RESISTENCIA BACTERIANA

Martha Pulido
Asesora Cientifica
 Bacteria
• Definición
Las bacterias son células
procariotas, por lo que a diferencia
de las células
eucariotas (de animales, plantas,
hongos, etc.), no tienen
el núcleo definido ni presentan, en
general, orgánulos
membranosos internos.
Generalmente poseen una pared
celular y ésta se compone
de peptidoglicano
Esquema de una bacteria
 Membrana Citoplásmatica
Funciones

Permeabilidad
Sistema de transporte
Biosíntesis
Fuente de energía
Liberación de exoenzimas
 Características Membrana Citoplasmática

• No difiere entre bacterias G+ o G-

• Es rica en proteínas(70 %) y no contiene
esteroles.
• Tiene repliegues hacia el interior del Citosol
(mesosomas).
• Participa en la segregación de las cromátidas
hijas durante la división celular a través del
cromosoma bacteriano al estar firmemente
adherido a ella.
 Pared celular bacteriana
• Estructura exclusiva de las bacterias
• Funciones:
- Confiere rigidez
- Responsable de la forma celular
- Barrera contra ciertos agentes tóxicos

• Componente básico: Peptidoglicano

 Síntesis de la pared
1. Síntesis de precursores solubles en
citoplasma
2. Unión a lípidos de la membrana
3. Formación de polímeros lineales fuera
de la membrana
4. Formación de puentes transversos entre
polímeros
 Pared Celular Gram Positivas

• El ácido teicoico representa el 50 % de la pared, gran

parte de éste ácido está unido a los glicolipidos de la
membrana citoplasmática por lo que se llama ácido
lipoteicoico y participan en el anclaje de la pared
celular a la membrana citoplasmática.
• Ácido teicoico sólo esta en bacteria G+ y forman los
mayores determinantes antigénicos que definen la
individualidad inmunológica de éstas bacterias.
 Estructura Pared
Bacterias Gram Positivas
Ácidos
Proteinas teicoicos

Ácidos lipoteicoicos

Peptidoglicano

Membrana
citoplásmica
 Pared Celular Gram Negativas
• Menor espesor y menor cantidad de
peptidoglicano (mureina) que Gram positivos.
• Protege a la bacteria de los cambios de
osmolaridad y le da su forma
• No tiene ácido teicoico
• Contiene lipopolisacaridos que le dan
características antigénicas
 Estructura Pared
Bacterias Gram Negativas

Medio externo

Ag O

Membrana Core Lípido A Lipopolisacárido

externa LPS

Porinas Proteinas
Lipoproteinas
Espacio
Peptidoglicano
periplásmico
Membrana citoplásmica

CITOPLASMA
 Clasificación de los
antibióticos

Espectro Estructura Mecanismos de acción

Origen Actividad
de acción Química sobre las estructuras
bacterianas
Biológico Reducido Bacteriostático
1. B-lactamicos
Sintético Amplio Bactericida
2. Glicopeptidos
Semisintetico Bacteriolitico
3. Aminoglucocidos
4. Macrólidos
5.Tetraciclinas
6.Fluoroquinolonas
 Espectro De Acción

Espectro reducido:
Son activos selectivamente frente a un grupo determinado de bacterias
Ej: Macrólidos: cocos Gram (+)
Gentamicina: bacilos Gram (-)

Espectro amplio:
Presentan actividad frente a la mayoría de los grupos bacterianos de
importancia clínica
Ej: Penicilina: cocos Gram (+), cocos Gram (-), bacilos Gram (+)
Ampicilina: cocos Gram (+) y Gram (-), algunos bacilos Gram (-)
 Sitios de acción de los antibióticos

1. Inhibición de la síntesis de la pared celular

2. Bloqueo de la síntesis de factores metabólicos
(acido fólico)
3. DNA gyrasa DNA redireccionando RNA polimerasa
4. Síntesis de proteínas
5. Estructura de la membrana citoplasmática
1.Inhibición de la síntesis de pared celular

Fase 1: Síntesis de precursores

• UDP- NAG
• Ac. Fosfoenolpirúvico
• UTP
• NADH

Forma: UDP-NAM (azúcar). A este

complejo se adiciona el dipéptido D-ala
D-ala.

Fosfomicina : Análogo estructural del

fosfoenolpiruvato.
Cicloserina : Análogo a la D- ala.
1.Inhibición de la síntesis de pared celular

Fase 2: Transporte de precursores

• UDP-NAM fosfolípido

•En pared se une Nacetil glucosamina

lineal de peptidoglicano.
•Pirofosforilado, se desfosforila

• Bacitracina: Une al transportador y

bloquea la desfosforilación
•Mureidomicinas: (tunicamicina,
anfomicina, liposidomicina) compiten con
el transportador.
1.Inhibición de la síntesis de pared celular

Fase 3: Organización estructural

peptidoglicano
El precursor (azúcar y aa) se
ensamblan por medio de proteínas
fijadoras (PBP)
Glucopéptidos : Evitan la acción de la
glucosiltranferasa y
transpeptidasas.Bloquean elongación

Fase 4: Entrecruzamiento
Se lleva a cabo gracias a las PBP.
Beta-lactámicos: Bloquean acción de
PBP por ser similares al residuo D-ala
D-ala
1.Inhibición de la síntesis de pared celular

• Fase 4 Entrecruzamiento
Enzima Función Acción penicilina

PBP 1a y PBP 1b Elongación del cilindro celular. Lisis rápida.

PBP 2 Condiciona la forma de la célula. La célula se redondea y

muere.

PBP 3 Formación del septo transversal. Filamentación y muerte.

PBP 4, PBP 5, PBP 6 Eliminan la D-ala terminal del No letal. Generan toleancia
pentapéptido (maduración PG).
 2. Bloqueo de la síntesis de factores
metabólicos (acido fólico)
• Trimetoprimsulfametoxazol
• Sulfosoxazol
• Cotrimoxazol
La síntesis de folatos es indispensable para la
obtención de aminoácidos y de las bases puricas y
pirimidinicas.
Los folatos se obtiene a partir de una molécula
pteridina y acido paraaminobenzoico “PABA”.
 2. Bloqueo de la síntesis de factores
metabólicos (acido fólico)
La acción de la enzima dihidropteroatosintetasa se forma el
acido dihidropteroico “acido fólico” por acción de una
reductasa se forma el acido tetrahidrofólico.

Acido fólico Acido folínico

Cotrimoxazol
3. DNA gyrasa DNA redireccionando RNA
polimerasa

Interfieren en el superenrrolamiento del DNA uniendose a la topoisomerasa II o IV.

Esto produce la ruptura de la doble cadena de DNA y muerte celular y fragmenta la
proteina en sintesis dependiente o independiente.
 4. Síntesis de proteínas
 Activación
 Iniciación
 Fijación
 Elongación:
 Transferencia
 Reconocimiento
 Translocación

Los aminoglicosidos se unen a la subunidad ribosomal 30S causando la falta

de incorporación de aminoacidos en los peptidos en elongación, estas
proteinas no traducidas pliegue inadecuado, y la incorporación de proteínas
mal plegadas en la membrana de la envoltura celular conduce a un aumento
en la absorción del antibiotico. Esto junto al incremento en la unión al
ribosoma se asocia con muerte celular.
 5. Estructura de la membrana
citoplasmática

• Polimixinas
• Daptomicina
• Ionoforos (gramicidina
valinomicina,
tirosidinas A y B)
 Resistencia antimicrobiana

•“Fenómeno por el cual un microorganismo deja de

verse afectado por un antimicrobiano al que
anteriormente era sensible, son inmunes a los efectos
de los antimicrobianos, de modo que los tratamientos
habituales se vuelven ineficaces y las infecciones
persisten y pueden transmitirse a otras personas”.
 Dinámica de la Resistencia
Bacteriana

CAUSA

RESISTENCIA Estimación de la
Contención
BACTERIANA magnitud del
problema

CONSECUENCIAS
Factores que influyen en la resistencia
bacteriana

PACIENTE

Resistencia
bacteriana

MICRORGANISMO ANTIMICROBIANO
 Emergencia de Resistencia
Antimicrobiana
Bacteria Susceptible

Bacteria Resistente

Transfiere Gen Resistencia

Nueva Bacteria Resistente
 Selección de Cepas Resistentes

Cepas Resistentes
(Raras)

Exposición
Antimicrobiana

Cepas Resistentes
Dominantes
Resistencia antimicrobiana
 Detección fenotípica de Mecanismos
de Resistencia en Gramnegativos
• Betalactamasas de espectro extendido (BLEE)
• Carbapenemas
- Test de Hodge
- EDTA
- Acido Boronico
• Resistencia a colistina
Betalactamasas de espectro extendido
(BLEE)
• Resistencia a penicilinas, oximino-cefalosporinas
(cefotaxima, ceftriaxona, ceftazidima, cefepima) y
monobactámicos (aztreonam)
• Son inhibidas por el ácido clavulánico.
• Los genes que las codifican se encuentran en
elementos móviles que facilitan su diseminación y
con frecuencia presentan co-resistencia a otros
antibacterianos como aminoglicósidos, cotrimoxazol
y quinolonas
 Confirmación de ESBL

Tabla 3 A M100
S26
Confirmación ESBL Doble disco
Test Negativo Test Positivo
 Detección fenotípica de BLEE

• Imagen del efecto

sinérgico entre
cefalosporinas de
tercera generación y
ácido clavulánico
mediante las técnicas
de difusión con discos

• Etest en una cepa

productora de BLEE.
Interpretación de BLEES por MIC
 Carbapenemasas
• Son B–lactamasas capaces de hidrolizar
carbapenémicos.
• Además pueden hidrolizar casi todos los
betalactámicos.
• Se clasifican en 3 tipos moleculares: A, B y D
• Carbapenemasas:
• Metaloenzimas: IMP, VIM y NDM
• KPC
• OXA
• Otras (muy raras): SME, IMI, SPM
Clasificación de las Carbapenemasas
 Carbapenemasa KPC: Test de
Hodge
Recomendación :
• Realizar la prueba de MHT Únicamente para Enterobacterias y
cuando se cumpla con alguna de las siguientes características:
•Resistencia al menos a 1 cefalosporinas de tercera generación
DISCO DIFUSION
*Ertapenem: Diámetros <= 19-21 mm
* Meropenem: <= 16-21 mm
MICRODILUCION
- MICs de Ertapenem 2 ug/mL
- MICs de Meropenem 2ug/mL – 4 ug/mL
 Test De Hodge Modificado

1. Prepare una escala 0.5 de

Mc Farland de E. coli
ATCC 25922
2. Realice dilución 1:10 de
esta suspensión
3. Siembre por método de KB
la suspensión bacteriana
4. Coloque en el centro de la
caja sensidisco de
Ertapenem o Meropenem
5. Realice estría de la cepa
problema y cepas control
desde el borde del disco A. Cepa control Negativo k. pneumoniae ATCC BAA-1706
B. Cepa control Positivo k. pneumoniae ATCC BAA-1705
hacia la periferia de la caja C. Resultado Positivo
 Limitaciones del test de Hodge

• Falsos positivos en productores de ESBL o

AmpC junto con perdida de porinas
• Falsos Negativos en algunos casos con
aislamientos productores de Carbapenemasas
tipo NDM
• Únicamente aplica para Enterobacterias
Metalobetalactamasas (MBLs)
• Grupos funcionales
– 3ª MLBs codificadas a nivel plásmidico (IMP-VIM, L1, CAU-
1, GOB-1, FEZ-1)
– 3b
• Hidrolizan una gran variedad de antibióticos β-lactámicos,
incluyendo penicilinas, cefalosporinas (1ª, 2ª, 3ª y 4ª
generación) y carbapenemes. No actúan, in vitro, sobre
aztreonam
• Requieren un ion zinc en el sitio activo
• No son inhibidas por A. Clavulanico o tazobactam
• Inhibidas por quelantes de iones metálicos como el EDTA,
acido dipicolínico
• Enterobacterias, Pseudomonas y GNNF
Metalobectalamasas: VIM, IMP, NDM
 Detección de metalo-beta-lactamasas
Método de la doble difusión de discos:
• -Colocar 1 disco de imipenem (10 µg) y un disco de EDTA a una
distancia de 15 mm de borde a borde de ambos discos.
• -Colocar 1 disco de meropenem (10 µg) a una distancia de 15 mm
del disco de EDTA (de borde a borde de ambos discos),
contrapuesto al de imipenem.
Interpretación
• Una prueba positiva consiste en la observación del agrandamiento
de la zona de inhibición del desarrollo alrededor del disco de
imipenem (10 µg) o meropenem (10 µg) hacia el disco de EDTA.
Este fenómeno de agrandamiento es conocido comúnmente como
“Efecto Huevo”.
• Una prueba negativa se considera cuando hay ausencia del
agrandamiento de la zona de inhibición del desarrollo alrededor del
disco de imipenem (10 µg) y meropenem (10 µg) hacia el disco de
EDTA.
Detección de metalo-beta-lactamasas
 NDM-1 Metalo beta-lactamasa New
Delhi 1
• Descubierta en 2008, en una cepa de Klebsiella
pneumoniae de paciente sueco procedente de New Delhi,
India
• Codifica múltiples genes de resistencia.
• Hidroliza todos los betalactámicos excepto Aztreonam.
• Inicialmente aislada de Klebsiella pneumoniae y E coli
• Posteriormente en otras bacterias: Enterobacter
cloacae, Citrobacter spp, Morganella morganii.
Incluso A. baumannii
• Resistentes a aminoglicósidos y fluoroquinolonas
 Test de Acido borónico
• El acido borónico es un inhibidor selectivo
de carbapenemasas tipo A serin
carbapenemasas
• Concentración del disco de 300ug
• El acido borónico tiene baja especificidad
para detectar carbapenemasas en cepas
altemente productoras de enzimas de tipo
AmpC ( Enterobacter, Citrobacter)
Sinergia con Acido Borónico
 Test de Acido Boronico
• IMP+AB v/s IMP solo

• Aumento del halo

inhibición de 4 mm
entre sensidisco de
IMP+AB versus IMPsolo
Comparativo
Resumen
 Carba NP
• Debe realizarse a Enterobacterias, P. aeruginosa y
Acinetobacter spp. Que son resistentes a uno o
mas carbapenemicos
• Se necesitan reactivos especiales , algunos
requieren preparación y tienen una vida útil corta
• Los resultados no válidos se producen con
algunos aislados . Ciertos tipos carbapenemasas
(por ejemplo, OXA , cromosómicamente
codificada ) no son detectado consistentemente
• Ref: CLSI M100 S26
 Carba NP-Materiales requeridos
Preparación diaria:
• Agua grado reactivo
• Imipenem en polvo para reconstituir
• Reactivo de extracción de proteinas
• Sulfato de Zinc heptahidratado
• Rojo de fenol
• NaHO 1N
• Microcentrifuga (tubos de 1.5 ml)

Con los reactivos anteriores prepare:

• Sultafo de Zn Heotahidratado 10mM
• Rojode fenol al 0.5%
• Hidoxido de Na al 0.1N
• Carba NP Solución A
• Carba NP Solución B ( Solución A +
Imipenem)
 Carba NP Limitaciones

• Buen desempeño para la mayoría de las

Carbapenemasas excepto OXA
• Cuando la MIC del Carbapenem aun
permanece en el rango de sensibilidad
• Cepas muy mucoides
• Tiempo de la lectura varia de acuerdo a la
carbapenemasa ( Mas rápido con KPC e
impredecible con OXA y NDM)
 Pruebas Comerciales

• RAPID EC CARBA NP
 Importancia de la búsqueda y
detección de Carbapenemasas

• Gérmenes multirresistentes
• Limitadas opciones de tratamiento
• Alta probabilidad de falla en el tratamiento
con β-lactámicos
• Mayor mortalidad asociada a la infección
• Persistencia en el ambiente hospitalario
• Alta capacidad de diseminación entre BGN
 Resistencia a Colistina
• La Colistina es un antibiótico (Polimixina) de
ultima línea utilizado en el tratamiento de
infecciones multirresistentes.
• Resistencia a través de plásmidos mcr-
1(Mobile Colistin Resistance)
• Detectaron portadores en E. coli y Salmonellas
sp.
• Antibiotico de uso humano y veterinario
 Resistencia a Colistina
Importante:
• No existe punto de corte CLSI para
Enterobacterias
CLSI M100 S26

Microorganismos S I R
Otros No - fermentadores <2 4 >8
Acinetobacter spp <2 - >4
P. aeruginosa <2 4 >8
B. cepacia - - -
S. maltophilia - - -

Solo MIC No KB
Staphylococcus spp
 Resistencia Bacteriana: mecA PBP2a
S. aureus
Penicillinas
Ampicilina
Amoxicilina
Cefalosporinas
Proteína ligadora de
PBP 2a
A. Clavulanico PBP
PLP
penicilina

bb-lactam
-lactam
Ribosoma

DNA Membrana
PBP Celular

PBP
Citoplasma
b-lactam PBP
PBP 2a PBP 2a Pared Celular

Inhibición de PBP
 S. aureus Vs. Vancomicina
• Sensibilidad reducida a Vancomicina por adq. de vanA:
– VRSA: Resistentes (CIMs > ó =16 μg/ml)
– VISA: Intermedio (CIM 4-8 μg/ml)
– h-VISA: CIM VAN < 2 μg/ml (sensible) pero capaces
de seleccionar subpoblaciones VISA.
• El mecanismo de resistencia se encontró asociado a una
alteración en la regulación de la síntesis y degradación
de la pared producida que genera cambios en la misma.
• En algunas cepas se observa crecimiento lento y
coagulasa débil.
Confirmación de sensibilidad intermedia
o resistencia a Vancomicina
Gracias!!!