10 Recombinacion

TEMA 10: RECOMBINACIN GENTICA
Dr. Pedro F. Mateos
I. OBJETIVOS por alelos de uno de los padres del

cruce.
La recombinacin gentica es un
proceso que lleva a la obtencin de un (iii) Las cepas de alta produccin
nuevo genotipo a travs del pueden realmente aumentar el coste de
intercambio de material gentico entre la fermentacin debido al cambio de
secuencias homlogas de DNA de dos las propiedades fisiolgicas (mayor
orgenes diferentes. La informacin produccin de espuma, cambio en los
gentica de dos genotipos puede ser requerimientos del medio de cultivo,
agrupada en un nuevo genotipo etc.). Cruzando de nuevo la cepa con la
mediante recombinacin gentica. Por cepa silvestre pueden obtenerse cepas
lo tanto la recombinacin gentica es de alta produccin con propiedades
otra forma efectiva de aumentar la mejoradas de fermentacin.
variabilidad gentica de una poblacin.
Las ventajas de la recombinacin II. RECOMBINACION GENTICA

gentica son:
Como ya hemos dicho, la
(i) Diferentes cepas superproductoras recombinacin gentica es un proceso
pueden ser reunidas en una sola cepa, que lleva a la obtencin de un nuevo
de forma que el efecto acumulativo de genotipo a travs del intercambio de
estas mutaciones puede ser mayor que material gentico entre secuencias
el efecto de una sola mutacin. Sin homlogas de DNA de dos orgenes
embargo, la esperanza inicial de diferentes. Las secuencias homlogas
obtener un aumento significativo en el de DNA tienen la misma secuencia o
rendimiento por simple recombinacin casi la misma; por consiguiente, puede
de dos mutantes de alta produccin ocurrir apareamiento de bases en una
slo ha sido conseguida en unos pocos longitud extensa de las dos molculas
casos. En la mayora de los casos, la de DNA. Los cromosomas homlogos
productividad de los recombinantes tienen los mismos genes ubicados en el
generalmente es intermedia entre los mismo sitio. Sin embargo, los genes,
valores de las cepas parentales. aunque similares, pueden no ser
necesariamente idnticos como ocurre
(ii) En el curso del desarrollo de cepas cuando existe una mutacin en un gen.
existe frecuentemente un descenso en
el aumento del rendimiento despus de Para que aparezcan nuevos genotipos
cada etapa de mutacin. Adems de los como consecuencia de la
mutantes que son enriquecidos recombinacin, es esencial que las dos
selectivamente debido a su aumento en secuencias homlogas sean
la productividad, existe un desarrollo genticamente diferentes. Tal es el
de mutaciones que no se detectan que caso en una clula eucaritica diploide,
impiden un aumento adicional en la que tiene dos juegos de cromosomas,
produccin de metabolitos a travs de uno procedente de cada padre. El punto
influencias pleiotrpicas. Con cruces donde los cromosomas se cruzan se
genticos, estos alelos mutantes denomina kiasma y el proceso de
desfavorables pueden ser reemplazados intercambio se llama entrecruzamiento.
48
Recombinacin gentica en bacterias
La recombinacin homloga ocurre

despus de la transferencia es decir,
cuando el fragmento de DNA del
donador est en la clula receptora. Si
no se produce recombinacin, el
fragmento de DNA del donador se
perder, debido a que no puede
replicarse independientemente.
Recombinacin gentica en clulas III. RECOMBINACIN GENTICA

diploides EN BACTERIAS
En las clulas procariotas slo existe La recombinacin gentica en bacterias

un nico cromosoma. Por lo tanto, tiene lugar cuando se transfieren
antes de que pueda ocurrir la fragmentos de DNA homlogo desde
recombinacin, un cromosoma una clula donadora a una clula
homlogo (normalmente una parte de receptora por uno de estos tres
este) debe primero ser transferido procesos:
desde una bacteria donadora a una
bacteria receptora. Debido a que el 1.- Transformacin: supone que el
cromosoma del donador debe ser DNA donador se encuentra libre en el
homlogo con el receptor, las bacterias medio.
donadoras y receptoras generalmente
pertenecen a la misma especie o a
especies muy relacionadas.
49
3.- C o n j u g a c i n : donde la
transferencia implica un contacto
clula-clula y la presencia de un
plsmido conjugativo en la clula
donadora.
Transformacin
2.- T r a n s d u c c i n : donde la
transferencia del DNA donador est
mediada por un virus. Conjugacin
Transduccin Clulas Hfr
50
IV. RECOMBINACION GENETICA B.- Recombinacin parasexual
EN HONGOS
Algunos de los hongos
Los hongos tienen dos tipos distintos econmicamente tiles como
de procesos de recombinacin gentica Penicillium chrysogenum (productor
que pueden ser utilizados en un de penicilina) y C e p h a l o s p o r i u m
programa de mejora de cepas. Son acremonium (productor de
conocidos como ciclos sexual y cefalosporina) no tienen ciclo sexual.
parasexual. En la parasexualidad, la fusin de dos
hifas de igual o de diferente polaridad
A.- Recombinacin sexual resulta en un micelio con ncleos de
ambas cepas parentales. Este
Algunos hongos utilizados heterocarionte es normalmente estable,
industrialmente (A s p e r g i l l u s , con los ncleos mezclados pero no
Claviceps, Saccharomyces) tienen un interaccionan. Sin embargo, en casos
ciclo sexual completo. En estos raros (10-7-10-6 en P e n i c i l l i u m
organismos la fusin nuclear chrysogenum) se produce la fusin
(cariogamia) conduce a la mezcla de nuclear y se forma un ncleo diploide.
ncleos en el organismo diploide. En tales ncleos diploides puede
Despus de la formacin de diploides producirse el entrecruzamiento entre
tiene lugar la recombinacin durante el cromosomas homlogos, lo que origina
proceso subsecuente de meiosis. Se la recombinacin gentica. Para
produce un nuevo genotipo, bien de la obtener un recombinante debe
combinacin de los cromosomas producirse la formacin de clulas
parentales o mediante el haploides o esporas. La haploidizacin
entrecruzamiento de cromosomas espontnea es relativamente rara (10-3)
homlogos. pero puede ser inducida con p-
fluorofenilalanina.
Recombinacin parasexual
Ciclo de vida de levaduras
51
Tambin se puede inducir la fusin
V. FUSION DE PROTOPLASTOS mediante la aplicacin de un campo
elctrico lo que se denomina
Los protoplastos son clulas de las que electrofusin. Cuando las clulas son
se ha eliminado la pared celular por colocadas en un campo elctrico con
tratamiento con enzimas. Para las corriente alterna se desarrollan
bacterias se utiliza la lisozima, orificios pasajeros en la membrana
mientras que para hongos se utiliza plasmtica, lo que facilita el proceso de
quitinasa o celulasas. Los protoplastos fusin de membranas y la fusin
deben ser estabilizados contra la lisis celular. La velocidad de fusin es de
por resuspensin en un medio que aproximadamente el 80-90%, ms alta
contenga un estabilizador osmtico que el 60% obtenido con PEG.
como la sacarosa. La fusin de Adems de su uso en la fusin de
protoplastos normalmente es rara protoplastos de plantas, la
debido a la fuerte carga negativa de la electrofusin puede ser tambin
superficie del protoplasto, pero en utilizada con protoplastos de levaduras
presencia de polietilenglicol (PEG) los y hongos. Sin embargo, la fusin de los
protoplastos se agregan y se produce la pequeos protoplastos bacterianos es
fusin acompaada por intercambio de ms difcil de conseguir.
DNA. Despus de la fusin se permite
la regeneracin de la pared celular de La fusin de protoplastos se utiliza con
tal manera que en la progenie los siguientes fines:
regenerada exista un nmero
significativo de recombinantes. a.- Recombinacin intraespecfica de
cepas que carecen de sistema sexual o
parasexual, o cuya frecuencia de
recombinacin es demasiado baja.
b.- Hibridacin interespecfica para

obtener organismos completamente
nuevos capaces de sintetizar
metabolitos modificados. El uso de la
fusin de protoplastos para este
objetivo est siendo examinado por
diferentes productores de antibiticos.
Entre los hongos se han intentado
cruces interespecficos entre varios
obtenindose recombinantes en el
cruce entre Penicillium cyaneofulvum
X Penicillium citrimum aunque con
una frecuencia muy baja (10-5). La baja
frecuencia de fusin heteroespecfica
puede ser debida a que la falta de
homologa del genoma impide que
tenga lugar la recombinacin o bien a
la presencia de sistemas de
restriccin/modificacin que llevan a
la incompatibilidad fisiolgica.
Fusin de protoplastos
52

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La recombinacin homloga ocurre

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En las clulas procariotas slo existe La recombinacin gentica en bacterias

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b.- Hibridacin interespecfica para

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