Este documento presenta las técnicas de tinción de Gram, Wright, Ziehl-Neelsen, Giemsa y tinción de reticulocitos. Describe los pasos, materiales y resultados de cada técnica de tinción para observar bacterias, glóbulos blancos y reticulocitos al microscopio.
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Este documento presenta las técnicas de tinción de Gram, Wright, Ziehl-Neelsen, Giemsa y tinción de reticulocitos. Describe los pasos, materiales y resultados de cada técnica de tinción para observar bacterias, glóbulos blancos y reticulocitos al microscopio.
Este documento presenta las técnicas de tinción de Gram, Wright, Ziehl-Neelsen, Giemsa y tinción de reticulocitos. Describe los pasos, materiales y resultados de cada técnica de tinción para observar bacterias, glóbulos blancos y reticulocitos al microscopio.
Este documento presenta las técnicas de tinción de Gram, Wright, Ziehl-Neelsen, Giemsa y tinción de reticulocitos. Describe los pasos, materiales y resultados de cada técnica de tinción para observar bacterias, glóbulos blancos y reticulocitos al microscopio.
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COLORACIÓN GRAM
Cubrir la preparación (previamente realizada) con colorante cristal violeta por un tiempo de 1 minuto, enjuagar a chorro de agua.
Colocar en la preparación Lugol por el tiempo de 1 minuto, enjuagar.
Agregar alcohol- acetona y enjuagar inmediatamente (decoloración).
Añadir Safranina a la preparación por el tiempo de 1 minuto, enjuagar a chorro de agua.
WRIGHT. https://edulabc.com.mx/tincion-de-wright/
Técnica
Llenar de agua la cubeta para que los colorantes no se peguen al fondo.
Colocar las varillas paralelas sobre los bordes de la cubeta.
Colocar las extensiones sanguíneas sobre las varillas paralelas.
Cubrir las extensiones con un volumen conocido de solución de Wright durante dos minutos. Se producirá la fijación de la extensión.
Añadir el mismo volumen de agua destilada, soplando ligeramente con la pipeta para homogeneizar la mezcla, durante 3-4 minutos. Se producirá la tinción de la extensión.
Lavar los frotis teñidos con agua destilada hasta eliminar los restos de colorante.
Secar las extensiones al aire.
Observar las preparaciones al microscopio óptico para comprobar la calidad de la tinción.
Material
Frotis sanguíneo seco y rotulado.
Cubeta.
Varillas paralelas.
Frasco lavador con agua destilada.
Pipetas pasteur.
Cronómetro
Glóbulos blancos teñidos con colorante de Wright:
1. Realizar un frotis bacteriano de la cepa de mycobacterium phlei y fijar la extensión con
calor.
2. Añadir el primer colorante: Carbofucsina.
3. Se pasa por el mechero varias veces, durante cinco minutos, sin permitir que hierva el colorante. 4. Decantar y lavar con agua destilada el exceso de colorante.
5. Decolorar con alcohol/ácido hasta que la muestra tenga un color rosado.
6. Lavar con agua destilada.
7. Teñir con el colorante azul de metileno durante un minuto.
8. Lavar con agua destilada hasta retirar el exceso de colorante.
9. Secar la extensión al aire.
10. Observar al microscopio óptico y anotar los resultados.
Material Frotis sanguíneo seco y rotulado. Cubeta. Varillas paralelas. Frasco lavador con agua destilada. Pipetas pasteur. Cronómetro.
Técnica
1. Llenar de agua la cubeta para que los colorantes no se peguen al fondo.
2. Colocar las varillas paralelas sobre los bordes de la cubeta.
3. Colocar las extensiones sanguíneas sobre las varillas paralelas.
4. Cubrir las extensiones con metanol y esperar 4-5 minutos.
5. Decantar para eliminar el metanol.
6. Cubrir las extensiones con solución extemporánea de Giemsa recién diluída a 1/10 (1 gota de Giemsa por 9 gotas de agua destilada) y dejar actuar durante 25 minutos.
7. Lavar las extensiones con agua destilada para eliminar los restos de colorante.
8. Secar las extensiones al aire, colocas en vertical.
9. Observar los frotis sanguíneos teñidos al microscopio óptico.
Resultados
Filtrando el colorante de Giemsa Fijando los frotis sanguíneos con metanol. Tubos con el colorante disuelto en proporción 1:9
Tiñendo las preparaciones mediante la técnica de inundación-decantación. Secando las extensiones sanguíneas una vez han sido teñidas y lavadas.
https://youtu.be/a9USx69i4KM
RETICULOCITOS Material Sangre anticoagulada con EDTA o, en su defecto, sangre capilar. Tubo de ensayo o tubo de hemólisis. Parafilm. Portaobjetos. Portaobjetos esmerilado. Pipetas pasteur. Colorante azul de cresil brillante (1 gramo de azul de cresil brillante y 100 ml de NaCl al 0.85%). Aceite de inmersión.
Microscopio. En caso de punción capilar hará falta guatis, alcohol de 70º y el contenedor de residuos biológicos.
Técnica 1. En un tubo de hemólisis debidamente rotulado, se mezclan tres gotas de sangre con tres gotas de colorante. 2. Mezclar suavemente, para evitar la hemólisis de los hematíes. 3. Dejar en reposo durante 15 minutos a temperatura ambiente. 4. Homogeneizar la mezcla. 5. Realizar una fina extensión sanguínea. 6. Rotular el portaobjetos. 7. Dejar secar al aire. 8. Realizar el recuento de reticulocitos utilizando el objetivo de inmersión del microscopio óptico. Aquí podemos apreciar a un compañero depositando tres gotas de sangre capilar, previa punción. Mezcla de sangre con el colorante azul de cresil brillante. Imagen captada durante el reposo de 15 minutos a temperatura ambiente.
En esta imagen vemos parte del material utilizado después del tiempo de reposo y de la creación de las extensiones sanguíneas. Imagen captada tras la realización de la extensión con la mezcla de sangre y colorante. En esta imagen podemos observar claramente un reticulocito. El campo observado está observado con el objetivo de inmersión de 100X (1000X de resolución). La imagen está aumentada utilizando el zoom óptico de la cámara con la que se tomó la imagen.
Dos reticulocitos observados al microscopio óptico con el objetivo de inmersión (1000X de
resolución). Esta imagen está ampliada digitalmente.
