FACULTAD DE FARMACIA

UNIVERSIDAD COMPLUTENSE

TRABAJO FIN DE GRADO

TTULO:

MICROBIOTA INTESTINAL Y DIABETES

Autor: ANTONIO BELTRN MARTN

D.N.I.: 53764133-T

Tutor: FRANCISCO JAVIER ARROYO NOMBELA

Convocatoria: FEBRERO 2017

RESUMEN
La diabetes es una enfermedad metablica crnica que afecta a ms del 9% de la poblacin
mundial. Se confirma que hay una relacin entre la alteracin de la microbiota intestinal en
pacientes diabticos tipo 2 y nios diabticos tipo 1 en relacin con pacientes que no son
diabticos.
Los resultados de la administracin de probiticos en el tratamiento de la diabetes no son
concluyentes, pero s que hay mejora en varios parmetros relacionados con la diabetes.
En los nuevos tratamientos potenciales de la diabetes tipo 1, se han obtenido resultados
positivos en modelos animales en la diferenciacin celular de los enterocitos intestinales en
clulas secretoras de insulina, pudiendo producir hasta el 30% de insulina de un individio
sano.

INTRODUCCIN
1. Microbiota humana
La microbiota humana es el conjunto de microorganismos vivos que habitan en el cuerpo
humano: bacterias, virus, hongos y un arquea. De ellos, las ms abundantes son las bacterias.
Estos microorganismos colonizan la superficie de piel, mucosas respiratoria, digestiva y
urogenital, viviendo en simbiosis. (1)
Estos microorganismos se adhieren extracelularmente a receptores especficos de las clulas
epiteliales llamadas adhesinas, sin activar los mecanismos de defensa y se adaptan a las
condiciones especficas del medio: humedad, temperatura, tensin de oxgeno, etc. (1)
En nuestro cuerpo habitan ms de 10.000 especies bacterianas diferentes y se estima que el
organismo humano alberga unos 100 billones de microorganismos, 10 veces ms que el nmero
de clulas humanas. En el tracto gastrointestinal y en la boca hay una gran diversidad
microbiana, la piel tiene una diversidad media y dnde menos variedad hay es en la vagina. (2)
Funciones
La simbiosis entre el hombre y su microbiota hace posible la supervivencia, ya que ayuda a
metabolizar alimentos mediante fermentacin de residuos de la dieta, proporciona factores
esenciales para el crecimiento, contribuye a la maduracin del sistema inmune y protege contra
la colonizacin e invasin de microorganismos patgenos (3):
La microbiota intestinal permite obtener nutrientes de los alimentos a travs de la produccin
de enzimas y rutas metablicas que carecemos. Tambin, ayuda a sintetizar la vitamina K,
biotina, aminocidos, y a la absorcin de iones como el Ca, Mg, y Fe. (3)

-2-
 La microbiota intestinal recupera la energa de la dieta a travs de la produccin de cidos
grasos de cadena corta por fermentacin de carbohidratos: acetato, butirato y propionato.
Estos son una fuente energtica para las clulas: el acetato para los miocitos, el butirato para
los enterocitos y el propionato para los hepatocitos (3).
La microbiota restringe el crecimiento de bacterias potencialmente patgenas, con el efecto
barrera, y participa en la degradacin de toxinas (3)
Contribuye a la maduracin del sistema inmune: la interaccin de los enterocitos del
intestino con los antgenos bacterianos provoca una respuesta inmune contra antgenos
considerados no patgenos. Ello desencadena un estado de inmunotolerancia que permite la
exposicin continua a dichos microorganismos (3)
2. Diabetes Mellitus
La diabetes es una enfermedad metablica crnica causada por una alteracin en la funcin
endocrina del pncreas o por la alteracin en los tejidos efectores, de forma que se pierde la
capacidad de producir suficiente insulina o de utilizarla eficazmente. La insulina es una
hormona fabricada y liberada por las clulas pancreticas y permite que la glucosa de la
sangre acceda a las clulas del organismo para ser usada como fuente de energa. (4)
Se estima que actualmente hay ms de medio milln de nios menores de 14 aos con
diabetes tipo 1 y 415 millones de adultos con diabetes en el mundo (9% de la poblacin
mundial), de los cuales 193 millones estn sin diagnosticar. Adems, uno de cada siete
nacimientos se ve afectado por la diabetes gestacional. (4)
Se distinguen principalmente 2 tipos de diabetes:
Diabetes Mellitus de tipo 1 o juvenil: por lo general, se detecta en nios y adolescentes.
Se considera una enfermedad inflamatoria crnica causada por la destruccin especfica
de las clulas en los islotes de Langerhans del pncreas. Est causada por una reaccin
autoinmune, en la que el sistema inmunolgico ataca a las clulas debido a la presencia
de anticuerpos contra antgenos citoplasmticos de las clulas pancreticas como la
descarboxilasa del cido glutmico 65 y 67 (GAD65 y 67), la protena de choque trmico
65 (Hsp-65), y contra insulina (5). Sin embargo, la mayor susceptibilidad para desarrollar
DMI se encuentra en los genes del antgeno leucocitario humano (HLA clase II) del
cromosoma 6, que contribuyen con el 50% del riesgo. (6)
La razn exacta se desconoce, pero est relacionado con mutaciones de varios genes,
factores ambientales, a circunstancias en el desarrollo en el tero, a la alimentacin
durante las primeras etapas de la vida o a infecciones virales.

-3-
 Diabetes Mellitus de tipo 2 o adulta: por lo general, aparece en la edad adulta y se produce
cuando las clulas pancreticas no producen suficiente cantidad de insulina y/o existe
resistencia perifrica a la insulina por parte de los adipocitos y clulas musculares. Entre
el 90% y el 95% de las personas diabticas son de tipo 2. (4)
Est asociado con varios factores de riesgo y estilos de vida: obesidad, sedentarismo, mala
alimentacin, edad, hipertensin arterial, dislipemia, y tiene relacin con la gentica. (4)

ANTECEDENTES
1. Microbiota intestinal normal
Ms del 95% de la microbiota humana se localiza en
el tracto digestivo, pero su distribucin no es
homognea y depende de: la excrecin de bilis y
jugo pancretico, el peristaltismo, la secrecin de
mucina que contiene IgA, el pH, la disponibilidad de
nutrientes, la dieta, la tensin de oxgeno, el
antagonismo bacteriano y la presencia de receptores
celulares para las adhesinas bacterianas (8). Hay
cinco filos bacterianos: los gram negativos
Bacteroidetes, Proteobacteria y Verrucomicrobia, y los gram positivos Actinobacteria y
Firmicutes; y un Archaea (13).
El estmago es un rgano donde hay pocos microorganismos debido al pH cido. La
densidad de bacterias vara entre 10 y 100 UFC/ml. Se compone de la flora oro farngea
que ha sido deglutida, como Streptococcus -hemolticos, Lactobacillus sp., Candida sp.
Adems, puede estar presente Helycobacter pylori. (7)
El intestino delgado formado por duodeno, yeyuno e leon. En el duodeno se mantiene el pH
cido, elevada actividad peristltica, la secrecin de bilis, que tiene propiedades
antimicrobianas, y otras sustancias, como la lisozima e IgA, contribuyen a mantener un
nmero relativamente bajo de microorganismos. El duodeno y yeyuno, tienen una baja
concentracin de microorganismos, entre 103 y 105 UFC/ml. Las especies predominantes son
bacterias Gram positivas como Lactobacillus y Streptococcus (9).
La microbiota del leon es muy parecida a la del colon, se produce un aumento densidad
bacteriana con una concentracin de 107 a 108 UFC/ml, ya que disminuye la velocidad del
trnsito intestinal y aumenta el pH. Predominan los microorganismos anaerobios y Gram
negativos. (9)
-4-
 El intestino grueso es la localizacin corporal con mayor densidad microbiana con

Grupo microbiano UFC/g heces 1014UFC/ml, debido a la disminucin del contenido en

9 12
Bacteroides 10 -10 agua, la disminucin del peristaltismo y un pH cercano
9 11
Bifidobacterias 10 -10 al fisiolgico. Se estima que conviven ms de 500
9 11
Eubacterias 10 -10 especies diferentes de bacterias, con un predominio de
9 11
Peptoestreptococos 10 -10
9 11
microorganismos anaerobios, con una relacin con las
Peptococos 10 -10
5 11 aerobias de 1000/1. Suponen entre el 40-50% del peso
Ruminococos 10 -10
Fusobacterias 6 10 seco de los materiales fecales. Los filos Bacteroidetes y
10 -10
6 9 Firmicutes constituyen ms del 90% de las categoras
Clostridios 10 -10
5 8
Lactobacilos 10 -10 filogenticas que dominan el colon (11). Los
5 8
Enterobacterias 10 -10 Firmicutes se encuentram en mayor proporcin, incluye
5 7
Enterococos 10 -10 ms de 200 gneros y los ms importantes son los
3 5
Estreptococos 10 -10
2 5
Lactobacillus, Micoplasma, Bacillus y Clostridium. Los
Levaduras 10 -10
4 Bacteroidetes incluyen slo 20 gneros. (12)
Estafilococos 0-10
Tabla 1. Microorganismos en heces humanas. Compilado de Hagiage (14), Cummings (15),
Holzapfel y cols. (16) y Salminen y cols. (17).

2. Intervencin de los microorganismos en el metabolismo glucdico

Los Firmicutes son ms eficientes en la fermentacin de carbohidratos insolubles (fibras). Las
especies de Bacteroidetes son ms verstiles en el uso de sustratos, utilizan los oligosacridos
y polisacridos solubles que provienen de la rotura de polisacridos insolubles (18).
Por su parte, las Bifidobacterias (Actinobacterias) contienen enzimas que degradan glicanos y
glicosaminoglicanos (celulosa, condroitina, cido hialurnico y mucinas). La fermentacin de
estos sustratos por la microbiota intestinal libera cidos grasos de cadena corta (AGCC),
principalmente acetato, propionato y butirato (19).
El butirato sirve de energa para los enterocitos e inhibe la produccin de TNF
proimplamatorio, modulando la actividad del factor de transcripcipn NF-KB46 (20).
El acetato y el propionato son absorbidos. El acetato sirve de sustrato para la gluconeognesis,
la sntesis de colesterol y de triglicridos, mientras que el propionato se utiliza como sustrato
para la gluconeognesis (19).
Las incretinas son producidas por clulas enteroendocrinas y potencian la secrecin de
insulina en respuesta a la glucemia, regulndola y son responsables alrededor del 70% del
nivel de insulina postprandial. La principal es la GLP1. Los AGCC se unen a los receptores
GPR41 y GPR43 de los enterocitos. Mediante el primer receptor se libera el pptido YY, que

-5-
reduce la energa extrada de la dieta al aumentar el peristaltismo intestinal. Mediante el
segundo receptor se libera GLP1, que induce la liberacin de insulina dependiente de glucosa
e inhibe la secrecin de glucagn, aumenta la
sensibilidad a la insulina y disminuye el apetito (21).
En cuanto a las protenas, la histamina es un producto
del metabolismo fermentativo de Lactobacilos, en
concreto, Lactobacillus reuteri y ejerce una seal
inmunoreguladora, ya que suprime la produccin de
TNF a travs de receptores de H2 del epitelio
intestinal (19).

Figura 2. Regulacin del metabolismo a partir de la

microbiota. Cascada de reacciones a partir de los AGCC
en los receptores GPR41 y GPR43, liberando PYY Y
GLP-1, estimulando la secrecin de insulina pancretica
y actuando en adipocitos. (22)

OBJETIVOS
Comprobar la hiptesis de la disbiosis intestinal en pacientes con DMI y DMII a travs de la
revisin bibliogrfica de los ensayos realizados hasta el momento.
Demostrar nuevas lneas de prevencin y tratamiento para evitar la enfermedad y/o avance
mediante la introduccin de microbiota que pueda regular el control glucmico del individuo.

MTODOS Y MATERIALES
La mayora de los estudios sobre la microbiota intestinal estn basados en el anlisis de las
heces, ya que su recoleccin es sencilla y no invasiva. Las tcnicas de cultivo tradicionales
pueden detectar aproximadamente el 30% del total de las bacterias del tracto intestinal por
varias razones: las condiciones de crecimiento especiales para la mayora de las bacterias, la
selectividad de los medios de cultivo que se utilizan, el estrs impuesto por procedimientos de
cultivo, la necesidad estricta de condiciones de araerobiosis, y las dificultades con la
simulacin de las interacciones de las bacterias con otros microorganismos y clulas del
husped (13).
Las tcnicas modernas de estudio de la microbiota han revelado un nmero importante de
bacterias que no son cultivables: el 62% de la microbiota colnica no se conoca y el 80% de
las bacterias identificadas por la metagenmica se consideran no cultivables (23).

-6-
El Proyecto del Microbioma Humano (2007) ha identificado aproximadamente al 30% de la
microbiota intestinal, y junto con el proyecto Metagenmica del Tracto Intestinal Humano
(MetaHIT) en Europa.
Actualmente, la molcula ms usada en estudios de filogenia y taxonoma es el gen que
codifica para el ARNr 16S, sin necesidad de realizar cultivos. La informacin gentica
obtenida de la secuenciacin del microbioma se agrupa en las llamadas unidades taxonmicas
operacionales, de acuerdo con el porcentaje de semejanza de sus ARNr 16S. Cuando hay una
semejanza en el ARNr 16S del 95% se habla de gnero, y cuando la semejanza es del 97%, se
habla de especie (23).
Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR): tcnica molecular que permite amplificar
cadenas de DNA y obtener mltiples copias. Se realiza en un termociclador que usa diferentes
temperaturas en funcin de la etapa de cada reaccin. Se emplean nucletidos, polimerasas, y
cofactores para que la reaccin tenga lugar. Posteriormente, esas copias se secuenciarn.
Una de las ms usadas es PCR en tiempo real o cuantitativa, que combina la tcnica de PCR
con anlisis de inmunofluorescencia al aadirle una molcula emisora de fluorescencia (24).
DGGE (electroforesis en gel por gradiente desnaturalizante) y TGGE (electroforesis en
gel por gradiente trmico): ambas metodologas se basan en la separacin de fragmentos de
amplificacin con distinta secuencia mediante electroforesis (24).
FISH (hibridacin fluorescente in situ): tcnica cuantitativa que consiste en el uso de
sondas para el ARNr marcadas con fluorescencia que se hibridan directamente con
preparaciones bacterianas fijadas sobre un portaobjetos (24).
Metagenmica
Se han desarrollado tcnicas moleculares para analizar microorganismos a gran escala: la
metagenmica. La metagenmica es un conjunto de tcnicas que permite obtener todos los
fragmentos de ADN y ARN que contiene una muestra concreta, para luego secuenciarlos y
compararlos con todas las secuencias genticas conocidas y publicadas hasta el momento,
permitiendo encontrar homologas (24).
En primer lugar, se elimina todo el material gentico del hospedador, luego se selecciona los
genes que codifican para RNAr 16S y se amplifica todo el material gentico mediante PCR.
El siguiente paso es la secuenciacin a gran escala, y se pueden emplear tres mtodos: sanger,
pirosecuenciacin o ultrasecuenciacin. La ms usada es la pirosecuenciacin (25).
En la pirosecuenciacin el material gentico amplificado se coloca en pocillos de una placa de
pirotitulacin junto con las enzimas necesarias para la pirosecuenciacin. La secuenciacin
ocurre gracias a una reaccin enzimtica con la secuencia que emite un haz de luz que es

-7-
directamente proporcional al nucletido que est leyendo. Por tanto, el ADN y ARN
amplificado se traduce en seales que se comparan con las bases de datos (25).

RESULTADOS
1. Disbiosis intestinal en la patogenia de la Diabetes tipo 2
Larsen y cols. (26) realizaron un estudio con el objetivo de conocer diferencias entre la
microbiota intestinal en pacientes con diabetes tipo 2 y pacientes no diabticos.
Se observ que el filo Firmicutes y clase Clostridia se redujeron significativamente en el
grupo diabtico en comparacin con el grupo control; adems, la clase Clostridia mostr una
tendencia a disminuir con mayores niveles de glucosa plasmtica. El filo Bacteroidetes fue
representado principalmente por la clase Bacteroides, que fue un poco mayor en diabticos en
comparacin con el grupo control.
La clase Betaproteobacteria fue superior en diabticos con respecto a no diabticos, al igual
que la clase Bacillo, y positivamente correlacionada con la glucosa plasmtica.
La conclusin de este estudio es que la diabetes tipo 2 en humanos est asociada con cambios
de la microbiota intestinal.

Karlsson y cols. (27) caracterizaron la microbiota fecal de pacientes sanos, pre-diabticos y

diabticos. Encontraron menor cantidad de Clostridia productoras de butirato (Roseburia
intestinalis y Faecalibacterium prausnitzii) asociado a pacientes diabticos tipo 2. En
pacientes saludables, la microbiota intestinal era ms diversa y F. prausnitzii se halla en
mayor cantidad.

Gotteland M. y cols. (28) tambin detectaron la presencia de disbiosis en sujetos con diabetes
tipo 2, los cuales, en trminos generales tienen menor cantidad de Bifidobacterium spp y
Faecalibacterium prausnitzii, conocidos por tener actividad anti-inflamatoria.

Los estudios de Qin y cols. (29) identificaron la presencia de disbiosis intestinal moderada en
pacientes con diabetes tipo 2, respecto a pacientes sanos. Se obtuvo un resultado significativo
de aumento de patgenos oportunistas (Bacteroides caccae, Clostridium hathewayi,
Clostridium ramosum, Clostridium symbiosum, Eggerthella lenta y Escherichia coli) y
disminucin de bacterias productoras de butirato (Clostridiales sp., Eubacterium Rectale,
Faecalibacterium prausnitzii, Roseburia intestinalis y Roseburia inulinivorans) en pacientes
diabticos.

-8-
J. Sato y cols. (30) realizaron un ensayo comparando la microbiota intestinal de pacientes
sanos y pacientes con diabetes tipo 2, concluyendo que hay una disbiosis intestinal en
diabticos.
Los resultados del estudio mostraron que marcadores de la inflamacin eran ms elevados en
el grupo diabtico que en el control. Se registraron menor nmero de bacterias del grupo
Clostridium coccoides, Atopobium Cluster, y Prevotella en el grupo diabtico y el recuento de
Lactobacillus, especialmente L. Reuteri y L. plantarum, fue mayor respecto al grupo control.
Las concentraciones fecales de cido actico y propinico fueron ms bajas en el grupo
diabtico.
Tambin se detect en el grupo de diabticos que el nivel de LPS en sangre era ms elevado
que el grupo control y mostr resultados correlaciones con marcadores como IMC, HbA1c,
hs-CRP, TNF-a e IL-6.

Egshatyan y cols. (31) realizaron un ensayo para conocer las diferencias de la microbiota en
pacientes con diferente tolerancia a la insulina. En l se comparan 3 grupos: pacientes con
tolerancia normal a la glucosa o grupo control (C), pacientes prediabticos (PreD) y pacientes
con Diabetes tipo 2 (D).
La microbiota de las muestras fue predominantemente representada por Firmicutes, y en
menor grado, por Bacteroidetes. Aproximadamente el 50% de la abundancia microbiana total
fue representada por cinco gneros: Blautia, Bacteroides, Prevotella, Faecalibacterium, y
Clostridium.
Se observ un aumento en el gnero Blautia en los pacientes diabticos en comparacin con
los sanos. As como el gnero Serratia, que fue mayor en pacientes con intolerancia a la
glucosa. Las bacterias del filo Verrucomicrobia disminuyeron en pacientes con intolerancia a
la glucosa en relacin al resto de grupos.
Por lo tanto, el estudio de Egshatyan tambin proporciona la evidencia de la modulacin de la
microbiota intestinal en la patognesis de la diabetes de tipo 2.

2. Disbiosis intestinal en la patogenia de la Diabetes tipo 1

I.Leiva y cols. (32) realizaron un estudio comparando la microbiota intestinal de nios con
diabetes tipo 1 y nios sanos, detectando una disbiosis. Se manifest que la mayora de las
bacterias pertenecan a los filos Firmicutes y Bacteroidetes en ambos grupos.

-9-
Hubo diferencias dentro de los gneros de los filos Bacteroidetes, Firmicutes y
Actinobacteria entre los nios sanos y diabticos. En diabticos el nmero de Actinobacteria
y Firmicutes disminuye y los Bacteroidetes aumentan con respecto al grupo control. En los
nios diabticos aumenta la cantidad de Clostridium, Bacteroides, Veillonella, Eggerthella y
Bacillus as como una disminucin de Prevotella y Bifidobacterium. Adems, el cociente
Firmicutes/Bacteroidetes fue significativamente ms bajo en los nios diabticos que en los
nios sanos.
Hubo una correlacin positiva entre la reduccin en el nmero de Bifidobacterium y
Lactobacillus y los niveles de glucosa plasmticos, adems de que niveles ms altos de
HbA1c estuvieron asociados con una disminucin del cociente Firmicutes/Bacteroidetes y un
aumento en el nmero de Clostridium.
Tabla 2. Gneros y grupos
presentes en la microbiota de los
nios sanos y nios con diabetes
tipo 1. (32)

3. Endotoxemia bacteriana por LPS de la pared de gram negativas.

Cani y cols. (33) demostraron que los lipopolisacridos (LPS) de las bacterias gram negativas
constituyentes de la pared bacteriana migran al torrente sanguneo causando una endotoxemia
que genera inflamacin sistmica de bajo grado. Estos LPS se unen a unos receptores
llamados Toll-like (TLR)-4, promoviendo la liberacin de molculas proinflamatorias. Este
estado permanente de inflamacin de bajo grado supone un avance en diferentes
enfermedades, entre las cuales, la diabetes.
4. Investigacin de nuevos tratamientos de la diabetes a travs de la administracin
de bacterias intestinales modificadas.
Los estudios de Suzuki y cols. (34) indican que el GLP-1 podra estimular la diferenciacin
de enterocitos en clulas glucosensibles y secretoras de insulina, aparentemente a travs de la
va de sealizacin Notch.
John C. March y cols. (35) investigaron la administracin oral de bacterias comensales
capaces de secretar GLP-1 para comprobar la reduccin de la hiperglucemia en ratas con
diabetes mediante la diferenciacin de enterocitos en clulas secretoras de insulina que
responden a glucosa, pudiendo servir como tratamiento de la diabetes. En el trabajo de John

- 10 -
C. March, se modific Lactobacillus gasseri para secretar GLP-1 a travs de la introduccin
de un plsmido.
En el estudio haba 3 grupos: ratas control no diabticas (C), ratas diabticas alimentadas con
Lactobacillus no modificados (L) y ratas diabticas alimentadas con Lactobacillus
modificado (LG) durante 90 das.
A los 50 das, se realiz una prueba de tolerancia a la glucosa y se midieron los niveles de
insulina y glucosa en sangre en diferentes tiempos: el grupo L present mayor nivel de
glucosa en la sangre y menor insulina plasmtica con respecto al grupo C. La glucosa en
sangre y la insulina plasmtica no fueron significativamente diferentes entre el grupo C y LG.

Figuras 3A y 3B. (A) glucosa plasmtica y (B) insulina en sangre de los 3 grupos de estudio y
en diferentes tiempos tras realizar la prueba de la tolerancia oral de glucosa. (35)

A los 90 das, se compararon los niveles de insulina del intestino delgado de cada grupo de
estudio: slo el grupo LG expres ms insulina en su intestino que las ratas control (ms de 5
veces superior al grupo control). La frecuencia relativa en el grupo LG es que 1 de cada 1.600
clulas epiteliales produce insulina.
En el pncreas, no hubo diferencias entre los grupos LG y L, el grupo C present niveles muy

Figura 4. Comparacin de los niveles

Figura 5. Insulina total (pncreas e - 11 - de insulina en intestino delgado de
intestino delgado) de los 3 grupos de los 3 grupos de estudio a los 90 das.
estudio. (35) (35)
superiores de insulina por gramo comparado con los dos grupos.
Midiendo la cantidad total de insulina en intestino y pncreas, se observ que el grupo LG
tena un 60% ms de insulina total que el grupo L. El grupo C tena casi el doble de insulina
total que el grupo diabtico alimentado con Lactobacillus gasseri.
La conclusin de su estudio es que las ratas diabticas alimentadas con bacterias secretoras de
GLP-1 mostraron aumentos significativos en los niveles de insulina y eran ms tolerantes a la
glucosa, que las alimentadas con la cepa bacteriana madre. Estas ratas desarrollaron clulas
productoras de insulina dentro del intestino delgado suficiente para reemplazar ~25-33% de la
capacidad de insulina de ratas sanas no diabticas. La secrecin de insulina en ratas LG sigui
la misma cintica y no fue significativamente diferente de la secrecin de insulina del grupo
control sano. Los tejidos intestinales de las ratas con clulas reprogramadas expresaron
marcadores de clulas importantes: MafA, PDX-1, y el FoxA2, esenciales para la funcin
normal de las clulas pancreticas. Estos resultados prueban la posibilidad de un uso seguro
de un tratamiento oral no absorbido para la diabetes tipo 1.

5. Bsqueda de tratamientos para la diabetes a travs de suplementos probiticos

Marie-Christine Simon y cols. (36) desarrollaron un ensayo en pacientes tolerantes a la
glucosa, que ingirieron diariamente 1010 millones de UFC de Lactobacillus reuteri o placebo
durante 1 mes. Se demostr que el grupo que tom el probitico aument la liberacin de
GLP-1 y GLP-2 en un 76% y un 43%, respectivamente, y se secret un 49% ms de insulina
postpandrial con respecto al placebo. Sin embargo, la ingestin de L. reuteri no afect las
proporciones entre los mediadores inmunitarios pro y antiinflamatorios analizados y no alter
la sensibilidad a la insulina perifrica.
Esto sugiere que la ingestin oral de una cepa especfica puede servir como un nuevo enfoque
teraputico para mejorar la liberacin de insulina dependiente de la glucosa en pacientes
diabticos.

Andreasen y cols. (37) realizaron un ensayo en pacientes diabticos tipo 2 y pacientes sanos
con tolerancia a la insulina alterada o normal bajo tratamiento de 4 semanas con L.
acidophilus o placebo. El objetivo del estudio fue probar la hiptesis de que la
suplementacin oral con L.acidophilus mejora la sensibilidad a la insulina y modular la
inflamacin sistmica en sujetos humanos.
Los resultados mostraron que el tratamiento con L. acidophilus parece mejorar la sensibilidad
a la insulina en aquellos pacientes con resistencia perifrica a la insulina y diabticos. Sin

- 12 -
embargo, los marcadores inflamatorios TNF, IL-6, IL-1 y protena C reactiva no fueron
afectados por la intervencin.
En conclusin, la ingesta de L. acidophilus durante 4 semanas mejor la sensibilidad a la
insulina en comparacin con el placebo, pero no afectan la respuesta inflamatoria sistmica.

El ensayo realizado por Vrieze y cols. (38) de trasplante fecal durante 6 semanas de donantes
sanos a pacientes con sndrome metablico para observar el efecto en la resistencia a la
insulina revel una mejora en la sensibilidad perifrica a la insulina. La diversidad de la
microbiota intestinal se increment en 16 grupos bacterianos, sobre todo Bacteroidetes,
incluidos los productores de butirato, como Clostridium cluster y Roseburia intestinalis, este
ltimo mostr un aumento de 2,5 veces; y disminuy Alcaligenes faecalis y Escherichia coli
(patgenos oportunistas) en el grupo tratado con la infusin de microbiota intestinal de
pacientes sanos.
En conclusin, los datos obtenidos apuntan hacia una mejora de la sensibilidad a la insulina
tras realizar trasplante fecal de individuos sanos a pacientes con resistencia a la insulina,
debido al papel que juega el butirato producido por el metabolismo microbiano intestinal,
puesto que se observ que aumentaron las cantidades de bacterias productoras de butirato en
los pacientes tratados.

H. S. Ejtahed y cols. (39) realizaron un ensayo sobre del efecto antioxidante que ejerce la
ingesta de yogur enriquecido con Lactobacillus acidophilus y Bifidobacterium lactis en
pacientes con diabticos tipo 2 y los efectos sobre la enfermedad, ya que el estrs oxidativo
juega un papel importante en la patognesis y progresin de la diabetes.
Los pacientes diabticos fueron asignados a dos grupos: un grupo control consumi yogur
convencional durante 6 semanas y el grupo de estudio consumi yogur enriquecido con
Lactobacillus acidophilus y Bifidobacterium lactis.
Los resultados muestran una disminucin significativa de la glucemia en ayunas y la
hemoglobina glicosilada (HbA1c); y el aumento de las actividades de superxido dismutasa
eritroctica y glutatin peroxidasa de los pacientes tratados con yogur enriquecido en
comparacin con el grupo control. Sin embargo, no se observaron cambios significativos en la
concentracin de insulina basal.
Estos resultados sugieren que la ingesta de microbiota antioxidante, como son L.acidophilus y
B. lactis, ayuda a mejorar la patogenia de la diabetes, probablemente por la disminucin del
estrs oxidativo mediada por los probiticos y sus efectos moduladores y antiinflamatorios.

- 13 -
Yadav y cols. (40) informaron que el probitico dahi (leche fermentada que contiene L.
acidophilus y L. casei) retrasa el avance de la intolerancia a la glucosa y la hiperglucemia,
mediante una disminucin del estrs oxidativo en modelos animales.

Yuting Ruan y cols. (41) realizaron un metaanlisis de los estudios publicados sobre la
influencia de la administracin de distintos tipos de probiticos en el control glucmico,
resistencia a la insulina y marcadores de la inflamacin relacionados con la diabetes. El
motivo de este anlisis es la obtencin de resultados contradictorios en los ensayos
publicados. Se analizaron 17 estudios clnicos en humanos, con un total de 1.105
participantes. Las especies probiticas y la dosis utilizada vara entre dichos estudios: 8
estudios utilizaron una especie de probitico, el resto usaron una combinacin dos o ms
especies.
En todos los estudios hubo cambios en la glucemia en ayunas, pero de los 17 ensayos, solo 4
informaron una reduccin significativa posterior a la toma de los probiticos, con diferencias
medias desde 0,15 a 1,51 mmol/L (2.70 mg/dL-27.21 mg/dL). La media del metaanlisis
indic una reduccin significativa de 0,31 mmol/L (5.59 mg/dL) en comparacin con los
grupos control. Los ensayos con una duracin de ms de 8 semanas mostraron ese efecto ms
significativo, indicando una tendencia ms positiva de los probiticos a lo largo del tiempo.
De los 17 estudios, 8 mostraron cambios en la resistencia a la insulina perifrica, con 4
estudios que informaron una reduccin significativa despus de consumir probiticos. Los
ensayos que utilizaron ms de una especie de probitico mostraron este efecto significativo en
comparacin con los grupos control.
Cinco de los estudios incluidos sugieren que el consumo de probiticos disminuy
marcadores inflamatorios, incluyendo hsCRP, IL-6 y TNF-.
Como conclusin: los estudios que han usado ms de una especie de probiticos y duraron
ms de 8 semanas muestran reducciones ms pronunciadas en la glucosa basal y resistencia a
la insulina perifrica. El consumo de probiticos puede mejorar ligeramente el control
glucmico. La modificacin de la microbiota intestinal por la suplementacin probitica
puede ser un mtodo para prevenir y controlar la hiperglucemia en la prctica clnica.

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DISCUSIN
En todos los estudios descritos, se observa una modificacin cuantitativa de la
composicin de la microbiota intestinal de los pacientes diabticos respecto a los
pacientes no diabticos.
En aquellos pacientes diabticos hay una disminucin del filo Firmicutes (26). Dentro de
ese filo, disminuye el nmero de bacterias de la clase Clostridia (26) (27) (29), en
concreto, de las bacterias productoras de butirato, como: Faecalibacterium prausnitznni
(27) (28) (29), Roseburia intestinalis (27) (28), Eubacterium rectale (29) y Roseburia
inulinivorans (29).
Dentro del filo Actinobateria, hay un descenso de los gneros Bifiobacterium (28) y
Atopobium (30). En el filo Bacteroidetes, el gnero Prevotella se encuentra disminuido en
diabticos (30). Y, en los pacientes con intolerancia a glucosa el filo Verrucomicrobia est
disminuido en la microbiota intestinal.
Adems, hay un aumento del filo Bacteroidetes (26). Dentro del filo Firmucutes, la clase
Bacillo est aumentada (26), en concreto, Lactobacillus reuteri y Lactobacillus planterum
(30). Del filo Proteobacteria, la clase Betaproteobateria est aumentada en diabticos
(26) y en los pacientes intolerantes a glucosa la clase Serratia (31). Adems, los estudios
de Qin (31) identificaron un aumento del nmero de patgenos oportunistas, como
Bacteroides caccae, Clostridium hathewayi, Clostridium ramosum, Clostridium
symbiosum, Eggerthella lenta y Escherichia coli.
Esta disbiois intestinal se puede caracterizar en grandes rasgos por un aumento de
bacterias gram negativas y patgenos oportunistas; y una disminucin de gram positivas y
fermentadoras productoras de cido butrico.
La influencia del butirato ser menor en pacientes diabticos en relacin a los pacientes
sanos: no se induce tanta liberacin de incretinas (GLP-1 y GLP-2), ni de PYY.
Atribuyendo un menor control sobre la homeostasis glucdica postpandrial y afectando
tambin en la predisposicin a la resistencia a la insulina perifrica.
El mayor nmero de bacterias gram negativas y patgenos oportunistas incrementan la
respuesta inflamatoria tanto a nivel intestinal como sistmica, induciendo la liberacin de
mediadores proinflamatorios como IL-6 y TNF- y aumentando la translocacin a sangre
de LPS que se unen a los receptores TLR-4, con la consiguiente liberacin de ms
mediadores proinflamatorios.
En nios diabticos tipo 1 tambin hay una disbiosis con respecto a nios no diabticos,
ya que se ve aumentado el filo Bacteroidetes, y los gneros Clostridium (patgenos
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 oportunistas), Bacteroides, Veillonella, Eggerthella y Bacillus. Hay una disminucin de
los filos Firmicutes y Actinobacteria, y los gneros Prevotella y Bifidobacterium en
comparacin con los nios sanos. (32)
En cuanto a la aplicacin de probiticos para el tratamiento de la diabetes tipo 2, los
ensayos tratados en esta revisin bibliogrfica muestran diferentes resultados, segn la
especie o especies que se hayan administrado.
Se observ una mejora en pacientes diabticos tipo 2 de la sensibilidad a la insulina
perifrica en los ensayos de Andreasen (37) (uso de L. acidophilus durante 4 semanas en
humanos), Yadav (40) (uso de L. acidophilus y L.casei en animales), Vrieze (38)
(trasplante fecal de donantes sanos a receptores con sndrome metablico) y en el
metaanlisis de 17 ensayos realizado por Yuting Ruan (41) en el que 8 de los 17
mostraron una mejora en la sensibilidad a la insulina perifrica, y 4 de ellos con valores
significativos, sobre todo los que usaron ms de una especie de probioticos.
Se vio una mejora en la hiperglucemia en ayunas en los ensayos de Ejtahed (39) (uso de
L. acidophilus y Bifidobacterium lactis en diabticos, y mostr una reduccin de HbA1c),
Yadav (40) (uso de L. acidophilus y L.casei en animales) y en el metaanlisis de 17
ensayos realizado por Yuting Ruan (41) en el que todos los estudios muestran una
disminucin de la hiperglucemia (la media del metaanlisis es de -5,59mg/dL), siendo los
estudios con valores ms relevantes aquellos con una duracin superior a 8 semanas.
En el ensayo de Marie-Christine Simon (36) se vio un aumento de la secrecin de la
insulina postpandrial y reduccin de la hiperglucemia postpandrial, al administrar
L.reuteri durante 4 semanas.
Estos estudios no son concluyentes, ya que no se ve una respuesta significativa en la
administracin de probiticos. Sin embargo, esto se puede deber a que los estudios no se
han realizado con caractersticas similares de duracin de tratamientos, cepas empleadas,
muestras de poblacin con diferentes caractersticas, etc.
En cuanto a los mediadores de la inflamacin (hsCRP, IL-6 y TNF-) en el metaanlisis
de Yuting Ruan (41), 5 de los 17 ensayos mostraron disminucin de estos marcadores. En
los ensayos de Ejtahed (39) y Yadav (40) se obtiene una disminucin de los niveles de
estrs oxidativo en los pacientes tratados con los probioticos.
El ensayo realizado en modelos de ratas por John C. March (35), al introducir un plsmido
que codifica para GLP-1 en Lactobacillus gasseri y administrndolo durante 90 das, se
vio una diferenciacin celular de los enterocitos intestinales (1 de cada 1600) a clulas
secretoras de insulina a nivel intestinal. Los resultados fueron que se secret entre un
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 25%-30% de la insulina de un individuo sano y mejor la hiperglucemia basal con
respecto al grupo al que no se le haba administrado el probitico modificado.
Este resultado supone una nueva lnea de investigacin para el tratamiento de la diabetes
tipo 1, puesto que se logra obtener un aumento de clulas sensibles a la glucosa y
productoras de insulina, disminuyendo en gran medida la hiperglucemia postpandrial.

CONCLUSIN
En la revisin bibliogrfica de los estudios reseados se observa que hay una alteracin de la
microbiota intestinal en los pacientes diabticos tipo 2 y nios con diabetes tipo 1, con
respecto a los pacientes sanos. Podra decirse que hay una relacin entre el desarrollo y/o la
patogenia de la diabetes y la disbiosis intestinal presente en los pacientes estudiados. Cabe
destacar que la mayora de los estudios presentados coinciden en la disminucin de las
bacterias productoras de butirato, de la clase Clostridia y filo Firmicutes, y aumento del filo
Bacteroidetes.

La disminucin de la microbiota productora de butirato podra causar una disminucin de las

incretinas (GLP-1 y GLP-2) y PYY, de modo que disminuye la secrecin de insulina
postpandrial (aumentando la glucemia postpandial), disminuye la captacin de glucosa por
parte de los tejidos, por lo que, a largo plazo, induce una resistencia perifrica a la insulina e
hiperglucemia. Un aumento de bacterias productoras de butirato podra mejorar los signos de
la diabetes tipo 2.

Las bacterias patgenas aumentadas en nmero, junto con las bacterias gram negativas
tambin aumentadas (Proteobacteria y Bacteroidetes) puede inducir una respuesta inmune,
que desencadena en la liberacin de bajos niveles de mediadores proinflamatorios, que junto
con la actividad de LPS de gram negativos vehiculizados en la sangre, creara un estado de
bajos niveles de inflamacin, como indica Cani en sus publicaciones, afectando a un aumento
progresivo en el tiempo de resistencia a la insulina.

El tratamiento de la diabetes tipo 2 mediante la administracin de bacterias comensales no ha

demostrado resultados concluyentes, esto se puede deber a que se han aplicado diferentes
especies en los ensayos y la duracin de los mismos no son iguales, dando resultados
dispares. Sin embargo, la mejora de la hiperglucemia basal o la disminucin de la tolerancia a
la insulina perifrica se han demostrado, en mayor o menor medida en estos ensayos.

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La aplicacin de las bacterias modificadas para el tratamiento de la diabetes tipo 1, y en
menor medida, para la diabetes tipo 2, segn el ensayo realizado por John C. March, da
resultados muy prometedores en modelos animales. Podra ser un tratamiento potencial no
invasivo para esta patologa, pero se necesita un mayor estudio.

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