Práctica 2: Pruebas Generales para Carbohidratos

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES EXACTAS Y DE LA

EDUCACION DEPARTAMENTO DE QUIMICA
AREA: BIOQUIMICA

PRUEBAS GENERALES PARA Guía: 2

CARBOHIDRATOS (Bioquímica general)
Páginas: 1-5

2.1 INTRODUCCION

Los carbohidratos, glúcidos o azúcares son una clase de biomoléculas que sirven como
fuente de energía para las actividades vitales de las células. La diversidad estructural de
los carbohidratos es una característica clave de estas moléculas en su función de
mediadores de las interacciones celulares. Su fórmula general suele ser (CH2O)n.

Los carbohidratos incluyen azúcares, almidones, celulosa y otros compuestos, los cuales
son derivados aldehídicos o cetónicos de alcoholes polihidroxilados. Existen varias
pruebas para caracterizar los azúcares específicos dependiendo de las propiedades
fisicoquímicas que estos presentan.

Las pruebas que se proponen para esta práctica, deben realizarse mezclas problema
comestibles tales como jugos de frutas, miel y papas, además de soluciones de azucares
específicos.

2.2OBJETIVOS

2.2.1 Identificar carbohidratos mediante diferentes reacciones químicas.

2.2.2. Determinar cualitativamente la presencia de carbohidratos en diferentes muestras

problema.

2.3CONSULTAS PRELIMINARES

2.3.1 ¿Que indica el término azúcar reductor y no reductor? De ejemplos de estos azúcares.

2.3.2 ¿Qué pruebas se espera que sean positivas para los carbohidratos a utilizar en la
práctica?
2.3.3 Escribir todas las reacciones químicas que se presentan en las pruebas a realizar
durante la práctica
2.3.4 Describa como se realiza y en qué consiste la prueba de formación de ozasonas.

2.3.5 Consultar las fichas de seguridad de los reactivos a utilizar.

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Práctica 2: Pruebas Generales para Carbohidratos.

2.4 MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS

Los materiales, reactivos y equipos, así como su cantidad dispuestos para la práctica de
laboratorio, se relacionan detalladamente en la tabla 2.1.

Tabla 2.1 Relación de los materiales, reactivos y equipos requeridos para la práctica.
MATERIALES Tipo Cant Tipo Cant

Pipeta graduada de 5 mL 2 Goteros 3

Pipeta graduada de 1 mL 1 Propipeta 2

Vaso de precipitados de 2 Termómetro 1

250 mL

Vaso de precipitados de 1 Frasco lavador 1

100 mL

Varilla de vidrio 1 Trípode 1

Tubos de ensayo Grandes 20 Mechero 1

Gradilla 1 Malla de asbesto 1

Pinza de madera 1

MATERIALES Harina 2g Jugo fruta (debe ser claro) 5 mL

A CARGO Piña, naranja, limón,
DEL Papa o yuca 2g piñuela, lulo, maracuyá
ESTUDIANTE
Solución patrón de carbohidratos 100 mL Reactivo de Barfoed 80 mL
c/u

Almidón al 1% 50 mL Reactivo de Seliwanoff 80 mL

Agua destilada 1 galón Reactivo de Benedict 100 mL

n-butanol 50mL Solución de yoduro (0.01M de 10 mL

I2 y 0.12M de KI)

Ácido sulfúrico 50mL Reactivo de Bial 30 mL

Reactivo de Molish
10 mL

Agitador mecánico (vórtex) 1 Plancha de calentamiento 1

 EQUIPOS
Remitir al manual de
*Remitirse al manual de protocolo de riesgo/seguridad y fichas técnicas de seguridad.
*Cada grupo debe tomar 7 azucares diferentes incluyendo las dos muestras problemas

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Práctica 2: Pruebas Generales para Carbohidratos

2.5PARTE EXPERIMENTAL

2.5.1 Prueba de Molish.

Añadir 1 mL de cada una de las soluciones de carbohidratos a utilizar en tubos de ensayo

rotulados (con los azucares a utilizar) y posteriormente agregar 2 gotas del reactivo de
Molish a cada tubo. Cuidadosamente agregar 0.5mL de H 2SO4 concentrado a través de las
paredes de los tubos, de tal forma que el ácido forme una capa por debajo de la solución
del carbohidrato. Un color rojo-violeta en la interfase entre el ácido y la solución acuosa
indica una prueba positiva para carbohidratos.

2.5.2 Prueba de Seliwanoff

Añadir 1 mL del reactivo de Seliwanoff a 0,5 mL de las soluciones de carbohidrato en tubos

de ensayo debidamente rotulados. Mezclar y colocar los tubos en un baño de agua
hirviendo por 4 minutos. Un color rojo intenso es prueba positiva para cetohexosas. El
color es más fuerte si se continúa calentando, pero en éste caso las aldohexosas también
darán color
rojo. La prueba también es positiva para sacarosa (indique en su informe), porque un color
verde índica una prueba (+) para pentosas.

2.5.3 Prueba de Bial o de Orcinol

Añadir 1 mL de reactivo de Bial a 0,5 mL de las soluciones de carbohidrato en tubos de

ensayo debidamente rotulados. Mezclar y calentar suavemente los tubos en un mechero
hasta que la solución comience a hervir (o hasta que la solución cambie a un color fuerte).
Dejar enfriar ligeramente el contenido. Agregar 3 mL de agua y mezclar.

Finalmente, añadir 0.5 mL de alcohol butílico (1- butanol), mezclar bien, dejar reposar y
examinar la capa de alcohol butílico. Un color amarillo oscuro es prueba positiva para
hexosas y verde oliva positiva para pentosas.

2.5.4 Prueba para azucares reductores. Reacción de Benedict.

A 1 mL del reactivo de Benedict añadir 4 gotas (o 0,4mL) de la solución de la muestra de

carbohidrato en tubos de ensayo debidamente rotulados. Mezclar y calentar la solución en
un baño de agua hirviente durante 2 min. Un precipitado verde, amarillo o rojo indica
resultado positivo para azúcares reductores.

Los diferentes colores que pueden aparecer se deben al tamaño de las partículas
formadas: Las partículas grandes forman un precipitado rojo y las partículas pequeñas un
precipitado verde.
2.5.5 Prueba de yodo para polisacáridos

Añadir 2 gotas de solución de yoduro a 1 mL de la solución de carbohidrato en tubos de

ensayo debidamente rotulados. Mezclar. ¿Qué indica un color azul o rojo oscuro en la
muestra? Es conveniente comparar con un blanco que contenga agua y solución de
yoduro.

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Práctica 2: Pruebas Generales para Carbohidratos.

2.5.6 Prueba de Barfoed

A 1 mL de reactivo de Barfoed agregar 0,5 mL de solución de carbohidrato en tubos de

ensayo debidamente rotulados y mezclar. Poner los tubos en baño de agua hirviendo por
exactamente un minuto. Remover y luego dejar reposar a temperatura ambiente. El tiempo
de reacción es fundamental, debido a que el reactivo reaccionará con monosacáridos y
disacáridos, pero en el caso de los monosacáridos la reacción será más rápida. El
calentamiento prolongado puede dar reacciones falsamente positivas ¿por qué? Examinar
el color y la cantidad de precipitado obtenido. Una pequeña cantidad de precipitado no es
una prueba positiva.

2.6 OBSERVACIONES, CALCULOS Y RESULTADOS

En la tabla 2.2 registre sus resultados y a continuación las observaciones

realizadas. Tabla 2.2 Pruebas para la identificación de carbohidratos

CARBOHIDRATOS PRUEBAS

Molish Seliwanoff Bial Benedict Polisacárido Barfoed

s

Almidón

Sacarosa

Glucosa

Galactosa

Ribosa

Fructosa

Lactosa

Muestra problema 1

Muestra problema 2
 ∙ En cada caso, indicar coloración, y si es + (prueba positiva) o – (prueba negativa) y especificar observaciones.

Para la discusión se deben relacionar los resultados obtenidos en cada una de las pruebas,
con la estructura de las sustancias estudiadas corroborando la veracidad de las mismas. De
igual forma consultar reportes del tipo de carbohidratos presentes en las muestras y comparar
con los resultados obtenidos.

Mediante las estructuras de disacáridos y polisacáridos utilizados explicar en su discusión las

pruebas positivas para Benedict y concluir al respecto.

2.7PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

2.7.1 ¿Por qué la fructuosa da una prueba positiva con el reactivo de Benedict el cual es
específico para azucares reductores?
2.7.2 ¿Por qué se dice que la maltosa y la lactosa tienen un potencial grupo aldehído? 2.7.3
¿Por qué el glucógeno y el almidón dan resultados negativos para azucares reductores? 2.7.4
Explique por qué en la prueba de Barfoed los disacáridos reaccionan más lentamente que los
monosacáridos.

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Práctica 2: Pruebas Generales para Carbohidratos

2.8 RECUPERACION Y/O ALMACENAMIENTO TEMPORAL DE RESIDUOS QUIMICOS

Los residuos químicos resultantes de la práctica de laboratorio, deben ser dispuestos y/o
desechados siguiendo los protocolos establecidos y resumidos en la tabla 2.3.

Tabla 2.3 Clasificación de residuos químicos, tratamiento y forma de desecharlos.

Sección Recipiente No. Tratamiento adicional Residuo

2.5.1 Debe Solución de

neutralizarse y acido sulfúrico
llevar al vertedero

2.5.2 Solventes orgánicos 4 Reactivo Seliwanoff

2.5.3 Solventes orgánicos 4 Reactivo vial y

1- butanol

2.5.4 Agroquímica 5 Sulfato cúprico

2.5.5 Solventes halogenados 1 Soluciones

yodadas

2.5.3 Agroquímica 5 Acetato de cobre

2.9. BIBLIOGRAFIA

2.9.1 BALTES, W. Química de los alimentos. España. Acribia. 2007. 492p. 2.9.2 BELITZ, H.D;
GROSCH, W. Química de los alimentos.España. Acribia.Tercera edición. 2012. 938p.
2.9.3 STRYER, Lubert; TYMOCZKO, Jhon; BERG, Jeremy. Bioquímica. Editorial Reverté S.A.
Séptima Edición. 2013. 1200p.
2.9.4 MATHEWS,Cristopher. Bioquímica. Pearson Addison Wesley. 4ª ed. 2013.1375p. 2.9.5
LENHINGER, David; COX, Michael. Principios de Bioquímica. Omega. 7ª ed. 2017. 3269p.
Autores Revisión Vo.Bo. Fecha Aprobación

Jefe Unidad de Area Comité Técnico

Comité de Plan Ambiental Rector
Comité Residuos Químicos Jose Luis Diago Franco