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Analisis de Agua (Modificar Resu y Conclu)

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TERCER LABORATORIO DEL CURSO MICROBIOLOGÍA – SA323 E

“DETERMINACIÓN DE LA CALIDAD DEL AGUA POR SU


CONTENIDO BACTERIAL”
(recuento de bacterias heterotróficas)

QUISPE LOPEZ PEDRO LUIS – 20182187I

DOCENTE: ING. JORGE GILBERTO TELLO CEBREROS

Lima, Perú
2019
UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA
Facultad de Ingeniería Ambiental

I. INDICE

1. ÍNDICE…………………………………………………………………..…Pg. 2
2. RESUMEN…………………………………………………………………Pg. 3
3. INTRODUCCIÓN………………………………..……………………...…Pg. 3
4. OBJETIVOS………….……………………………………………...….…Pg. 4
5. MARCO TEÓRICO…………………………………….……………….…Pg. 5
6. METODOLOGÍA……………………………………….……………….…Pg. 9
7. RESULTADOS…………………………..…………………..………….…Pg. 10
8. DISCUSIÓN…………………………………………….………………..…Pg. 11
9. CONCLUSIÓN……………………………………………..………...….…Pg. 11
10. RECOMENDACIÓN………………………………….…………...…….…Pg. 12
11. ANEXOS…….………………………………………………………………Pg. 13
12. APÉNDICE…………..……………………………………..…………….…Pg. 18
13. FUENTE DE INFORMACIÓN……………………………….………….…Pg. 19

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II. RESUMEN
En el día a día, la población mundial necesita consumir agua, puesto como bien se sabe
este es el compuesto más importante en el organismo del ser humano. Debido a esta
dependencia que tenemos, el ser humano tiene el derecho a que se le provea un agua en
óptimas condiciones la cual no perjudique el nivel de salud de este y por ello nos vemos en
la necesidad de tratar el agua que se consumirá. Entre los parámetros más importantes en
el tratamiento del agua, en el presente informe, se mencionaran dos de estos: La turbidez y
el pH.
La turbidez es un parámetro que nos sirve como expresión de la propiedad óptica que tiene
una sustancia liquida, en este caso el agua, de dispersar y absorber la luz. Este parámetro
tiene un gran significado no solo desde el punto de vista de la salud, sino también estético.
Por otro lado en el presente informe se analizara el pH, el cual es un parámetro de vital
importancia en el tratamiento del agua, puesto que el conocimiento de este y el cómo medirlo
nos permitirá expresar el nivel de acidez o alcalinidad del agua y a su vez con el valor
obtenido permitirnos determinar si el agua está dentro de los niveles permitidos y así esta
sea apta para el consumo humano.
En el presente informe se relacionara los diversos valores de turbidez hallados en cada
dilución hecha, además de hallar sus respectivos valores de pH y con ello observar la
relación que existe entre el pH y la turbidez. Una vez con estos valores y graficas
correspondientes se presentara las conclusiones a las que se haya llegado, así como las
recomendaciones para que las próximas experiencias en el laboratorio se realicen con más
comodidad.

III. INTRODUCCIÓN

El agua frecuentemente actúa como vehículo de transmisión de microorganismos


entéricos. La Dirección General de Salud Ambiental (DIGESA), la Organización Mundial de
la Salud (OMS) en sus Guías para la calidad del agua potable y otras normas
internacionales, establecen o recomiendan requisitos de calidad para el agua de consumo
humano. En general, la normativa establece que el agua es apta bacteriológicamente para
consumo si se encuentra exenta de microorganismos patógenos de origen entérico y
parasitario intestinal, ya que, estos transmiten enfermedades, desórdenes hepáticos (virus
de hepatitis), etc. La presencia de microorganismos patógenos en el agua es un riesgo que
se incrementa en las áreas marginales de mayor densidad poblacional o en zonas sin
disponibilidad de agua potable. La seguridad que un agua contaminada puede ser causal
de enfermedades, ha conducido a la necesidad de controlar rutinariamente la calidad
microbiológica de muestras de diversos orígenes. Dentro de los controles resultan difíciles
de llevar a cabo debido a la gran variedad de bacterias patógenas cultivables, a la
complejidad de los ensayos de aislamientos y a la presencia en baja concentración de
varias especies altamente agresivas. Por esta razón, los análisis bacteriológicos apuntan a

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la búsqueda de microorganismos indicadores de contaminación fecal y se centralizan en la
cuantificación de Coliformes. Este grupo está integrado por enterobacterias, siendo
Escherichia coli el indicador universal de contaminación fecal.

IV. OBJETIVOS

 OBJETIVOS GENERALES:
 Técnicas de dilución para variar la concentración de una muestra de agua.
 Determinar la cantidad de colonias de bacterias de una muestra de agua.
 Calcular las Unidades Formadoras de colonia por mililitro (UFC/1ml) de una
muestra de agua.

 OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

 Utilizar como medio de cultivo agar nutritivo fundido estéril para el crecimiento de
las bacterias que se encuentran en el agua.

 Emplear técnicas de dilución para variar la concentración de la muestra y así


obtener una muestra ideal, con un rango de [10-100] colonias, la cual nos
permitirá obtener mejores resultados.

 Determinar la cantidad de colonias de bacterias obtenidas de las muestras de:


Grifo de baño FIA, pileta FIA y Grifo de baño FIC. Para cada muestra se analizará
tres (03) concentraciones distintas:

 Muestra de agua de 1ml


 Muestra de agua (diluida en agua de disolución estéril) de 0.1 mL (10-1 mL)
 Muestra de agua (diluida en agua de disolución estéril) de 0.01 mL (10-2 mL)

 Calcular las Unidades Formadoras de colonia por mililitro (UFC/1mL) de cada


muestra.

 Verificar según la norma de calidad de agua (DIGESA), si los ambientes


examinados están cumpliendo el reglamento impuesto.

 Determinar la calidad del agua en los ambientes determinados dentro de la


Universidad Nacional de Ingeniería.

 Reconocer como la presencia de cloro en el agua influye en el crecimiento de


bacterias y en la calidad del agua.

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V. MARCO TEÓRICO
EL AGUA:
El agua es un recurso importante en el ciclo de vida de muchos de los microorganismos, y
también es vital en la vida de nosotros, por eso es necesario tener un control sobre toda el
agua destinada al consumo y uso humano.

a) CALIDAD DEL AGUA:


Determinación de la calidad del agua suministrada por el proveedor, de acuerdo a los
requisitos físicos, químicos, microbiológicos y parasitológicos del agua para consumo
humano establecidos por Reglamentos impuestos por DIGESA.
Los estándares más comunes utilizados para evaluar la calidad del agua se relacionan
con la salud de los ecosistemas, seguridad de contacto humano y agua potable.
b) INDICADORES DE CALIDAD DEL AGUA
Para conocer el grado de calidad de las aguas, independientemente del posible uso al
que vayan a ser destinadas, se parte de la toma de muestras para la obtención de una
serie de parámetros e indicadores. Estos indicadores se clasifican generalmente en
organolépticos, físicos, químicos y microbiológicos.

INDICADORES USADOS PARA LA CALIDAD DEL AGUA


Color
organolépticos Turbidez
Olor
Solidos Solidos suspendidos (sedimentables y no sedimentables)
físicos Totales Solidos Filtrables (coloidales y disueltos)
Temperatura
Dureza
pH ( básico, ácido y neutro)
químicos Oxígeno disuelto
Materia orgánica
DBO (demanda biológica de oxigeno)

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DQO (demanda química de oxigeno)
COT (carbono orgánico total)
Coliformes (totales y fecales)
microbiológicos indicadores Estreptococos fecales
Enterococos fecales
c) Principales contaminantes
Los contaminantes más frecuentes de las aguas son: materias orgánicas y bacterias,
hidrocarburos, desperdicios industriales, productos pesticidas y otros utilizados en la
agricultura, productos químicos domésticos y desechos radioactivos. Lo más grave es
que una parte de los derivados del petróleo son arrojados al mar por los barcos o por
las industrias ribereñas y son absorbidos por la fauna y flora marinas que los
retransmiten a los consumidores de peces, crustáceos, moluscos, algas, etc.

Bacterias Heterotróficas
Las bacterias heterotróficas (heterótrofas) se definen como aquellas bacterias que usan
compuestos del carbono orgánico como fuente de energía y el carbono para su
crecimiento, en contraposición con las bacterias autotróficas que utilizan los
compuestos inorgánicos como fuente de energía y el C02, como fuente de carbono.
Esta definición de bacteria heterótrofa es amplia e incluye tanto a las bacterias
saprofíticas como a las patógenas. Por lo tanto, tanto las bacterias que causan como
las que no causan enfermedades son heterótrofas.
Entre ellas tenemos que destacar principalmente los tipos de bacteria que habitan el
agua potable y también las que son causante de infecciones en el cuerpo humano.
También se encuentran en muchos otros aspectos de la naturaleza siendo que son
fundamentales para el proceso de reciclaje.

a) Características:
 Este tipo de bacterias se presentan en gran cantidad en los ambientes
naturales, mucho más en los ambientes acuáticos.
 Ellas se encuentran en el agua, no solo en lagos y ríos sino también en
el agua potable y la que podemos obtener del servicio de agua corriente.
 Son el tipo de microorganismo que vive mayor tiempo en un ambiente
acuático.
 Estas bacterias se adaptan y sobreviven a los ambientes con altos
niveles de oxígeno, como también a aquellos que mantienen un nivel
bajo.

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 Absorben diferentes sustancias del ambiente en el que habitan para
producir energía.

b) Tipos de bacterias heterótrofas


Existen diferentes tipos de bacterias heterótrofas y son las siguientes:

 Bacterias Foto-heterótrofos: Estas bacterias absorben la luz solar y su


energía para sobrevivir en el ambiente, además necesitan de otros
compuestos orgánicos.

 Bacterias Quimio-heterótrofos: Estas bacterias absorben la energía del


ambiente por medio de las reacciones químicas. No son capaces de
producir sus propios alimentos, por eso necesitan absorber azucares del
ambiente en el que se encuentran para sobrevivir.

 Bacterias Organótrofos: Estas bacterias absorben energía por medio de


un sustrato orgánico.

 Bacterias Litótrofos: Estas bacterias absorben energía por medio de un


sustrato inorgánico. Las características de esta bacteria las convierte en una
de las más extrañas que existen.

CONTEO BACTERIANO:
a) Conteo en placa PETRI:
Es el método más usado para contar bacterias. Un caldo de cultivo con
microorganismos es diluido y posteriormente muestras del mismo son distribuidas
en la caja de Petri contenedora de agar. Es de suponerse que cada célula se
dividirá en sus múltiples alrededores para producir colonias separadas en el agar.
Cada célula es llamada unidad formadora de colonias (UFC). Después de la
incubación, el número de colonias se reflejará en el número de células UFC
originalmente presentes. Es importante considerar un número limitado de colonias
pues de no ser así, éstas pueden sobrepoblarse y dificultar el conteo de las mismas
(rango sugerido de 25-250 colonias). El conteo se facilita utilizando un contador de
colonias. Este método es deseable porque arroja el total de células viables (sólo

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células vivas); en contraste con el conteo microscópico y el conteo de peso seco.
Una desventaja radica en el tiempo que requiere para producir las colonias, ya que
se necesitan como mínimo veinticuatro horas o más. Por otra parte, no es cien por
ciento fiable porque generalmente las colonias crecen unidas en cadenas o en
grupos.
Unidades Formadoras de Colonias (UFC):
 Unidades Formadoras de Colonias es un valor que indica el grado de
contaminación microbiológica de un ambiente.
 Expresa el número relativo de microorganismos de un taxón determinado en
un volumen de un metro cúbico de agua.
 UFC es el número mínimo de células separables sobre la superficie, o
dentro, de un medio de agar semi-sólido que da lugar al desarrollo de una
colonia visible del orden de decenas de millones de células descendientes.
 Las UFC pueden ser pares (diplococos), cadena (estreptococos) o racimos
(estafilococos), así como células individuales Unidad formadora de colonias.

SE MIDE: UFC/mL

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Imagen 1: Contador de Bacterias

VI. METODOLOGÍA:
A. TOMA DE MUESTRAS DE AGUA:

1. Utilizamos un frasco estéril (vacío) para la extracción de la muestra de agua.


2. Abrir el grifo o caño del cual se va realizar la toma, medimos la temperatura del
agua, esperamos unos cinco minutos y anotamos la marca del termómetro.
3. Luego abrimos el frasco y rápidamente lo colocamos en el grifo hasta que la
cantidad de la muestra de agua llegue a la mitad aproximadamente, cerramos
herméticamente. Anotamos la fecha y hora de la toma.

IMAGEN 2: Frasco estéril.


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B. CULTIVO DE LA MUESTRA DE AGUA

1. Primero retiramos los tubos de prueba que contienen el agar nutritivo,


esperamos unos minutos a que se enfríen (sin dejar que se solidifique).
2. Realizamos la dilución a distintas concentraciones con ayuda de pipetas
estériles.
3. Extraemos 1mL de cada una de las disoluciones preparadas y las vertemos en
sus respectivas placas Petri estériles.
4. Inmediatamente verter el agar nutritivo en cada una de las placas Petri
realizando un movimiento lento para homogenizar la muestra, esperar que se
solidifique.
5. Invertir las placas e incubarlas a 35ºC por 48 horas.

IMAGEN 3: Placas Petri.

VII. RESULTADOS:

DILUCIÓN (mL) Unidad


MUESTRA DE fundamental de Características
OBSERVACIONES
AGUA colonias / mL (Tamaño)
1 10-1 10-2 (UFC/mL)

Grupo Nº 1 En la placa Nº 1 no
se realizó una
Grifo Baño de ---- 15 2 150 [1-3] mm
buena distribución
la FIA del agar Nutritivo.

Grupo Nº 3
98 28 ---- 98 [1-5] mm -----
Pileta de la FIA

Grupo Nº 5
Grifo Baño de 20 4 1 20 [1-5] mm -----
la FIC

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GRUPO LUGAR UBICACIÓN FECHA HORA TEMPERATURA

Grifo Baño
Nº 1 3er Piso 09/04/19 11:35 am 26ºC
de la FIA

Al extremo de la pileta
Pileta de
Nº 3 más próxima a la salida 09/04/19 12:29 pm 27ºC
la FIA
de la FIA.

El grifo más próximo a la


Grifo Baño
Nº 5 salida del baño para 09/04/19 11:45 am 23ºC
de la FIC
varones del 2do Piso FIC

VIII. DISCUSIÓN DE RESULTADOS


La muestra del grupo Nº 1 obtenida del grifo de baño de la FIA tiene 150 UFC/mL, lo
cual, siendo comparado con las normas impuestas por la DIGESA resultan estar en el
rango establecido. Las bacterias consideradas para el conteo estuvieron dentro del
rango de [1-3] mm.

La muestra del grupo Nº 3 obtenida de la pileta de la FIA tiene 98 UFC/mL, lo cual,


siendo comparado con las normas impuestas por la DIGESA resultan estar en el rango
establecido. Las bacterias consideradas para el conteo estuvieron dentro del rango de
[1-5] mm.

La muestra del grupo Nº 5 obtenida del grifo del baño para varones de la FIC tiene 20
UFC/mL, lo cual, siendo comparado con las normas impuestas por la DIGESA resultan
estar en el rango establecido. Las bacterias consideradas para el conteo estuvieron
dentro del rango de [1-5] mm.

IX. CONCLUSIONES:

La técnica usada para realizar la determinación de la calidad del agua por su contenido
bacterial fue eficaz y eficiente, ya que, nos llevó a los resultados esperados

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minimizando el tiempo de análisis y usando los materiales y equipos que nos abastece
nuestro laboratorio que no son tan modernos.

Las muestras

 Se logró determinar la presencia de heterótrofos en el agua.

 Se logró determinar la calidad higiénica del agua la cual es apta para el


consumo humano.

 Se logró determinar la alcalinidad en la que se encontraba la muestra de agua.

---------------------
-Es evidente según el experimento que existen microorganismos en las muestras tomadas,egún sea
el volumen y las diluciones utilizadas crecen colonias de diferentes tamaños y en diversas
cantidades,esta va disminuyendo según el número de dilución.

-En el grupo 1 –Estanque de arquitectura los factores para el crecimiento y desarrollo de


microorganismos han sido favorables debido a temperatura,nutrientes ,partículas ,turbidez del
agua,etc.

-No se puede comparar los resultados del grupo 3 y grupo 5 con el límite máximo permisible de
parámetros biológicos,debido a que las condiciones de la norma según DIGESA son diferentes al
procedimiento realizado por los grupos en cuanto tiempo de incubación de placas.Por lo tanto no
se ha podido hallar la calidad del agua en los ambientes del baño del Gimnasio UNI y en .

-Se conoce el procedimiento para el análisis de calidad de agua ,por tanto ya que el grupo 3 y el
grupo 5 no cumplió dicho objetivo, se reconoce que si se hace nuevamente el experimento se
tomará el promedio de resultados para las conclusiones a tomar.

---------------
En suma podemos notar que conforme se diluye la turbidez disminuye y esto se debe a
que la concentración de partículas en suspensión de la muestra disminuye y con ello el
paso de la luz es mucho mejor.
Además el pH aumenta conforme se va realizando la dilución, lo cual se debe a que el
agua al tener un pH igual a 7 lo que logra es empezar a disminuir la concentración de iones
H+ de la muestra sin diluir.
El error en los valores de turbidez calculados se dan por diversos factores, como el error
humano o también por otras interferencias como lo son sólidos sedimentables, burbujas de
aire presentes (oxigeno), etc.
Otro aspecto que se pudo notar fue que la temperatura no varía mucho en relación a la
disolución realizada, y esto dependerá a la temperatura del agua destilada a usar.

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Finalmente concluimos en que tanto la turbidez como el pH son unos de los parámetros
más importantes dentro de la calidad de agua, el conocimiento de estos nos proporciona la
suficiente información para determinar si estamos frente a un agua contaminada o no.

--------------

 Las muestras arrojan resultados que se encuentran dentro del rango sugerido
para el conteo de colonias de bacterias (30-300), por tanto se puede decir que:
o Cantidad de unidades formadoras de colonias por mililitro:
BAÑO FIA -> 287 UFC/ml
LAVADERO DE PLATOS ->46 UFC/ml
ESTANQUE DE ARQUITECTURA-> 420 UFC/ml
 A medida que la concentración disminuya las colonias de bacterias disminuyen
en cantidad y están distribuidas con mayores espacios entre ellas. Esto no se
evidencia en los resultados del grupo 5 ya que en la placa de 10-1ml hay más
colonias de bacteria (42) que la placa de 1 ml (8). VER TABLA.2
 Este método de determinación de la cantidad de colonias de bacterias en una
muestra de agua resulta ser estadístico, por lo que es necesario realizarlo
repetidas veces para así encontrar un resultado más fiable, en nuestro caso con
los resultados obtenidos no podemos afirmar con exactitud la calidad del agua,
pero si fuese así compararíamos con los LMPs del ANEXO I. Haciendo esto las
tres muestras se encuentran dentro del rango <500 UFC/ml (bacterias
heterotróficas).

X. RECOMENDACIONES:
Luego de haber desarrollado el experimento, para tener una mejor impresión con las
experiencias, seguir las siguientes recomendaciones:

 Mantener en un lugar seguro la muestra extraída.

 Tener Cuidado con contaminar las pipetas estériles usadas para disminuir las
concentraciones de las disoluciones.

 Tener cuidado al momento de tomar las muestras de agua evitando


cualquier tipo de contaminación externa.

 Anotar las condiciones en las que se encuentran las muestras a tomar.

 Tener cuidado al momento de sacar el agar de la autoclave, para poder


utilizar el insumo completo y realizar correctamente el procedimiento de
laboratorio.

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 Para disminuir la concentración de microorganismos en el caso de la pileta


de FIA, podríamos hacer un tratamiento con cloro residual, y analizamos el
contenido bacterial una vez terminado el proceso.

 Contar las colonias por lo menos dos veces y escoger a partir de qué
tamaño estas son contabilizadas, anotar diámetros y características para un
mejor resultado.

 Realizar el método de conteo por cuadrantes, ya que, es muy tedioso


contar toda la placa Petri a la vez.

 El tiempo de incubación debe ser preciso y exacto, para poder comparar


los resultados con los números máximos permisibles según la norma del
DIGESA.

 Obtener 3 muestras del mismo lugar para obtener mejores resultados y


realizar una adecuada conclusión.

Grupo 3:
Contamino la pipeta, ya que, dejo la tapa del cilindro para esterilizar pipetas sobre
la mesa dejándolo descubierto.

XI. ANEXOS:

REGLAMENTO DE LA CALIDAD DEL AGUA PARA CONSUMO HUMANO

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XII. APÉNDICE

DIAGRAMA DE FLUJO DE DETERMINACIÓN DE LA CALIDAD DEL AGUA POR


ANÁLISIS BACTERIAL

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XIII. FUENTES DE INFORMACIÓN:

 Michael Madigan, John Martinko, Jack Parker, Biología de los microorganismos,


Madrid, Editorial Pearson ,2004.

 Repositorio, Tratamiento de aguas. [Consulta: 2 mayo 2019] Disponible en:


https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/civil/ing_sanitaria/Ingenieria_Sanitaria_A4_
Capitulo_06_Tratamiento_de_Aguas.pdf

 https://www.psa.es/es/projects/solarsafewater/documents/libro/02_Capitulo_02.pdf

 http://www.digesa.minsa.gob.pe/publicaciones/descargas/Reglamento_Calidad_Agua.pdf

 http://www.cff.org.br/userfiles/file/Pasta%20-
%20Costa%20Rica/_XVI%20Congreso%20Farmac%C3%A9utico%20Nacional%20%20(PDF)__/Cl
ase%201%20M%C3%A9todos%20fisicoqu%C3%ADmicos%20y%20microbiol%C3%B3gicos%20p
ara%20garantizar%20la%20calidad%20del%20agua.pdf

 https://www.redalyc.org/html/1812/181230079005/

 https://www.academia.edu/8137472/Indicadores_de_calidad_de_agua

 https://www.who.int/water_sanitation_health/dwq/gdwq3_es_7_fig.pdf

 file:///C:/Users/USUARIO/Downloads/14798659_DOC042.61.20226.Mar16_ES.web.pdf

 https://www.tiposde.com/bacterias_heterotrofas.html

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