UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA

SELVA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA EN

RECURSOS NATURALES RENOVABLES

RECURSOS NATURALES RENOVABLES

CURSO: GENETICA

TEMA: LIBRERÍA DE ADN

DOCENTE: VICENTE POCOMUCHA POMA

INTEGRANTES:

ARANGO HUARCAYA, Richard

MENDOZA PRESENTACION, Julio

MILIAN SANCHEZ, Lady

QUINTANILLA MEZA, Mac

SALDAÑA SEDANO, Stharlyn

Ciclo: I-2019

TINGO MARIA

Julio 20019
 INTRODUCCION

Una librería de ADN es una colección de clones cada uno de los cuales contiene
un vector al que se le ha insertado un fragmento de ADN derivado del ADN o el
ARN totales de la célula o tejido. Con el tamaño suficiente, la colección de clones
debería contener, teóricamente, todas las secuencias existentes en la fuente
original de ADN, es decir, debería contener muestras de todo el ADN del
organismo. Es posible buscar en la genoteca un clon con un fragmento de ADN de
interés mediante métodos sensibles de detección capaces de detectar dicho
fragmento entre millones de clones diferentes.

Qué es una librería o genoteca? •Genoteca genómica – moléculas de vector que

contienen insertos de DNA genómico •Genoteca de cDNA – moléculas de vector
que contiene insertos de cDNA Recuerda: RNA cDNA (específico de tejido) ¿Por
qué necesitamos una genoteca? Encontrar lo que buscamos es como buscar una
aguja (gen) en un pajar (genoma/mRNA)

Entre los usos que se le pueden dar a una genoteca están:

 El aislamiento de secuencias y genes: punto de partida para el estudio

molecular.
 La conservación del genoma: la excepcionalidad de una muestra biológica
aconseja conservar su material genético (restos arqueológicos, especies en
extinción, individuos con patologías únicas).
 Estudio de la secuencia genómica: conocer la secuencia completa de un
genoma implica su clonación previa.

En genética, una biblioteca genómica es una población de bacterias huésped,

cada una de ellas lleva un ADN que fue insertado en un vector de clonación, de tal
manera que la colección de clones representa todo el genoma del organismo
fuente. Este término también representa la colección de todas
las moléculas vector, cada una con un fragmento del ADN cromosómico del
organismo, antes de la inserción de estas moléculas en las células huésped.
Las técnicas de análisis del genoma desarrolladas a partir de los años setenta han
revolucionado los conocimientos a nivel molecular de muchos procesos biológicos
normales y patológicos. Actualmente, es posible localizar, identificar, amplificar y
secuenciar los genes que codifican las proteínas esenciales, y los elementos
reguladores de su expresión. También es factible expresar genes en sistemas
apropiados, para analizar su función o producir grandes cantidades de las
proteínas que codifican. Los avances de la genética molecular han revolucionado
la vida moderna porque han puesto a disposición de investigadores bá- sicos y
aplicados, cantidades ilimitadas de ácidos nucleicos con información para la
construcción de moléculas de importancia clínica o industrial. Sea cual fuere la
índole del ácido nucleico en estudio, este debe ser aislado y caracterizado. Para
esto, debe ser generada una fuente permanente del material de manera que se
disponga de cantidades suficientes para los estudios.

La caracterización molecular de un gen requiere tanto su identificación y

aislamiento a partir del resto del genoma, como su ampliación para poder obtener
cantidades suficientes para su análisis. Aunque es posible amplificar in vitro
fragmentos de ADN mediante PCR, la identificación y amplificación de genes de
interés se realiza muy a menudo recurriendo a técnicas que permiten multiplicar in
vivo un gen determinado, tras la introducción de una única copia del mismo en una
célula hospedadora, generalmente bacteriana. El número de copias del gen
aumenta a medida que se multiplica el organismo hospedador. La genoteca como
herramienta de la biotecnología so, en su conjunto, se denomina clonación
molecular y se resume en los pasos siguientes:  Se comienza con el aislamiento
del ADN genómico (ADNg) de varias células, que al ser digerido con enzimas de
restricción, genera una enorme cantidad de segmentos cortos de ADN, llamados
fragmentos de restricción. También el ARN mensajero (ARNm) se puede usar
como material de partida. Como las moléculas de ARN son excepcionalmente
lábiles, difíciles para amplificar en su forma original y no pueden por si mismas ser
ligadas a un vector para clonación, son convertidas en ADN por síntesis de ADN
complementario (ADNc), mediante la enzima transcriptasa reversa.  Estos
fragmentos son incorporados a otras secuencias de ADN (vectores plásmidos o
bacteriófagos), de modo que cada vector recibe uno de los fragmentos. Las
moléculas resultantes de esta unión se denomina ADN recombinante.  Los
vectores con sus fragmentos de restricción se introducen en la célula hospedadora
(bacterias principalmente, levaduras u otras células eucariotas), las cuales son
sembradas en medios de cultivo para su multiplicación.
MARCO TERORICO

CARACTERISTICAS DE UNA LIBRERÍA DE ADN

Una biblioteca genómica debe representar la totalidad del genoma de un

organismo como un conjunto de la superposición de fragmentos clonados, que por
lo tanto, permiten el aislamiento de una secuencia en el genoma. Los fragmentos
para la clonación idealmente deben ser generadas por un procedimiento
independiente de secuencia, para asegurar que los fragmentos sean generados al
azar y por lo tanto no exista un sesgo hacia una secuencia particular. Por último,
los fragmentos clonados deben ser mantenidos en forma estable, sin
tergiversación de las secuencias debido a la recombinación o diferencial la
replicación del ADN clonado durante la propagación de los recombinantes. Si bien
estos criterios pueden parecer bastante exigentes, los sistemas de disponibles
para la producción de bibliotecas genómicas permiten estos requisitos que deben
cumplir más o menos completamente.

La lógica de cribar una librería. El cribado es un compromiso entre: El tamaño del

genoma A genomas más grandes mayor número de colonias hay que cribar
Tamaño del inserto A medida que el tamaño del inserto es mayor, menor número
de colonias que cribar

GENOTECAS GENOMICAS: Una librería de ADN o genoteca genómica es un tipo

útil de genoteca que contiene fragmentos del ADN genómicos generados
mediante la digestión parcial con cantidades limitantes de una enzima de
restricción la cual efectúa cortes en determinados sitios con una frecuencia
elevada en el genoma. Como consecuencia, se produce una digestión parcial del
ADN, de modo que sólo tiene lugar la fragmentación de unos cuantos sitios de
restricción, quedando el resto intacto. Se genera así una colección de fragmentos
superpuestos con una longitud idónea para la clonación en un vector de
clonación.1 Tras ligar el vector y el fragmento de ADN, se introduce en una célula
huésped. La cantidad de clones que se necesitan para generar una genoteca que
cubra el genoma entero dependerá del tamaño de dicho genoma y del tamaño de
los trozos de ADN obtenidos. Por tanto, para saber el número de clones que
necesitamos usamos dos parámetros:
Nº clones = Tamaño genoma/tamaño medio del fragmento x Nº de clones con el
mismo inserto
Para reducir la posibilidad de que al usar las enzimas de restricción algún gen de
interés se corte por la mitad, se tiene más de un clon con el mismo fragmento. Por
esto, se multiplica por el número de clones que tengan el mismo fragmento.

GENOTECAS DE ADN Y COPIA (ADNc)

Una genoteca de ADN copia es un tipo de genoteca que contiene copias de ADN
copia de la población de mensajero presente en un determinado tejido. Este tipo
de genoteca tiene varias ventajas:1

 El clon obtenido contiene solamente los exones de un gen, y por lo tanto es

una representación directa de la secuencia codificante de un gen, sin
los intrones ni otras secuencias promotoras. Esto se convierte en una
desventaja en caso de querer estudiar estas zonas.
 Los diversos conjuntos de ADNc que representan los transcritos de un único
gen pueden presentar diferencias entre sí, indicando que se están usando
promotores o sitios de poliadenilación alternativos, o bien que se está
produciendo un corte y empalme en sitios diferentes («splicing alternativo»), de
manera que algunos exones pueden quedar incluidos o excluidos en algunos
transcriptores.
 El uso de una fuente específica de ARNm permite crear una genoteca con una
buena fuente de clones para genes de los que se sabe que se expresan de
manera preferente o exclusiva en un determinado tipo de tejido.
Sin embargo, el ADNc no proporciona indicación alguna acerca del tamaño o el
número de los exones ni de la secuencia de los lugares de empalme 3' y 5'. 1
La clonación del ADNc se basa en la acción de la transcriptasa inversa, una ADN
polimerasa dependiente de ARN derivada de retrovirus, que puede sintetizar la
cadena de ADN complementaria a una plantilla de ARN. Tras esto, esta cadena
única de ADNc se usa como plantilla para la ADN polimerasa que convierte la
molécula de cadena única en otra de cadena doble. Entonces, esta molécula de
ADN bicatenario es ligada en un vector apropiado para crear una genoteca de
ADNc representativa de todos los transcritos originales de ARNm que se
encuentran en una célula o tejido original. Algunos vectores hábilmente
construidos, llamados vectores de expresión, contienen señales de transcripción y
de traducción adyacentes al lugar de inserción del ADNc, haciendo posible la
transcripción y traducción en bacterias, hongos o células en cultivo, de una
molécula de ADNc de longitud completa para poder así producir la proteína que
codifica.

ELABORACIÓN LIBRERÍA DE ADN O DE GENOTECA

Puede ser de ADN genómico (ADNg) o ADN complementario (ADNc). La primera
es una colección de fragmentos de ADN genómicos clonados en un vector, que en
conjunto representan la totalidad del ADN o genoma de un organismo. A partir de
este tipo de genoteca se podrá seleccionar el clon que posea un ADN
recombinante específico y cultivarlo posteriormente para amplificarlo (De Robertis
y col., 1998; Peñafiel y García, 2001; Izquierdo, 2001). La genoteca de ADNc es el
conjunto de clones obtenidos a partir de los ARN mensajeros (ARNm), por lo que
comprenderán una selección del total de genes de la célula, ya que sólo aquellos
genes que están siendo expresados son transcritos al ARNm. Una vez que la
información esté disponible en la forma de genoteca de ADNc, los segmentos
procesados individualmente podrán ser aislados y examinados con relativa
facilidad (Stratagene, 2000; Izquierdo, 2001).
a) Obtención del ADN y ARNm Los insertos pueden ser esencialmente de dos
tipos: fragmentos de ADNg y ADNc obtenido a partir del ARNm. El ADN total de la
célula, que con frecuencia es requerido como una fuente de material para obtener
genes a ser clonados, puede ser procedente de cultivo de bacterias, células de
origen vegetal y animal o procedente de otro tipo de organismo a estudiar. Las
técnicas de ruptura de las células pueden dividirse en métodos físicos, con los
cuales las células se rompen por fuerzas mecánicas y métodos químicos, donde la
lisis celular es llevada a cabo por exposición a agentes químicos que afectan la
integridad de las barreras celulares. La lisis química involucra generalmente un
agente que ataca la pared celular, en el caso que la genoteca como herramienta
de la biotecnología haya, y otro que destruye la membrana celular. Para la
bacteria Escherichia coli y organismos relacionados, el ablandamiento de la pared
celular se lleva a cabo por lisozimas, etilendiaminotetraacético (EDTA), o una
combinación de ambos. Las lisozimas digieren compuestos polímeros que son los
que le dan rigidez a la pared celular. El EDTA remueve los iones magnesio que
son esenciales para preservar la estructura de las envolturas celulares y también
inhibe enzimas celulares que podrían degradar el ADN. El debilitamiento de la
pared celular con lisozimas o EDTA es suficiente para causar la ruptura de la
célula, pero usualmente un detergente como el 3-sodio-1-duodecil -2-sulfato (SDS)
ayuda en el proceso de lisis al remover las moléculas de lípidos y, por lo tanto,
causar la ruptura de las membranas celulares. Una vez lisada la célula, se
remueven los detritus insolubles. Componentes como paredes celulares digeridas
parcialmente pueden ser removidas por centrifugación, quedando el extracto
celular como un limpio sobrenadante. Para eliminar proteínas remanentes se
puede usar fenol o una mezcla de fenol cloroformo en proporción 1:1. Estos
solventes orgánicos precipitan las proteínas y dejan los ácidos nucleicos (ADN y
ARN) en solución acuosa. Para eliminar el exceso de ARN de la solución acuosa
se usa la enzima ribonucleasa. Para concentrar el ADN de la muestra, el método
más usado es la precipitación con etanol, en presencia de sal (cationes
monovalentes de Na+) y a una temperatura de –20ºC o menos. El precipitado
puede ser recolectado por centrifugación y luego redisuelto en un volumen
adecuado de agua. Aunque los pasos básicos de purificación del ADN son los
mismos, cualquiera que sea el organismo, algunas modificaciones son
consideradas de acuerdo a las características de las células que se usen (Brown,
1990). Para su clonación, los fragmentos de ADN deben tener dimensiones
determinadas y limitadas. El tamaño del ADNg, sea procariota o eucariota, es muy
superior al máximo posible para un inserto. Por ello, la clonación de genes a partir
de ADNg requiere el aislamiento previo del ADN y su ruptura en fragmentos de la
genoteca como herramienta de la biotecnología maño adecuado, mediante el uso
de endonucleasas de restricción. Para el aislamiento de ARN se puede usar una
solución monofá- sica de fenol e isotiocianato de guanidina (Trizol Reagent),
basado en el mejoramiento del método de Chomczynski y Sacchi de 1987
(GIBCOTM BRL. 1999). Durante la homogeneización y lisis de la muestra, el Trizol
mantiene la integridad del ARN. La adición de cloroformo seguido de
centrifugación, separa la solución en una fase acuosa y una fase orgánica. El ARN
permanece exclusivamente en la fase acuosa y es recuperado por precipitación
con alcohol isopropílico. El ARN aislado con Trizol está libre de proteínas y
contaminación con ADN. A partir del ARN total se aísla el ARNm poli (A) utilizando
una resina oligo (dT) (Brown, 1990; GIBCOTM BRL, 1999; Stratagene, 2000;
Lewin, 2001). Para la realización de genotecas de ADNc, se debe realizar la
síntesis de los ADNc a partir de los ARNm obtenidos.
b) Síntesis del ADNc La síntesis de los ADNc se logra utilizando un cebador oligo
(dT), de 12-18 nucleótidos de largo, el cual se une a la colas poli (A) del extremo
3´ de las moléculas de ARNm de células eucariotas y la acción de la enzima
transcriptasa reversa, la cual sintetiza una cadena complementaria de ADN por
cadena de ARNm existente . En kit comerciales como el elaborado por Stratagene,
el primer oligo (dt) posee un sitio de reconocimiento para la enzima de restricción
Xho I. Si la doble cadena de ADNc contiene uno o más sitios de reconocimiento
para la enzima de restricción que se use, ésta pudiera ser clivada y
subsecuentemente clonada en dos o más fragmentos, haciendo difícil el
aislamiento y análisis de ADNc completos.

LAS GENOTECAS
En la actualidad la biología molecular ha desarrollado una forma de tecnología
avanzada, proponiendo una nueva forma de estudiar diferentes organismos a
partir de las llamadas genotecas. Éstas son bibliotecas de genes que contienen la
información necesaria para que se forme un organismo; así como en una
biblioteca, cada gen representa un libro de la misma. En términos generales, para
construir una genoteca se procede a obtener el DNA de la célula, se fracciona y se
clona; más tarde se introduce en un vector de una célula a otra. Existen dos tipos
de genotecas: de DNA genómico y de cDNA. Las genotecas de DNA genómico
son las que contienen moléculas de DNA genómico de un organismo dentro de un
vector. Mientras que las genotecas de cDNA son las que contienen moléculas de
cDNA de un organismo dentro de un vector. El cDNA es un DNA copia que
proviene del RNAm del organismo y se obtiene a través de la enzima transcriptasa
reversa, por lo que el producto obtenido no posee intrones, asegurando de esta
manera que el fragmento de DNA dará lugar a una proteína. A las genotecas de
este tipo también se les conoce como bibliotecas de expresión, las cuales
adquieren suma importancia, puesto que ayudan a desarrollar nuevas moléculas
para el diagnóstico y perfeccionamiento de tratamientos
MÉTODOS DE CLONACIÓN
Genética Para realizar una investigación que recurra a la clonación genética, lo
primero que debe hacerse es cortar el fragmento de DNA que va a utilizarse, en
las posiciones correctas y con enzimas llamadas endonucleasas de restricción, las
cuales actúan como tijeras moleculares; a continuación se unen los fragmentos
obtenidos, proceso realizado naturalmente por una enzima de unión llamada DNA
ligasa. Posteriormente se selecciona una pequeña molécula de DNA circular
capaz de generar más copias de ella misma. Esto se logra utilizando vectores de
clonación (plásmidos o DNA viral), es decir molé- culas transportadoras, que
transfieren y replican fragmentos de DNA. Los plásmidos se encuentran
naturalmente en las bacterias y son los que guardan información importante para
su sobrevivencia, como es el caso de los genes para ciertas toxinas o genes de
resistencia a drogas. El vector que transporta ahora el gen se conoce como
plásmido recombinante y es introducido en bacterias para que éstas, a través de
su maquinaria genética, puedan expresar el gen y dar lugar a la proteína. Las
bacterias se mantienen en condiciones favorables de crecimiento (medio de
cultivo) para su amplificación y obtener de este modo múltiples células que poseen
el fragmento de DNA clonado.

EN BENEFICIO DE LA SALUD
La clonación de genes es utilizada para obtener en gran cantidad un gen
específico que puede ser utilizado para producir una nueva vacuna, un nuevo
medicamento o incluso mejorar la calidad de los alimentos que consumimos a
diario. A través de la clonación se pueden tomar genes de bacterias, virus,
animales, plantas y humanos para combinarlos, gracias a las tecnologías de
ingeniería genética. Como ejemplo relevante podemos mencionar el caso de la
insulina, una hormona requerida para metabolizar la glucosa que presenta déficit
en personas con Diabetes mellitus. Hasta la década de los 80 la insulina era
extraída del páncreas porcino y bovino, con el paso del tiempo se descubrió que
en algunas personas el uso de este tipo de insulina desencadenaba una respuesta
inmune no deseable. Para evitar dicha respuesta fue que se logró producir insulina
humana a partir de una bacteria. Se extrajo el gen que codifica a esta hormona de
una célula humana y se insertó en la bacteria Escherichia coli, de este modo se
generó insulina humana que, se ha demostrado, es tolerada rápidamente por las
personas diabéticas debido a que su secuencia genética es la misma. Hoy en día
se han logrado avances extraordinarios en beneficio del área médica al utilizar la
clonación de genes; los científicos esperan encontrar a través de la clonación
genética la cura para enfermedades que no han podido remediarse.
CONCLUSION
Una vez que el ADN ha sido clonado, se pueden multiplicar los clones individuales
en cualquier momento y obtener un fragmento de ADN recombinante en cantidad
suficiente, a partir de lo cual se abren diversas posibilidades, tanto en el ámbito de
la investigación pura (estudio de la estructura y la función de un gen) y aplicada
(obtención de plantas o animales transgénicos), como en la esfera médica
(diagnóstico y tratamiento de enfermedades). Hay muy pocas áreas de la
investigación biológica que no han sido afectadas por la clonación de genes. En la
industria, por ejemplo, la clonación de genes ha permitido alcanzar enormes
avances en biotecnología. Por muchos años han sido utilizados bacterias y
hongos como fábricas vivientes las cuales producen componentes muy útiles
como los antibióticos, por ejemplo la penicilina, la cual es sintetizada por un hongo
Penicilium y la estreptomicina, producida por una bacteria Streptomyces griseus.
La clonación ha revolucionado la biotecnología de una forma notable,
proporcionando una vía en la cual, proteínas de mamíferos puedan ser producidas
dentro de células bacterianas
Las genotecas son importantes como herramienta para la obtención de
conocimiento más preciso de las bases moleculares de muchas enfermedades y
de nuevas posibilidades terapéuticas.
BIBLIOGRAFIA
https://prezi.com/h2hfy0vggcnw/genotecas-o-librerias-del-adn/
http://www.bmbq.uma.es/lbbv/index_archivos/presentbiotec/4-Vect-gent-6.pdf
https://cdigital.uv.mx/bitstream/handle/123456789/48580/126-CYL-
011116.pdf?sequence=1&isAllowed=y
https://es.slideshare.net/marisol_aman/genotecas-slide
file:///C:/Documents%20and%20Settings/alumno/Mis%20documentos/Downloads/
Cap_tulo_8.pdf
http://sian.inia.gob.ve/pdfpnp/La%20genoteca%20como%20herramienta%20de%2
0la%20biotecnologia.pdf