REPÚBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA MINISTERIO DEL PODER

POPULAR PARA LA EDUCACIÓN UNIVERSITARIA

UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL DE LOS LLANOS CENTRALES
RÓMULO GALLEGOS
AREA DE CIECIAS DE LA SALUD-MEDICINA
HOSPITAL CENTRAL DE MARACAY

DOCENTE: AUTORES

Dra. Gabriela Gutiérrez Maria Isabel Rojas Aguirre C.I V- 19.688.131

Maria Jose Rojas Aguirre C.I V-24.986.911

CRH37

Maracay, Marzo 2021

 BREVE RESEÑA HISTORICA DE ANATOMIA PATOLOGICA

La Anatomía Patológica es una disciplina de conocimiento científico basada en

el diagnóstico morfológico de la enfermedad, estudiándola a nivel morfológico
(orgánico, tisular, celular)y molecular. El objetivo es establecer un diagnóstico
final de certezade la lesión del paciente que será utilizado por el médico para
implementar el tratamiento adecuado y planificar o no un seguimiento.Su
historia ha transcurrido ligada a lade la autopsia de modo que la Anatomía
Patológica se constituye en las siguientes ramas fundamentales: autopsias,
biopsias, citología, estudio subcelular y molecular.
OJETIVOS

•La Anatomía Patológica es una ciencia de la biología que estudia las

alteraciones estructurales que aparecen por las enfermedades en órganos,
células y moléculas.

•A través del estudio de las lesiones y secuelas de las enfermedades indaga la

etiología, trata de explicar la evolución, patogenia y semiología y ayuda a la
evaluación de los tratamientos.

•Su finalidad inicial, y que hoy,en esencia, persiste, es relacionar las

alteraciones de la forma con las de la función

.•La Anatomía Patológica es una asignatura fundamental en el currículum de un

estudiante de Medicina, puesto que ayuda a establecer las bases científicas de
los procesos nosológicos y de esta forma une las Ciencias básicas y las
observaciones clínicas. Este hecho es el fundamento de la situación troncal de
la Anatomía Patológica y su aprehensión intelectual por los estudiantes es
objetivo primordial de esta disciplina.

•Otro objetivo fundamental de la asignatura es dar a conocer al estudiante

cómo el anatomopatólogo puede ayudarle en el desarrollo de su labor médica.
Es decir, hacerle comprender qué son y para qué valen las técnicas y métodos
usados en la Anatomía Patológica, capacitándole para que haga indicaciones
clínicas correctas de petición de autopsias, biopsias y citologías, así como una
adecuada aplicación de los métodos de microscopía electrónica, patología
molecular, inmunohistoquímica, etc., usados en la Anatomía Patológica.
•Una vez cursada la asignatura, el estudiante deberá alcanzar la comprensión
de los diagnósticos anatomopatológicos, lo que le ayudará a establecer el
diagnóstico, la terapéutica, el pronóstico y la prevención de las enfermedades
de sus pacientes.

•También es objetivo de la asignatura que el estudiante llegue a considerar la

Anatomía Patológica, además de una especialidad médica, un método general
de investigación que le será esencial para resolver los problemas que se le
planteen en el ejercicio de la Medicina.

•La Anatomía Patológica se divide en general y especial. En la general se

estudian las lesiones y mecanismos de reacción del organismo
independientemente del órgano en el que se asienten. La especial lo hace
teniendo en cuenta las modificaciones de estas alteraciones y reacciones
según el órgano en el que radican.

•En el programa de la asignatura se incluyen los avances más destacados que

se han hecho en la compresión del origen biomolecular de las enfermedades y
también se mantienen las descripciones morfológicas esenciales que
representan la estructura básica de la Anatomía Patológica. Por tanto, se
incorporan en su contenido las actuales técnicas moleculares e inmunológicas,
y de otro tipo, que mejoranla interpretación de la patogenia y el diagnóstico de
las lesiones.

•El programa se inicia con una serie de capítulos que incluyen el conocimiento
de los mecanismos celulares y moleculares y manifestaciones estructurales de
la lesión y muerte celular y de las alteraciones de los espacios intersticiales.
Posteriormente se estudian los trastornos circulatorios y su patología
relacionada, para continuar con los mecanismos de inflamación e inmunidad.
•El programa estudia la Anatomía Patológica de las enfermedades infecciosas
y la patología ambiental. Dedica siete lecciones al estudio de los trastornos del
crecimiento y de la patología oncológica. Incluye además una serie de capítulos
en los que se estudian las manifestaciones específicas de las enfermedades en
los diferentes órganos o sistemas, en las que los cambios morfológicos son
esenciales para la comprensión de las mismas
AUTOPSIA

Autopsia es el término que queda reservado en el caso de los exámenes

judiciales realizados para la determinación de la causa de la muerte con el fin
de proporcionar información al Juez cuando existe una investigación judicial y
son ordenadas por él, mientras que necropsia se utiliza para los exámenes que
se realizan en los ambientes medico asistenciales con el fin de determinar la
causa del fallecimiento solicitada por la familia o por el propio equipo médico
asistencial cuando lo consideran necesario.

Este estudio anatomopatológico postmorten, completo (totalidad del organismo

investigado), sistemático, con estrecha correlación anatomoclínica, en la que
participa además la investigación bibliográfica y documentación fotográfica.
Esta es la autopsia de interés clínico, en la que se realiza una exhaustiva
investigación macro y microscópica de todos los órganos con una sistemática
prevista para la toma de especímenes de tejidos (que serán luego en el
laboratorio de histología los "tacos" de inclusión en parafina), semejante a la
utilizada en el examen macroscópico de las piezas quirúrgicas. Comprende el
desarrollo de una serie de maniobras y/o de investigaciones, que se realizan
sobre el cadáver, para estudiar la causa de la muerte, tanto directa como
indirecta.

Diferencias éntrela autopsia cliica y forense

Objetivos de la autopsia clínica:

Aportar datos epidemiológicos

. Verificar procedimientos diagnósticos y terapéuticos.

 Correlacionar aspectos clínico-patológicos (discusión anatomoclínica).

Formar recursos humanos en la especialidad

. Descubrir nuevas enfermedades

TIPOS DE AUTOPSIAS

Autopsia Clínica

Estudia el cadáver para investigar la causa de la muerte, cómo los diversos

órganos y tejidos se han alterado por el proceso morboso y cómo tales
modificaciones anatómicas pueden haber provocado síntomas funcionales. Es
decir, observa los signos de una enfermedad mediante el examen de las
alteraciones orgánicas halladas en el cadáver.

Autopsia Médico-Legal o Judicial

La autopsia médico legal comprende el examen del cadáver por orden judicial.
Es efectuada por médicos forenses designados a tales efectos (peritos
médicos), a los fines de identificar la/s causa/s y el mecanismo/s de muerte. El
Código de Procedimiento Penal de la Nación, en su artículo 264 (denominado
“autopsia necesaria”), establece que: “En todo caso de muerte violenta o
sospechosa de criminalidad se ordenará la autopsia, salvo que por la
inspección exterior resultare evidente la causa de la muerte”. El análisis de la
excepción que establecen los códigos, a saber: “salvo que por la inspección
exterior resultare evidente la causa de la muerte”, debe ser aplicada con
cuidado, ya que por más evidente que resulte externamente, la autopsia puede
revelar datos que aporten mayor claridad al caso en torno a la muerte (por
ejemplo, el hallazgo radiológico/radioscópico de proyectiles en un cuerpo
carbonizado).

Según la ley, es necesario realizar la autopsia en: Muerte violenta: suicidios,

homicidios, accidentes e intoxicaciones

. Muertes sospechosas de criminalidad: muertes en las cuales existe una

hipótesis delictiva, entre las cuales podemos citar:

- Muertes atribuidas a la asistencia médica (mala praxis). Objetivos de la

autopsia clínica: Aportar datos epidemiológicos.

 Verificar procedimientos diagnósticos y terapéuticos.

 Correlacionar aspectos clínico-patológicos (discusión anatomoclínica).

Formar recursos humanos en la especialidad

. Descubrir nuevas enfermedades

. Ateneos anatomoclínicos.

- Muerte Súbita del Lactante (MSL). - Muerte de fetos y recién nacidos

- Muerte súbita en internación psiquiátrica. - Muertes en custodia (detenidos). -

Muertes súbitas inesperadas.

- Muertes esperadas sin asistencia médica.

- Muertes con asistencia médica por corto plazo. También constituirían

supuestos de autopsia médico legal necesaria las muertes de etiología dudosa
(MED) o de “causas dudosas”, ya que resulta imperativo determinar si nos
encontramos ante una muerte natural o violenta. La autopsia médico-legal
constituye una de las diligencias de mayor trascendencia entre las propias de la
actividad médico-forense. Los resultados de la autopsia ayudarán a interpretar
si la muerte fue natural o violenta, y en el segundo de los casos, si se trata de
un accidente, homicidio o suicidio

TECNICAS DE AUTOPSIA

Se refieren a las características edilicias del lugar donde se realiza la autopsia.

Lo ideal consiste en realizar la autopsia en locales que cuenten con los
siguientes elementos:

- Depósito de cadáveres, con cámara frigorífica ad-hoc y sala de exposición

para reconocer los cadáveres no identificados.

- Sala de autopsias con pizarrón y negatoscopio.

- Mesadas para autopsia.

- Laboratorio para la realización de técnicas complementarias que fueren

necesarias (toxicología, anatomía patológica, genética forense, etc.).

- Equipo de rayos X con arco en C. - Archivo y biblioteca.

- Dependencias para conservación del material de autopsias, archivo de ropas

y objetos que posean los cadáveres, etc.

El material para realizar una autopsia estará compuesto de:

Cuchillos y tijeras para seccionar partes blandas y cartílagos, pinzas de

disección con dientes de ratón, costótomo de Gluck, raquítomos de escoplo,
legras, sierras, escoplos martillos, etc.

Principales técnicas de autopsia

Se designa como técnica de autopsia al “conjunto de procedimientos

operatorios que tienen por objeto facilitar la exteriorización y examen de los
órganos y tejidos que integran el organismo”. La técnica de autopsia se
propone la exteriorización de los órganos y vísceras en las condiciones más
naturales posible, con mínima alteración del cadáver compatible con una
observación perfecta de aquéllos y capaz de permitir reconstruir el cuerpo. De
los métodos de la técnica de autopsia, cabe mencionar los siguientes:

Método de Morgagni: procedimiento clásico o primitivo, realizada con una

metodología y orden sistematizado.

Método de Rokitansky: describe el primer método ordenado y completo de

autopsia, donde lo principal es el examen y disección in situ de las vísceras.
Método de Gohn: modificación de la técnica de Rokitansky, introduce la
extracción de los órganos formando bloques.

Método de Letulle: realiza una gran incisión oval de la cara anterior del tórax
y abdomen, para una visión amplia del conjunto de vísceras de ambas
cavidades. Realizaba la extracción de vísceras en masa, para examinarlas
fuera del cadáver.

Método de Mata: entre las principales ventajas es que altera poco el estado
del cadáver, conserva sus rasgos fisonómicos, causa menos mutilación y
destrozo.

Método de Virchow: efectuó una aplicación específica de los métodos

anteriores a la práctica forense. Consiste en el reconocimiento global de las
vísceras in situ y su análisis por separado, una vez extraídas del cadáver, para
describir en detalle la técnica de estudio de cada una de ellas. Es uno de los
métodos más utilizados en el mundo y es la base en la mayor parte de los
“reglamentos de autopsias” vigentes.

INDICACIONES

Locales para la dirección y servicios administrativos. El lugar en su conjunto

debe estar sometido a rigurosas normas higiénicas. Se deberá tener en cuenta
una correcta iluminación, ventilación con extractores suficientes, pisos y
paredes lisas y pulidas, para su fácil lavado. Las mesas de necropsias de acero
inoxidable o de piedra, con longitud suficiente para colocar cadáveres de
diferentes tallas. Mesadas adecuadas para el corte de vísceras y colocación del
instrumental.
El operador deberá vestir en la sala de autopsia igual que el cirujano en el
quirófano: usar ambo, batas, cofias, barbijos, guantes, antiparras, zapatos
especiales para la sala de autopsias; todo ello para prevenir accidentes y evitar
propagar infecciones fuera del lugar. Más allá de las normas de bioseguridad,
el perito está obligado a velar por su salud y la de las personas que lo asisten,
en virtud que los cuerpos son remitidos sin antecedentes; por lo tanto, es
imprescindible hacer gala de la prudencia en la ejecución de esta operación.
Siempre existe la posibilidad que los cuerpos sean portadores de una
enfermedad infecciosa grave, como el SIDA, coccidioidomicosis, hepatitis B,
tuberculosis activa, meningitis, infección estafilocóccica, etc. La sangre y los
órganos sin fijar son fuentes de infección. Se debe procurar no contaminar
nada, más que la superficie de la mesa durante la necropsia.

PRECAUCIONES DE LA AUTOPSIA

La autopsia es un procedimiento crítico desde el punto de vista de la exposición

de riesgos para los trabajadores que la realizan. Se revisan los riesgos
biológicos y su prevención, enfatizando el principio fundamental de la
bioseguridad: las medidas de contención biológica. Se discuten las diferentes
medidas de bioseguridad, en particular los correspondientes a la morgue
incluyendo el sistema de precauciones universales, limpieza y desinfección de
la sala de autopsias, manejo de los residuos y protocolos ante accidentes.

Uno de los primeros casos conocidos de infección fatal fue en 1849 cuando el
médico austríaco Jakob Kollestcka (1803-1847) se cortó una mano mientras
realizaba una autopsia contrayendo una infección estreptocóccica(1,2). Han
pasado más de ciento cincuenta años, pero el riesgo biológico continúa
existiendo aunque hayan cambiado los microorganismos potencialmente
fatales y aunque existan antibióticos. La manera más efectiva de evitar
infecciones u otro tipo de accidentes laborales es trabajar respetando normas
de bioseguridad.

La bioseguridad (seguridad biológica), en su sentido amplio, implica un

conjunto de medidas destinadas a mantener el control de factores de riesgo
laborales procedentes del trabajo con agentes biológicos, físicos o químicos,
previniendo impactos nocivos y asegurando que el desarrollo o producto final
de los procedimientos no atenten contra la salud y seguridad de trabajadores,
pacientes y ambiente.

El principio fundamental de la bioseguridad es la contención. Refiere a una

serie de métodos seguros en el manejo de estos agentes, con el propósito de
reducir al mínimo la exposición del personal, de otras personas y del entorno.
Los diferentes elementos de contención que deben ser tenidos en cuenta son:
Técnica correcta. El elemento más importante para contener los riesgos
biológicos es el apego estricto a las prácticas y técnicas correctas. En el caso
de la morgue, supone realizar las autopsias cumpliendo con todas las
recomendaciones que se indican en los protocolos. Contención primaria. El
equipo de seguridad es la primera línea de defensa cuando se manipulen
materiales biológicos que puedan contener agentes patógenos, sustancias
tóxicas o radiaciones. Comprende los dispositivos o aparatos que garantizan la
seguridad (ejemplo: cabinas de seguridad biológica y elementos de protección
personal, desde los más sencillos, como guantes, mascarillas, batas, calzado,
hasta los más complejos, como trajes de aislamiento con sistemas de
respiración exterior).Contención secundaria. Corresponde al diseño de las
instalaciones internas.

La magnitud de las barreras secundarias dependerá del tipo de agente

infeccioso que se manipule. En la morgue, la mayoría de las veces se
desconoce qué agente infeccioso puede existir en el cadáver. También
dependerá de otras variables, como la situación epidemiológica de cada país o
región (enfermedades trasmisibles prevalentes). No es igual el riesgo de una
autopsia de un cadáver portador de tuberculosis en un país que no tenga
resistencia a los fármacos, la situaciones de desastre o de guerra, generan s
Niveles de bioseguridad Se refiere al rigor de las precauciones, juzgadas
necesarias para el trabajo con materiales infecciosos. Se establecen cuatro
niveles, en orden creciente de peligro, tomando como referencia las medidas y
estándares indicados por el Centro para Control de y Prevención de
Enfermedades de los Estados Unidos (CDC) y la Organización

Gac. int. cienc. forense ISSN 2174-9019 Nº 9. Octubre-Dicimbre,

201314Mundial de la Salud (OMS), basados en la infectividad, virulencia,
transmisibilidad del germen, severidad de la enfermedad y naturaleza de la
tarea que debe realizarse. El nivel de bioseguridad recomendado para trabajar
se relaciona con los microorganismos que puedan estar presentes pero no
debe equipararse el nivel de bioseguridad con la clasificación de los gérmenes,
es decir para un mismo germen puede ser necesario trabajar con dos niveles
distintos de bioseguridad dependiendo de la tarea que se realice situaciones
diferentes de las ordinarias.

UTILIDAD E IMPORTANCIA DE LA AUTOPSIA

La autopsia es considerada uno de los procedimientos básicos de la auditoría

interna y la fiscalización del acto médico, que debe realizarse en todo centro
hospitalario ya que contribuye a mantener la calidad de la atención médica; así
está dispuesto por organismos internacionales.

La autopsia médico legal es capítulo aparte, pero debe ser realizada bajo los
mismos lineamientos generales y consecuentemente por médicos patólogos
forenses. Es alentador ver la inclusión de la patología de la autopsia en la
reciente unidades currículares de formación del médico legista. Por otro lado, la
autopsia médico legal debe formar parte en la formación general del
anatomopatólogo.

Se considera la autopsia necesaria para adquirir mayor conocimiento de las

enfermedades conocidas como de las nuevas enfermedades que surgen y que
beneficie al mejor cuidado de los pacientes. Es fuente de órganos para
transplante inmenso recurso de datos estadísticos fuente inagotable para la
educación médica tanto en el pre grado como en el post grado. Proveedora del
material para investigación. En los pacientes con cáncer, sirve para
documentar la extensión y compromiso real de la enfermedad, documentar la
efectividad real de la terapéutica o conocer la causa de su fracaso. Sirve para
esclarecer la causa de muerte súbita en niños y adultos, cuando es intra-
hospitalaria, ya que la muerte súbita extra hospitalaria pertenece al campo
médico legal
SOLICITUD DE INFORME ANATOMO-PATOLOGICO

 Datos del paciente: Nombres y Apellidos, edad, fecha de nacimiento,

domicilio, número de teléfono.

 Datos sobre las muestras: material enviado, forma de obtención, sitio de

la lesión, sitio de la toma.

 Datos clínicos e imagenelógicos

 Impresión diagnostica.

 Firma y sello del profesional solicitante.

TIPOS DE FORMATOS, CONTENIDO, LLENADO DE LOS FORMATOS Y DATOS IMPORTANTES

Apellidos y nombres: Se detallará el nombre completo del cadáver (apellido/s y

nombre/s) constantes en el documento de identidad (si se dispone), o los
referidos en la designación de autopsia emitida por la autoridad competente.
Tipo de documento y número de identificación: Se colocará el número del
documento de identificación de la persona que reconozca al cadáver.
Sexo: Hombre o Mujer.
Edad aparente: Se colocará los años cumplidos si corresponde a un adulto, de
tratarse de un cadáver menor de edad, se colocará los años y meses
cumplidos. En caso de desconocer la información, quedará registrado en la
celda correspondiente.
Estado civil: Se escogerá con una X una opción de las indicadas: casado/a,
soltero/a, divorciado/a, viudo/a, unión de hecho. La opción que se marque
corresponderá al registro que conste en el documento de identidad
Lugar de Nacimiento y fecha de nacimiento.
Valoracion del cadáver podrá ser:
a) Tez o color de piel.
b) Mestizo
c) Indigena
d) Blanco
e) Otro
Ocupación: Se registrará la ocupación que refieran familiares o acompañantes
como un dato referencial, o la profesión si consta en el documento de
identificación. En caso de desconocer la información, quedará registrado en la
celda correspondiente. Dirección domiciliaria del fallecido(a): detallaren este
campo el sector de residencia del fallecido(a) referido por familiares o
acompañantes. En caso de desconocer la información, quedará registrado en
la celda correspondiente. Persona con Discapacidad: detallar la existencia de
una capacidad evidente en el cadáver bajo `procesos de observación o
afirmaciones sustentadas por parte de los familiares o acompañantes del
fallecido(a),
Antecedentes referenciales de la muerte: se resumirá las circunstancias de la
muerte, referidas por familiares o conocidos del fallecido(a), o por datos que
consten en documentos como Acta de levantamiento de cadáver, Parte Policial.
Antecedentes patológicos personales (clínicos, quirúrgicos personales): Se
detallará los estados patológicos (enfermedades) que refieran familiares o
conocidos del fallecido(a), y se registrará los nombres de la persona que
proporciona la información, número de un documento de identidad y teléfono.

TECNICAS MODERNAS AUXILIARES EN ANATOMIA PATOLOGICA

Métodos de estudio de la Anatomía Patológica. La biopsia. Definición. Tipos.

Indicaciones. Biopsia Excisional, incisional, espirativa, transoperatoria por
congelación, postoperatoria. Importancia de la biopsia. Citología espirativa.
Aplicación e importancia. La autopsia. Definición. Tipos. Autopsia clínica y
forense. Objetivos de la autopsia. Importancia. Técnicas generales de estudio
de la Anatomía patológica y de la Citología. Inclusión por parafina.
Congelación. Histoquímica e Inmunohistoquímica. Microscopía Electrónica.
Microscopía de fluorescencia. Historadiología. Cultivo de tejidos. Importancia
de las especialidades relacionadas con la Anatomía Patológica.

Biopsia:
bios (vida) opsia (observar)
Procedimiento por medio del cual se obtiene un fragmento de tejido de un ser
vivo, con el objetivo de someterlo a un estudio microscópico y establecer un
diagnóstico.
Importancia:
Sirve para hacer diagnóstico, para indicar tratamiento, para definir pronóstico,
evolución y extensión de una lesión.
TIPOS DE BIOPSIAS:
1.- Incisional: se toma un fragmento de la lesión.

2.- Excisional:   se toma toda la esión.

3.- Aspiración: mediante un trocar o aguja se aspira tejido de la lesión. Biopsia

por Aspiración por Aguja Fina (BAAF).

4.- Congelación o transoperatoria: se toma un fragmento de la lesión durante

la operación y se da diagnóstico en menos de media hora y se informa positiva,
negativa o esperar cortes por parafina si se tiene duda en el diagnóstico. Se
utiliza el criostato mediante la fijación física de la muestra por congelación.

5.- Postoperatoria: se realiza estudio por parafina de la lesión.

En los hospitales funcionan los Comités de Tejidos o Comités de Evaluación de

Intervenciones Quirúrgicas, en ellos se analizan y discuten las operaciones
realizadas y los resultados de las biopsias de las mismas, es importante la
boleta que debe llenar el médico con los datos del paciente y enviarla con la
muestra de tejido al servicio de Anatomía Patológica.

Citología

Muestra de exudados, secreciones o líquidos de cualquier parte del organismo

donde hay células aisaladas o en grupos.

 Sirve para el estudio de las neoplasias (orgánica) y se da positiva,

negativa o sospechosa.
 Estudio hormonal o functional.
 Estudio genético.

Necropsia:

nekros (cadaver) opsia (observar)

Estudio de un cadáver mediante la observación cuidadosa, incluyendo la
apertura de sus cavidades y el examen de todos su órganos. Se llena el
protocolo de autopsia con todos los datos de la misma y la descripción de los
hallazgos efectuados en todos os órganos y cavidades.

TIPOS DE NECROPSIAS:

1.- Clínica (toda muerte natural, infarto, neoplasias, neumonía, etc)

2.- Médico legal o forense(a toda muerte violenta: accidente, caida, quemado,
ahogado, etc)

OBJETIVOS DE LA NECROPSIA:

1.- Determinar la causa de muerte.

2.- Rectificar los certificados de defunción.

3.- Efectuar estudios estadísticos.

4.- Elaborar política de salud.

5.- Docencia.

6.- Fines jurídicos.

En los hospitales existen también los Comités de análisis de la Mortalidad

hospitalaria, en los cuales se discuten los expedientes clínicos, las conductas
tomadas con los diferentes pacientes, los complementarios, tratamientos
indicados y los resultados de las necropsias.

 LABORATORIO DE ANATOMIA PATOLOGICA. ESTRUCTURA.

1.- Morgue.

2.- Laboratorio.
3.- Citología.

4.- Secretaria.

5.- Archivo.

5.- Diagnóstico.

FUNCIONES DE LA ANATOMIA PATOLOGICA:

1.- Asistencial.

2.- Docencia.

3.- Investigativa.

4.- Administrativa.

TECNICA HISTOPATOLOGICA Y CITOLOGICA:

1.- Descripción de la muestra, toma de fragmentos y numeración de la misma

en el pase de biopsia, donde son recibidas las mismas que llegan identificadas
y fijadas en formol.

2.- Fijación de la muestra en formol al 10% por 24 horas o más.

3.- Deshidratación: alcohol 70, 80, 95, absoluto (Se utiliza el alcohol en grados
ascendentes en el procesador automático donde se colocan las muestras en
bolsas de gasa) (Fig. No 1)

4.- Aclaramiento: xilol, 1-4 vasos (En el procesador automático) (Fig. No 1)

5.- Impregnación en parafina de 56 grados: Los dos últimos vasos del

procesador automático

6.- Inclusión en parafina: confección de bloques de parafina donde se colocan

los tejidos y se identifican con su número correspondiente. (Fig. No 2)

7.- Tallado de los bloques de parafina y colocados en hielo para endurecerlos.

8.- Corte de los bloques de parafina en micrótomos verticales y/o horizontales.
(Fig. No 3)

9.- Obtención de las secciones de tejido de 5 a 10 micras que son colocadas en

Baño de María.

10.- Se colocan las secciones de tejido en las láminas cubreobjetos,

previamente impregnadas las mismas de albúmina o clara de huevo e
identificadas con el número correspondiente colocado con lápiz diamante.

11.- Se desparafinan las láminas en la estufa antes de la coloración.

12.- Coloración en el siguiente orden: xilol, alcohol en grados descendentes,

agua, hematoxilina que colorea el núcleo y da reacción basófila de color azul-
violeta, agua, alcohol-ácido, agua, secar, eosina que colorea el citoplasma, da
reacción acidófila de color rosado, alcohol en grado ascendente.

13.- Montaje: utilizar bálsamo de Canada y colocar el cubre objeto en cada

lámina.

14.- Rotular las láminas con el número colocado en cartulina.

Histoquímica, Inmunocitoquímica:

Relacionada con la actividad química de las células y los tejidos. Por ejemplo la
presencia de ciertos colores en las células que indican que ha ocurrido una
reacción química específica, además que la densidad del color dentro de las
células puede servir como índice de la intensidad de la reacción. Los métodos
histoquímicos han sido particularmente exitosos para el estudio de enzimas y
sustancias catalíticas que controlan y dirigen muchas de las actividades
celulares. Mucho del conocimiento sobre las enzimas se ha obtenido al
remover las mismas en las células que las originan, no ha sido hasta el
advenimiento de la Histoquímica que los anatomistas han podido ver a través
del microscopio cuales células portan enzimas específicas o medir como se
activan esas enzimas en las células bajo diferentes condiciones.
La Inmunocitoquímica es una de las ramas de la Histoquímica que ha recibido
una considerable atención recientemente. A nivel del microscopio de luz, las
técnicas de anticuerpos fluorescentes son un método sensible para la
localización de polisacáridos específicos y proteínas. La base de esta técnica
es que el organismo reacciona con sustancias proteicas extrañas, los
antígenos y elabora sustancias específicas, los anticuerpos, los cuales se
combinan e inactivan los antígenos. Las moléculas de los colorantes
fluorescentes están vinculados químicamente a las moléculas de los
anticuerpos y los sitios de sus reacciones con los antígenos pueden ser
visualizados con el microscopio ultravioleta. Este método ha sido utilizado para
identificar las proteínas hormonales, la localización intracelular de varias
enzimas y los sitios de proteínas contráctiles como la miosina. Este método
permite al investigador localizar el sitio preciso de la reacción antígeno-
anticuerpo.

Histoautoradiografía:

Es una técnica importante de la Histoquímica relacionada con el uso de los

isótopos radiactivos de varios elementos químicos que están presentes en las
células y los tejidos. Los elementos o compuestos marcados con isótopos
radiactivos son administrados a materiales vivos, permitiendo que el
investigador siga la vía que toman las sustancias  a través de los tejidos. El
grado de concentración y dilución de los elementos dentro de los
constituyentes específicos celulares puede estimarse por medio de las
radiaciones emitidas de dichos tejidos. La técnica de marcar compuestos con
isótopos radiactivos hace posible el estudio de la distribución y concentración
de los isótopos en secciones de tejidos similares a aquellos estudiados en el
microscopio de rutina. Este estudio, conocido como autoradiografía se
complementa poniendo en contacto las secciones del tejido radiactivo con
películas fotográficas y emulsiones que son sensitivas a la radiación.

Microscopio Ultravioleta:

Este sistema permite incrementar la resolución el doble de un microscopio

ordinario (0.1µ). La luz Ultravioleta se emplea en el microscopio fluorescente.
La fluorescencia puede ocurrir naturalmente en la muestra o puede resultar de
la introducción de un colorante fluorescente unido a un componente específico
de la muestra. Esto es útil en el estudio de la Inmunocitoquímica.

Microscopio Electrónico:

El límite de resolución de este microscopio es aproximadamente 2 Ángstrom.

Permite observar las células y las estructuras de los tejidos más allá de lo que
se ve con el microscopio de luz. Las estructuras más pequeñas que las
macromoléculas individuales pueden ser observadas ahora y se les llama
estructuras finas o mejor ultraestructura.

Los científicos utilizan este microscopio en diversos campos de la

investigación, incluyendo Medicina, Biología, Química, Metalúrgica,
Entomología y Física. Desde la introducción del microscopio electrónico en el
año 1930, este ha revolucionado el estudio de las estructuras microscópicas y
las superficies.

Los microscopios electrónicos han resultado una poderosa herramienta

científica para a la investigación de la estructura básica de la materia,
específicamente en el campo de la Biología y de la ciencia de los transistores.
Mediante estos microscopios se han tomado fotos extraordinarias de las
“caras” de los insectos, formas de microorganismos y la estructura superficial
de nuevas moléculas de aleaciones de alta tecnología y otras sustancias. Ellos
resultan de gran importancia para la Patología Clínica de los centros médicos.

 Cultivo de tejidos:

Esta es otra técnica del siglo XX en la investigación anatómica, la cual se

relaciona con el cultivo de células y tejidos de organismos complejos fuera del
organismo vivo. Esta técnica permite el aislamiento de unidades vivas,
mediante las cuales el investigador puede observar directamente los procesos
de crecimiento, multiplicación y diferenciación celular. El cultivo de tejido ha
añadido una nueva dimensión a la ciencia anatómica.

MICROSCOPIA ELECTRONICA
La microscopía se define como el conjunto de técnicas y métodos destinados a
hacer visibles los objetos de estudio que, por su pequeñez, no son accesibles
para el ojo humano. Para ello, se usa el microscopio. El primero que se inventó
fue el óptico, que contiene dos o más lentes y que permiten obtener una
imagen aumentada del objeto, el cual funciona por refracción. Sin embargo,
presenta la limitación de que no se  puede obtener una magnificación más allá
de mil aumentos. Por eso, en el siglo XX, se inventó el microscopio electrónico,
mucho más potente.

El microscopio electrónico utiliza electrones con alta energía para realizar

observaciones a diferencia del  óptico, que se sirve de la luz (fotones). La
energía que se maneja en estos sistemas esta representada por una unidad
denominada electronvoltio (símbolo eV).

Un electronvoltio se define como una unidad de energía para el electrón

cuando es acelerado por una diferencia de potencial de un voltio. Este valor se
obtiene experimentalmente y equivale aproximadamente a 1,602176462 x 10-
19 Julios.

Un microscopio electrónico de barrido convencional puede alcanzar del orden

de 30 KeV (1 KeV = 103 eV)

En 1924, el físico francés Luis De Broglie pudo comprobar como un haz

electrónico acelerado a una determinada velocidad posee una longitud de onda
determinada. Esta es la fórmula que lo representa:

[Donde h = constante de Plank; v= la velocidad, y m= masa de la partícula].

De aquí podemos deducir que, cuanto mayor sea esa velocidad de aceleración
de los electrones, menor es la longitud de onda y, por lo tanto, el poder de
resolución mayor.
 A modo de comparación, el ojo humano puede ver hasta 0,1 milímetros; el
microscopio óptico, hasta 0,0002 milímetros; y el electrónico de barrido, hasta
más o menos 40 nanómetros. Un nanómetro equivale a 1/1.000.000 milímetros.
De hecho, el microscopio electrónico, al utilizar electrones con alta energía,
permite pasar de observaciones con una magnificación promedio de 2.000
aumentos a otra mayor de 300.000.

El microscopio electrónico posibilita también obtener una mayor profundidad de

campo, lo que permite conseguir un efecto más real de las tres dimensiones.

En el mundo de lo más pequeño, no existe el color con la longitud de onda

electrónica y, por lo tanto, las imágenes aparecen en blanco y negro.

CITOMETRIA DE FLUJO

La citometría de flujo representa un método rápido objetivo y cuantitativo de

análisis de células, núcleos, cromosomas, mitocondrias u otras partículas en
suspensión. El principio en el que se basa esta tecnología es simple: hacer
pasar células u otras partículas en suspensión alineadas y de una en una por
delante de un haz luminoso.

La información producida puede agruparse en dos tipos fundamentales: la

generada por la dispersión de la luz y la relacionada con la emisión de luz por
los fluorocromos presentes en la célula o partícula al ser excitados por el rayo
luminoso. Las señales luminosas detectadas se transforman en impulsos
eléctricos que se amplifican y se convierten en señales digitales que son
procesadas por una computadora.

La citometría de flujo ha encontrado amplia utilidad en ciencias como la

inmunología, hematología, oncología, anatomía patológica y biología celular. La
conjugación de marcadores fluorescentes con anticuerpos monoclonales o
policlonales ha hecho posible los estudios de la densidad y la distribución de
determinantes y receptores de la superficie y del citoplasma celular,
permitiendo identificar subpoblaciones celulares

¿Cómo funciona el citómetro de flujo?

Un citómetro de flujo se encuentra compuesto por tres principales sistemas, el de
fluidos, el óptico, y el electrónico.

Componentes de un citómetro de flujo. Éste se integra por tres sistemas: el

sistema de fluidos, que se encarga de transportar las células hacia el haz de
luz; el sistema óptico, compuesto por láseres y detectores que registran la luz
emitida por la célula, y un sistema electrónico que recibe las señales luminosas
y las codi-fica en gráficos.

PRINCIPIOS, FUNDAMENTOS Y UTILIDAD DE CITOMETRO

Existen varios componentes básicos en cualquier citómetro de flujo. Una

suspensión de células es inyectada en un líquido capaz de ordenar el flujo de
células de manera individual y a gran velocidad. Dicho flujo pasa por un punto
en el que incide la luz de al menos un láser, aunque los citómetros actuales
cuentan generalmente con 2 o más fuentes de luz. Desde este punto, la luz
incidente se transforma en emisiones a diferentes longitudes de onda
(diferentes fluorescencias), algunas de las cuales son recogidas por detectores
que amplifican las señales y las transforman a formato digital. Los citómetros
actuales están preparados para manejar simultáneamente entre 6 y 10
detectores. Toda esta información es integrada en un ordenador, capaz de
almacenarla para su análisis posterior.

La citometría puede estudiar partículas en suspensión, en nuestro caso,

células. De cada una de ellas es capaz de identificar una serie parámetros
intrínsecos, derivados del tamaño y la complejidad de la partícula (se refiere a
características de su envuelta y de su contenido), y parámetros extrínsecos,
derivados del marcaje de las partículas con sustancias que emiten
fluorescencia. En el caso que nos ocupa, estas sustancias son anticuerpos que
reconocen algún marcador y que están provistos de un fluoróforo, molécula
capaz de absorber y emitir fluorescencia.