PRÁCTICA #07 Enzimas

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
I. INTRODUCCIÓN
Las proteínas llamadas enzimas se encargan de catalizar las

reacciones químicas del metabolismo, permitiendo de esta
manera el mantenimiento de la vida. Los fenómenos
enzimáticos son utilizados y conocidos desde la antigüedad con
el nombre de fermentación, por lo tanto, las primeras enzimas
se llamaron primeramente fermentos y después distasas.
La velocidad de una reacción dependerá del número de

combinaciones por unidad de tiempo entre la enzima y el sustrato. Existen diversos factores
que pueden afectar la velocidad de reacción como es el caso de la temperatura, pH y
concentración. Las enzimas son altamente eficientes puesto que disminuyen la energía de
activación y son altamente específicas, Por lo tanto se las requiere en pequeñas cantidades y
se clasifican de acuerdo a su función catalítica.
Un enzima que podemos encontrar en todos los seres vivos es la catalasa, necesaria para
descomponer el peróxido de hidrógeno, un compuesto tóxico, que se produce durante el
metabolismo celular.
II. OBJETIVOS
 Mediante pruebas cualitativas reconocer la presencia de enzimas en diferentes
muestras biológicas.
 Identificar a las enzimas a través de sus propiedades físico-químicas.
III. MATERIALES
3.1. Materiales biológicos

Almidón Amilasa salival Sangre diluida Papa
3.2. Materiales de vidrio

Tubos de ensayo Pipetas Vaso precipitado
3.3. Reactivos
Reactivo de Benedict Lugol
3.4. Equipos y otros

Pinzas de tubos Gradilla Cocina eléctrica Guantes quirúrgicos
IV. PROCEDIMIENTO
4.1 ACCION ENZIMÁTICA DE LA CATALASA
La catalasa es una enzima que se encuentra en los peroxisomas de células animales y

vegetales, que actúa sobre un sustrato específico el peróxido de hidrógeno, que es una
molécula tóxica que se forma durante el metabolismo celular, desdoblándolo en agua,
liberando O2.
1. En un tubo de ensayo colocar sangre diluida o un trocito de papa.

2. Agregar 2 mL de peróxido de hidrógeno y dejar en reposo por 1 minuto.
3. Observar, interpretar y graficar los resultados. se observa como un burbujeo que
indica la liberación de O2.
4.2. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
La enzima catalasa por ser una proteína puede ser desnaturalizada a elevadas
temperaturas, lo que inhibiría también su capacidad catalítica.
1. En un tubo de ensayo hacer hervir pequeños trozos de papa más agua destilada a
alta temperatura. Hacer lo mismo con la sangre diluida, colocando 4 mL en otro tubo.
2. Agregar 1 mL de peróxido de hidrógeno y dejar en reposo por 2 minutos.
3. Observar, interpretar y graficar resultados. La alta temperatura inactiva a la enzima
catalasa, de tal manera que no actúa sobre el sustrato (peróxido de hidrógeno)
4.3. ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA AMILASA

La enzima amilasa es conocida también como ptialina salival y está presente en la
saliva. Actúa específicamente sobre el almidón, hidrolizando su enlace O glucosídico,
transformándolo en unidades de glucosa.
A) Sistema de incubación
1. En dos tubos de ensayo (I y II) agregar 2 mL de solución de almidón 1% y luego
2 mL de agua destilada.
2. Colocar los tubos a baño María a 37ºC por 2 minutos.
3. Luego agregar al tubo II, 3 mL de amilasa salival obtenida con enjuague de agua
tibia.
4. Incubar los tubos por 10 minutos a 37ºC
5. Observar e interpretar los resultados
COMPONENTES TUBOS
I II
Almidón 1% 2 2 mL
mL
Agua destilada 2 2 mL
mL
Preincubar a 37ºC x 2 minutos
Amilasa salival (enjuague con agua tibia) 3 mL
Incubar a 37ºC x 10 minutos
B) Control de la actividad enzimática por el productor residual (Sustrato)
1. De los tubos I y II incubados transferir 2 mL a otros 2 tubos, luego añadir 0,5 mL

de lugol
2. Mezclar, observar, interpretar y graficar resultados.
COMPONENTES TUBOS
I II
Del tubo I incubado 2 mL
Del tubo II incubado 2 mL
Lugol 0,5 0,5
mL mL
3. Observar la coloración azul violeta en uno de los tubos
C) Control de la actividad enzimática de los productos formados
1. De los tubos I y II incubados transferir 1 mL a otros dos tubos previamente

rotulados.
2. Agregar a cada tubo 2 mL del reactivo de Benedict.
COMPONENTES TUBOS
I II
Del tubo I incubado 1 mL
Del tubo II incubado 1 mL
Benedict 2 mL 2 mL
3. Llevar los tubos a baño maría hirviendo por 5 minutos y observar la coloración
rojo ladrillo en uno de los tubos
V. RESULTADOS
ACCION ENZIMÁTICA DE LA CATALASA
Después de agregar el peróxido de

hidrogeno observamos la acción de la
enzimática de la catalasa, en forma
de burbujitas para luego convertirse
en espuma blanca que iba
ascendiendo.
EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA
Observamos que el calor inactiva a la

enzima de la catalasa, de esta manera
no actúa sobre el sustrato de (peróxido
de hidrogeno).
No hubo presencia de agua y de
oxígeno.
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA AMILASA
A) Sistema de incubación
I TUBO
No hubo reacción
II TUBO
Si hubo reacción
B) Control de la actividad enzimática por el productor residual (Sustrato)
I TUBO
El yodo ingresa y produce una reacción
positiva.
II TUBO
Actúa la amilasa el cual degrada al
almidón y se produce una negación
negativa. Se observó una muestra de
color amarillenta
C) Control de la actividad enzimática de los productos formados.
C) Control de la actividad enzimática de los productos formados
I TUBO
No se produjo degradación.
IITUBO
El reactivo Benedict degrada y rompe el
enlace de la glucosa.
VI. CONCLUSIONES
 La práctica se culminó con éxito ya se obtuvieron los resultado esperados,

reconocimos a la enzima de la catalasa y su coloración entre otros métodos.
 Los agentes precipitantes inhiben la actividad enzimática por desnaturalización de la

enzima.
 La velocidad de una reacción enzimática depende de varios factores. Entre éstos

está el pH. Cada enzima tiene un rango de pH en el que su actividad enzimática es
óptima. Fuera de este rango la enzima por ser una proteína empieza a
desnaturalizarse por la prolongación o desprotonación de sus aminoácidos
constituyentes
 La temperatura es otro factor importante en la actividad enzimática. Se puede decir

que a mayor temperatura aumenta la velocidad de la reacción hasta que llega un
punto en el que la velocidad disminuye con el aumento en el calor.
VII. CUESTIONARIO
1. Indique ¿cuáles son los principales constituyentes de un sistema enzimático?
Son las siguientes:

1. Sustrato:
Es cualquier compuesto químico.
Que subyace a otro y sobre el cual está en condiciones de ejercer algún tipo de influencia.
2. La enzima:
Son proteínas complejas que producen cambios químicos específicos en algunas sustancias, sin
que exista un cambio en ellas mismas.
3. Conzimas
Las coenzimas son pequeñas moléculas orgánicas no proteicas que transportan grupos químicos
entre enzimas. A veces se denominan cosustratos. Estas moléculas son sustratos de las enzimas
y no forman parte permanente de la estructura enzimática.
4.Sustancias activadoras
Como el ATP.
2. Cómo se demuestra la actividad enzimática experimentalmente?

De la siguiente manera.
Medida de la velocidad inicial.
Cuando una enzima se mezcla con un gran exceso de sustrato (a concentración saturante), el
complejo intermedio enzima-sustrato se genera en una rápida fase inicial transitoria.
Medida del progreso de la curva

En estos experimentos los parámetros cinéticos se determinan a partir de expresiones de las
concentraciones de las diferentes especies como funciones del tiempo.
Medida de la fase transitoria

En estos experimentos se observa el comportamiento de la reacción durante la rápida fase inicial
transitoria en la que el complejo molecular intermedio.
Experimentos en la fase de equilibrio

En estos experimentos se perturba una mezcla de enzima, sustrato y producto que ha alcanzado
el equilibrio químico, por ejemplo cambiando la temperatura, la presión o el pH, y se estudia cómo
regresa la mezcla al equilibrio
3. ¿Qué diferencias existen entre una hormona y una enzima?
La diferencia es esta:
-Una hormona
Es una sustancia segregada por las diferentes glándulas de nuestro organismo.
-Una enzima
Es un catalizador que interviene en los procesos de transformación del metabolismo de los seres vivos.
VIII. BIBLIOGRAFIA
 Guía de laboratorio de bioquímica general L.D. Caicedo. Tomado de Vélez A.

Manual de bioquímica. Universidad Santiago de Cali. Facultad de Educación.
 Química 2013. 3. Cox M. M. y Nelson, D. L. (2006). Lehninger. Principios de

Bioquímica. Barcelona: Editorial Omega. 4. DEGRADACIÓN DEL ALMIDÓN
MEDIANTE LA AMILASA SALIVAL. (2008) Revista Eureka sobre Enseñanza
y Divulgación de las Ciencias, enero, año/vol. 5, número 001 Asociación de
Profesores Amigos de la Ciencia: EUREKA Cádiz, España pp. 104-106

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Las proteínas llamadas enzimas se encargan de catalizar las

La velocidad de una reacción dependerá del número de

3.1. Materiales biológicos

3.2. Materiales de vidrio

3.4. Equipos y otros

4.1 ACCION ENZIMÁTICA DE LA CATALASA

La catalasa es una enzima que se encuentra en los peroxisomas de células animales y

1. En un tubo de ensayo colocar sangre diluida o un trocito de papa.

4.2. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

4.3. ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA AMILASA

B) Control de la actividad enzimática por el productor residual (Sustrato)

1. De los tubos I y II incubados transferir 2 mL a otros 2 tubos, luego añadir 0,5 mL

3. Observar la coloración azul violeta en uno de los tubos

C) Control de la actividad enzimática de los productos formados

1. De los tubos I y II incubados transferir 1 mL a otros dos tubos previamente

ACCION ENZIMÁTICA DE LA CATALASA

Después de agregar el peróxido de

EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Observamos que el calor inactiva a la

ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA AMILASA

C) Control de la actividad enzimática de los productos formados

 La práctica se culminó con éxito ya se obtuvieron los resultado esperados,

 Los agentes precipitantes inhiben la actividad enzimática por desnaturalización de la

 La velocidad de una reacción enzimática depende de varios factores. Entre éstos

 La temperatura es otro factor importante en la actividad enzimática. Se puede decir

Son las siguientes:

2. Cómo se demuestra la actividad enzimática experimentalmente?

Medida del progreso de la curva

Medida de la fase transitoria

Experimentos en la fase de equilibrio

3. ¿Qué diferencias existen entre una hormona y una enzima?

 Guía de laboratorio de bioquímica general L.D. Caicedo. Tomado de Vélez A.

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