Antígenos Febriles

ANTÍGENOS FEBRILES
REACCIONES PARA LA DETERMINACIÓN DE

ANTICUERPOSESPECÍFICOS CONTRA
SALMONELLA Y BRUCELLA

INTRODUCCIÓN. - la salmonella se consideran patógenos entéricos
obligados.
los alimentos y el agua contaminados son los mecanismos de transmisión. la
enfermedad puede presentarse como gastroenteritis, septicemia con lesiones
en diversos órganos o fiebre tifoidea.
La brucelosis se presenta en la mayoría de los casos con anorexia, fiebre
decaimiento y escalofríos pudiendo aparecer luego complicaciones importantes
como son las óseas y neuropsiquicas.
a pesar de que el método definitivo para establecer la etiología de estas
enfermedades es a través del aislamiento del agente patógeno esto resulta
difícil debido a que investigación frecuentemente en periodos tardíos de la
enfermedad y luego de una terapia antibiótica.
por este motivo es de Gran importancia diagnostica la detección de los
anticuerpos específicos producidos en el curso de cada una de estas
patologías. es de escaso valor siendo necesarias dos o más pruebas seriadas
a fin de poner en evidencia cambios en el título de anticuerpos.
FUNDAMENTO
El suero del paciente se pone en contacto con antígenos específicos. en este
caso se utilizan suspensiones de salmonellas o brucellas muertos . si la
muestra contiene anticuerpos correspondientes se producirá una aglutinación
visible macroscópicamente.
REACTIVOS
Antígenos Febriles Salmonella: suspensión contiene los siguientes antígenos
bacterianos:
 antígenos paratyphoid A (Salmonella antígeno flagelar A)
 antígenos paratyphoid B (salmonella antígena flagelar B)
 antígenos thypoid H (salmonella antígena flagelar D)
 antígenos thypoid O (salmonella antígena somático D)
Antígenos Febriles Brucella: suspensión de antígenos bacterianos ( brucella,
abortus, cepa 1119-3). Las bacterias utilizadas ensayadas por el método de la
acriflavina se encuentra en fase Lisa .
Antígenos Febriles Controles
 control positivo: dilución de suero inactivado positivo
 control negativo: dilución de suero negativo
Solución fisiológica
lo reactivos llevar a temperatura ambiente y agitar vigorosamente antes de su
empleo
Precauciones Con El Reactivo. - los reactivos son para uso diagnóstico” in
vitro”.
Los controles han sido examinados para HIV y HBVEncontrándose no
reactivos.
no obstante debe ser empleado como si se tratara de material infectivo.. los
reactivos tienen que ser almacenados entre 2-10 ºCNo congelar. cualquier
contaminación bacteriana de los reactivos producida durante el uso puede ser
causa de deterioro, desechar.
MATERIAL BIOLÓGICO
muestra
 suero: obtener suero limpio en forma estéril. el no se inactiva ni se
calienta puesto que los anticuerpos son termo labiles no Añadir adictivos
sueros hemolizados lipemicos ictéricos y con presencia o restos de
antibióticos dan reacciones inespecíficas.
MATERIALES
 placa de vidrio
 micropipetas
 tubos de hemólisis
 varillas de vidrio o aplicadoras
 reloj o cronómetro
 rotador de control de r.p.m
PROCEDIMIENTO
TÉCNICA RÁPIDA EN PLACA
 colocar en una placa una gota 50 u l de suero y agregar una gota 50 ul
de suspensión de antígeno. mezclar y agitar la palta en forma circular
durante 2 minutos
 observar la presencia o ausencia de aglutinación utilizando una luz
indirecta sobre fondo oscuro
TITULACIÓN RÁPIDA EN PLACA
 utilizar una placa de vidrio con pocillos se utilizará un sector de pocillos
para cada uno de los reactivos( )
 empleando las micropipetas apropiadas colocar en estos sectores 80 ul,
20 ul, 10 uly 5 ul De suero límpido. repetir el procedimiento para el
control positivo y el control negativo
 colocar una gota de antígeno() previamente agitado sobre cada gota de
suero en cada dilución correspondiente
 mezclar el suero y el antígeno utilizando una varilla abarcando todo el
área del pocillo debe emplearse una varilla distinta para cada disolución
de suero.
 Agitar La palca durante 2 minutos en forma circular
 observar la aglutinación utilizando luz indirecta sobre fondo oscuro
 de la de los en placa equivalen Aproximadamente a las de la prueba en
tuvo Como se muestra a continuación:
Volumen de suero (ml) Dilución aproximada en la prueba en tubo
0,08 1:20
0,04 1:40
0,02 1:80
0,01 1:160
0,005 1:320
TITULACIÓN EN TUBO
 agitar vigorosamente el antígeno para obtener una suspensión
homogénea y preparar una dilución del mismo con solución fisiológica
1:20 del mismo con solución fisiológica (SF)
 en una serie de 10 tubos colocar: 0,9ml de SF en el primer tubo y 0,5 ml
de SF en los restantes
 agregar 0,1 ml de suero en el primer tubo. Mesclar bien y transferir 0,5
ml
 de este suero diluido en segundo tubo y asi sucesivamente hasta el
decimo tubo.
 Descartar 0,5 ml del suero diluido del tubo Nº 10
 Colocar un tubo adicional por cada lote de determinación con 0,5 ml de
SF. Rotular “control de SF”
 Agregar en cada tubo 0,5 ml de suspensión de antígeno diluida de
acuerdo a lo indicado en el paso
 Se obtiene diluciones desde 1:20 hasta 1:10.240.
 Mezclar por agitación e incubar en baño de agua según el siguiente
cuadro
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
 Cuatro cruces (4+): todos los microorganismos aglutinan.
 Tres cruces (3+): aglutinan aproximadamente el 75%
 Dos cruces (2+): aglutina aproximadamente el 50 %
 Una cruz (1+): aglutinan aproximadamente el 25 %
 Negativo: no aparece aglutinación.

VALORES DE REFERENCIA
 general título de 1:40 o 1:80 son sospechosos de enfermedad sólo
títulos mayores de 1:80 pueden considerarse probatorios de diagnóstico
de enfermedad cuando estén acompañados de la sintomatología
clínica.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

títulos significativos pueden obtenerse en individuos inmunizados por vacunas
tifoideas. pueden observarse reacciones específicas con antígenos de
salmonella o grupo d en suero de pacientes con influenza.
también se encontraron reacciones inespecíficas en pacientes con
enfermedades. hepáticas crónicas Crónica activa y Consumidores de
narcóticos.
los antígenos de brucella pueden dar reacciones cruzadas en individuos
vacunados contra cólera.

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