Informe de Laboratorio Espectrofotometria.1

FACULTAD Informe de Práctica de Laboratorio
Laboratorio de análisis sensorial

DE CIENCIAS EXACTAS Y
NATURALES
Espectrofotometría
Ana María García Quintero
Manuel Gallego Londoño
Fecha de presentación 24/11/2021
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Resumen
La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite determinar la concentración de un compuesto en solución. Se
basa en que las moléculas absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida depende de forma
lineal de la concentración. Se realizaron análisis cualitativos y cuantitativos para los cuales se utilizó un espectrofotómetro; al realizar
el análisis cualitativo se determinó que la muestra es Sulfato de níquel con una longitud de onda de 390nm y el análisis cuantitativo
por medio de una curva de calibración determinó una concentración de 2,14% p/v.
Palabras Clave: Espectrofotometría; Barrido espectral; Longitud de onda; línea D del sodio; espectrofotómetro…
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1. Introducción b= longitud de la trayectoria de la luz a través de la

solución (cm)
El principio de la espectroscopía ultravioleta−visible
c=Concentración (mol/L)
involucra la absorción de radiación ultravioleta−visible por
una molécula, causando la promoción de un electrón de
un estado basal a un estado excitado; este estado Los métodos fotométricos se caracterizan por ser
depende del tipo de sustancia, de la influencia del medio confiables, tener amplio uso y ser de fácil manejo.
en el que se halle y de la energía que se le suministre. La Además, no solo sirven para calcular la cantidad de un
excitación corresponde a los electrones de enlace, por ello analito en una matriz, si no también se puede utilizar
los picos de absorción pueden correlacionarse con los para identificar sustancias de manera cualitativa {2}.
tipos de enlaces. Por este motivo, la espectroscopia
UV−visible es válida para identificar grupos funcionales en
una molécula. Las bandas que aparecen en un espectro Partes de un espectrofotómetro
UV−visible son anchas, ya que se superponen Un espectrofotómetro es un instrumento para medir la
transiciones vibracionales y electrónicas. Una radiación transmitancia o la absorbancia de una muestra en
tendrá un 100% de transmitancia si al pasar a través de función de la longitud de onda, también se pueden
una sustancia sale inalterada su intensidad, es decir, no realizar mediciones de una serie de muestras a una sola
es absorbida por la sustancia. Si la radiación puede ser longitud de onda {2}. Las partes esenciales de un
absorbida por la sustancia, el porcentaje transmitido espectrofotómetro son (figura 1):
disminuye en proporción logarítmica con la cantidad de
sustancia presente en la siguiente formula {1}.
A= - log T
La absorción de la luz por una sustancia en solución

puede describirse matemáticamente por la ley de Beer-
Figura 1. Esquema simple de un espectrofotómetro
Lambert: A=ξbc
A=Absorbancia a una longitud de onda específica

ξ=absortividad molar, única por cada molécula y varía
con la longitud de onda L cm-1 mol-1)
2. Procedimiento Experimental Analisis de indentificacion de muestra problema
1. Encender el equipo y esperar el tiempo prudencial Para medidas de absorbancia de una determinada
para que este se estabilice. sustancia a una longitud de onda, ξ y b son constantes,
2. Identificar y entender la función de cada una de las así que habrá una relación directa entre la absorbancia
partes del equipo. de una solución y la concentración de la sustancia
3. Llenar hasta las dos terceras partes una celda absorbente. Si se mide la absorbancia en función de la
apropiada, con el blanco fotométrico. concentración de moléculas absorbentes en
4. Llenar hasta las dos terceras partes una celda soluciones patrón, se puede construir una gráfica de la
apropiada, con la muestra a analizar. ley de Lambert-Beer, llamada también curva de
5. Llevar el selector de longitud de onda a 380 nm y leer calibración pasos:
la absorbancia tanto del blanco como de la
muestra a estudiar. 1. Encender el equipo y esperar el tiempo prudencial
6. Cambiar la longitud de onda, con un rango de para que este se estabilice.
variación apropiada, de tal manera que se lea la 2. Identificar y entender la función de cada una de las
absorbancia del blanco y de la muestras desde 380 nm partes del equipo.
hasta 1100 nm. 3. Preparar una solución estándar de concentración
7. Sacar las celdas, desocuparlas y lavarlas. conocida y volumen suficiente, para preparar a partir
8. Apagar el equipo y dejarlo en orden. de esta, los diferentes patrones de una curva de
calibración.
Observacion: si el espetrofotometro es de doble haz no 4. Seleccionar los parámetros con los cuáles realizará la
se requier tomar el blanco fotometrico ya que el mismo curva de calibración: longitud de onda,
instrumento lo tiene en cuenta a la hora de arrojar el dato temperatura, tiempo del ensayo, concentraciones.
de absorvancia. 5. Preparar 5 mL de cada uno de los diferentes patrones
a utilizar en la curva de calibración.
Analisis de datos obtenidos 6. Llenar hasta las dos terceras partes una celda
apropiada, con el blanco fotométrico.
Con los datos obtenidos arrojados por el instrumento se 7. Llenar hasta las dos terceras partes las celdas, con los
debe hace un grafico que relacione lingitud de onda λ(nm), diferentes patrones para construir la curva de
con absorvancia (ABS) obtenida, esto con el fin de calibración.
compararla con graficas de la literatura para identificar la 8. Leer la absorbancia de los patrones.
muestra problema. 9. Llenar hasta las dos terceras partes una celda, con la
muestra problema.
Además y para complementar el trabajo, en uno de los 10. Leer la absorbancia de la muestra problema.
espectrofotómetro disponibles en el laboratorio realizar 11. Sacar las celdas, desocuparlas y lavarlas.
de manera automática la curva espectral con el programa 12. Apagar el equipo y dejarlo en orden.
de barrido de exploración, este se observará en la
pantalla del equipo. Con este gráfico y los datos obtenidos Observacion: Algunos espectrofotómetros tienen
anteriormente escoger la longitud de onda a la cuál programas en los que se puede construir la curva de
realizará el procedimiento cuantitativo (máximo de calibración directamente, verificar si el equipo en el que
absorción en la mayoría de los casos). usted está trabajando tiene esta función y
explorarla.
Figura 2. Esquema de una celda equivalente

Figura 3. Esquema de un espectrofotometro uv-visible
3. Resultados
En la tabla1 se pueden observar los datos obtenidos

por triplicado de absorbancia
Gráfica 2. Literatura
En la tabla 2 se muestras los resultados obtenidos por

triplicado de absorbancia de concentraciones que va
desde 1,0 % p/v a 5,0 % p/v
Tabla 1. Longitudes de onda, datos absorbancia
En la (grafica 1) se muestra los datos de absorbancia

vs longitudes de onda, dando como resultado una
longitud de onda de 390 nm siendo esta la más
elevada al compararlo con la literatura nos arroja que Tabla 2. Datos de ABS y concentraciones
la muestra problema es Sulfato de níquel.
En la (gráfica 3) se muestra la relación de ABS vs

concentración con los cuales se obtiene una curva de
calibración y la ecuación de la recta
grafica 1. Barrido espectral
El (grafico 2) el cual es sacado de la literatura nos

indica que al observar el pico de las (gráfica 1) es
similar a la (grafica 2).
Grafica 3. ABS vs conc.

En la tabla 3 las cifras de merito permiten calificar los
distintos métodos, y comparar unos con otros en cuanto
a su eficiencia para el logro del objetivo final. Conclusiones
1. la espectrofotometría es un método analítico
indirecto porque se basa en la medición de la
absorbancia o transmitancia
2. La espectrofotometría es el método más usado,
debido a que es sensible y sencillo
3. Se encontró que la sustancia problema era
sulfato de níquel y que su concentración es 2,14
% p/v
Tabla 3. Cifras de mérito
En la tabla 4 se muestra los paràmetros de regresión los

cuales son necesarios para hallar la concentraciòn de la
muestra
Tabla 4. Parámetros de regresión
Realizamos la ecuación para hallar la concentración final

de la muestra
Ecuación de la recta y = 0,194x - 0,0351
Ecuación en la cual se despeja la concentraciòn
𝐀𝐁𝐒=𝟎,𝟏𝟗𝟒(±𝟎,𝟎𝟏𝟑𝟎) 𝐂𝐎𝐍𝐂−𝟎,𝟎𝟑𝟓𝟏(±𝟎,𝟎𝟒𝟑𝟏)
CONC=(ABS+0,0351) /0,194
CONCENTRACION 2,1444769 %P/V
Bibliografía
 A. (2020). FOTOMETRIA. Equipos y laboratorio

de Colombia.
https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articu
lo-ampliado/fotometria
 Guía de laboratorio
 Las bases de la espectrofotometría | HANNA
Instruments Colombia. (2021).
https://www.hannacolombia.com/blog/post/206/la
s-bases-la-espectrofotometria.
https://www.hannacolombia.com/blog/post/206/la
s-bases-la-espectrofotometria

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1. Introducción b= longitud de la trayectoria de la luz a través de la

La absorción de la luz por una sustancia en solución

A=Absorbancia a una longitud de onda específica

Figura 2. Esquema de una celda equivalente

En la tabla1 se pueden observar los datos obtenidos

En la tabla 2 se muestras los resultados obtenidos por

Tabla 1. Longitudes de onda, datos absorbancia

En la (grafica 1) se muestra los datos de absorbancia

En la (gráfica 3) se muestra la relación de ABS vs

grafica 1. Barrido espectral

El (grafico 2) el cual es sacado de la literatura nos

Grafica 3. ABS vs conc.

En la tabla 4 se muestra los paràmetros de regresión los

Tabla 4. Parámetros de regresión

Realizamos la ecuación para hallar la concentración final

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