Tincion diferencial: Tincion de Gram en la bacterias;

Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus,

Streptococcus pneumoniae y Escherichia coli

BIOLOGÍA CELULAR
Docente: Laura Pulido Rios
FECHA
AUTORES: Felipe Barrantes y Valeria Dominguez
 Tincion diferencial: Tincion de Gram
en la bacterias; Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae y Escherichia coli

INTRODUCCIÓN

OBJETIVOS
• Identificar la morfologia bacteriana de Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus
aureus, Streptococcus pneumoniae y Escherichia coli
• Identificar la caracteristicas de presentes de una gram negativa y de una gram
positiva y sus diferencias en la membrana plasmatica
• Comprender el fundamento de un tincion diferencial en este caso la tincion de
gram y como se comporta para la carectizacion de las bacterias

Las bacterias son un grupo diverso de microorganismos unicelulares, procariotas, que se

pueden encontrar prácticamente en cualquier ambiente: suelos, aguas, aire, y como
simbiontes, parásitos, o patógenos del hombre, otros animales y plantas. Son los
organismos más pequeños que contienen toda la maquinaria requerida para su
crecimiento y autorreplicación a expensas del material alimenticio.

Para identificar y clasificar los microorganismos presentes en nuestra muestra podemos

realizar observaciones in vivo o bien utilizar técnicas auxiliares, como son la fijación y la
tinción. Estas últimas serán útiles cuando el material a observar sea necesario conservarlo
durante algún tiempo, o simplemente para poner de manifiesto estructuras difícilmente
observables in vivo. Esto lo conseguimos mediante reacciones químicas realizadas sobre
los microorganismos muertos que nos permitirán apreciar diferencias que nos ayudarán
a clasificar e identificar los microorganismos.

La tincion de Gram es definida como una tinción diferencial, ya que utiliza dos colorantes
y clasifica a las bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias
Gram positivas. Los principios de la tinción de Gram están basados en las características
de la pared celular de las bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada
microorganismo. La pared celular de las bacterias Gram negativas está constituida por
una capa fina de peptidoglicano y una membrana celular externa, mientras que las
bacterias Gram positivas poseen una pared celular gruesa constituida por peptidoglicano,
pero no cuentan con membrana celular externa; así pues, la composición química y el
contenido de peptidoglicano en la pared celular de las bacterias Gram negativas y Gram
positivas explica y determina las características tintoriales. Con un fundamento de tinción
se basa en colocar como colorante primario cristal violeta, el cual tiene afinidad con el
peptidoglicano de la pared bacteriana. Posteriormente, se coloca Lugol, el cual sirve como
mordiente e impide la salida del cristal violeta por la formación de un complejo cristal
violeta yodo que satura los espacios del peptidoglicano de la pared bacteriana. En
seguida, se coloca una mezcla de alcohol-acetona, la cual deshidrata la pared bacteriana
y cierra los poros de esta, también destruye la membrana externa de las bacterias Gram
negativas debido a que ésta es soluble a la acción de solventes orgánicos.

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MÉTODO

Figura.1. Diagrama de flujo. Procedimiento tinción diferencial: Tinción de Gram

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RESULTADOS Y ANÁLISIS
Al aplicar la tincion diferecial de Gram en las 4 muetras de bacterias: Klebsiella
pneumoniae, Staphylococcus aureus, Streptococcus pneumoniae y Escherichia coli, se
tenira de dos colores: morado son gram positivas y rosado o rojo son gram negativas, esto
por su diferencia en la membrana plasmatica la composición química y el contenido de
peptidoglicano en la pared celular por su fundamento de colorante cristal violeta, lugol,
alcohol y fuscina.

Morfología bacteriana:
Se caracteriza por poseer bacilos Gram
negativos, no esporulante, producción de
indol a partir de triptófano, no utilización de
citrato como fuente de carbono y no
producción de acetoína. Además, fermenta la
glucosa y la lactosa con producción de gas.
No forma esporas, móviles (flagelos
perítricos), miden 0.5 µ de ancho por 3 µ de
largo, catalasa positivos, oxidasa negativos.

Figura.2. Muestra E. Coli. Tincion de Gram. 100x

Morfología bacteriana
Es una cocácea gram positiva, capsulada, las
células bacterianas tienen una forma
lanceolada, se disponen en pares o diplos, la
pared bacteriana tiene la estructura general
de las cocáceas, con una capa de
peptidoglicano constituida por subunidades
de acetil-glucosamina y ácido acetil
murámico enlazadas por puentes peptídicos.
El ácido teicoico se dispone de dos formas en
la pared celular, una expuesta en la superficie
celular y otra forma unida en forma covalente
a los lípidos de la membrana citoplasmática.
Streptococcus pneumoniae pertenece a la
familia Streptococcaceae. Es una bacteria
Gram positiva, normalmente anaerobia
facultativa, catalasa negativa, inmóvil, con
forma ovalada, rodeada de una cápsula y se
Figura.3. Muestra Streptococcus pneumoniae. Tincion de Gram. 100x suele agrupar formando cadenas de dos
(diplococos) o más bacterias.
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Morfología bacteriana:
Las colonias de estafilococos en medios
ordinarios son pardo doradas, blancas,
amarillas o rosas, opacas, copuladas Se trata
de cocos de gram positivos que poseen
tendencias a agruparse en racimos. Este se
divide en tres planos para formar grupos de
células irregulares semejantes a racimos de
uvas. Pertenece a la familia
Staphylococcaceae. Es Gram positivo,
aunque las cepas viejas o los
microorganismos fagocitados se tiñen como
Gram negativo. Tiene forma de coco y
puede aparecer en parejas, en cadenas o en
racimos.

Figura.4. Muestra Staphylococcus aureus. Tincion de Gram. 100x

Morfología bacteriana:
Esta es una especie gram negativa
perteneciente a la familia
Enterobacteriaceae, Es un bacilo
característico por la fermentación de
azúcares por eso un agar ideal para este es el
Maki, en pruebas TSI su resultado es A/A+-
, él dentro de la figura 5 podemos evidenciar
grandes agrupaciones y cantidades de
manchas con zonas más rosadas qué otras
enunciando la presencia de esta bacteria,
aun así puede haber en esta práctica un mal
manejo no óptimo de esta tensión

Figura.5. Muestra Klebsiella pnueumonia. Tincion de Gram. 100x

¿Por qué es una bacteria Gram positiva?

Se puede visualizar que la muestra presenta una coloración de color purpura en tonalidad fuerte,
esto se debe por la retención de la tinción de cristal violeta en la capa gruesa de peptidoglicano
en la pared celular y membrana citoplasmáticas. El cristal violeta atraviesa la envoltura celular
y se retiene en el citoplasma. La diferenciación de mezcla, Lugol con cristal violeta: es su
precipitación. Así el Lugol dificulta la salida del cristal violeta de ambos tipos de células y queda
con la coloración púrpura dando como resultado el obtenido en la figura 4 y 5.

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¿Por qué es una bacteria Gram negativa?

Se puede visualizar que la muestra presenta una coloración de color rosado en tonalidad fuerte,
esto por el fundamento de fucsia, su pared celular está formada por dos membranas lipídicas,
una interna (citoplasmática) y otra externa con un espacio entre ellas que se denomina espacio
periplasmatico en este espacio se encuentra el peptidoglicano, el cristal violeta, el cual tiene
afinidad con el peptidoglicano de la pared bacteriana. Posteriormente, se coloca Lugol, el cual
sirve como mordiente e impide la salida del cristal violeta por la formación de un complejo cristal
violeta yodo que satura los espacios del peptidoglicano de la pared bacteriana. En seguida, se
coloca una mezcla de alcohol-acetona, la cual deshidrata la pared bacteriana y cierra los poros
de esta, también destruye la membrana externa de las bacterias Gram negativas debido a que
ésta es soluble a la acción de solventes orgánicos, como la mezcla de alcohol. las Gram negativas
no lo pueden retener por tener menos cantidad de peptidoglicano. Por último, se coloca
safranina, la cual funciona como un colorante secundario o de contra tinción y sirve para teñir
las bacterias que no pudieron retener el complejo cristal violeta-yodo.

CONCLUSIONES
Se puede concluir que las bacterias gram positivas presentan las siguientes características
diferenciadoras a las gram negativas que son: más mureína, una pared celular
monoestratificada y presencia de ácidos teicoicos o una capa gruesa de peptidoglicanos
en la pared celular y en la membrana citoplasmática.

Se puede concluir que en las bacterias gram positivas el fundamento de la tinción de gram
se presenta su identificación en una coloración de tonalidad púrpura por la retención del
cristal violeta atraviesa la membrana plasmática y se retiene en el citoplasma el lugol
dificulta la salida de este precipitando, impidiendo y reteniendo el color dando un
resultado de gram positiva. Pasando lo contrario en gram negativas el alcohol ocasiona
extrae el cristal violeta de la bacteria y su membrana y citoplasma quedan incoloros
quedando una totanidad de color rosado que es la safranina dando como resultado de
gram negativa.

Se puede concluir que la bacteria Streptococcus pneumoniae presenta un morfología de

cocácea gram positiva, tienen una forma lanceolada, catalasa negativa, inmóvil, con
forma ovalada, rodeada de una cápsula y se suele agrupar formando cadenas de dos
(diplococos)

Se puede concluir que la bacteria Klebsiella pnueumonia presenta gram negativa

perteneciente a la familia Enterobacteriaceae, Es un bacilo característico por la
fermentación de azúcar.

Se puede concluir que la bacteria Staphylococcus aureus Las colonias de estafilococos en

medios ordinarios. Se trata de cocos de gram positivos que poseen tendencias a agruparse

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en racimos. Este se divide en tres planos para formar grupos de células irregulares
semejantes a racimos de uvas. Pertenece a la familia Staphylococcaceae.

Se puede concluir que la bacteria Escherichia coli se caracteriza por poseer bacilos Gram
negativos, no esporulante, móviles (flagelos perítricos), miden 0.5 µ de ancho por 3 µ de
largo, catalasa positivos, oxidasa negativos.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Preado, V. (2001). Conceptos microbiológicos de Streptococcus pneumoniae.

https://www.scielo.cl/. https://www.scielo.cl/scielo.php?pid=S0716-
10182001000000002&script=sci_arttext
Bacteria Gram positiva. (s. f.). https://www.quimica.es/. Recuperado 6 de octubre de
2021, de https://www.quimica.es/enciclopedia/Bacteria_Gram_positiva.html
Tinción de Gram. (s. f.). 2.ulpgc.es. Recuperado 6 de octubre de 2021, de
https://www2.ulpgc.es/hege/almacen/download/35/35696/tincion_de_gram.pdf
Pírez, M., & Mota, M. (s. f.). Morfología y estructura bacteriana.
http://www.higiene.edu.uy. Recuperado 12 de octubre de 2021, de
http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/MorfologiayEstructuraBacteriana.pdf
Laboratorio de Infectología, Centro Nacional de Investigación y Atención a Quemados
(CENIAQ), & I.N.R. (2013). Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología.
https://www.medigraphic.com/. https://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-
2014/ir141b.pdf

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