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    Informe N7

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    Tania Marisol
    La práctica describió los procedimientos de fijación y tinción de Gram para identificar bacterias gram positivas y negativas. Los estudiantes realizaron tinción en muestras de yogur y un medio de cultivo, observando diferentes coloraciones bajo el microscopio que indicaron la presencia de bacterias gram positivas como estreptococos en el yogur y cocos en el medio de cultivo. El reporte incluyó tablas con los resultados y discutió posibles errores en los procedimientos.

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    Informe N7

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    La práctica describió los procedimientos de fijación y tinción de Gram para identificar bacterias gram positivas y negativas. Los estudiantes realizaron tinción en muestras de yogur y un medio de cultivo, observando diferentes coloraciones bajo el microscopio que indicaron la presencia de bacterias gram positivas como estreptococos en el yogur y cocos en el medio de cultivo. El reporte incluyó tablas con los resultados y discutió posibles errores en los procedimientos.

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    La práctica describió los procedimientos de fijación y tinción de Gram para identificar bacterias gram positivas y negativas. Los estudiantes realizaron tinción en muestras de yogur y un medio de cultivo, observando diferentes coloraciones bajo el microscopio que indicaron la presencia de bacterias gram positivas como estreptococos en el yogur y cocos en el medio de cultivo. El reporte incluyó tablas con los resultados y discutió posibles errores en los procedimientos.

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    La práctica describió los procedimientos de fijación y tinción de Gram para identificar bacterias gram positivas y negativas. Los estudiantes realizaron tinción en muestras de yogur y un medio de cultivo, observando diferentes coloraciones bajo el microscopio que indicaron la presencia de bacterias gram positivas como estreptococos en el yogur y cocos en el medio de cultivo. El reporte incluyó tablas con los resultados y discutió posibles errores en los procedimientos.

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    UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

    FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA


    CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA

    LABORATORIO DE BIOQUÍMICA

    PRÁCTICA 7:

    TEMA: TINCIÓN GRAM

    Alumnos:
     Castro Tania
     Chávez Alexandra
     Díaz Denisse
     Luna Mishell

    Profesor: Dra. Magdalena Díaz


    Ayudante de cátedra: Emerson Vizuete

    Junio de 2018
    RESUMEN
    Identificación de bacterias gram positivas y gram negativas. Para lo cual la práctica se
    basó en dos técnicas, la primera fue la fijación, en la que se realizó una extensión de la
    muestra sobre el portaobjetos con ayuda de agua destilada y la zona oxidante de la
    llama, finalmente, se procedió a realizar la segunda técnica, tinción, en la que a través
    de colorantes y mordientes se mejoró el contraste para poder visualizar las bacterias a
    través del microscopio. Se observaron distintas coloraciones para la visualización de
    bacterias y al exponer el portaobjetos al microscopio se examinaron diferentes tipos de
    estructuras, concluyendo que si se mostraba una coloración violeta se identificaban
    bacterias gram positivas y si tenían una coloración roja se trataba de bacterias gram
    negativas.
    PALABRAS CLAVE
    BACTERIAS_GRAM_POSITIVAS/BACTERIAS_GRAM_NEGATIVAS/
    FIJACIÓN/TINCIÓN/COLORANTES/MORDIENTE
    1. OBSERVACIONES
    Tabla 1-1. Datos de tinción gram

    Procedimient Muestra Observación


    o
    Después de realizar la fijación y colocar el azul de metileno se
    observó una coloración azul clara con los lentes de 40x y 100x
    yogurt los cuales físicamente se puede denotar como estreptococos
    termófilos gram positivo debido a que su forma es racimal y su
    coloración está siendo tomada del colorante utilizado.
    Tinción
    En el medio de cultivo después de realizar la fijación y la tinción
    con safranina observamos una coloración violeta por lo que
    Medio de
    deducimos que esta es gram positiva, y con los lentes 40x y 100x
    cultivo
    se pudo observar los cocos presentes en el medio de cultivo
    evaluado.

    FUENTE: Centro de biología. Universidad Central del Ecuador. FIQ. 2018.

    2. DISCUSIÓN
    El método cualitativo empleado en la práctica fue válido por lo que se logró conocer
    las técnicas para el reconocimiento de bacterias y a su vez reconocer si son gram
    positivas o negativas. Sin embargo, existieron errores que afectaron el reconocimiento
    de las bacterias provenientes del cultivo. Se verificaron errores aleatorios al momento
    de preparar las placas, entre ellos el que más se destacó fue que al fijar las bacterias a
    la placa el tiempo de exposición en la llama fue prolongado o a su vez estuvo
    demasiado cerca de ésta, siendo esta la posible causa de que las bacterias se quemaran
    y consecuentemente no se lograra observar en el microscopio. Otro error cometido se
    dio al momento de lavar la placa que contenía las bacterias provenientes del yogurt, ya
    que no se esparció el agua por las paredes de la placa, sino que cayó directamente en
    la bacteria, desplazándola de la placa y siendo imposible su observación en el
    microscopio. Por lo que se recomienda fijar las placas a una distancia considerable
    respecto a la llama para evitar quemar las bacterias, además para lavar las placas se
    aconseja extender el agua por las paredes para no eliminar las bacterias de la misma y
    marcar por la parte de atrás de la placa con un marcador la zona donde se aloja a la
    bacteria para así sea más fácil su observación en el microscopio.

    3. CONCLUSIONES

    3.1. La identificación de bacterias ya sea gram positivas o gram negativas depende


    de la coloración que estos presentan después del procedimiento realizado, dando como
    resultado una tonalidad violeta para las bacterias gram positivas y una tonalidad
    rosada para las bacterias gram negativas.

    3.2. Según la tabla 4.1-1 en la experimentación con el medio de cultivo se concluyó


    que se trataba de cocos gram positivos debido a la forma esférica que se logró
    observar con el lente de 100x y la coloración violeta que presentaba.

    3.3. Según la tabla 4.1-1 en la muestra de yogur hubo presencia de bacterias gram
    positivas debido a que su composición se encuentran los estreptococos que poseen una
    capa gruesa de peptidoglicano que es el encargado de absorber el color del reactivo.

    4. CUESTIONARIO

    4.1. ¿Qué sustancias usamos en la tinción de Gram?

    Cristal Violeta
    Colorante primario o básico, que se une a la pared celular bacteriana. (color azul o
    violeta)
    Lugol
    Solución de yodo, utilizado como mordiente, el cual facilita la adhesión del cristal
    violeta a la pared celular.
    Alcohol acetona
    Decolorante
    Safranina o fucsina de gram
    Colorante secundario, que imparte una coloración de contraste o contracolor (color
    rojo o rosado).

    4.2. ¿Por qué las bacterias Gram negativas no se tiñen de color morado?

    Las bacterias Gram-negativas presentan dos membranas lipídicas entre las que se
    localiza una fina pared celular de peptidoglicano, al ser la pared fina, no retiene el
    colorante durante la tinción de Gram.

    4.3. ¿Qué tipos de bacterias según su morfología hay?

    Cocos
    Bacterias en forma esférica
    Bacilos
    Bacterias en forma de bastón
    Espirilos y espiroquetas
    Bacterias en forma de espiral
    Vibriones
    Bacterias en forma de coma

    4.4. Cuál es la diferencia de tinción simple y tinción compuesta


    Tinción simple
    Se emplea un solo colorante, se divide en dos clases generales:

     Colorantes básicos

    Tienen cargas positivas (cristal violeta, fucsina básica, safranina, verde malaquita)

     Colorantes ácidos

    Se emplean menos frecuentemente, tienen cargas negativas (eosina, fucsina ácida)


    Tinción compuesta
    Se emplea más de dos colorantes, divide a las bacterias en grupos diferentes según sus
    propiedades de tinción:

     Tinción de gram

    Es la tinción más empleada, divide a las bacterias en grupos diferentes según


    diferencias en la pared celular

     Tinción acido alcohol resistente

    Se tiñen calentando una mezcla de fucsina básica y fenol, tras la tinción no se


    decoloran fácilmente debido al elevado contenido en lípidos de las paredes de
    estas células.
    4.5. ¿Cuál es el propósito de la fijación?
    El propósito es hacer que las bacterias queden inactivas y adheridas al vidrio alterando
    lo menos posible la morfología bacteriana y las posibles agrupaciones de células que
    pudiera haber.

    5. ANEXOS
    5.1. Reporte de bacterias observadas en tinción gram.
    5. ANEXOS
    5.1. Reporte de bacterias observadas en tinción Gram

    Figura 7.1-1: bacteria del yogurt (40x) Figura 7.1-2: bacteria del yogurt (100x)

    Fuente: Laboratorio de Bioquímica UCE Fuente: Laboratorio de Bioquímica UCE

    Figura 7.1-3: bacteria caja medio de cultivo (40x) Figura 7.1-4: bacteria caja medio de cultivo (100x)

    Fuente: Laboratorio de Bioquímica UCE Fuente: Laboratorio de Bioquímica UCE

    Nombres Fecha Universidad Central del


    Dibuja Ecuador
    Grupo 07/06/2018 Facultad de Ingeniería
    : Química
    Revisa Emerson Escuela de Ingeniería
    14/06/2018 Química
    : Vizuete

    Escala: Lámina
    TEMA: tinción Gram
    1

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