Lab 2

Practica de laboratorio No.
2 PRUEBAS GENERALES PARA AMINOACIDOS

Y PROTEINAS
Presentado a: Carlos Fernando Sánchez

Presentado por: Yurley Tafurt Cardona
Juan David Vergara
Julio Andrés Ochoa
UNIVERSIDAD DEL CAUCA

FACULTAD DE INGENIERIA CIVIL
PROGRAMA DE INGENIERIA AMBIENTAL
Popayán, Marzo 9 de 2007
________________________________________________________________
RESUMEN
En la práctica se realizaron pruebas generales para el reconocimiento de

aminoácidos o proteínas que puedan estar presentes en una muestra. Las
pruebas comprenden: reacción Xantoproteíca, prueba de Biuret, prueba de
Ninhidrina, reacción de Hopkins–Cole y reacción de Ehrlich. Cada una de estas se
realizó con cinco muestras diferentes: Sln de urea, Sln de gelatina, Sln de
ovoalbumina de huevo, AA (fenilalanina, asparagina, glicina, tritófano, histidina y
muestrea problema).
INTRODUCCION
Las proteínas son compuestos de carbono, oxigeno, hidrogeno y nitrógeno. La

mayoría de ellas contienen además azufre y algunos fósforos. Sus moléculas son
de proporciones coloidales, todas son muy complejas molecularmente y tienen alto
peso molecular. La molécula proteica esta compuesta de una combinación de
aminoácidos por condensación. Las proteosas, peptonas, péptidos y aminoácidos
son derivados de las proteínas formados en síntesis e hidrólisis.
Por la estructura peptídico y la presencia de determinados grupos (grupos R), las

proteínas pueden reaccionar con una variedad de agentes originándose productos
coloreados. Estas reacciones son la base para la determinación cuantitativa y
cualitativa de las proteínas. Por presentarse variaciones en la composición de los
aminoácidos de las diferentes proteínas, se manifiestan diferentes colores y
grados de intensidad para una misma reacción, íntimamente relacionado con la
naturaleza de la proteína analizada. Todas dan la reacción de BIURET. Esta es
debida al grupo NH-CO. Las que contienen tirosina dan las reacciones
Xantoproteica y de Millón, las que contienen triptofano dan la reacción de este
nombre, y las que contienen cistina dan la reacción de la cistina (azufre).
OBJETIVOS
 Reconocer a través de pruebas generales la presencia de aminoácidos o

proteínas en una muestra
 Analizar mediante las reacciones de Hopkins-Cole y Ehrlich una muestra

problema.
MATERIALES Y METODOS
Ver guía
Nota 1: para la prueba de Hopkins- Colen se adicionó además ácido acético
Nota 2: en las pruebas se utilizó ovoalbúmina.
DATOS Y RESULTADOS
1. prueba de Biuret
Tabla No.1 resultados experimentales

TUBOS RESULTADOS
Color Resultado
prueba
Agua Azul muy claro con varios -
precipitados azul-verdoso
Urea morado con precipitado café +
Glicina Azul tenue con partículas de color -
café.
Histidina Azul oscuro sin precipitados. -
fenilalanina Azul claro con precipitados azul cielo -
y café
albúmina Dos capas: una morada y otra +
incolora.
Gelatina Morado tenue con precipitado morado +
oscuro
asparagina Azul (mas oscuro que los anteriores -
sin precipitado)
triptófano Azul muy tenue con precipitado café. -
Imagen No.1
2. Reacción Xantoproteíca
Tabla No.2 Resultados obtenidos en el laboratorio

Proteína o HNO3 NaOH Resultado de la
aminoácido prueba
Albúmina amarillo Con precipitados y de color +
amarillo
Urea Incoloro Incoloro -
Gelatina Lechoso Amarillo muy tenue sin +
precipitados
Triptofano Vino tinto Anaranjado oscuro, sin +
precipitados
Agua Incoloro Incoloro -
Fenilalanina Incoloro Incoloro -
Histidina Incoloro Incoloro -
Glicina Incoloro Incoloro -
Asparagina Incoloro Incoloro -
Imagen No.2
3. prueba con Ninhidrina

Tabla No.3 resultados experimentales
TUBOS RESULTADOS
COLOR RESULTADO
PRUEBA
1. agua Incoloro -
2. urea Incoloro -
3. glicina Morado oscuro +
4. histidina Morado oscuro +
5. fenilalanina Marrón +
6. albúmina Azul oscuro +
7. gelatina Blanco -
8. asparagina Naranja oscuro + (prolina)
9. triptófano Verde -
Imagen No.3
4. Reacción de Hopkins-Cole
Tabla No. 4 datos experimentales

Proteína o aminoácido H2SO4 + H3COOH Resultados
obtenidos
Albúmina 2 colores, parte
inferior naranja,
superior incoloro
Urea Incoloro -
Gelatina Incoloro -
Triptofano Naranja claro +
Agua Incoloro -
Fenilalanina Amarillo tenue +
Histidina Rosado tenue +
Glicina Incoloro -
Asparagina Incoloro -
Muestra problema Amarillo tenue +
5. Reacción de Ehrlich
Tabla No. 4 datos experimentales

Proteína o aminoácido Color Resultados
obtenidos
Albúmina
Urea -
Gelatina -
Triptofano +
Agua -
Fenilalanina +
Histidina +
Glicina -
Asparagina -
Muestra problema +
ANALISIS DE RESULTADOS
1. REACCIÓN DE BIURET
La producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se debe
a la presencia del enlace peptídico (- CO- NH -) que se destruye al liberarse los
aminoácidos. El reactivo de Biuret contiene CuSO 4 en solución acuosa alcalina
(gracias a la presencia de NaOH ). Cuando una proteína se pone en contacto con
un álcali concentrado, se forma una sustancia compleja denominada Biuret, de
fórmula:
La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la

formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu 2+ y los pares de
electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces
peptídicos.
O C C O
H N N H
R C H H C R
2 +
C u
O C C O
H N N H
R C H H C R
El grupo amino de las proteínas en presencia del reactivo de BIURET, hace que el
reactivo cambie de azul a violeta. Color violeta: Positivo (detecta los grupos
aminos en las proteínas). Color azul: Negativo.
2. REACCIÓN XANTOPROTEÍCA
Esta prueba sirve para caracterizar los aminoácidos bencénicos. En esta prueba
se produce la nitración del anillo bencénico presente en los aminoácidos
fenilalanina y triptofano, obteniéndose nitrocompuestos de color amarillo, que se
vuelven anaranjados en medio fuertemente alcalino.
La adición de ácido nítrico concentrado a soluciones que contienen proteína

generalmente causa la formación de un precipitado blanco que cambia a amarillo
al calentarlo. El color se empieza a convertir en anaranjado cuando la solución se
vuelve básica. Las proteínas insolubles cambian a amarillo y anaranjado en la
superficie. Esta reacción se debe a la nitración de anillos fenílicos en la
fenilalanina y triptófano para dar sustitutos nitrogenados que se colorean
anaranjado con la adición de base por la formación de sales.
En esta reacción el ácido nítrico producirá la desnaturalización e hidrólisis parcial

de las proteínas y por lo tanto las proteínas que contengan los aminoácidos
(triptófano) mencionados también darían positivo con esta reacción, como lo es en
el caso de la gelatina y la ovoalbúmina.
La reacción es la siguiente:
3. PRUEBA CON NINHIDRINA
Tiene como objetivo detectar y cuantificar cantidades de aminoácidos

libres. Los aminoácidos, en general reaccionan con la ninhidrina (hidrato de
hicelohidrandeno) cuando son calentados con un exceso de la misma.
Todos los aminoácidos que poseen un grupo amino libre reaccionan y
forman dióxido de carbono, amoníaco y un aldehído que contiene un átomo
de carbono menos que el compuesto original. Esta reacción da lugar a la
formación de un producto color azul o púrpura (que posteriormente puede
ser utilizado para cuantificar el aminoácido). En el caso de la prolina, que
estructuralmente no posee el grupo amino libre, sino un grupo imino, la
coloración final es amarilla. El amoníaco, la mayoría de los polipéptidos y
las proteínas pueden desarrollar coloración en esta reacción, pero a
diferencia de los aminoácidos, no liberan CO2.
La coloración azulada o violeta será proporcional a la concentración del
aminoácido.
La reacción entre un aminoácido y la ninhidrina es la siguiente:

Al agregarle la solución de ninhidrina se obtuvo un color púrpura, el cual significa
prueba positiva para cualquier aminoácido
4. REACCION DE HOPKINS
Implica la reacción del grupo indol del triptofano con el acido glioxílico, en
presencia de ácido sulfúrico concentrado.
El anillo indólico presente en la cadena lateral de los alfa-aminoácidos libres o
haciendo parte de péptidos y proteínas se puede reconocer mediante reacción con
el ácido glioxílico a pH ácido, puesto que forma complejos de coloración violeta o
amarillo violeta, permitiendo así identificar al triptófano y las proteínas que lo
contienen. La positividad se reconoce por la aparición de un anillo color violeta-
rojizo.
5. REACCION DE EHRLICH
La presencia de anillos aromáticos fenólicos o nitrogenados en la cadena lateral

de los Aminoácidos se puede identificar mediante la reacción con ácido sulfanílico
y nitrito de Sodio por formación de sales de Diazonio fuertemente coloreadas
permitiendo así detectar la presencia de Tirosina e Histidina libres o formando
péptidos y proteínas.
CONCLUSIONES
 Las reacciones realizadas en esta práctica pueden servir para determinar la

presencia de ciertos grupos en una proteína, pero no son adecuados para la
identificación de aminoácidos.
 El hecho que algunas proteínas hayan dado positivo para la reacción de
Biuret indica que están conformadas por más de tres residuos de
aminoácidos.
 La intensidad de una reacción colorida y la cantidad de precipitado varió de
una proteína a otra no sólo por la cantidad de grupos disponibles para la
reacción en la proteína sino también por la cantidad de reactivos agregados.
 La glicina no reaccionó con el reactivo de Biuret porque está en forma libre y
no hay enlaces peptídicos con los que pueda reaccionar este reactivo.
Además en la reacción xantoprotéica dio negativo porque carece de grupos
aromáticos.
 Entre los aminoácidos hay algunos que en su estructura tienen anillos
aromáticos: fenilalanina y triptófano, como se comprobó en la reaccion
xantoproteica.
BIBLIOGRAFIA
 www.uniboyaca.edu.co/manualinstrum.pdf
 http://72.14.209.104/search?
q=cache:FiB0A_iSaKIJ:www.uprm.edu/biology/cursos/biologiageneral/CVlab
4.ppt+prueba+de+biuret&hl=es&ct=clnk&cd=4&gl=co
 www.uco.es/dptos/bioquimica-biol-mol/pdfs/26aminoacidos.pdf
 http://www.pucmmsti.edu.do/cienciasfisiologicas/BQMA-SIB2.PDF

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Las proteínas son compuestos de carbono, oxigeno, hidrogeno y nitrógeno. La

Por la estructura peptídico y la presencia de determinados grupos (grupos R), las

 Reconocer a través de pruebas generales la presencia de aminoácidos o

 Analizar mediante las reacciones de Hopkins-Cole y Ehrlich una muestra

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3. prueba con Ninhidrina

Tabla No. 4 datos experimentales

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La reacción se basa en la formación de un compuesto de color violeta, debido a la

La adición de ácido nítrico concentrado a soluciones que contienen proteína

En esta reacción el ácido nítrico producirá la desnaturalización e hidrólisis parcial

Tiene como objetivo detectar y cuantificar cantidades de aminoácidos

La reacción entre un aminoácido y la ninhidrina es la siguiente:

La presencia de anillos aromáticos fenólicos o nitrogenados en la cadena lateral

 Las reacciones realizadas en esta práctica pueden servir para determinar la

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