QUE ES BIOTECNOLOGIA?

Se refiere a toda aplicación tecnológica que utilice sistemas biológicos y organismos vivos o sus
derivados para la creación o modificación de productos o procesos para usos específicos. Dichos
organismos pueden estar o no modificados genéticamente por lo que no hay que confundir
Biotecnología con Ingeniería Genética. La Organización para la Cooperación y el Desarrollo
Económico define la biotecnología como la «aplicación de principios de la ciencia y la ingeniería
para tratamientos de materiales orgánicos e inorgánicos por sistemas biológicos.
Sus bases son la ingeniería, física, química, biología, medicina y veterinaria; y el campo de esta
ciencia tiene gran repercusión en la farmacia, la medicina, la ciencia de los alimentos, el tratamiento
de residuos sólidos, líquidos, gaseosos y la agricultura.

Ventajas, riesgos y desventajas

Ventaja
Entre las principales ventajas de la biotecnología se tienen:

 Rendimiento superior. Mediante organismos genéticamente modificados (OGM), el

rendimiento de los cultivos aumenta, dando más alimento por menos recursos, disminuyendo
las cosechas perdidas por enfermedad o plagas así como por factores ambientales.

 Reducción de plaguicidas. Cada vez que un OGM es modificado para resistir una determinada
plaga se está contribuyendo a reducir el uso de los plaguicidas asociados a la misma que suelen
ser causantes de grandes daños ambientales y a la salud.

 Mejora en la nutrición. Se puede llegar a introducir vitaminas y proteínas adicionales en

alimentos así como reducir los alérgenos y toxinas naturales. También se puede intentar
cultivar en condiciones extremas lo que auxiliaría a los países que tienen menos disposición de
alimentos.

 Mejora en el desarrollo de nuevos materiales

ARN
El ARN o el ácido ribonucleico es un polímero de nucleótidos que se compone de un azúcar de la
ribosa, de un fosfato, y de bases tales como adenina, guanina, citosina, y uracilo. Desempeña un papel
crucial en la expresión génica actuando como el intermedio entre la información genética codificada
por la DNA y las proteínas.
El ARN tiene una estructura muy similar a la de la DNA. La diferencia clave en estructura del ARN
es que el azúcar de la ribosa en ARN posee un grupo del oxhidrilo (- OH) que esté ausente en la DNA.
EL MUNDO DEL ARN
El concepto de un mundo del ARN es una hipótesis con gran arraigo en los datos empíricos y parte
de una perspectiva científi ca larga y compleja de más de cincuenta años, desde que se descubrió el
papel central del ARN y los ribonucleótidos en la síntesis de proteínas y las reacciones bioquímicas.
Conforme fuimos conociendo más acerca de la biología del ARN, se sugirieron varias propuestas
independientes de vida primordial sin proteínas. Aunque esta posibilidad se vio reforzada con el
descubrimiento de las ribozimas, existen muchas defi niciones del mundo del ARN, algunas de ellas
contradictorias entre sí. Se podría decir que es una etapa temprana, quizás primordial, durante la cual
las moléculas de ARN tuvieron un papel mucho más evidente en la herencia, el metabolismo y,
particularmente, el origen y los primeros pasos en la evolución de la biosíntesis proteínica. La
abrumadora evidencia de las propiedades estructurales, reguladoras y catalíticas de las moléculas de
ARN, junto con su ubicuidad en los procesos celulares, solo se puede explicar reconociendo que
representaron un papel clave en la evolución temprana de la vida, tal vez incluso en su origen.
TIPOS DE ARN
ARN MENSAJERO:
El ARN mensajero es el ácido ribonucleico que transfiere el código genético "comunica la
información genética" procedente del ADN del núcleo celular a un ribosoma en el citoplasma, es
decir, el que determina el orden en que se unirán los aminoácidos de una proteína y actúa como
plantilla o patrón para la síntesis de dicha proteína.
A pesar de que la mayoría de los ARNm eucarióticos son monocistrónicos, es decir, contienen
información para una sola cadena polipeptídica, algunos estudios han demostrado que ciertos genes
eucarióticos organizados en grupos se transcriben como policistrónicos al igual que en los
organismos procariotas.

ARN RIBOSÓMICO O RIBOSOMAL

Es un ARN que forma parte de los ribosomas y es esencial para la síntesis proteica en todos los seres
vivos. Los ARNr forman el armazón de los ribosomas y se asocian a proteínas específicas para formar
las pre-subunidades ribosomales. Es el material más predominante en el ribosoma, que en peso
consiste de aproximadamente 60 % de RNAr y 40 % de proteína.

ARN DE TRANSFERENCIA
Es un tipo de ácido ribonucleico que tiene una función importante en la síntesis proteica. Es aquel
que transfiere las moléculas de aminoácidos a los ribosomas, para posteriormente ordenarlos a lo
largo de la molécula de ARN mensajero (ARNm); estos aminoácidos se unen por medio de enlaces
peptídicos para formar proteínas durante el proceso de síntesis de proteínas. Cada tipo de ARNt se
combina específicamente con 1 de los 20 aminoácidos que se van a incorporar en las proteínas. Existe
una molécula de ARNt para cada aminoácido, con una tripleta específica de bases no apareadas, el
anticodón, codón y el ARN (ribosomal).
MICRO ARNS
Existe otro tipo de pequeños ARNs dentro de la célula, los cuales controlan el desarrollo larvario en
Caenorhabditis elegans. Estos genes son expresados en tiempos específicos y reprimen algunos genes
que codifican proteínas y que gobiernan diversas etapas y eventos del desarrollo larval. Su expresión
etapa-específica y su papel en los eventos de regulación les han acreditado su nombre: pequeños
ARNs temporales o stARNs, los cuales también se presentan durante el desarrollo embrionario en
humanos. En este caso, los microARNs (miARNs) son codificados en el núcleo como pre-
microARNs, de aproximadamente 70 nucleótidos de longitud, por la ARN polimerasa II usando como
templado intrones de genes codificantes o intrones y exones de transcritos no codificantes.

Expresión Génica

La expresión génica es el proceso que permite obtener proteínas a partir de genes. Los genes son
secuencias de nucleótidos de ADN que codifican la información necesaria para la síntesis de
proteínas. Esta síntesis tiene lugar en dos pasos: transcripción y traducción. La transcripción tiene
lugar en el núcleo y en ella una de las dos hebras que conforman la doble cadena de ADN sirve de
molde para que una secuencia concreta se copie a una molécula de ARN de cadena sencilla.
Posteriormente, este ARN sale fuera del núcleo y lleva el mensaje la secuencia de nucleótidos hasta
los ribosomas, de ahí el nombre de ARN mensajero (ARNm). La traducción es un proceso
citoplasmático en el que la molécula de ARNm se descodifica para generar una cadena específica de
aminoácidos, llamada polipéptido (la proteína). La correspondencia existente entre nucleótidos
(ARNm) y aminoácidos (proteína) es lo que se denomina código genético.

SILENCIAMIENTO GÉNICO MEDIADO POR ARN NO CODIFICANTE

Los microARN son pequeños ARN (18-25 nucleótidos) endógenos, no codificadores de proteínas,
que impiden la expresión de un determinado gen. Esto lo logran bloqueando la traducción
(mecanismo antisentido) o mediando la degradación de ARN mensajeros específicos (aquellos
poseedores de una secuencia complementaria al microARN). Fisiológicamente, los microARN
ejercen varias funciones. Desde el punto de vista epigenético, no solo tienen la capacidad de regular
la expresión génica por los mecanismos expuestos anteriormente, sino que también pueden remodelar
la cromatina al modificar el patrón de metilación de una secuencia específica, viéndose
particularmente involucrados en la formación de heterocromatina. También se han visto implicados
en la corrección selectiva de errores en la metilación del ADN, lo que protegería al organismo contra
una eventual pérdida transgeneracional del patrón de metilación. En relación a la patología, los
microARN pueden actuar como supresores de tumores o como oncogenes. A modo de ejemplo, se ha
encontrado una familia de microARN que actuaría como supresora de la oncogénesis y de las
metástasis en el cáncer de mama. Existen muchas aplicaciones terapéuticas para los microARN; la
más conocida es el uso de ARN de interferencia contra patología oncológica.
ACTIVIDAD CATALITICA

ARN catalítico

En los últimos veinte años han surgido varias pistas de interés en el ámbito del ARN
catalítico. Experimentos realizados a finales de los años 80 y 90 revelaron que ciertos tipos de ARN
tenían actividades catalíticas intrínsecas. Bioquímicos renombrados en el estudio del ARN
como Tom Cech, Dan Hershlag, Luc Jaeger y Anne Marie Pyle proporcionaron detalles clave
sobre los procesos que llevan al ARN a doblarse en formas catalíticamente activas. Con la
demostración de sus capacidades enzimáticas y de soporte de información, el ARN surgió como un
candidato favorito en la búsqueda de la molécula que pudiera haber dado el saque de salida del
comienzo de la vida. El mensaje promulgado por los partidarios del «mundo del ARN» era que,
mediante una selección natural darwinista, las mutaciones pudieron haber producido actividades
catalíticas que se fueron mejorando a través de generaciones sucesivas de replicación.
Probablemente para disgusto de los proponentes de la famosa hipótesis sobre el «mundo de ARN»,
el químico de Duke University David Deamer, junto a otros, desacreditó convincentemente dicha
hipótesis, fundándose en que los procesos necesarios para la formación de biopolímeros habrían sido
sumamente ineficaces en una Tierra sin vida.

RIBOZIMAS

Las ribozimas son ARN con actividad catalítica. El término "ribozima" es una contracción de las
palabras "ácido ribonucleico" y "enzima". Los sustratos de las ribozimas son con frecuencia ARN.
La actividad de las ribozimas combina transesterificación e hidrólisis de un enlace fosfodiéster.
Muchas ribozimas naturales catalizan la hidrólisis de uno de sus propios enlaces fosfodiéster
(ribozimas autocatalíticas) o de enlaces de otros ARN. Se han descrito ribozimas en virus,
en procariotas y en eucariotas, también en arqueas.
RIBOZIMAS: RESABIOS DEL MUNDO PRIMITIVO
El estudio de catalizadores biológicos se intensificó a mediados de 1800 cuando Louis Pasteur llamó
fermentos a los agentes presentes en las levaduras que convertían azúcar en alcohol. En 1926 se
purificó la primer enzima, la "ureasa", a partir de plantas, encontrando que estaba compuesta por
material proteico. Los cientos de enzimas purificadas y analizadas desde entonces resultaron ser de
naturaleza proteica, por lo que se concluyó que todas las enzimas eran proteínas. Este dogma pareció
cambiar cuando en 1982, en el laboratorio de Thomas Cech, estudiando el procesamiento de RNA en
el protozoo ciliado Tetrahymena thermophila se observó que el corte y empalme (splice) de un intrón
del pre-rRNA era autocatalítico. ¡El RNA se escindía por sí mismo sin ayuda de un catalizador
proteico!. Paralelamente, en el laboratorio de Sidney Altman se investigaban las propiedades de la
enzima ribonucleasa P, que se encuentra en todos los organismos. Los sustratos de esta enzima son
una serie de moléculas precursoras de tRNA inactivo que son transformadas en tRNA funcional. La
ribonucleasa P consta de una subunidad proteica y un RNA de 377 nucléotidos enlazados en una sola
cadena. Al separar los componentes, la subunidad RNA fue capaz de catalizar la hidrólisis de tRNA
precursor en ausencia completa de la parte proteica. Como la caracteristica prominente de estas
moléculas de RNA era clivar otras cadenas de RNA se les llamó ribozimas. En 1989 se les otorgó. a
Cech y a Altman el premio Nobel por el descubrimiento de estos catalizares biológicos no proteicos.
El descubrimiento de las ribozimas fortaleció la teoría del "mundo de RNA" que intenta develar el
misterio del origen de la vida. La hipótesis del "mundo de RNA" propone que la evolución basada en
la replicación del RNA precedió a la aparición de la síntesis proteica. En algún momento de la
evolución de la vida la continuidad genética fue asegurada por la replicación del RNA, sin involucrar
como catalizadores a las proteínas codificadas genéticamente, siendo el apareamiento de bases
descubierto por Watson y Crick la clave para la replicación. Las evidencias que sustentan esta teoría
están basadas en las múltiples funciones que pueden cumplir el RNA o los ribonucleótidos:
1) el RNA es capaz de almacenar información genética
2) puede servir de templado para la síntesis de cadenas complementarias de polinucleótidos
3) puede actuar como catalizador
4) nucléotidos de RNA actúan como coenzimas en muchas reacciones biológicas
5) los desoxirribonucleótidos precursores del DNA son sintetizados a partir de ribonucléotidos
6) la presencia de pequeñas ribonucleoproteínas ayudan en la expresión genética y en el
mantenimiento del genoma
7) las moléculas de RNA guia participan en la edición del RNA
8) numerosos virus llevan como único material genético RNA de simple o doble cadena.
Durante la evolución, a medida que el metabolismo celular se fue sofisticando el requerimiento de
biocatalizadores con distinta especificidad hizo que las proteínas, con mayor versatilidad que el RNA
(20 aminoácidos en comparación con cuatro bases) asumieran el rol de biocatalizadores, mientras que
el DNA presumiblemente adquirió la función de guardar y transmitir la información genética, dada
su mayor estabilidad. Los descendientes de la era dominada por el RNA habitan hoy en el mundo en
forma de ribozimas presentes en organismos que van desde las bacterias al hombre. Las ribozimas
aumentan sustancialmente la velocidad de reacción (3,4,5,6). Así las constantes cinéticas son
comparables a las de enzimas proteicas. Pueden usar cofactores como imidazol y presentar regulación
alostérica. Su estructura molecular a semejanza de los catalizadores proteicos presenta pliegues dando
origen a estructuras tridimensionales que forman sitios activos como hendiduras profundas,
protegidas, e inaccesibles a solventes. Mediante esta estructura terciaria se facilita la catálisis
orientando los sustratos al sitio catalítico.
RIBOZIMAS SINTÉTICAS
Los científicos han sintetizado ribozimas in vitro, parten de secuencias de RNA seleccionadas al azar
(más de 1015), luego separan a las moléculas en base a su habilidad para realizar funciones
bioquímicas (unión a ligandos, catálisis), el material seleccionado es amplificado y el ciclo de
selección y amplificación es repetido hasta que las secuencias activas dominan el conjunto. Por último
se pueden introducir mutaciones para ampliar la diversidad de secuencias, incorporando de esta
manera las características más releva ntes de la evolución. Mediante esta técnica lograron sintetizar
catalizadores de RNA más eficientes que pueden intervenir en otro tipo de reacciones, tal como
formar nucléotidos a partir de un azúcar y una base, o sintetizar uniones amida. Se diseñan ribozimas
para cortar determinados RNA con fines terapéuticos (6), remedando la estructura y la actividad
catalítica de las ribozimas naturales conocidas. Se ha pensado que la función que cumplen estas
ribozimas puede ser aplicada para varios problemas médicos, como el cáncer y el sida, teniendo en
cuenta que si la molécula de RNA es clivada antes de llegar al ribosoma, la codificación que encierra
esa cadena nunca se expresará completamente.

LA RIBONUCLEASA P DE BACILLUS SUBTILÍS: UNA ENZIMA CON UN ARN

CATALÍTICO
La ribonucleasa P es la enzima responsable de madurar el término 5' de los precursores de los ácidos
ribonucleicos de transferencia (ARNI). En eubacterias, consta de dos componentes, uno proteico y
uno ribonucleico. El gen que define el componente ribonucleico de la ARNasa P de Bacillus subtilís
fue clonado y su secuencia determinada. In vivo y en condiciones fisiológicas in vitro, ambos
componentes son necesarios para efectuar catálisis. Sin embargo, a altas concentraciones de iones
mono- y divalentes, el ARN por sí solo es capaz de procesar los pre-ARN; el gen clonado en un
vehículo de expresión que contiene el promotor de bacteriófago T7 permite la síntesis in vitro de un
ARN que retiene propiedades catalíticas. Las altas concentraciones de cationes necesarias para
manifestar la actividad del ARN P cumplen la función de contrarrestar la repulsión electrostática entre
el ARN enzima y el ARN sustrato, y así permitir el íntimo contacto requerido para la catálisis. Esto
se ha demostrado en el análisis cinético de la reacción catalizada por el ARN P solo; a medida que
aumenta la concentración de cationes, el Km de la reacción disminuye, consistente con la mayor
afinidad de la enzima por su sustrato a elevada fuerza iónica; pero la reacción es muy lenta

DESCUBRIMIENTO DEL RNA INTERFERENTE

 La publicación en Nature (1998) del artículo de Fire-Mello y colaboradores, supuso un salto
espectacular para entender el fenómeno de silenciamiento de genes. Aunque existían evidencias
previas, como se indicó anteriormente, de que tanto el RNA antisentido como el RNA sentido podían
silenciar genes de forma específica, sin embargo estos experimentos eran inconsistentes y de bajo
rendimiento. Fire-Mello demostraron el efecto fenotípico de RNA inyectando en las gónadas del
gusano C. elegans el gen unc-22 que codifica para la proteína del miofilamento, que es abundante
pero no esencial. Existen varios miles de copias de unc-22 mRNA presentes en el músculo estriado
del gusano y ya se sabía que una disminución en los niveles de este gen producían un aumento en la
curvatura del gusano mientras que la supresión completa del gen resultaba en mayores defectos
estructurales y pérdida de motilidad. Observaron que los cambios fenotípicos en el gusano solamente
se producían cuando se inyectaba el RNA sentido y antisentido en forma de dsRNA, pero no cuando
cada RNA era incorporado en forma de cadena sencilla. Además demostraron que la secuencia del
RNA a inactivar y la contenida en el RNA bicatenario tenían que ser complementarias, lo que
aportaba especificidad en el silenciamiento. Muy pocas moléculas eran necesarias para obtener
silenciamiento. Para explicar el silenciamiento llevaron a cabo experimentos de hibridación in situ
del gen abundante mex-3 RNA inyectado en las gónadas de animales adultos, y observando que
después de añadir RNA bicatenario complementario al gen mex-3 desaparece el mensajero, lo que
les llevó a proponer un efecto a nivel de transcripción o de estabilidad del gen. Finalmente la
inyección de RNA bicatenario unc-22, y gfp-LacZ en la cabeza o cola de animales transgénicos para
la proteína fluorescente GFP, demostró también producir interferencia pronunciada en la progenie y
en todos los tejidos, indicando que el RNA bicatenario fue amplificado o que actuaba catalíticamente.

INTERFERENCIA DEL ARN (RNAI) EN BIOTECNOLOGÍA

RNAi es un fenómeno fundamental y potente en el cual un ARN corto del doble-cabo disuade la
expresión génica específica creando la desintegración en la serie de cadena del ARN de mensajero
determinado del objetivo en el citoplasma.

Permite la creación de características más ventajosas en las instalaciones que se sujetan a la

modificación genética. Las instalaciones genético modificadas RNAi-basadas son más eficientes en
imponer silencio a las expresiones génicas apuntadas bastante que modificando las expresiones
nuevas de la proteína.

Las funciones de la interferencia del ARN en la biotecnología del campo incluyen los parásitos de
manejo y las enfermedades causados por las bacterias, hongos, y los virus, para perfeccionar cosecha,
y generar las instalaciones con los rasgos nuevos.

SIGNIFICADO BIOLÓGICO DEL RNAI Y APLICACIONES

Desde un principio, al RNAi se le han ido asignando funciones biológicas con repercusiones muy
importantes en regulación de la expresión génica, en desarrollo, evolución, así como sus posibles
aplicaciones farmacológicas

1. Efecto antiviral
Las observaciones pioneras en plantas indicaban un efecto protector contra infecciones virales
cuando se producía el fenómeno de PTGS, lo que sugería que el RNAi podría proteger contra
agresiones víricas en otros organismos. Se ha establecido de hecho que RNAi es un mecanismo
de defensa antiviral que funciona en plantas, gusano y mosca, aunque no se ha establecido que
este mecanismo exista en mamíferos. No obstante, los estudios llevados a cabo en el tratamiento
de la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) con RNAi administrado de
forma exógena, indican que formas sintéticas en dúplex apareado como siRNAs (34) o con
estructura de horquilla (haipin, shRNAs) introducidas en las células y dirigidas contra varios de
los mRNAs que codifican por proteínas víricas estructurales (env-gag-pol) y no estructurales
(rev-tat-vif-nef) y contra factores celulares como son los co-receptores CXCR4 y CCR5 para la
entrada del VIH, pueden interferir eficazmente la infección por VIH en distintos cultivos
celulares. Se han llevado a cabo aproximaciones semejantes contra los virus de la hepatitis B y
C, mediante la introducción de siRNAs o shRNAs dirigidos frente a mRNAs que codifican por
proteínas virales. También se están utilizando miRNAs humanos como herramienta contra la
patogénesis del virus de la gripe.
2. CÁNCER Y ENFERMEDADES GENÉTICAS
Existe gran interés en utilizar la tecnología del RNAi en el tratamiento de tumores. La evidencia
indica que muchos miRNAs están altamente expresados en tejidos diferenciados, pero su
expresión está reducida en tumores. Se ha sugerido que si los miRNAs contribuyen al cáncer, la
supresión de los mismos puede servir como terapia antitumoral. Esta aproximación puede
funcionar, ya que estudios en ratón han demostrado inhibición de miRNAs con antagonistas
llamados «antagonomics». También, la posibilidad de poder regular la expresión de genes de
forma específica por RNAi en organismos, abrió las puertas a su posible uso como agente
terapéutico para el control de enfermedades con deficiencia génica conocida. Así pues, se está
aplicando la tecnología de RNAi como terapia de enfermedades neurodegenerativas como
Huntington, Ataxia, Alzheimer, entre otras. Varios estudios han demostrado que la terapia del
RNAi mejora el fenotipo MARIANO ESTEBAN RODRÍGUEZ AN. R. ACAD. NAC. FARM.
116 de enfermedades humanas en modelos animales. Recientemente, utilizando siRNAs
introducidos por vía sistémica en forma de liposomas se ha demostrado que se puede silenciar
(90%) en macacos el gen de la apoliproteína B (APOB) en el hígado durante 48 horas después de
su administración, con la consiguiente reducción en los niveles de colesterol. Hace falta realizar
más experimentación para demostrar carencia en toxicidad del producto y que se obtiene
silenciamiento completo y de larga duración en genes implicados en enfermedades
neurodegenerativas (ejemplo, hungtintina, Sca I, ataxia, B-amiloide, tau y otros).

3. REPRESIÓN ESPECÍFICA DE GENES Y REGULACIÓN DEL DESARROLLO DE

ORGANISMOS
Una de las grandes aplicaciones del RNAi ha sido su utilización para reprimir de forma específica
la funcionalidad de genes celulares y asignar funciones a los mismos, lo que ha supuesto un salto
espectacular en genómica funcional y en biología del desarrollo. Básicamente, el producto es
introducido en una célula en forma de siRNA o shRNA, actuando de vehículo un vector no viral
o viral, y llevando en su secuencia promotores adecuados para su producción intracelular y
silenciamiento del gen específico al activarse el sistema Dicer-RISC. De esta manera se ha
conseguido silenciar multitud de genes en células en cultivo y esencialmente se podrá silenciar
cualquier gen de interés en un organismo