Lepra PPT Clase de Laboratorio

LEPRA
Maria Luisa Ramirez y Marlen Carrillo Hernández

ESTUDIOBACTERIOLOGICO
✓ Se define como Baciloscopia al examen directo de material extraído de
líquido intersticial o piel que se tiñe por la técnica de Ziehl Neelsen con el
fin de visualizar los Bacilos Ácidos Alcohol Resistentes (BAAR).
✓ Aprovechando la propiedad de las micobacteria y del M. leprae de:
➢ Formar un complejo entre el colorante básico y los ácidos micólicos

presentes en la pared bacteriana.
➢ Formar un complejo entre el RNA ribosomal de la

•
micobacteria y el colorante básico
.
➢ La impermeabilidad de la pared celular bacter iana, una vez
ocurrida la interacción ent re el colorante y los ácidos micólicos,
impiden la salida de los complejos formados en el citoplasma
bacteriano
INDICACIONES PARA
LA TOMA DE LA BACILOSCOPIA
Si al examen clínico se tiene como impresión diagnostica lepra:
•
➢ se debe proceder a la toma de la muestra de líquido intersticial, para realizar la
baciloscopia con el fin de clasificar el caso:
✓ Multibacilar si el resultado del examen es positivo (índice bacilar >0)
✓ Paucibacilar si el resultado del examen es negativo (Índice bacilar =0)
un examen con índice bacilar

igual a cero (0) no descarta el
diagnóstico de lepra, en este caso
se debe realizar una biopsia de
piel
INSTRUCCIONES PRELIMINARES A
LA TOMA DE MUESTRA
A F L
1 •
La solicitud del examen, debe ser 2

3 3
2
completa y contener todos los 4 4
J '-
datos del paciente, además debe 5
/\ 5
acompañarse del esquema 6 6
corporal donde el médico deberá 7 7
señalar los sitios en los cuales se 8 8
van a tomar las muestras. 9 9
10 10
A 8 O E F G K L
Figura 1. Esquema corporal para señalar los sitios de las

lesiones para toma de muestras
INSTRUCCIONES
PRELIMINARES A
LA TOMA DE MUESTRA
Se debe tomar muestras de linfa de seis sitios.

✓ 2 lóbulos de las orejas
✓ Codo derecho y Codo Izquierdo
✓ 2 lesiones activas diferentes,
En caso de no existir lesiones se

deben reemplazar por muestras
de los codos.
PROCEDIMIENTO DE TOMA DE
MUESTRA
Para lograr una mejor isquemia se puede frotar el sitio utilizando un
escobillón seco, siempre en una misma dirección, hasta que la zona quede
completamente pálida, garantizando la ausencia de sangre en la muestra
para facilitar la lectura.
Fotografía tomada del manual de Federico lleras

• En todas estas muestras, codos, lóbulos de las orejas y lesiones, se debe extraer líquido intersticial, rico
en macrófagos, que contienen los bacilos.
• Si las lesiones son planas se debe recolectar la muestra del borde interno, si son eritematosas tomar la
muestra del centro.
• No se debe tomar muestra de lesiones abiertas debido que estas siempre tienen sobreinfección,
tampoco se recomienda de la cara
Fotografía tomada del manual de Federico lleras
https://www.youtube.com/watch?v=GcUAB8pdgmQ
DISTRIBUCIÓN DE LAS MUESTRAS DE LÍQUIDO
INTERSTICIAL EN LA LÁMINA PORTAOBJETOS.
PROCESO DE COLORACION
1. Preparar las láminas a colorear y un control positivo y uno negativo por cada grupo de láminas a
ser coloreadas.
2. Fijar las láminas al calor, pasándolas por la llama tres a cuatro veces sin quemar las muestras .
3. Colocar las láminas sobre un puente de coloración con la marca hacia el operador
4. Dejar enfriar las laminas

5. Cubrir cada una de las láminas con fucsina fenicada previamente filtrada.
6. Calentar la lámina flameando con llama directa, hasta obtener la emisión de

vapores sin dejar hervir el colorante; retirando la llama algunos instantes pero
siempre manteniendo la emisión de vapores, este procedimiento se debe realizar
durante 10 minutos.
7. Dejar enfriar la lámina por 5 minutos y descartar la fucsina.
8. Lavar con agua a baja presión dejando caer el agua desde la parte de la
lámina que no tiene la muestra, cuidando de no perder la marca como referente
de orientación de la posición adecuada de la lámina.
9. Cubrir la lamina con alcohol acido al 3% durante 5 minutos repitiendo este paso las veces
que sea necesario, dependiendo del grosor del frotis, hasta lograr la total decoloración.
10. Lavar nuevamente con agua.
11. Cubrir la lámina con azul de metileno de Loeffler(colorante de contraste)

por un tiempo mínimo 3 minutos.
12.Lavar nuevamente con agua.
13. Limpiar la cara posterior de cada lámina con una gasa, cuidando de
que no se limpie la cara de la lámina que tiene la muestra.
14. Dejar secar a temperatura ambiente.

LECTURA MICROSCOPICA
Se realizara la lectura de cada una de los laminas, para lo cual se coloca
sobre cada muestra una gota de aceite de inmersión y con el objetivo de
100x se inicia la lectura, examinando cada muestra en forma de zig-zag iniciando
en la parte superior
El informe bacteriológico deberá

incluirtanto el número de cruces en cada u na
de las muestras examinadas, como el
resultado del índice bacilar calculado.
TÉCNICA SEMI-CUANTITATIVA
Se debe reportar en simbolos no en números

NOTA: La presencia de globias en cualquier muestra indica una gran cantidad de bacilos, por
lo cual se le adjudicarán (+++) tres cruces
Las muestra de moco nasal no se recomienda, porque su toma es molesta, las

Micobacterias no tuberculosas que no son patógenas se encuentran, generalmente, en la
nariz de sujetos saludables y, durante el curso del tratamiento, Mycobacterium leprae
puede desaparecer de la mucosa nasal antes que de las lesiones cutáneas.
Escala de logarítmica de Ridley
Porque se debe utilizar la Escala logarítmica de Ridley
1. Evaluar tendencias de cargas bacilares
2.. Compar ació n con los demás países desde el punt o epidemiológico
3. Para acogerse a los lineamientos internacionales
4. Seguimiento de pacientes en tratamiento
5. Es un examen que apoya la clasificación de las recidivas

TÉCNICA MEDIANTE LA ESCALA LOGARITMICA DE
RIDLEY
In d ic e b a c ila r ( 1 B ) p o r la e s c a la lo g a r ít m ic a d e R id le y
EL índice bacilar (IB) corresponde al promedio aritmético de número de cruces obtenidas de

cada uno de los sitios examinados y se informa en números arábigos.
El rango oscila entre O a 6.
Estimación de bacilos por globias
1 globia grande tiene aproximadamente 10 00 BAA R
1 globia mediana tiene aproximadamente 600 BAA R
1globia pequeña tiene aproximadamente 300 BAAR

Grafica del 1B por la escala
logarítmica de Ridley
CALCULO DEL INDICE BACILAR
La clasificación bacteriológica operativa será entonces

• MULTIBACILAR (MB}: 1B mayor de cero (>O}.
• PAUCIBACILAR (PB}: 1B igual a cero (=O}
El informe bacteriológico deberá incluir tanto el número de cruces en cada una de las
muestras examinadas, como el resulta del índice bacilar calculado.
Calcular el índice bacilar {1B) del pacient e, haciendo un promedio del número de cruces
obtenido del número de frotis examinados, y realizar el registro del resultado en el
formato de resultados de baciloscopias, informándolo en númeroarábigos.
Ejemplo:
• Lóbulo de la oreja derecha: 1+
• Lóbulo de la oreja izquierda: 2+
• Lesiónl: 3+
• Lesión2: 3+
• Lesión3: 2+
• Lesión4: 2+
Sumatoria: 13
1B = 1 +- 2-+ -3 +- 3- +-2 -+ -2 2.1

6
CRITERIOS DE DIAGNOSTICO
~ Universidad LA CALIDAD
~~~ de Santa
,.., , J. u,,f 1 0 d e1VOl.'H" " ".EdtlcK
-----======::::::::
\1Gll,\DA_MINEDlTAC'IOJ,;
ENFERMEDAD DE HANSEN-LEPRA
CLASIFICACIÓN
Clasificación Espectro
Ridley-Jopling TT DT DD DL LL
(1962)
Mad:rid Tuberculoide Dimorfa Lepromatosa

(1962)
Paucibacila:r Multibacilar
~ Universidad LACALIDAD
~~~ de Santa
,.., , J. u,,f 1 0 d e1VOl.'H" " ".EdtlcK
-----======::::::::
\1Gll,\DA_MINEDlTAC'IOJ,;
✓ La enfermedad de Hansen es causada por los bacilos Mycobacterium leprae, y Mycobacterium
lepromatosis (en adelante, “M.” como abreviatura de género “Mycobacterium”).
✓ El M. leprae pertenece a la clase Actinomycetales, orden Mycobacteriales, familia Mycobacteriacea.
Es aerobio, inmóvil, no esporulado, su membrana plasmática es conformada por proteínas, glicolípido

fenólico, arabinoglicanos, peptidoglicanos y ácidos micólicos; estos últimos responsables de su ácido
alcohol resistencia .
✓ El M. leprae se caracteriza por no ser cultivable en medios artificiales debido a su reducido genoma y
efectos derivados en su metabolismo

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✓ Aprovechando la propiedad de las micobacteria y del M. leprae de:

➢ Formar un complejo entre el colorante básico y los ácidos micólicos

➢ Formar un complejo entre el RNA ribosomal de la

un examen con índice bacilar

La solicitud del examen, debe ser 2

completa y contener todos los 4 4

acompañarse del esquema 6 6

corporal donde el médico deberá 7 7

señalar los sitios en los cuales se 8 8

van a tomar las muestras. 9 9

Figura 1. Esquema corporal para señalar los sitios de las

Se debe tomar muestras de linfa de seis sitios.

En caso de no existir lesiones se

Fotografía tomada del manual de Federico lleras

Fotografía tomada del manual de Federico lleras

4. Dejar enfriar las laminas

6. Calentar la lámina flameando con llama directa, hasta obtener la emisión de

7. Dejar enfriar la lámina por 5 minutos y descartar la fucsina.

10. Lavar nuevamente con agua.

11. Cubrir la lámina con azul de metileno de Loeffler(colorante de contraste)

14. Dejar secar a temperatura ambiente.

El informe bacteriológico deberá

Se debe reportar en simbolos no en números

Las muestra de moco nasal no se recomienda, porque su toma es molesta, las

1. Evaluar tendencias de cargas bacilares

5. Es un examen que apoya la clasificación de las recidivas

EL índice bacilar (IB) corresponde al promedio aritmético de número de cruces obtenidas de

El rango oscila entre O a 6.

Estimación de bacilos por globias

1 globia grande tiene aproximadamente 10 00 BAA R

1 globia mediana tiene aproximadamente 600 BAA R

1globia pequeña tiene aproximadamente 300 BAAR

La clasificación bacteriológica operativa será entonces

1B = 1 +- 2-+ -3 +- 3- +-2 -+ -2 2.1

Mad:rid Tuberculoide Dimorfa Lepromatosa

✓ El M. leprae pertenece a la clase Actinomycetales, orden Mycobacteriales, familia Mycobacteriacea.

Es aerobio, inmóvil, no esporulado, su membrana plasmática es conformada por proteínas, glicolípido

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