy raros en la naturaleza; los
compuestos de tiocarbamato presentan actividad hipotensora (Cceres, 1996).
2.1.11. Toxicologa
20
Las familias de compuestos posibles de identificar se describen a
continuacin.
21
2.2.1.3. Agliconas de flavonoides
2.2.1.4. Alcaloides
2.2.1.5. Amidas
22
2.2.1.6. Antocianinas
2.2.1.7. Antraquinonas
2.2.1.8. Carotenoides
23
2.2.1.9. Compuestos reductores
2.2.1.10. Cumarinas
2.2.1.11. Esteroles
2.2.1.12. Flavonoides
24
As tambin reducen la fragilidad capilar, protegen frente a estados
txicos, antiinflamatorios y colorantes, combaten alergias, agregados
plaquetarios, radicales libres, microbios, virus, tumores, hipertensin y protegen
el sistema circulatorio. Se encuentran, por ejemplo, en la manzanilla.
2.2.1.14. Muclagos
2.2.1.15. Polisacridos
25
2.2.1.16. Saponinas
2.2.1.18. Triterpenos
26
Se les extrae, preferentemente, por arrastre de vapor o por solventes
orgnicos. Las plantas con aceites esenciales se ubican, principalmente, en las
familias de las labiadas y las umbelferas. Las propiedades curativas son
variadas y abundantes. Por lo general, poseen propiedades sedantes,
antiespasmdicas y desinfectantes. Dado que son compuestos voltiles, son
eliminados por las vas respiratorias y actan como expectorantes.
2.2.2. Cromatografa
27
La grfica de la seal del analizador que muestra los picos para cada
componente es un cromatograma. Un cromatograma tpico se representa en la
figura 4 presentada a continuacin:
28
Una vez separados, detectados, e incluso cuantificados todos los
componentes individuales de una muestra problema, el nico dato del que se
dispone para la identificacin de cada uno de ellos es el tiempo de retencin
de los correspondientes picos cromatogrficos. Este dato no es suficiente para
una identificacin inequvoca, sobre todo cuando se analizan muestras con un
nmero elevado de componentes, como es frecuente en cromatografa capilar
de gases.
29
Cada uno de estos componentes se registra en forma de pico
cromatogrfico y se identifica mediante su respectivo espectro de masas.
30
El ndice de refraccin es la relacin o cociente entre el ngulo de
incidencia y el de refraccin. El valor de este ndice es una funcin directa del
peso molecular de los aceites, aumentando en proporcin al nmero de tomos
de carbono que posean los cidos grasos y a un grado de instauracin.
2.2.4. Densidad
Es una propiedad fsica que expresa la relacin que existe entre la masa
del cuerpo y su volumen. La densidad puede obtenerse de forma indirecta y
directa. Para la obtencin indirecta, se miden la masa y el volumen por
separado y posteriormente se calcula la densidad. La masa se mide
habitualmente con una balanza, mientras que el volumen puede medirse
determinando la forma del objeto y midiendo las dimensiones apropiadas o
mediante el desplazamiento de un lquido, entre otros mtodos.
31
Lixiviacin: es la disolucin preferente de uno o ms componentes de
una mezcla slida por contacto con un disolvente lquido (Treybal, 1988).
32
En la forma ms sencilla de esta operacin bsica se mezclan bien el
material de extraccin y el disolvente. A continuacin se separa y se regenera el
disolvente junto con el soluto en l disuelto. El material de extraccin puede
estar presente tambin como lecho fijo, que es atravesado por el disolvente.
33
La tcnica y el tipo de extraccin estn vinculados, ya que definiendo la
tcnica de extraccin se estar tambin puntualizando el tipo de extraccin que
se va a realizar, por ejemplo:
34
En la tcnica Soxhlet cada etapa comienza desde que cae la primera gota
del solvente condensado, hasta que sifonea la cmara de extraccin. La tcnica
Soxhlet es una de las ms sensibles en la toma de datos, ya que en s, la
unidad experimental, puede sacar muchas conclusiones con solo tomar los
datos adecuados. Algunos datos que pueden ser tiles para monitorear el
proceso se listan a continuacin:
pH
Densidad
Viscosidad
Colorimetra (absorbancia)
Refractometra (ndice de refractancia)
Tiempo de ciclo
Ciclos por da
Temperatura de cmara de extraccin de Soxhlet
35
El muestreo en esta tcnica no se puede realizar con tanta frecuencia, por
lo que nicamente es posible realizar mediciones de los siguientes parmetros:
pH
Densidad
Viscosidad
Absorbancia
ndice de refractancia
36
2.3.2.3. Presin
2.3.2.4. Temperatura
Temperatura ambiente
Temperatura de ebullicin de la solucin
A 70C, ya que muchos slidos biolgicos se degradan a esta
temperatura, o bien las protenas de la matriz del slido se
desnaturalizan y se extraen otros elementos, por lo que la extraccin deja
de ser selectiva.
Temperatura de fusin
Temperatura supercrtica
37
2.3.2.5. Agitacin
2.3.2.7. Tiempo
38
2.4. Tratamiento de la materia prima
2.4.1. Recoleccin
2.4.2. Secado
39
El secado es la etapa en la que se reduce el contenido de humedad de la
materia prima, sin embargo un tratamiento inadecuado de la semilla da como
resultado una materia prima de baja calidad, con prdida de principios activos,
as como un aumento de la carga microbiana.
2.4.3. Molienda
40
2.5. Solventes
2.5.1. Clasificacin
41
Tabla V. Caractersticas de solventes
Clasificacin Caractersticas
Prticos Poseen un grupo funcional capaz de ceder protones
(OH, NH, SH)
Capacidad para formar puentes de hidrgeno
Polares
Aprticos polares Carecen de grupos funcionales capaces de ceder
protones
Constante dielctrica alta
Aprticos apolares Carecen de grupos funcionales capaces de ceder
protones
Constante dielctrica baja
Cuando se dice que una molcula es polar, se quiere decir que tiene un
elevado momento dipolar. Sin embargo, cuando se dice que un disolvente es
polar, significa que tiene una elevada constante dielctrica (ver tabla VI).
42
Tabla VI. Clasificacin de solventes
Constante
Clasificacin Solvente dielctrica
(25C)
Agua 78,30
Metanol 33,60
Prtico
Polar Etanol 24,30
Isopropanol 18,30
Aprtico Acetona 20,70
2.5.2. Metanol
43
Tabla VII. Propiedades del metanol
2.5.3. Hexano
44
Se trata de un lquido incoloro, fcilmente inflamable y con un olor
caracterstico a disolvente. Es poco no polar o combinable con el agua, pero se
mezcla bien con los disolventes orgnicos apolares como el alcohol, el ter o
el benceno. Es muy poco polar, por lo que su momento dipolar es casi nulo y
su fuerza de elucin es muy baja (=0,01). Las propiedades del hexano se
presentan a continuacin en la tabla VIII, su estructura molecular en la figura 6.
45
2.5.4. Agua
Los dos enlaces no estn opuestos, sino que forman un ngulo de 104,45
debido a la hibridacin sp3 del tomo de oxgeno, as que en conjunto, los tres
tomos forman una molcula angular, cargada negativamente donde se ubica el
oxgeno y positivamente donde se encuentran los hidrgenos. Este hecho
permite que las molculas de agua se atraigan fuertemente, adhirindose por
donde son opuestas las cargas. Las propiedades se presentan a continuacin
en la tabla IX y su estructura molecular en la figura 7.
46
Figura 7. Estructura molecular del agua
47
Figura 8. Mtodo de Weende de anlisis proximal
48
2.6.1. Protena cruda
49
2.6.3. Fibra cruda
Por otra parte, el extracto libre de nitrgeno (ELN) es una medida indirecta
de los carbohidratos solubles o digeribles presentes en el alimento. Se
obtiene mediante la sumatoria de los valores porcentuales determinados para la
humedad, protena cruda, lpidos, fibra cruda y ceniza, y sustrayendo el total de
100. En alimentos basados en vegetales, esta fraccin se compone
principalmente de azcares libres, almidn y otros carbohidratos digeribles.
50
2.6.4. Humedad
2.6.5. Cenizas
51
Figura 9. Proceso del estudio histolgico
Para empezar con la tcnica histolgica se debe obtener una muestra del
tejido.
52
Lavado: se hace para eliminar el exceso de fijador. Existen medios de
inclusin que son hidrfobos y precisan de la eliminacin de agua en la
muestra. Debido a que una gran parte del tejido est constituida por
agua, se aplica una serie gradual de soluciones acuosas de menor a
mayor grado de agente deshidratante, por ejemplo, alcohol etlico o
acetona.
53
Corte: la mayor parte de los preparados para microscopa ptica tienen
un grosor entre 5 a 10 micrmetros. Para estos cortes se utiliza un
aparato llamado micrtomo, con cuchillas de acero.
54
3. DISEO METODOLGICO
55
Tabla X. Variables del proceso de extraccin de las fracciones
extractables de la semilla de moringa
56
Figura 10. Ubicacin geogrfica de la plantacin de moringa en la
aldea El Obrajuelo, Villa Canales
Los solventes son hexano con una baja constante dielctrica de 1.89, el
metanol con una constante dielctrica media de 33.6 y el agua con una alta
constante dielctrica de 78.3, tal como se puede comparar en la figura 11.
57
Figura 11. Constantes dielctricas de solventes
3.2.4. Localizacin
3.4.2. Reactivos
3.4.3. Equipo
59
3.4.4. Cristalera
Matraces
Earlenmeyers
Balones
Beackers
Picnmetro
Probetas
Pipetas volumtricas
Vidrios de reloj
Termmetro
Balanza analtica
Balanza de humedad
Refractmetro
Cronmetro digital
3.4.6. Instalaciones
60
Herbario Aguat, Facultad de Agronoma, USAC.
Laboratorio de Histologa, Facultad de Agronoma, USAC.
Instalaciones del laboratorio de Bromatologa, Facultad de Veterinaria,
USAC.
61
3.5.3. Preparacin de la muestra
62
Figura 12. Procedimiento para extraer las fracciones extrables de la
semilla de moringa
63
3.5.6. Caracterizacin fitoqumica
64
Figura 13. Diagrama de flujo del desarrollo del trabajo
65
3.7. Tabulacin, ordenamiento y procesamiento de la informacin
66
Tabla XII. Tabla para el monitoreo de propiedades durante el proceso de
extraccin
67
Tabla XIII. Anlisis de varianza para el rendimiento porcentual
Total 1628,1372 14
68
Tabla XIV. Comparacin de Tukey para las medias del rendimiento
porcentual
Metanol 22,1007 A
Hexano 27,1519 B
Agua 46,2523 C
69
Tabla XV. Anlisis de varianza para la densidad
Total 0,2835 14
70
Tabla XVI. Comparacin de Tukey para las medias de la densidad
Media
Solvente Subconjunto
(g/mL)
Metanol 0,8968 A
Hexano 1,1846 B
Agua 1,1919 C
71
Tabla XVII. Anlisis de varianza para el ndice de refraccin
72
Tabla XVIII. Comparacin de Tukey para las medias del ndice de
refraccin
Metanol 1,4703 A
Hexano 1,4735 B
Agua 1,4270 C
73
Tabla XIX. Anlisis de varianza para los slidos solubles totales
74
Tabla XX. Comparacin de Tukey para las medias de los slidos
solubles totales
Metanol 0,6536 A
Hexano 0,9685 B
Agua 0,6426 A
28
27,5
Rendimiento (%)
Experimental
27 LI
Promedio
LS
26,5
26
Hex I Hex II Hex III Hex IV Hex V
75
Figura 23. Diagrama de Schewart para el rendimiento de la fraccin
extrable de la semilla de moringa (Moringa olefera Lam.) utilizando
metanol como solvente, con un nivel de confianza del 99%
23,5
23
Rendimiento (%)
22,5
Experimental
22
LI
21,5
Promedio
21
LS
20,5
20
MetOH1 MetOH2 MetOH3 MetOH4 MetOH5
47,5
47
Rendimiento (%)
Experimental
46,5 LI
Promedio
46 LS
45,5
H2O I H2O II H2O III H2OIV H2O V
76
4. RESULTADOS
77
Figura 27. Corte del rea central del tejido de reserva, teido con Sudn
IV, aumento 10X
78
Figura 29. Corte longitudinal de los cotiledones teidos con lugol,
aumento 4X
79
Figura 31. Composicin total de la semilla de moringa (Moringa olefera
Lam.), obtenida del anlisis bromatolgico
7%
Agua (%)
Materia seca total (%)
93%
0%
4% Extracto etreo (%)
Extracto libre de
17%
nitrgeno (%)
80
Figura 33. Rendimiento porcentual de la fraccin extractable de la
semilla de moringa (Moringa olefera Lam.), en funcin del solvente
utilizado
Desviacin
Rendimiento Media
Repeticin estndar
(%) (%)
(%)
1 27,05
2 26,95
3 27,92 27,15 0,5732
4 26,39
5 27,45
81
Tabla XXII. Rendimiento porcentual total de la fraccin extrable con
metanol, de la semilla de moringa (Moringa olefera Lam.)
1 22,74
2 21,98
3 20,76 22,10 0,8855
4 21,98
5 23,04
Desviacin
Rendimiento Media
Repeticin estndar
(%) (%)
(%)
1 45,98
2 46,20
3 47,04 46,25 0,4889
4 46,30
5 45,74
82
Tabla XXIV. Familias de metabolitos secundarios detectados en la
fraccin extrable de la semilla de moringa (Moringa olefera Lam.), al
realizar el tamizaje fitoqumico, para cada solvente
Solvente
Metabolito
Secundario Hexano Metanol Agua
Flavonoides - - -
Antraquinonas - - -
Alcaloides - - -
Saponinas + + +
Cumarinas - - -
Citronela - + -
Aceites
Mirceno + + +
esenciales
Limoneno - - -
Taninos - - -
Terpenos - - -
83
Tabla XXV. Metabolitos secundarios detectados en la fraccin
extractable de la semilla de moringa (Moringa olefera Lam.), utilizando
cromatografa capilar de gases acoplada a espectrometra de masas
(CGC/MS/DS)
84
Tabla XXVI. Clasificacin de los metabolitos secundarios encontrados en
la fraccin extractable de la semilla de moringa (Moringa olefera Lam.), al
utilizar cromatografa capilar de gases acoplada a espectrometra de
masas (CGC/MS/DS)
85
Tabla XXVII. Densidad de las fracciones extrables de la semilla de
moringa (Moringa olefera Lam.), obtenidas con los diferentes solventes
Densidad Desviacin
Media
Muestra a 22C estndar
(g/mL)
(g/mL) (g/mL)
Hexano 1 0,8922
Hexano 2 0,8989
Hexano 3 0,8965 0,8968 0,0030
Hexano 4 0,8963
Hexano 5 0,8999
Metanol 1 1,1873
Metanol 2 1,1789
Metanol 3 1,1879 1,1846 0,0049
Metanol 4 1,1891
Metanol 5 1,1798
Agua 1 1,1905
Agua 2 1,1902
Agua 3 1,1956 1,1919 0,0022
Agua 4 1,1918
Agua 5 1,1917
86
Tabla XXVIII. ndice de refraccin de las fracciones extrables de la semilla
de moringa (Moringa olefera Lam.), obtenidas con los diferentes
solventes
ndice de Desviacin
Muestra Media
refraccin estndar
Hexano 1 1,4707
Hexano 2 1,4700
Hexano 3 1,4702 1,4703 0,0007
Hexano 4 1,4693
Hexano 5 1,4711
Metanol 1 1,4731
Metanol 2 1,4725
Metanol 3 1,4745 1,4735 0,0008
Metanol 4 1,4742
Metanol 5 1,4734
Agua 1 1,4276
Agua 2 1,4286
Agua 3 1,4267 1,4270 0,0016
Agua 4 1,4245
Agua 5 1,4278
87
Tabla XXIX. Slidos solubles de las fracciones extrables de la semilla de
moringa (Moringa olefera Lam.), obtenidas con los diferentes solventes
Slidos Desviacin
Muestra solubles Media (g) estndar
totales (g) (g)
Hexano 1 0,9671
Hexano 2 0,9634
Hexano 3 0,9587 0,9685 0,0086
Hexano 4 0,9812
Hexano 5 0,9722
Metanol 1 0,6505
Metanol 2 0,6434
Metanol 3 0,6535 0,6536 0,0072
Metanol 4 0,6618
Metanol 5 0,6589
Agua 1 0,6451
Agua 2 0,6432
Agua 3 0,6456 0,6426 0,0030
Agua 4 0,6401
Agua 5 0,6390
88
Figura 34. Monitoreo de la densidad del extracto de la semilla de
moringa (Moringa olefera Lam.), durante el proceso de decoccin,
utilizando la tcnica Soxhlet y hexano como solvente
0,7
R1
0,69
I II III R2
0,68
Densidad (g/mL)
R3
0,67
R4
0,66
R5
0,65
Densidad
0,64 Solvente puro
0,63
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26
Ciclos
0,1400
0,1200
Slidos totales disueltos (g)
0,1000 R1
0,0800 R2
0,0600 R3
0,0400 R4
0,0200 R5
0,0000
-1 1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23 25
Ciclos de extraccin
89
Figura 36. Monitoreo de la densidad del extracto de la semilla de
moringa (Moringa olefera Lam.), durante el proceso de decoccin,
utilizando la tcnica Soxhlet y metanol como solvente
0,835 R1
R2
0,825
R3
Densidad (g/mL)
0,815 I II III R4
0,805 R5
Densidad Solvente
0,795 Puro
0,785
0,775 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
Ciclos
0,0400
Slidos totales disueltos (g)
0,0350
0,0300
0,0250 R1
0,0200 R2
0,0150
R3
0,0100
0,0050 R4
0,0000 R5
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
Ciclos de extraccin
90
Figura 38. Monitoreo de la densidad del extracto de la semilla de
moringa (Moringa olefera Lam.), durante el proceso de decoccin,
utilizando la tcnica de extraccin slido-lquido a reflujo y agua como
solvente
1,0079 R1
1,0059 R2
Densidad (g/mL)
1,0039 R3
R4
1,0019
R5
0,9999
Densidad Solvente puro
0,9979
0,9959
0,00 1,00 2,00 3,00 4,00 5,00
Tiempo (h)
0,0350
0,0300
0,0250 R1
Slidos totales (g)
0,0200 R2
0,0150 R3
0,0100 R4
0,0050
R5
0,0000
0,00 0,50 1,00 1,50 2,00 2,50 3,00 3,50 4,00 4,50
Tiempo (h)
91
92
5. INTERPRETACIN DE RESULTADOS
93
Tambin se realizaron tinciones con el reactivo azul de cresilo, el cual
reacciona con los muclagos y los tie de color azul Francia. La figura 28
muestra el tejido nutritivo de los cotiledones de la semilla y se observ que
existe muclago pero es escaso, como se ve en la clula que est al centro de
la fotografa.
94
Evaluando este resultado se concluye que el porcentaje de humedad
obtenido favorece el uso de la semilla de moringa como alimento, pues niveles
superiores al 8% favorecen la presencia de insectos y arriba del 14% existe el
riesgo de contaminacin por hongos y bacterias.
95
El valor nutritivo de la semilla de moringa es alto al compararse esta cifra
con el 37,5% que contiene el frijol de soya y el 22,0% del frijol negro.
96
Se realizaron extracciones slido-lquido, con los solventes, a sus
temperaturas de ebullicin, utilizando la tcnica de extraccin Soxhlet para el
hexano y metanol y la tcnica de extraccin a reflujo para el agua, llevando los
slidos hasta su agotamiento. Para verificar que esta condicin fuera cumplida,
se monitore cada una de las extracciones, tomando alcuotas con jeringas
clnicas de la fraccin extrable y evaluando los slidos totales disueltos y la
densidad. El procedimiento de extraccin se detuvo hasta que estas
propiedades permanecieron constantes. Finalmente se concentraron los
extractos obtenidos utilizando un rota evaporador.
97
Las fracciones extrables con el metanol son ms afines a las extradas
con hexano, porque la constante dielctrica del metanol es ms similar a la del
hexano que la del agua.
98
El monitoreo de los slidos totales disueltos para el metanol y hexano
tambin present las mismas tendencias, como se muestra en las figuras 35 y
37. Aqu se observ que al inicio del proceso es cuando se extraen ms
componentes afines a los solventes, y esta curva disminuy en funcin del
tiempo hasta que la cantidad que se estaba extrayendo de la semilla era
insignificante.
99
Se evaluaron las propiedades fisicoqumicas de los extractos resultantes,
(densidad, slidos totales e ndice de refraccin) presentadas en las tablas
XXVII a XXIX. A estos datos tambin se les hizo el anlisis estadstico
correspondiente que se presenta en las figuras 14-21 y tablas XIII a XX. De
igual forma se realiz el anlisis de varianza con un nivel de confianza del 95%
y al ser todos los valores de Fisher calculados mayores a los tabulados, se
concluy que el solvente s influye en las propiedades fisicoqumicas obtenidas;
por lo tanto se rechaz la hiptesis nula y se acept la hiptesis de
investigacin.
Estos resultados pueden ser tomados como una base para analizar las
familias de metabolitos secundarios que posee la muestra; sin embargo, con el
fin de brindar ms precisin, se realiz un anlisis de cromatografa capilar de
gases acoplada a espectrometra de masas con base de datos, en donde los
resultados pasaron de ser solamente cualitativos a ser cuantificables y grficos
por los cromatogramas que proporciona el estudio.
100
La tabla XXV muestra los metabolitos secundarios revelados en cada
uno de los extractos. El hexano, con la constante dielctrica ms baja, extrajo
principalmente steres. El metanol, con la constante dielctrica intermedia,
extrajo adems de steres ftlicos, algunos cidos grasos como el cido
palmtico, cido oleico y cido 3 nitroftlico, as tambin otros componentes
como el 5-hidroximetil-2-furancarbaldehido y el 4-hidroxibencenoacetonitrilo,
que tambin se encontr en el extracto acuoso. El ms importante de los
hallados en el extracto metanlico es el cido oleico. Este es un cido graso
monoinsaturado de la serie omega 9, considerado muy importante porque no
puede ser sintetizado por el cuerpo humano.
101
El pH influye altamente en la solubilidad de diversos compuestos, y
generalmente para obtener alcaloides con solventes de baja polaridad se debe
realizar un pretratamiento a la materia prima con soluciones alcalinas, buscando
con esto liberar los alcaloides de sus sales y volverlos as solubles en el
solvente orgnico. En el caso de extraccin de alcaloides con soluciones
acuosas es necesario un pH cido, buscando con esto la conversin de los
alcaloides en sus respectivas sales, solubles en agua.
102
Asimismo, los extractos de la semilla de moringa contienen aceites
esenciales que pueden ser usados con fines farmacolgicos, y su alto contenido
de saponinas indica que la semilla puede actuar como un coagulante natural
para purificacin de agua. Adems los altos porcentajes de rendimiento,
obtenidos en la experimentacin, hacen que el proceso de extraccin a nivel
industrial, sea atractivo por su factibilidad y rentabilidad.
103
104
CONCLUSIONES
105
7. Los mayores porcentajes de rendimiento se obtuvieron con los
solventes agua y hexano; sin embargo, el anlisis por cromatografa
capilar de gases acoplado a espectrometra de masas, demostr que
estos realizan una extraccin ms selectiva; el metanol obtuvo el menor
porcentaje de rendimiento pero extrajo la mayor cantidad y mayor
variedad de metabolitos secundarios.
106
RECOMENDACIONES
107
108
BIBLIOGRAFA
1. BALBIR, Matur. Trees for Life: Moringa Book. [en lnea]. St Louis, EUA,
2005. <http://www.treesforlife.org/ourwork/ourinitiatives/moringa/
moringa-book>. [Consulta: julio de 2010].
109
<http://www.medscape.com/viewarticle/55116>. [Consulta: enero
de 2011].
110
de mal olor Boletn Intexter (U.P.C). [en lnea]. 2002, num. 122.
<http://Upcommons.Upc.Edu/Revistes/Bitstream/2099/2733/1/5cro
mgases.Pdf> [Consulta: febrero de 2011].
12. MCCABE, Warren L.; SMITH, Julian C.; HARRIOT, Peter. Operaciones
unitarias en ingeniera qumica. 4a ed. Mxico: McGraw-Hill, 2007.
1189 p. ISBN: 139789701061749.
111
tallos, hojas y flores de Moringa olefera Lamark (Moringaceae)
cultivada en Guatemala. Trabajo de graduacin de Lic. en
Nutricin. Universidad de San Carlos de Guatemala, Facultad de
Ciencias Qumicas y Farmacia, 2004. 69 p.
17. Trees for Life International. Moringa olefera Lam. [en lnea]. <http://
www.treesforlife.org/our-work/our-initiatives/moringa>. [Consulta:
julio de 2010].
19. VILLELA RODAS, Csar Ariel. Tamizaje fitoqumico del fruto del rbol
de la Sapindus saponaria (jaboncillo), identificando las principales
familias de metabolitos secundarios, en muestras provenientes de
Cunn, departamento del Quich, Guatemala. Trabajo de
graduacin de Ing. Qumico, Universidad de San Carlos de
Guatemala, Facultad de Ingeniera, 2005. 142 p.
112
APNDICES
113
Apndice 3. Extracciones slido-lquido de la semilla de moringa
(Moringa olefera Lam.), utilizando el equipo de extraccin Soxhlet con
metanol
114
Apndice 5. Monitoreo de procedimiento de decoccin y obtencin de
propiedades fisicoqumicas
115
Apndice 6. Muestra de clculo
= [Ecuacin 1]
Donde:
= densidad (g/mL)
masa = masa total del extracto (g)
tara= masa del picnmetro (g)
volumen= volumen del picnmetro (mL)
Ejemplo:
La densidad del extracto hexnico obtenido por el mtodo de decoccin con
el equipo de extraccin Soxhlet se calcul de la siguiente manera:
Datos:
masa = 4,156 g
tara= 3,204 (g)
volumen= 1,067 (mL)
4,156 3,204
= = 4,156 /
1,067
% =
100 [Ecuacin 2]
116
Continuacin apndice 6.
Donde:
%rendimiento = porcentaje de rendimiento de la fraccin extrable (%)
Masa materia prima = masa de materia prima utilizada para el proceso
extractivo (g)
Masa fraccin extrable= masa de la fraccin extrable recuperada (g)
Ejemplo:
El porcentaje de rendimiento de la fraccin extrable con hexano se calcul de
la siguiente manera:
Datos:
Masa materia prima = 20,03
Masa fraccin extrable= 5,42 (g)
20,03 5,42
% = 100 = 27,05 %
20,03
117
Apndice 7. Muestra de clculo
118
Apndice 7b. Slidos solubles totales obtenidos de la fraccin extrable
de la semilla de moringa (Moringa olefera Lam.), por procedimiento de
decoccin
Slidos
Media Desviacin
Muestra solubles
(g) estndar (g)
totales (g)
Hexano 1 0,9671
Hexano 2 0,9634
Hexano 3 0,9587 0,9685 0,0086
Hexano 4 0,9812
Hexano 5 0,9722
Metanol 1 0,6505
Metanol 2 0,6434
Metanol 3 0,6535 0,6536 0,0072
Metanol 4 0,6618
Metanol 5 0,6589
Agua 1 0,6451
Agua 2 0,6432
Agua 3 0,6456 0,6426 0,0030
Agua 4 0,6401
Agua 5 0,6390
119
Apndice 7c. Rendimiento porcentual de la fraccin extrable de la
semilla de la semilla de moringa (Moringa olefera Lam.), obtenido por
procedimiento de decoccin
Fraccin
Materia Rendimiento Media Desviacin
Muestra extractable
prima (g) (%) (%) estndar
(g)
Hexano 1 20,03 5,4178 27,05
Hexano 2 20,06 5,4058 26,95
Hexano 3 20,05 5,5989 27,92 27,15 0,5732
Hexano 4 20,02 5,2836 26,39
Hexano 5 20,02 5,4948 27,45
Metanol 1 20,01 4,5512 22,74
Metanol 2 20,04 4,4045 21,98
Metanol 3 20,01 4,1536 20,76 22,10 0,8855
Metanol 4 20,01 4,3981 21,98
Metanol 5 20,05 4,6202 23,04
Agua 1 20,01 9,2001 45,98
Agua 2 20,15 9,3094 46,20
Agua 3 20,04 9,4262 47,04 46,25 0,4889
Agua 4 20,02 9,2700 46,30
Agua 5 20,03 9,1623 45,74
120
Apndice 8. Tabla de requisitos acadmicos
1er paso 2do paso 3er paso 4to paso 5to paso 6to paso 7mo paso 8vo paso
Tema Tema Problema Temario
Carrera rea Especificacin Hiptesis
Genrico Especfico a resolver Tentativo
Familias de
Caracterizacin
Qumica Qumica Orgnica metabolitos
Fitoqumica
secundarios
NDICE DE
Protenas, lpidos y ILUSTRACIONES
Bioqumica Anlisis Bioqumico Anlisis proximal
carbohidratos LISTA DE SMBOLOS
GLOSARIO
Qumica
RESUMEN
IngenieraQumica
Es posible por
medio de una OBJETIVOS
Condensacin, Por medio de una
Transferencia de Transferencia de extraccin slido- HIPTESIS
evaporacin, extraccin slido- INTRODUCCIN
calor (IQ-3) calor lquido a nivel
lquido a nivel
ebullicin a reflujo laboratorio,
laboratorio, obtener
enIngeniera
obtener el
el rendimiento de
rendimiento de 1. MARCO TERICO
extraccin de las
Principios de extraccin de las
Transferencia de Difusin molecular fracciones
fracciones
transferencia de extractables de la 2. METODOLOGA
masa (IQ-4) en fluidos extractables de la
Operaciones masa semilla de moringa
semilla de
con tres diferentes
Licenciaturaen
Transferencia de las
solventes y 4. INTERPRETACIN
masa en etapas de Contacto interfacial Extraccin por correspondientes
realizar las
caracterizaciones DE RESULTADOS
contacto continuo slido-lquido percolacin Soxhlet correspondientes
fitoqumicas.
(IQ-5) caracterizaciones CONCLUSIONES
fitoqumicas.
RECOMENDACIONES
Operaciones REFERENCIAS
Unitarias Manejo de slidos Granulometra BIBLIOGRFICAS
Complementarias ANEXOS
(IQ-6) APNDICE
121
Apndice 9. Diagrama de Ishikawa
122
ANEXOS
123
Anexo 2. Anlisis proximal de la semilla de moringa
124
Anexo 3. Tamizaje fitoqumico de las fracciones extrables con
diferentes solventes
125
Continuacin anexo 3.
126
Continuacin anexo 3.
127
Continuacin anexo 3.
128
Continuacin anexo 3.
129
Anexo 4. Cromatografa de gases acoplada a espectrometra de masas
(CGC/MS/DS) de las fracciones extrables con diferentes solventes
Ab u n d a n ce
T IC : 1 1 2 0 R .D
2 0 .2 9
7000000
6000000
5000000
4000000
3000000
2000000
1 6 .0 7
1000000
1 4 .9 1
7 6 .2 0
0
8 .0 0 1 0 .0 0 1 2 .0 0 1 4 .0 0 1 6 .0 0 1 8 .0 0 2 0 .0 0 2 2 .0 0 2 4 .0 0 2 6 .0 0 2 8 .0 0
T im e -->
130
Continuacin anexo 4.
A b u n d a n ce
T IC : 1 1 2 2 .D
1 .4 e + 0 7 1 2 .3 6
2 0 .2 7
1 .2 e + 0 7
1 e +0 7
8000000
1 6 .0 7
6000000
4000000
1 0 .3 9
2000000 1 1 .51
02 .6 1
1 3 .3 8 1 4 .9 51 6 .3 6
8 .6 2 111 11
1.0
.162.9 0 186 .1 9
99.3
.4
170 .2 91 1 .8 0
7 1 5 .1
0
8 .0 0 1 0 .0 0 1 2 .0 0 1 4 .0 0 1 6 .0 0 1 8 .0 0 2 0 .0 0 2 2 .0 0 2 4 .0 0 2 6 .0 0 2 8 .0 0
T i m e -->
131
Continuacin anexo 4.
132
Continuacin anexo 4.
133
Continuacin anexo 4.
134
Continuacin anexo 4.
A b u n d a n ce
T IC : 1 1 2 1 .D
2 0 .2 4
5000000
4500000
4000000
3500000
1 2 .3 4
3000000
2500000
2000000
1500000
1 2 .5 3
1000000 1 1 .4 7
500000 1 3 .2 8
1 1 .0 4 1 6 .0 8
8 .7 9
7 .8 1 1101 1
.8.1
13
8 .7 9 1 4 .3 5
0
8 .0 0 1 0 .0 0 1 2 .0 0 1 4 .0 0 1 6 .0 0 1 8 .0 0 2 0 .0 0 2 2 .0 0 2 4 .0 0 2 6 .0 0 2 8 .0 0
T im e - - >
135
Continuacin anexo 4.
136
Continuacin anexo 4.
137