UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA

LA MOLINA
Departamento Académico de Biología

INFORME N°3
“TINCIÓN DIFERENCIAL ÁCIDO-
RESISTENTE”

MESA N°4

INTEGRANTES:
 Jachilla, Esthefany 20170230
 Portugal, Renzo 20170332
 Sifuentes, Ruby 20171120
 Tello,Micaela 20171378

LIMA - PERÚ
2019
I. INTRODUCCIÓN

En el mundo microbiano, las bacterias del género Mycobacterium,Nocardia y

Corynebacterium no pueden ser teñidas por procedimientos usuales como
tinción simple o Gram debido a la composición de su pared. Presenta
grandes cantidades ácidos grasos llamados ácidos micólicos, representan
el 60% de su peso seco, que le permiten la retención de colorantes acuosos
con mayor facilidad al ser decolorados con alcohol ácido (ácido-
resistencia).Este tipo de microorganismo son teñidos mediante un colorante
básico fucsina fenicada (carbolfucsina) en complemento con el calor para
lograr la penetración (Método de Ziehl-Neelsen)o la incorporación de
detergente en colorante (Método de Kinyoun).De acuerdo con Forbes
(2009),”cuando el frontis de tinción para acido-alcohol resistencia se observa
con un aumento de 1000X los microorganismos acido-alcohol resistentes
positivos se tiñen de rojo.De acuerdo con el tipo de tinción de contraste
utilizado,otros microoganismo, las células huésped y los detritos se tiññe de
un color azul a azul verdoso”(p.85).

Algunas bacterias albergan en su interior una espora que es originada por

un proceso llamado esporulación. En palabras de Tortora (2007), “una
endosporas es una estructura especial, resistente y latente que se forma
dentro de una célula y que protege a una bacteria de las condiciones
ambientales adversas” (p.71). Esta es deshidratada y contiene un 15 % de
calcio y ácido dipicolínico. Si se la estudia de afuera hacia dentro se observan
las siguientes capas: exosporium, que es la capa más fina y externa formada
por glicoproteínas; la cutícula, que brinda resistencia a las altas temperaturas,
y seguida de la corteza compuesta por peptidoglicano,que protege al
protoplasto. Existen muchos géneros que las forman; sin embargo, los
principales son Bacillus y Clostridium. Estos se consideran más relevantes
debido a que poseen especies patógenas para el ser humano.

Debido a que no puede ser teñida por colorantes convencionales, la mayoría

de las técnicas de tinción de esporas se basan en la aplicación de calor para
que el colorante penetre la gruesa pared. Una vez que la espora se tiñe, esta
no puede eliminar al colorante. En la actualidad, se cuentan con varias
metodologías de coloración; entre estas se pueden mencionar la técnica de
Dorner, la tinción de Möeller y la metodología de Shaeffer–Fulton o Wirtz-
Conklin.De todas las mencionadas, la última es la más utilizada en los
laboratorios de rutina. En esta, el verde de malaquita entra a las células
vegetativas y, al aplicar el calor, penetra en la endospora y también en las
exosporas. Al lavar con agua, el colorante se elimina de la célula vegetativa.
Esto ocurre porque el tinte verde de malaquita es ligeramente básico, por lo
que se une débilmente a la célula vegetativa, no puede salirse de la espora y
finalmente se contratiñe con safranina. Este fundamento es válido para el
resto de las técnicas, en las que ocurre algo similar.
 II. OBJETIVOS
- Reforzar la práctica de fijación de una muestra dada
-Conocer el fundamento, técnicas y aplicación de tinción en esporas
-Distinguir la presencia de endosporas bacterianas y la estructura
vegetativa de la célula.
- Identificar diferencias y similitudes entre los dos tipos de tinción
realizadas.

III. MARCO TEÓRICO

La tinción de esporas es la metodología usada para colorear las estructuras de

resistencia que forman algunos géneros bacterianos cuando se encuentran en
condiciones desfavorables; estas estructuras corresponden a una forma de
supervivencia. La tinción de ácido resistencia o tinción de Ziehl Neelsen separa
a las bacterias en dos grupos, las que resisten la decoloración por ácido-alcohol
de las que se decoloran. Esta tinción es muy importante porque muchas de las
bacterias ácido-alcohol resistentes son patógenas, como Mycobacterium
tuberculosis o Mycobacterium leprae, con lo que permite distinguirlas fácilmente
(Sanz,N 1976).

Con la técnica de Dorner las esporas se tiñen de color rojo y las células
bacterianas aparecen casi incoloras contra un fondo gris oscuro. Y con la técnica
de Shaeffer–Fulton o Wirtz-Conklin las esporas se presentan de color verde y los
bacilos de color rojo. Tiene el inconveniente de que las endosporas de cultivos
jóvenes no se tiñen bien, dado que se ven extremadamente claras o incoloras.
Para evitar esto se recomienda usar cultivos de 48 horas de incubación. (Yousef,
A & Carlstrom,C 2006)

a. ESPORAS

Desde su descubrimiento por F. COHN en 1873, las esporas bacterianas han

despertado un considerable interés por su extraordinaria resistencia a los
agentes físicos y a los antisépticos usuales. En condiciones de sequedad pueden
sobrevivir durante muchos años, y su resistencia al calor es de una gran
importancia, tanto en Medicina (asepsia) como en la industria. Conservera.
Todas las esporas resisten una prolongada exposición a 60-8 M, temperaturas
que matan en muy poco tiempo las células vegetativas de los microorganismos
mesófilos. Las de algunas especies sobreviven incluso después de permanecer
durante veinte minutos o más en agua hirviendo. No obstante, todas las esporas
bacterianas se destruyen por calentamiento durante diez minutos a 120°, en
ambiente húmedo (autoclave)

La mayoría de las bacterias esporuladas son de forma bacilar y se incluyen

según sean aerobias o anaerobias, en el género Bacillus o Clostridium. En cada
uno de estos se agrupan numerosas especies que, a pesar de tener en común
el ser esporágenas, presentan caracteres morfológicos y fisiológicos muy
diversos. Esta diversidad es particularmente acentuada en las bacterias
esporuladas anaerobias, hasta el punto de que Prévot (1961) convirtió el género
Clostridium en dos órdenes, plectridiales y clostridiales, según que la posición de
la espora sea terminal o subterminal, y dividió cada uno de estos grupos en
géneros atendiendo a la movilidad, a la tinción de Gram y a otros caracteres
(Sanz,N 1976).

Las bacterias formadoras de esporas de interés en los alimentos comprenden

tres géneros: Bacillus, Alicyclobacillus y Clostridium. Mientras Clostridium sp.
son bacterias anaerobias obligadas o anaeróbicas aerotolerentes, Bacillus y
Alicyclobacillus son aerobios u ocasionalmente anaerobios facultativos.
Alicyclobacillus spp. tienen una gran similitud con Bacillus spp. pero a los
primeros se les reconoce por su acidofilia. Estos géneros son bacilos Gram
positivos y producen esporas. Las esporas bacterianas latentes son típicamente
refráctiles (brillantes) cuando se observan al microscopio de contraste de fases.
Clostridium sp. son catalasa negativos mientras que Bacillus sp. son catalasa
positivos. Bacillus y Clostridium spp, se encuentran habitualmente en el suelo y,
por ello, se consideran contaminantes naturales de la mayoría de los alimentos,
particularmente los de origen vegetal. Algunos Clostridium sp. se encuentran en
el tracto intestinal de los animales y son contaminantes de los alimentos de
origen animal. Las esporas bacterianas, debido a su amplia difusión en la
naturaleza y su tolerancia a la sequedad o a otros agentes letales, se encuentran
habitualmente en las especias, granos de cereales, frutos secos, harina,
almidones y leche en polvo. Las bacterias formadoras de esporas se comportan
frecuentemente como agentes alterantes de los alimentos (tabla 5.1). Bacillus
sp. ocasiona la alteración rápida de leche pasteurizada, el ablandamiento y
glutinosidad del interior de la pieza de pan (viscosidad del pan «ropy bread») y
la alteración «flat sour» (producción de ácido, pero no de gas) de los alimentos
enlatados poco ácidos (pH > 4,6) procesados térmicamente. Alicyclobacillus sp.
adquieren importancia particularmente en los zumos de frutas pasteurizados y,
ocasionalmente, originan la alteración de estos productos (Sanz,N 1976)

La activación de las esporas, o pérdida del estado latente, se logra habitualmente

mediante el calentamiento de las esporas en suspensiones acuosas. La
temperatura y la duración óptima del calentamiento necesarios para la activación
varían ampliamente entre las diferentes especies e incluso entre diferentes
preparaciones de esporas de una misma especie. Comúnmente, los tratamientos
térmicos utilizados se sitúan en el intervalo 75-80°C durante 15-30 minutos
(Yousef, A & Carlstrom,C 2006).

b. ENDÓSPORAS

Sólo un pequeño grupo de Eubacterias es capaz de formar endósporas. La

enorme importancia de las endósporas se basa en su resistencia al calor.
Mientras que calentando a 80 CC durante 10 minutos (pasteurización) todas las
demás bacterias y también las células vegetativas de los formadores de esporas
mueren, las endósporas termorresistentes pueden soportar un calentamiento
considerablemente superior; algunas esporas aguantan incluso la cocción
durante horas. La laboriosa y costosa técnica de esterilización tiene como fin la
eliminación de las endósporas. La termo resistencia de las esporas ofrece por
otra parte la posibilidad singular de un enriquecimiento por selección de los
formadores de esporas: Se calienta durante 10 minutos a 80 o 100 °C tierra u
otro material, con lo que mueren todas las células vegetativas; sólo quedan vivas
las esporas termorresistentes, que germinarán tras sembrarlas en un medio de
cultivo adecuado (Schlegel,H 1979).

Entre las Eubacterias bacilares sólo forman endósporas los géneros Bacillus,
Clostridium y Desulfotomaculum, que se agrupan en la familia de las Baciláceas.
Al observarlas al microscopio, llaman la atención por su elevado índice de
refracción; este índice es el de una proteína deshidratada e indica que en la
espora se halla concentrada, en un espacio muy reducido, una gran cantidad de
material rico en proteína. La espora contiene casi toda la materia seca de la
célula madre, si bien dispone tan solo de una décima parte de su volumen. En
algunos casos dudosos puede decidirse si se trata de una verdadera endóspora
mediante una tinción para esporas. Si se calienta hasta ebullición una extensión
de bacterias fijada por calor y bañada en carbolfucsina, las esporas captan el
colorante, que no pierden ni incluso al añadir etanol o ácido acético 1 N, mientras
que el resto del espacio celular se decolora. (Schlegel,H 1979).

c. FORMACIÓN DE ESPORAS

Las esporas se forman en el interior de la célula bacteriana. La formación de las

esporas se inicia con una concentración del material proteico; aumenta el índice
de refracción de la zona de formación de esporas; se producen numerosas
transformaciones como consecuencia del empleo de las sustancias de reserva
disponibles (ácido poli-P-hidroxibutirico en los aerobios y polisacáridos en los
anaerobios). Durante las cinco horas de la formación de esporas se destruye el
75 % de las proteínas de la célula madre. Se forma ácido dipicolínico (ácido
2,6"piridindicarboxílico), Puede llegar a alcanzar el 15 % del peso seco de las
esporas y no se presenta en las células vegetativas. El ácido dipicolínico parece
presentarse en forma de sal cálcica en la envuelta de la espora (fuera de la pared
celular) y sólo se presenta en las esporas termorresistentes.La formación de
esporas es uno de los procesos más complicados de la diferenciación de la
célula bacteriana. Se inicia con una división celular especial y desigual. Mediante
estrangulación de la membrana citoplasmática una parte del protoplasto se
separa de la célula madre. Este protoplasto de la espora contiene una parte del
material nuclear, es decir, un genoma. En este caso no se produce, como en el
caso de una división celular normal, la formación de una pared celular entre los
dos protoplastos, el protoplasto de la espora será superada y rodeada por la
membrana citoplasmática de la célula madre. Esto tiene como consecuencia que
el protoplasto de la espora se halla rodeado por dos membranas citoplasmáticas:
una interior y una exterior; la última presenta su capa externa dirigida hacia el
interior. En este momento la membrana interior segrega un material del tipo del
de la pared celular; de este modo surge internamente la pared celular del
protoplasto de la espora. La envoltura externa de la espora es formada por el
protoplasto de la célula madre. El espacio comprendido entre ambas paredes, la
corteza (córtex), está ocupado por un polímero glucopeptídico de estructura
reticular. La envoltura externa de la espero puede estar formada por varias
capas. En algunas bacterias la célula madre forma aun otra membrana
envolvente, el exosporio; al madurar la espora queda como un saco suelto en
forma de balón que dichas capas constituyen aproximadamente el 50% del
volumen o del peso seco de la espora madura (Schlegel,H 1979).

Esquema de la formación de esporas y de la constitucion de las esporas maduras: Schlegel,H

1979

d. GERMINACIÓN DE LAS ESPORAS

Cuando se hallan en medios de cultivo adecuados la mayoría de esporas

germinan. Puede incrementarse la predisposición a germinar de las esporas
(«porcentaje germinativo») mediante el correspondiente almacenamiento previo,
y mediante calentamiento. En el caso de Bacillus subtilis se considera que el
tratamiento óptimo para la estimulación de la germinación consiste en un período
de reposo de siete días y en calentar durante cinco minutos en agua a 60 'C. La
germinación de las esporas supone una captación de agua y un hinchamiento.
Se producen profundos cambios fisiológicos: la respiración y las actividades
enzimáticas incrementan rápida-mente; se segregan aminoácidos, ácido
dipolínico y péptidos, la pérdida en peso seco que sufren las esporas durante la
germinación alcanza el 25-30%. Las esporas pierden durante la germinación su
resistencia al calor. El tubo germinativo que sale de la espora parece hallarse
rodeado por una pared celular muy delgada e inestable, de modo que en los
protoplastos puede incluso penetrar DNA. La salida del tubo germinativo puede
ser polar o lateral; la envuelta de la espora puede pues romperse o partirse
(Schlegel,H 1979).

e. VIDA DE LAS ESPORAS

En forma de esporas las bacterias pueden sobrevivir largo tiempo en estado de

vida latente. En la tierra que había quedado adherir da a las plantas del herbario
de Kew Gardens (Inglaterra) y que había permanecido en estado seco durante
200-300 años, sólo pudo comprobarse la existencia de unas pocas esporas aún
vivas de Bacillus subtilis y B. licheniformis. En estado seco la capacidad
germinativa de muchas bacterias se conserva durante años. En las colecciones
de conservación de las bacterias, las células vegetativas se secan por lo general
en estado congelado (liofilización) y se conservan a temperatura ambiental o a
temperatura baja en el vacío. Como ya calculaba BECQUEREL, los
microorganismos pueden conservarse durante millones de años a temperaturas
próximas al cero absoluto; experimentos de corta duración con nitrógeno líquido
y su extrapolación permiten ver que este pronóstico se cumple. Frente a la
liofilización las bacterias susceptibles pueden conservarse durante años en
suspensión a la temperatura del nitrógeno líquido. (Schlegel,H 1979).

Cambios morfológicos y fisiológicos que se producen durante la formación de esporas en las

bacterias formadoras de esporas anaerobias: (Schlegel,H 1979).

f. PIGMENTOS DE LAS BACTERIAS (Y DE LOS HONGOS)

Numerosas colonias bacterianas y fúngicas sobresalen por una marcada

coloración, ya sea debido a la liberación al medio de un pigmento o a
pigmentación de la célula. La capacidad de elaborar pigmentos se halla fijada
genéticamente y presenta por tanto un carácter distintivo. Las formas coloreadas
pueden reconocerse e identificarse con facilidad. Los pigmentos pueden consistir
en derivados de distintas clases de sustancias: carotenoides, pigmentos
fenacínicos, pigmentos pirrólicos, azaquinonas, antocianos, etc. En cápsulas de
Petri cubiertas con agar nutritivo complejo y expuestas durante un cierto tiempo
a una atmósfera polvorienta, las llamadas «cápsulas atmosféricas», aparecen a
menudo colonias coloreadas. Predominan las tonalidades amarillas, naranjas y
rojas relacionadas con los carotenoides. Las bacterias son predominantemente
miembros de los géneros Sarcina, Micrococcus, Myxobacterium,
Corynebacterium y Nocardia y la levadura Rhodotorula. La razón de que entre
las formas que germinan en este caso aparezcan con alta frecuencia formas
pigmentadas se halla en que los pigmentos tienen una actividad protectora frente
a los rayos de la luz visible y del ultravioleta próximo. Por esta razón en los
materiales expuestos a la luz (polvo, paja) las bacterias incoloras se mueren más
de prisa que las pigmentadas. También puede probarse la actividad protectora
frente a los daños ligados al fotodinamismo en una bacteria halófila, anaranjada,
que contiene carotenoides y su mutante incolora. Mientras que ambos tipos
crecían igualmente bien con luz débil, al someterlos a luz solar muy intensa el
crecimiento del mutante incoloro se vio fuertemente inhibido, si bien el tipo
salvaje pigmentado no se veía afectado. Sólo se produce la muerte por acción
de la luz visible en presencia del oxígeno atmosférico y se halla relacionada con
una fotooxidación: Por eso los pigmentos celulares normales (flavinas y
citocromos) actúan evidentemente como catalizadores. Los carotenoides se
hallan localizados en la membrana citoplasmática y protegen de la fotooxidación
a las regiones susceptibles de la célula (Schlegel,H 1979).

IV. MATERIALES Y PROCEDIMIENTO

 a. MATERIALES
M ATERIALES
TÉCNICA DE DÖRNER
Fucsina TÉCNICA DE SCHAEFFER
Alcohol Ácido Y FULTON
Cultivo de Bacillus sp. Cultivo de Bacillus sp.
Aceite de inmersión (Aceite de cedro) Aceite de inmersión (Aceite de cedro)
Asa de kölle Asa de kölle
Láminas porta objeto Láminas porta objeto
Baño de agua a 100° C Mechero
Soluciones colorantes: Soluciones colorantes:
- Fucsina - Fucsina
- Nigrosina - Verde malaquita
Tubo de ensayo Decolorante: Alcohol ácido
Agua destilada estéril Pinzas
ALGUNOS MATERIALES:

Agar Nutritivo (Bacillus sp.) Verde Malaquita

b. PRODECIMIENTO
 TÉCNICA DE DÖRNER

Preparar una suspensión concentrada del organismo en gotas de

agua.
Añadir igual cantidad de volumen de fucsina y colocarlo en baño maría.

Pasados 30 minutos transferir una gota de la suspensión de las células

hervidas a una lámina porta objetos y agregar una gota de nigrosina.

Extender la mezcla a una delgada película con la ayuda de otra lámina.

Secar la lámina al aire y examinar al microscopio.

TÉCNICA DE SCHAEFFER Y FULTON

Realizar una correcta fijación del microorganismo proporcionado.

Cubrir la lámina de fucsina y con una pinza calentarla por 3 minutos,

evitando que el colorante se seque o entre en ebullición.

Lavar con alcohol ácido hasta resultar incoloro y enjuagar con agua.

Suministrar verde malaquita por dos minutos y enjuagar con agua.

Secar la lámina al aire, añadir una gota de aceite de cedro y examinar

al microscopio.

1.

V. RESULTADOS Y OBSERVACIÓN
 Género: Bacillus sp
Grado de Aumento: 100X
Forma: Abastonada, alargada
Agrupación: Cadena
Tinción Gram:
Técnica de Dorner
Colorante: Fucsina
Agente decolorante: Nigrosina
Colorante: Naranja de Metilo

Género: Bacillus sp
Grado de Aumento: 100X
Forma: Abastonada, alargada
Agrupación: Cadena
Tinción Diferencial:
Tecnica de Schaeffer y Fulton
Colorante: Fucsina
Contrastante: Verde malaquita
Decolorante: Alcohol acido

VI. DISCUSIÓN
Según Tortora, Funke y Case (1993) en la técnica de Shaeffer-Fulton se debe
adicionar a la muestra fijada el colorante primario (verde maliquita) por 5 minutos,
seguidamente se debe lavar con agua durante 30 segundos, finalmente se le
agrega el colorante contrastante (safranina) y es así como se llega a diferenciar
las esporas (verdes) de parte vegetativa (roja o rosada). Sin embargo, en la
práctica nosotros calentamos la muestra al mechero por 3 minutos y además no
solo lavamos la placa con agua destilada, sino también utilizamos al alcohol
ácido como decolorante.

Las bacterias del género Bacillus sp y Clostridium sp producen una sola espora
por célula vegetativa, no obstante existen especies de bacterianas que forman
más de una espora por célula. Esto concuerda con la práctica realizada, pues
observamos en el microscopio una espora por cada célula vegetativa en el caso
del Bacillus sp (Pelczar, 1966).

La localización de las endosporas dentro de la célula y su tamaño, no es igual

en todas las especies de las bacterias. Ciertas endosporas son centrales, otras
terminales y otras subterminales (Pelczar, 1966). Experimentalmente
corroboramos que la localización de las endosporas del Bacillus sp son
subterminales.

Las endosporas al tener un carácter ácido-resistente no perderán su color por la

acción de agentes decolorantes enérgicos como la solución acuosa o alcohólica
de ácido clorhídrico (Walter & Macbee, 1965). Es por ello, que en la práctica
nosotros utilizamos al alcohol ácido como decolorante.

La penetración de la pared celular o de la envoltura de la espora se logra

calentando la célula bacteriana en presencia del colorante, es por ello que en la
práctica utilizamos al mechero de alcohol (Walter, McBee & Temple, 1973)

Cuando una célula esta en condiciones extremas forma la endospora (Portoles,

1959). Por ello, en la práctica nosotros utilizamos un cultivo viejo, pues al ser un
cultivo antiguo ya no posee los requerimientos nutricionales complejos como los
aminoácidos y vitaminas.

VII. CONCLUSIONES

 Antes de realizar las tinciones respectivas se necesita fijar la muestra.

Siempre se tiene en cuenta las medidas para evitar la contaminación y
procurar la esterilización para posteriormente observarla en el
microscopio compuesto a un aumento de 1000x con el lente sumergido.

 El fundamento de las técnicas aplicadas para la tinción de bacterias ácido-

resistente se centra en la composición lipídica de la pared por lo que se
 necesita emplear métodos de tinción especiales. En estos se aplican
variables como el calor y el uso de colorante básicos.

 En la tinción de las células bacterianas se pueden distinguir dos partes

muy diferenciadas: la endospora y la estructura vegetativa. La primera
puede identificarse como una estructura circular u ovoide que se
encuentra en el interior y centrada, mientras que la segunda es la que
rodea a la endospora.

 Las dos tinciones aplicadas, Schaeffer y Fulton y la de Dorner concuerdan

en que la espora se tiñe de rojo debido a que el tinte básico ha penetrado
su pared. Sin embargo, la primera mencionada tiene una ventaja sobre la
segunda debido al factor tiempo, ya que esta la muestra debe hervirse
durante un tiempo mayor de 20 minutos para poder permeabilizar la
pared. En cambio,Schaeffer y Fulton, trabaja 3 minutos en el mechero y
el resto es una secuencia de aplicación de colorantes. Otra diferencia es
que en la de Dorner se tiñe la zona vegetativa de color verde; mientras
que en el otro método, esta parte esta incolora y el fondo es oscuro por la
nigrosina.

VIII. CUESTIONARIO

1. ¿Cuál de los métodos utilizados le permitió observar mejor las

endosporas bacterianas? ¿A qué atribuye la diferencia?
Si bien aplicar ambas técnicas nos permitió reconocer las endosporas
bacterianas, en la técnica de Dörner se observó con mayor precisión la ubicación
de las endosporas, ya que la nigrosina extrae el colorante de todas las
estructuras celulares excepto de las endosporas y por consiguiente, se verán las
endosporas rojas, la parte vegetativa incolora y el fondo oscuro por la nigrosina.

2. ¿Qué efecto produciría el reemplazar el alcohol ácido por otro

decolorante como el alcohol-cetona?
La endospora tiene carácter ácido resistente, es decir toda la parte vegetativa se
vuelve incolora a excepción de la endospora esta característica es la que nos
permite distinguir la endospora de la parte vegetativa, sin embargo,
reemplazaríamos el alcohol ácido por el alcohol-cetona, esta decoloría a las
endosporas en el caso de las bacterias gram positivas y en el caso de las gram
negativas decoloraria toda la bacteria por lo que sería necesario otro colorante
contrastante, no obstante ya no se podría distinguir las endosporas.

3. ¿Qué otros géneros de bacterias pueden formar endosporas?

GÉNERO CARACTERÍSTICA

Desulfotomaculum Bacilos. Reductores de sulfato.

 Sporolactobacillus Microaerofílicos, catalasa negativa, productores de
ácido láctico.

Alicyclobacillus Acidófilos (pH=3).

Fotótrofos anoxigénicos que producen una única forma

Heliobacterium estructural de bacterioclorofila. Alcalófilo (pH=9)

Sporosarcina Forma de cocos. Son microorganismos aerobios estrictos,

esféricos u ovalados.

Fuente: Madigan, Martinko y Parker, 2004.

4. Revise otras técnicas de tinción de esporas y compáralas con las usadas

en este ejercicio.
Técnica de Moeller: Esta técnica se se basa en la tinción de la espora mediante
la utilización del ácido crómico y la fucsina fenicada en caliente para sensibilizar
y colorear al esporo. La decoloración se realiza con ácido-alcohol y utiliza como
colorante contrastante al azul de metileno. Finalmente se llegan a observar las
endosporas rojas y el resto de la bacteria azul. Es similar a la técnica de
Schaeffer y Fulton vista en el laboratorio, con la diferencia que no se emplea el
colorante verde malaquita.

Técnica de Wirtz: En esta técnica las esporas se observan de color verde,

mientras que la parte vegetativa de color rojo. En esta técnica se utiliza el mismo
colorante “verde de malaquita” que en la técnica de Schaeffer y Fulton a
diferencia que en este caso no se elimina este colorante al final.

IX. BIBLIOGRAFÍA

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 Tortora, G., Funke, B., & Case, C. (1993). Introducción a la
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