ACTIVIDAD PRÁCTICA N° 8

TRABAJOS DE LABORATORIO Y CAMPO

TEMA: FOTOSÍNTESIS

INTRODUCCIÓN

La energía consumida por los seres vivos procede de la energía solar, captada por el proceso de
fotosíntesis, por el cual la energía radiante (luz) es transformada en energía química, con la formación
de glucosa a partir del CO2 atmosférico y H2O. Concomitantemente se libera O2. Dicha
transformación ocurre en los cloroplastos de las plantas verdes y en estructuras laminares
(prolongación del plasmalema) de las microorganismos fotosintéticos (procariotas).
La fotosíntesis consiste en 2 tipos de reacciones:
a.- Reacciones fotoquímicas.
b.- Reacciones bioquímicas.

a.- Reacciones fotoquímicas, durante las cuáles se produce ATP y NADPH, siendo este último el
aceptor final de los electrones provenientes de la fotólisis del H2O. Este proceso es además
responsable de la liberación del O2 que ocurre en esta etapa. Este conjunto de reacciones se
producen en la membrana de los tilacoides.

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b.- Reacciones bioquímicas, se utiliza el ATP y el poder reductor, generados durante las reacciones
fotoquímicas, para la reducción del CO2 a (CH2O)n.

OBJETIVOS

• Analizar los procesos de fotosíntesis y respiración.

• Analizar la interrelación de estos procesos con el metabolismo general.
• Tomar conciencia de que el flujo del CO2 por el ecosistema ocurre a través de los procesos de
fotosíntesis y respiración.
• Adquirir destreza y habilidades para realizar trabajos experimentales de laboratorio en Química
Biológica.
• Valorar el espíritu de superación, la responsabilidad, cooperación y respeto para el logro de una
eficiente labor grupal.

EXPERIENCIA DE LABORATORIO 1: Flujo de electrones dependiente de la luz.

Comentarios teóricos sobre la experiencia
La reacción por la cual una molécula de agua es disociada por acción de la luz se denomina
fotólisis. Los cloroplastos aislados, suspendidos en agua y en presencia de un aceptor de electrones y
de luz, desprenden oxígeno. Esto revela un hecho primario en la fotosíntesis: la transferencia activada
por la luz de un electrón desde una sustancia hasta otra. Esto se puede representar mediante la siguiente
ecuación denominada Reacción de Hill:
luz
A + H2O ---------------------------〉 AH2 + ½ O2
cloroplasto
En esta ecuación: "A" representa un aceptor de electrones, que en los vegetales es el NADP+.
En la experiencia utilizaremos como aceptor artificial de electrones el colorante 2,6 diclorofenol
indofenol, de color azul cuando está oxidado, que al ser reducido por los electrones provenientes de
la fotólisis del agua, se vuelve incoloro. El curso de la reacción puede ser observado por la
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desaparición del color azul del 2,6 diclorofenol indofenol cuando pasa de estado oxidado a estado
reducido.

- 2,6 diclorofenol indofenol oxidado -----------------------------AZUL

- 2,6 diclorofenol indofenol reducido ----------------------------- INCOLORO

Descripción de la experiencia
Material necesario:
- Hojas de palán-palán.
- Sacarosa 0,5 M.
- Buffer fosfato 0,1 M pH 6,5
- Agua destilada.
- Suspensión de cloroplastos.

Procedimiento:
a.- Colocar en la licuadora 8 ó 9 hojas frescas de palán-palán (previamente lavadas y sin las
nervaduras principales) con 100 ml de sacarosa 0,5 M. Licuar durante 10 a 15 segundos. ¿Por qué se
utiliza sacarosa 0,5 M en lugar de agua para el aislamiento de los cloroplastos?
b.- Filtrar con gasa y recoger en un Erlenmeyer.
c.- Colocar la suspensión en tubos y centrifugar a 2500 r.p.m. durante 10 minutos.
d.- Desechar el sobrenadante y resuspender el precipitado en 2 ml de sacarosa 0,5 M.
e.- Tomar 4 tubos y seguir los pasos esquematizados en el siguiente cuadro:

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4

1 Agua destilada 6 ml 6 ml 6 ml 6 ml

2 Buffer 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml

3 Suspensión de cloroplastos 4 gotas 4 gotas 4 gotas 4 gotas

4 Calentamiento a ebullición -------- --------- 5' ----------

5 2,6 diclorofenol indofenol -------- 2 ml 2 ml 2 ml

6 Exposición a la luz 10 ' Oscur. 10 ' 10 '

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EXPERIENCIA DE LABORATORIO 2: Determinación del consumo de CO2.

Comentarios teóricos sobre la experiencia

Con esta experiencia se pondrá en evidencia el aprovechamiento del dióxido de carbono que
realiza la planta en condiciones adecuadas durante el proceso fotosintético.
Para la realización de ésta experiencia se utiliza un indicador de ácido-base, que tiene la
propiedad de cambiar de color de acuerdo al pH de la solución, siendo amarillo en medio ácido y
rojo en medio básico.

CO2 + H2O 〈=============〉 H2CO3 〈=============〉 HCO3- + H+

Descripción de la experiencia
Material necesario:
- Elodea.
- Rojo de Fenol.

Procedimiento:
a.- Tomar 2 tubos de ensayo, llenarlos hasta la mitad de H2O y agregarles 4 gotas de solución
de rojo de fenol hasta que tome una coloración rosada.
b.- Insuflar aire con una pipeta hasta que se produzca el viraje al color amarillo.
c.- Introducir un trozo de Elodea en cada tubo.
d.- Exponer un tubo a la luz y el otro colocarlo en oscuridad, durante 30 minutos.
e.- Discutir e interpretar los resultados.

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EXPERIENCIA DE CAMPO: Producción de Biomasa en plantas C3 y C4.

Comentarios teóricos sobre la experiencia.

Plantas C3
La enzima RUBISCO convierte las moléculas de dióxido de carbono en moléculas de seis
átomos de carbono que casi inmediatamente se rompen en moléculas de tres carbonos, de ahí el
nombre C3. Sin embargo, la Rubisco también puede unirse al oxígeno en lugar de dióxido de carbono,
proceso llamado fotorrespiración. Cuando se produce la fotorrespiración, se consume energía y hace
menos eficiente la fotosíntesis de la planta. La velocidad de fotosíntesis neta disminuye al fijarse
menos carbono con el mismo gasto de agua. Además para compensar la pérdida de agua se abren los
estomas, lo que conlleva a una menor eficiencia en el uso del agua.

Plantas C4
En las plantas C4, dos tipos diferentes de células están implicadas en la fotosíntesis: las células
de las vainas del haz (que se forman alrededor de los haces vasculares) y las células del mesófilo. El
CO2 es capturado en las células del mesófilo, donde la PEP carboxilasa, fija el CO2 al
fosfoenolpiruvato (PEP) para hacer un producto de cuatro carbonos que se exporta a las células de la
vaina del haz, donde se libera el CO2. La enzima rubisco entonces toma este CO2 y lo introduce en el
ciclo de Calvin. La PEP carboxilasa tiene poca o ninguna afinidad por el oxígeno, por lo que este
proceso de dos etapas ayuda a minimizar la fotorrespiración al aumentar las concentraciones de CO2
en las células de la vaina del haz, donde el ciclo de Calvin se lleva a cabo. Esta variante confiera una
mayor eficiencia en el uso del agua por lo que se fija más carbono por molécula de agua.

Célula
del
Célula mesófilo
del
mesófilo

Célula
de la
vaina
del haz

Las plantas C4 tienen mayor gasto energético que es compensado con la mejor eficiencia en el
uso del agua, mayor crecimiento y eficacia en la fotosíntesis a temperaturas altas.
Las plantas C3 son muy competitivas en climas templados y húmedos, mientras que las plantas
C4 son más competitivas en climas secos con largos períodos de aridez y con baja humedad relativa.
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 Las plantas C3 son mucho más comunes que sus competidoras C4. A pesar de sus pocas
variedades, las plantas C4 representan el 25% del total de la actividad fotosintética en la tierra.

OBJETIVOS

• Medir caracteres relacionados con el rendimiento en plantas C3 (garbanzo) y en plantas C4 (maíz).

• Analizar cómo se relacionan dichos caracteres con la eficiencia fotosintética de ambas plantas.
• Relacionar la eficiencia fotosintética de cada especie en las dos condiciones diferentes de
luminosidad.
• Realizar un informe final teniendo en cuenta los aspectos previamente analizados (ver guía para
la elaboración del Informe de Regularidad).

CARACTERES ASOCIADOS CON EL RENDIMIENTO

1. Altura de planta (AP): medida desde la superficie del suelo hasta el ápice, sin estirar ramas, en
cm.
2. Altura de inserción de la primera vaina (A1a V) (para garbanzo): medida desde la base del tallo
en la superficie del suelo a la inserción de la primera vaina, en cm.
3. Altura de inserción de la espiga principal (A1a E) (para maíz): medida desde la base del tallo
(superficie del suelo) hasta la altura de inserción de la espiga.
4. Diámetro del tallo: Se mide a un tercio de la base del tallo (en garbanzo) o en el primer nudo (en
maíz) con un calibre.

Materiales:
-Cuaderno de campo para tomar nota
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 -Lápiz y goma
-Centímetro
-Calibre

Procedimiento:

1- Escoger tres plantas mínimo (triplicado) de cada especie (maíz y garbanzo) en cada una de las
condiciones (exposición a la luz natural y sombreado). En total se deben tomar mediciones de 12
plantas.
2- Medir en cada planta todos los caracteres relacionados con el rendimiento mencionados
anteriormente.
3- Elaborar un informe final

GUÍA PARA LA ELABORACIÓN DEL INFORME FINAL DE REGULARIDAD

El informe deberá constar de las siguientes partes:

1. Introducción: Mencionar las características de las plantas garbanzo y maíz y relacionarlas con su
anatomía C3 y C4.
2. Materiales y Métodos. Describir lo realizado en la experiencia a campo (fecha de siembra, especies
cultivadas, modalidad de cultivo, datos recabados, etc.). Análisis estadístico: con los datos
obtenidos obtener el promedio y desvíos para cada especie en ambas condiciones.
3. Resultados y discusión. Presentar los resultados y discutirlos teniendo en cuenta la condición de
cultivo entre las especies.
4. Conclusiones.

Realizar una presentación en Power Point de no más de 15 minutos exponiendo los

resultados obtenidos.

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ACTIVIDADES COMPLEMENTARIAS

1- En plantas, la ecuación neta para la reducción fotosintética de una molécula de CO2 a Hidrato de
Carbono puede resumirse de la siguiente forma:
luz
CO2 + H2O-----------------> (CH2O) + O2

¿Los átomos de O2 provienen del H2O, del CO2 o de ambos? Justifique

2- ¿Puede una suspensión de cloroplastos en la oscuridad llevar a cabo la síntesis de glucosa a partir
de CO2 y H2O? En el caso de responder negativamente, ¿qué debe añadirse para que pueda darse
la síntesis de glucosa?

3- Si se utiliza una atmósfera de 14CO2 (dióxido de carbono con el átomo de Carbono marcado
radioactivamente) en experimentos con plantas C3, C4 y CAM. ¿Estarán marcados inicialmente
los mismos átomos de C en la glucosa? Explique su respuesta.
¿Cuál es el primer compuesto marcado radioactivamente en cada tipo de planta?

4- La síntesis de glucosa a partir de CO2 por medio de la C4 precisa mayor cantidad de ATP por
molécula de CO2 reducida que las que se necesitan para la misma síntesis por medio de C3.
a) Comparar y explicar ¿por qué?
b) ¿Cuánto ATP gasta una planta C3 y una C4 para fijar 6 CO2 y cuál tiene una mejor eficiencia
fotosintética?

5- Cuál es el aceptor y el dador de electrones en las reacciones fotoquímicas y en las reacciones

bioquímicas de la fotosíntesis?

6- Se colocan a la luz dos tubos conteniendo en un medio isotónico y tamponado:

a) cloroplastos y el aceptor de electrones 2,6 diclorofenol indofenol oxidado
b) cloroplastos solamente
¿Diga en cuál/es tubos ocurre transporte electrónico y en cuál/es se pondrá en evidencia y por qué?

7- A dos tubos, conteniendo una solución de bicarbonato de sodio, se les agregó una planta acuática.
Uno de dichos tubos se colocó en la luz; y el otro tubo en la oscuridad. Diga en cuál se producirá
consumo de CO2. ¿De dónde obtendrán el CO2 y qué tipo de reacciones están ocurriendo?

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