Impacto de la Ausencia de Control de

Calidad en el Laboratorio de Microbiología.

Reporte de Casos.
Control de Calidad en Microbiología

Plan de Ponencia
• Introducción
• Abreviaciones Importantes
• Control y mantenimiento de Equipos
• Cepas de Referencia
• Control de Calidad en Medios de Cultivo
• Control en Cultivos
• Control de Calidad en el Antibiograma
• Planificación del Laboratorio
• Documentación y Registro del Laboratorio
• Entrenamiento del Personal
• Interpretación de Resultados
• Reporte de Casos
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Introducción

El laboratorio de Microbiología es altamente dependiente del

operador y de su experiencia, es así que, el Control de Calidad es una
parte importante de los procedimientos ya que busca obtener
precisión y reproducibilidad en los resultados.
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Abreviaturas Importantes
• AC – Aseguramiento de la Calidad
• CC – Control de Calidad
• CLSI – Clinical and Laboratory Standars Institute
• EUCAST – European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing
• ATCC – American Type Culture Collection
• CCUG – Culture Colletion University of Götenborg
• CECT – Colección Española de Cultivos Tipo
• CIP – Collection de Souches de l’Institute Pasteur
• DSM – Bacterial Cultures from Deusche Stammsammlung für Mikroorganismen
• NCTC – National Collection of Type Cultures
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Control y Mantenimiento de Equipos

Evaluación de Evaluación de Evaluación de Evaluación de

Diseño Instalación Funcionamiento Desempeño
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Control y Mantenimiento de Equipos

• Fichas de Control diario
• Fichas de Mantenimiento
• Fichas de Calibración
• Cronograma de mantenimiento
• Personal Encargado
• Esterilización cuando aplique

USP <1058> Analytical Instrument Qualification

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Cepas de Referencia
• CLSI y EUCAST recomiendan
su uso.
• Son Cepas con
características conocidas
• ATCC ATCC

CLSI

EUCAST
•
utilizadas para el CCI.
• Se deben seleccionar según • CCUG
las Necesidades del • CECT
laboratorio
• Protocolo de conservación • CIP
de Cepas Tipo. • DSM
• NCTC
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Cepas de Referencia
Microorganismo Cepas Características de la Cepa
ATCC 25922 DSM 1103
Control negativo de BLEE, CCI en Enterobacteriaceae,
Escherichia coli NCTC 12241 CCUG 17620
CCI de STX y Tetra en Acinetobacter.
CIP 7624 CECT 434

ATCC 27853 DSM 1117 AmpC inducible, CCI Carbapenemos, permite comprobar
Pseudomonas aeruginosa NCTC 12903 CCUG 17619 el contenido de cationes Ca y Mg y el pH en el medio MH,
CIP 76110 CECT 108
CCI Aminoglucósidos.
ATCC 25923 DSM 2569
Betalactamasa Negativo, CCI de Gram positivos no
Staphylococcus aureus NCTC 12973 CCUG 15915
fastidiosos, Control de Oxacilina.
CIP 103429 CECT 794

ATCC 29212 DSM 2570

Sensible a Ampicilina, Vancomicina y aminoglucósidos de
Enterococcus faecalis NCTC 12697 CCUG 9997
alta carga.
CIP 103214 CECT 795

Resistencia intermedio a Penicilina G por alteración de

Streptococcus ATCC 49619
DSM 11967
NCTC 12977
CCUG 33638 PBP. CCI para antimicrobianos utilizados en
pneumoniae CIP 104340
Streptococcus spp., grupo viridans, Beta hemolíticos.
ATCC 49766
DSM 11970 Sensible a Ampicilina, CCI para antimicrobioanos
Haemophilus influenzae NCTC 12975
CCUG 29539 utilizados contra Haemophilus spp. En medio HTM.
CIP 103570
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Conservación de Cepas
• ATCC recomienda tener una Cultivos de Stock y Cultivos de Trabajo.
• Almacenarlas de forma adecuada.
• Registrar características fenotípicas.
• Fecha de cultivo.
• Numero de copias.
• Se puede conservar en un medio estabilizador apropiado como TSB más
Glicerol al 20% o si es posible liofilizado.
• Se puede conservar por tiempo prolongado a -20°C
• A -50°C hasta durante 1 año
• -70°C por tiempo indefinido.
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Conservación de Cepas
• La farmacopea de los EE.UU. Recomienda
trabajar con cultivos Stock y cultivos de
trabajo. (USP)
• La USP 36-NF 31 <51> declara: “The viable
microorganisms used in the test must not be
more than five passages removed from the
original ATCC culture.”
• “Los microorganismos viables usados en las
evaluaciones no deben exceder los 5 pasajes
a partir del cultivo ATCC original”.
• Los cultivos de trabajo se pueden almacenar
entre 2 – 8 °C en tubo inclinado con TSA .
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Control de Calidad en Medios de Cultivo

• USP: Microbiological Enumeration <61>and Specified Microorganisms <62> The
recommendation of Quality Control (QC) include all prepared media.
• Es la actividad más importante, la calidad del trabajo depende
de la calidad de los medios de cultivo
• Pesar correctamente.
• Evaluar la calidad del agua utilizada.
• Seguir las directrices del fabricante.
• Evitar el calentamiento excesivo
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Control de Calidad en Medios de Cultivo

• Evaluación física de los medios:
• Apariencia y color: sin turbiedad o precipitados (Caldos)
• Ausencia de rajaduras en el medio
• Ausencia de humedad
• Ausencia de coagulo por enfriamiento
• Ausencia de burbujas
• Esterilidad
• Desempeño
• pH
• Altura
• Correcta identificación del medio, ya sea nombre o abreviatura.
• Fecha de preparación y lote.
• Personal que preparó el medio.
• Correcto almacenamiento para evitar la desecación.
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Control de Calidad en Medios de Cultivo

• Permite • Permite

selectivos, diferenciales e indicadores.

en Caldo.
Prueba de promoción de crecimiento

Prueba Ecométrica en agares

evaluar el evaluar el
desempeño desempeño
y la y la
selectividad selectividad
de los de los
Caldos. medios
sólidos.
 Control de Calidad en Microbiología

Control en Cultivos

• Control de muestras.
• Seleccionar los medios
adecuados según el tipo de
muestra.
• Seleccionar criterios de
aceptabilidad y exclusión de
muestras.
• Tiempos de incubación
según muestra.
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Control de Calidad en el Antibiograma

• Designar un personal que realice estas tareas.
• Evaluar el desempeño de los medios.
• Evaluar Conformidades y no conformidades del CCI.
• Realizar acciones correctivas, según sea necesario.
• Evaluar el desempeño de los antimicrobianos, según metodologías
utilizadas.
• CLSI y EUCAST nos facilitan la tarea.
Control de Calidad en Microbiología

Control de Calidad en el Antibiograma

Frecuencia del Control de Calidad
• Inicialmente diario.
• Acumular 20 datos o 15 datos de una evaluación de 5 días por triplicado.
• Luego, semanalmente
• Cuando hay un cambio de lote de MH o de antimicrobianos repetir sólo 1
vez.
• Repetir el experimento cuando se introduzca un nuevo antimicrobiano, hay
un cambio en la metodología o cuando se exceden en las no
conformidades.
Control de Calidad en Microbiología

Control de Calidad en el Antibiograma

Control de Calidad en Microbiología

Control de Calidad en el Antibiograma

Control de Calidad en Microbiología

Control de Calidad en el Antibiograma

Control de Calidad en Microbiología

Control de Calidad en el Antibiograma

Control de Calidad en Microbiología

Control de Calidad en el Antibiograma

Control de Calidad en Microbiología

Control de Calidad en el Antibiograma

Control de Calidad en Microbiología

Control de Calidad en el Antibiograma

 Control de Calidad en Microbiología

Planificación del Laboratorio

• Tener siempre disponibles
manuales de las técnicas
estándares.
• Establecer Protocolos bien
definidos.
• Presencia de flujogramas de trabajo
simplificados de los procesos.
• Flujogramas de trabajo en caso de
eventos adversos.
 Control de Calidad en Microbiología

Documentación y Registros del Laboratorio

• Documentar los resultados del CCI.
• Implementar un bitácora del CCI
• Documentar no conformidades y acciones correctivas.
• Documentar los Resultados de CCE
• Implementar bitácora del CCE.
• Documentar mantenimiento, diario, semanal o mensual de equipos.
• Documentar Cronograma de calibraciones o acciones preventivas en los
equipos.
• Documentar el entrenamiento y la evaluación del desempeño del personal.
• Inventario de insumos, reactivos y medios.
Control de Calidad en Microbiología

Documentación y Registros del Laboratorio

 Control de Calidad en Microbiología

Entrenamiento del Personal

• 21 CFR 211.25 “Personnel
Qualifications.”
• El personal de microbiología debe
estar capacitándose
constantemente.
• Evaluar periódicamente al personal.
• Participar en actividades de
Evaluación Externa de la Calidad.
Control de Calidad en Microbiología

Entrenamiento del Personal

 Control de Calidad en Microbiología

Interpretación de Resultados
• El personal de microbiología debe estar constantemente actualizado debido a
que la interpretación de los resultados en microbiología son muy variable
debido a:
• Microorganismos ubicuos y es común la contaminación ambiental.
• Introducción de contaminantes por parte del mismo operario.
• Los microorganismos no siempre están distribuidos de forma homogénea en la
muestra.
• Los ensayos en microbiología son susceptibles de interpretación variable.
Reporte de Casos

Experiencia de Casos Clínicos sin Consenso

• Se presentaron 4 casos diferentes con 6 laboratorios participantes de

diferentes países.
• El estudio demuestra la necesidad de tener:
• Protocolos de procedimientos estandarizados.
• Control de Calidad Interno.
• Programa de Evaluación Externa.
 Reporte de Casos

Experiencia de Casos Clínicos sin Consenso

• Caso 1
• Muestra: Esputo tomada de una niña de 10 años con Dx de Fibrosis Quística.
• Se aisló: Pseudomonas aeruginosa; además, la muestra también presentaba
Stenotrophomonas maltophilia y Aspergillus fumigatus (Este último no fue
identificado por ninguno de los laboratorios participantes).
• Sólo 3 laboratorios confirmaron Pseudomonas aeruginosa, mientras que
algunos reportaron Burkholderia cepacia y Shewanella putrefaciens.
• Tres días después se recibió una segunda muestra de esputo de la misma
paciente y se pudo confirmar el aislamiento de Pseudomonas aeruginosa.
• Se observó relativa correlación en el reporte del antibiograma; sin embargo el
tiempo de reporte varió desde 2 días, hasta 13 días.
 Reporte de Casos

Experiencia de Casos Clínicos sin Consenso

• Caso 2
• Muestra: Hisopado de secreción conjuntival de una mujer de 34 años con Dx de
Conjuntivitis.
• Se aisló Streptococcus pneumoniae, este aislamiento no presentaba las
características morfológicas típicas del género; sin embargo, hubo consenso
entre todos los laboratorios participantes.
• En el reporte de sensibilidad se observó unanimidad para Cloranfenicol. Pero
en el reporte de penicilina y ampicilina el laboratorio 5 reportó R, mientras que
los demás reportaron sensibilidad reducida.
 Reporte de Casos

Experiencia de Casos Clínicos sin Consenso

• Caso 3
• Muestra: Orina de mujer de 84 años de edad con DX de insuficiencia renal.
• Se aisló: Enterococcus faecium con recuento mayor a 100,000 UFC/mL
• Hubo consenso en el reporte de Género, mas no fue tanto así para definir la
especie.
• En el reporte de sensibilidad hubo consenso en la Resistencia a Vancomicina,
pero para Nitrofurantoína la mitad de laboratorios reportó sensible y la otra
mitad resistente.
• Esto impacta fuertemente en el esquema de tratamiento, ya que en cepas
Resistentes a Vancomicina, la primera opción es Nitrofurantoína.
 Reporte de Casos

Experiencia de Casos Clínicos sin Consenso

• Caso 4
• Muestra: Hisopado de secreción ótica de un hombre de 66 años con Dx de
otitis con perforación de tímpano.
• Se aisló: Streptococcus pneumoniae.
• Si bien se identificó correctamente el microorganismo (sólo 3 de los 6
laboratorios), también se detectó contaminación por Staphylococcus aureus.
• Asimismo, hubo problemas con la viabilidad de la muestra.
• En el reporte de sensibilidad hubo consenso; sin embargo, el hallazgo de
Staphylococcus aureus cambia el enfoque clínico.
Reporte de Casos

Experiencia de Casos Clínicos sin Consenso

Reporte de Casos

Experiencia de Casos Clínicos sin Consenso

 Reporte de Casos

Experiencia de Casos Clínicos sin Consenso

Conclusión:
• Si bien es cierto, un Control de Calidad Externo puede ayudar a mejorar
nuestros protocolos de trabajo, es necesario que éste vaya de la mano del
control de Calidad Interno.
• Además, nos recuerda que en Microbiología es necesario estar en
constante mejora y Capacitación en competencias del personal técnico-
científico.
• De igual manera es necesaria la implementación y constante revisión de
los protocolos de procedimientos estandarizados.