Manual de Microbiología 2021
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Manual de Microbiología 2021
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
4° CUATRIMESTRE
_____ PARCIAL
GRUPO: _______
FECHA: ________________
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Microbiología
UNIVERSIDAD TECNOLOGICA DE SAN JUAN DEL RIO
CONTENIDO:
9. Norma NOM-086-SSA1-1994
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Microbiología
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2.- No se permitirá la entrada al laboratorio al alumno que llegue 5 minutos tarde después de la
hora de entrada.
3.- Absolutamente prohibido: fumar, beber agua, comer y en general llevar las cosas a la boca
dentro del laboratorio.
4.-No debe poner ropa o libros sobre la mesa de trabajo; todos los objetos personales deberán
ser guardados en los cajones de la misma mesa.
5.- No guardar material de laboratorio (cultivo microbiano) en las bolsas de las batas.
6.- El alumno deberá estar provisto del material personal asignado o de lo contrario no podrá
permanecer en el laboratorio.
7.- Debe evitarse entablar conversaciones, así como comunicarse a voces con los vecinos de otras
mesas.
8.- Todo material no contaminado, tal como: algodón, papeles, cerillos etc... Deberán ser
depositados en los botes de basura destinados para este uso. No se debe tirar basura en el suelo,
ni guardarla en los cajones, ni tirarla en los vertederos.
9.-Tendrá que desinfectar con solución HIPOCLORITO DE SODIO a 200 ppm (1ml de cloro en 500
de agua) la mesa de trabajo ANTES de empezar y al TERMINAR la práctica.
10.- En caso de romper o derramar el material contaminado, debe verterse Hipoclorito a 200
ppm dejándolo actual 10 min antes de limpiar. Así como otro tipo de accidente personar avisar
al instructor o al profesor.
11.-El asa y la porta-asa deberán ser esterilizadas a la flama antes y después de utilizarlos.
Calentar el asa vertical o diagonal (no horizontalmente). Si está cubierta de algún material,
séquese al lado de la flama antes de esterilizarla para evitar el chisporroteo del material y su
diseminación.
12.-Incubar el material el tiempo que se indique, en caso contrario, este será desechado.
13.- Al finalizar la práctica entregar el material empleado debidamente separado: material sucio
que contenga a esterilizar, quitarle las etiquetas, material sucio para lavar, colocar en otro sitio;
reactivos debidamente ordenados y cerrados, comprobar que las llaves del gas y del agua estén
cerradas antes de salir del laboratorio.
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6.- RESULTADOS
7.- CUESTIONARIO
9.- BIBLIOGRAFIA
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PRÁCTICA # 1
Preparación del material de laboratorio.
OBJETIVO:
El objetivo de esta práctica es conocer la preparación del material de laboratorio, así como
algunos métodos de esterilización y los cuidados de los materiales.
INTRODUCCIÓN:
La preparación del material del laboratorio se inicia desde el momento en que se colectan los
recipientes o utensilios conteniendo substancias de un estudio ya realizado, estos deberán
esterilizarse y lavarse, posteriormente se secan, se tapan y s envuelven adecuadamente para
ser esterilizados al horno o al autoclave.
Los materiales que con más frecuencia se utilizan en el trabajo rutinario son: cajas de Petri,
tubos de ensaye, matraces, pipetas, etc.,.
MATERIAL:
Pipetas volumétricas.
Papel de estraza
Gasa.
Algodón.
Autoclave
Cinta testigo
Perilla
Colorante
PROCEDIMIENTO:
Autoclave:
8.- Esperar que salga todo el aire de la cámara hasta que sea constante el vapor.
11- Cambiar la perilla del termostato a MED para mantener esta presión, durante 15 min.
12. – Concluido el tiempo la perilla se mueve a DESC. Y se espera a que la presión llegue a 0
para abrir la válvula de escape.
METODO:
El material de cristalería que se utiliza son cajas de petri, Tubos de Ensaye, Matraces
Erlenmeyer, Pipetas volumétricas y tapones, otros materiales utilizados son el algodón y las
gasas.
Tendrá que ser lavado con agua destilada antes de cualquier práctica en el laboratorio de
microbiología
CAJAS DE PETRI.
Para cubrir la caja de petri con papel, se coloca con la tapa hacia abajo y los dobleces se hacen
de manera que permita dejar un espacio para rotular al frente dela caja. Para el manejo de
la caja cuando aún no está cubierta por el papel se maneja con la mano izquierda
únicamente.
PIPETAS.
GORRITOS.
Los gorritos se hacen a la medida del bote. El gorrito se hace con la finalidad de
proteger el bote que contiene los tubos y se deja un espacio para rotular el gorrito.
TAPONES.
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Los tapones se hacen de algodón o de gasa a la medida del tubo de ensaye, el matraz ó las pipetas
no les deben quedar ni muy apretadas ni muy flojas. El tapón se maneja con el dedo meñique de
la mano izquierda.
TECNICA DE DILUCIONES
1. ¿Qué es la Esterilización?
CONCLUSIONES.
BIBLIOGRAFIA.
MSD
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PRÁCTICA # 2
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO PARA MICROBIOLOGIA.
OBJETIVO:
INTRODUCCIÓN
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MATERIAL Autoclave
Cinta testigo
Potenciómetro
Tubos de ensaye con tapón
Buffer pH 4, 7, 10
2 Mecheros
2 matraz Erlenmeyer (250ml) REACTIVOS
1 probeta de 100ml
Agua destilada
Balanza granataria
Caldo lactosado
2 Tubos de ensayo medianos
Solución de hipoclorito de sodio al
1 Pipeta graduada de 10ml.
200 ppm
2 Pipeta graduada de 1ml.
Agar métodos estándar
1 Probeta de 100ml.
Solución salina al 0.9%
1 Frasco de dilución
Agua destilada
1 Balanza granataría
Agar Sal y manitol
Campana Durham
Agar MIO,
Algodón
Agar TSI
Papel de estraza
Agar Nutritivo
Balanza granataria
Agar Salmonella o TCBS
Parrilla
Caldo de infusión cerebro corazón
Espátula
PROCEDIMIENTO
3) Colocar en el matraz EM y se la mitad de agua destilada, de acuerdo a los ml que sean cada
tipo de medio.
4) Pesar el medio de cultivo, vaciar en el matraz, agitar vigorosamente y después agregar la otra
parte del agua destilada, seguir mezclando.
5) Colocar el medio (si así lo indica la etiqueta) a la parrilla a calentar a ebullición; se quita de la
parrilla cuando comienza a hervir y se deja enfriar un poco, para medir pH.
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RESULTADOS
Realizar un diagrama de flujo de la preparación de los medios de cultivos de cada una de las
técnicas usadas .Menciona cuales serían los puntos críticos en la preparación.
CUESTIONARIO
1.- ¿Qué norma mexicana nos indica el procedimiento para la realización de medios de cultivo?
3.- ¿Cuántos tipos de medio de cultivo existen menciona un ejemplo de cada uno de ellos?
OBSERVACIONES
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFIA
MSD
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PRÁCTICA # 3
REVISIÓN DE TECNICAS MÁS USADAS EN MICROBIOLOGÍA (3 horas)
OBJETIVO:
Que el alumno recuerde o aprenda las técnicas que más frecuentemente serán utilizadas
en el presente curso.
MATERIAL REACTIVOS
PROCEDIMIENTO
1. Realizar diluciones de muestras alimenticias en frascos y tubo con solución salina estéril
al 0.9% de un producto farmacéutico o alimento a realizar.
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6. Observación y lectura de las placas y tubos después de ser inoculados a 36°C 24 horas.
RESULTADOS
Realizar una tabla donde expliques cada una de las colonias su morfología, borde y
características de elevación, el número.
Del alimento contar todas las colonias, y revisar la norma o la FEUM si está bien o no.
CUESTIONARIO
1) ¿Por qué es posible aislar microorganismos por las técnicas de dilución y siempre en placas?
Si usted tiene una población homogénea de 105 microorganismos/ml en la muestra original
¿Cuántas colonias espera encontrar en una placa sembrada con 1 ml de la dilución 10-3, después
de haber incubado el tiempo y las condiciones adecuadas?
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OBSERVACIONES
CONCLUSIONES
BIBLIOGRAFIA
MSD.
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PRACTICA No. 4
OBJETIVO:
Observar cómo actúa el colorante de Gram en los microorganismos ya que el más empleado en
bacteriología, ya que los microorganismos. Se clasifican de acuerdo a como actúen con este
colorante.
INTRODUCCION:
Un MIO. Gram (+) debe presentar una pared celular sana. El mismo MiO. Si sufre daño a la pared
por una u otra causa, se vuelve Gram (-). Esto indica la importancia de la pared para la retención
o el escape del colorante. Una posible teoría del mecanismo de tinción es la siguiente:
El colorante básico entra al M.O. donde forma con el yodo una laca insoluble agua. El alcohol o
la cetona empleados para aclarar, deshidrata las paredes de los MIO. Gram (+), tratados con
mordientes, y forman una barrera de la laca que no pueden atravesar.
En las células Gram (-), los lípidos de la pared celular (más abundante en las células Gram (+), se
disuelve por este tratamiento, lo que permite el escape del complejo de cristal de violeta con
yodo. Algunos autores objetan esta teoría, pero es indudable la importancia general de la pared
celular.
Las micobacterias son difíciles de teñir ya que tienen cubierta cérea y deben emplearse métodos
especiales. Así como son difíciles de teñir, estos M.O. una vez teñidos, son difíciles de colorear.
Este hecho es considerado para propósito de diagnóstico.
El GRAM, es la coloración más importante para bacterias. Fue ideada por Hans Christian Gram en
1884. Permite distinguir entre barias especies de bacterias que pueden presentar morfología
colonial similar.
Cuando las bacterias retienen la combinación Cristal violeta-lodo y se tiñen de violeta, son
bacterias Gram positivas; las bacterias que se tiñen de rojo por la Safranina son Gram Negativas.
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Las células bacterianas Gram Positivas se les adhiere el Cristal Violeta, porque hay disminución
de la permeabilidad de la pared Celular causada por el efecto deshidratante del Alcohol; mientras
que las Gram negativas, el complejo sale por el aumento de la permeabilidad causada por la
solubilidad de los lípidos de la Pared Celular al alcohol.
MATERIAL:
Asa.
Mechero.
Microscopio.
Cinta adhesiva
PROCEDIMIENTO:
Tinción Gram
1.- Preparar un frotis delgado de un cultivo de Escherichia Coli, secar a temperatura ambiente y
fijar al calor.
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3.- Lavar.
5.- Lavar.
9.- Lavar
11.- Haga otro frotis con Escherichia coli, y de Sacaromises Sereviseae. Y reporte el siguiente
cuadro:
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CUESTIONARIO:
1.- ¿Podría sustituir el colorante primario por algún otro colorante? ¿Por qué?
5.- ¿Qué sucedería si agregara el colorante secundario más concentrado o por un tiempo más
prolongado?
CONCLUSIONES.
BIBLIOGRAFIA.
MSD.
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PRACTICA #5
OBJETIVO:
Sugiere uno.
MATERIAL
Cajas petri
Tubos de ensayo medianos
Hisopos estériles
Regla
Incubadora 35 ªC
Brotes
15 círculos de papel filtro de 1 cm de diámetro.
REACTIVOS
PROCEDIMIENTO
b.- Transferencia
c.- Resiembra
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Humedecer un hisopo estéril en el tubo con BHI que contenga el inoculo, rodándolo
varias veces en el mismo tubo para quitar el exceso de líquido.
d.- Inoculación
e.- Incubar.
f.- Leer
RESULTADOS:
CUESTIONARIOS:
CONCLUSIONES.
BIBLIOGRAFIA
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