Observación de Bacterias

Observación de Bacterias
Introducción
Son técnicas que permiten observar microorganismos en función de la capacidad de los mismos para retener o no
determinadas sustancias colorantes, lo que depende de la carga de la célula y del colorante.
Los colorantes pueden ser de distintos tipos:
Catiónicos. Son sustancias que tienen carga positiva. Penetran en el interior de las células y las tiñen. Ejemplos: azul
de metileno, cristal violeta, safranina.
Aniónicos. Con carga negativa. No penetran en el interior celular, de modo que no tiñen las células, sino el entorno.
En este caso se habla de tinción negativa. Ejemplos: eosina,nigrosina.
Liposolubles. Se mezclan con los lípidos celulares y los tiñen. Ejemplo: negro sudán.
Las tinciones pueden ser:
Simples. Utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de que las células tienen una composición química
diferente a la de su entorno, de modo que ambos se comportan de forma diferente frente a un colorante. El
colorante tiñe las células (azul de metileno, safranina) o no (nigrosina).
Diferenciales. Se basan en el hecho de que distintos tipos de células tienen distinta composición química, y por lo
tanto reaccionan de forma diferente frente a una tinción, lo que permite clasificar los microorganismos en diferentes
grupos, según su capacidad de tinción. En este apartado están dos tinciones de importancia taxonómica y médica: la
tinción de Gram y la de ácido-alcohol resistencia (de Ziehl-Neelsen). Estas tinciones utilizan más de un colorante.
Selectivas. Se basan en el hecho de que distintas estructuras celulares tienen distinta composición química, de modo
que se tiñen selectivamente con ciertos colorantes. Ej; tinción de esporas, de flagelos, de paredes celulares, de
corpúsculos metacromáticos. Pueden utilizarse uno o más colorantes.
a) Azul de metileno (Tinción positiva). Permite teñir el interior celular. Tiñe microorganismos procarióticos (vivos o
muertos). Los eucarióticos sólo se tiñen si están muertos. Algunas estructuras, como los corpúsculos
metacromáticos, se tiñen más intensamente con este colorante que el resto de la célula.
b) Nigrosina (Tinción negativa). Se trata de un colorante aniónico, que no penetra en el
interior celular. Proporciona una visión de la forma y el tamaño celulares al observarse los
microorganismos brillantes sobre un fondo oscuro.
Objetivos
Realizar una tinción simple de bacterias procedentes de distintas muestras naturales.
Realizar dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qué casos se recomienda una u otra.
Observar la morfología bacteriana y aprender a distinguir los distintos tipos de agrupaciones que existen.
Practicar con el microscopio al máximo aumento y con el correcto empleo del aceite de inmersión.
MATERIAL
Mechero Bunsen o de alcohol
Asa de siembra o aguja ebmangada
Pinzas
Portaobjetos
Muestras bacterians de origen natural: yogurt, vinagre, sarro dental, suelo,etc.
Colorantes para tinción:
a) Solución de cristal violeta al 1%
b) Solución de safranina al 0.5%
c) Azul de metileno al 1%
Microscopio y aceite de inmersión
BACTERIAS DEL YOGURT

El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural de la leche. A escala industrial se realiza la
fermentación añadiendo a la leche dosis del 3-4% de una asociación de dos cepas bacterianas: el Streptococcus
termophilus, poco productor de ácido, pero muy aromático, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta
preparación se podrán, por tanto, observar dos morfologías bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de
agrupación (estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Además, el tamaño del lactobacilo (unos 30µm de
longitud) facilita la observación aunque no se tenga mucha práctica con el enfoque del microscopio.
Procedimiento
Extension: Realizar el frotis disolviendo una mínima porción de yogur en una pequeña
gota de agua.
Fijación Fijar con metanol o Xilol para eliminar parte de la grasa.
Teñir Apoyar el portaobjetos sobre el soporte de tinciones y añadir unas gotas de azul
de metileno o con un colorante cualquiera de los arriba indicados durante 4-5
minutos.
Lavar con agua destilada
Secar. pasar el portaobjetos varias veces por encima de la llama del mechero de
alcohol, sin permitir que llegue a hervir, hasta que se seque.
añadir una gota de glicerina y colocar el cubreobjetos
Observar primero con el objetivo 40×; luego se añade aceite de inmersión y se observa con el objetivo 100×
Contestar las siguientes preguntas:
1) El yogur es un alimento más fácilmente digerible que la leche, ¿por qué?
R/. Es debido a que los cultivos de bacterias que contiene el yogur rompen las cadenas de lactosa y la hacen mas
facil de digerir. el proceso de hacer yogur tambien modifica las proteínas de la leche haciendolas mas digerible.
2) En casos de intolerancia a la lactosa, ¿qué alimento será más fácilmente tolerado, la leche o el yogur? ¿Por qué?
R/. El yogur, porque es un derivado de la leche y se elabora mediante la fermentación bacteriana de leche que
transforma a los azucares en ácidos, así la lactosa se convierte en ácido láctico. El menor contenido de lactosa del
yogur con respecto a la leche, hace que sea mejor tolerado por quienes no consumen leche habitualmente y
ademas, permite comenzar a tolerar la lactosa.
3) ¿Qué papel desempeña cada una de estas bacterias en la formación del yogur a partir de la leche?
R/. Tanto Lactobacillus bulgaris como Streptococcus thermophilus realizan la fermentación del ácido lactico.
Transforman los azucares presentes en la leche (lactosa formada por glucosa y galactosa) en ácido lactico. se trata de
un proceso anaerobico que confiere acidez al yogur.
4) ¿Qué otros procesos conoces en que se empleen bacterias para la elaboración de algún producto alimenticio?
Proceso Organismo Papel en proceso molécula Producto
original final
Fabricación de la Saccharomyces Fermentación alcohólica Glucosa i/o Etanol

cerveza cerevisidae(levadura) y carbonatación fructosa +CO2
F. del pan S. cerevisidae Fermentación y Azucar Co2
carbonatación
F. del vinagre Bacterias del ácido acético Oxidación aerobios Alcohol Acido
estrictos (etanol) acético
BACTERIAS DEL VINAGRE

El vinagre es una solución acuosa rica en ácido acético resultante de la fermentación espontánea del vino o de
bebidas alcohólicas de baja graduación. La acetificación del vino es producida por bacterias aeróbicas del ácido
acético, principalmente Acetobacter aceti, aunque también Gluconobacter. Se trata de bacilos rectos con flagelos
polares.
Tomar con una aguja enmangada una pequeña porción de madre de vinagre natural o de la telilla que se forma
sobre la superficie de los vinos agriado.
Extender la muestra en el portaobjetos con una gota de agua y hacer el frotis.
Dejar secar y fijar con calor.
Teñir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar.
BACTERIAS DEL SARRO DENTAL
El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado sobre el esmalte de los dientes. Está constituido
principalmente por restos proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus productos metabólicos. La flora
bacteriana de la cavidad bucal es muy variable dependiendo de las condiciones que se den en el momento de hacer
la preparación, pero suelen abundar bacterias saprófitas,
pudiéndose observar gran variedad de morfologías:
espiroquetas, cocobacilos, diplococos y bacilos.
Con una aguja enmangada tomar una pequeña porción de
sarro dental y disolverla en una gota de agua sobre el
portaobjetos.
Dejar secar y fijar con calor.
Teñir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar.
BACTERIAS DEL SUELO

La variedad de bacterias que pueden aparecer en una
muestra de suelo es prácticamente infinita, muchas de ellas no cultivables en los laboratorios y algunas, incluso,
desconocidas para los microbiólogos. Para recoger la muestra y hacer el frotis basta con dejar parcialmente
enterrado en vertical un portaobjetos en la tierra de una maceta o de un jardín. Después de varios días, las bacterias
se habrán adherido al vidrio y sólo habrá que fijarlas por calor y teñirlas con un colorante cualquiera. Previamente
hay que limpiar los bordes del portaobjetos, así como la parte que no se va a teñir.
Características Procariotas Eucariotas
Tamaño de 0,5 micras a 2 micras de 2 a 200 micras
membrana sin membrana. No Con membrana. Hacen mitosis
nuclear hacen mitosis
Orgánulos Ribosomas y Ribosomas, mitocondrias, vacuolas, etc
mesosomas sin mesosomas
ADN Una molécula. Sin De una a varias moléculas. Forman
cromosomas cromosomas
Movimiento Flagelos de estructura Cilios y flagelos de estructura
simple compleja
Pared celular Delgada y de Sólo la presentan los vegetales
peptidoglicano (celulosa), los hongos (quitina)
Conclusión
Durante este experimento pudimos observar las diferentes formas que tienen las bacterias.
La mayoría de los enterococos, estreptococos y demás grupos o genero microbianos son algunos patógenos y
no patógenos, de estos se pueden preparar fermentaciones, que mediante un largo proceso,llegan a ser elaboradas
en productos comestibles, garantizando la mayor seguridad al consumir ese producto fermentado.

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