Universidad Nacional de Barranca

Facultad de Ingeniería
Dpto. Acad. Ciencias Básicas y Afines

PRÁCTICA N 5

RECONOCIMIENTO DE PROTEÍNAS Y ENZIMAS

INTRODUCCIÓN
Las proteínas son biomoléculas orgánicas compuestas de C, H, O y N pueden tener
además con menor frecuencia P, Fe, Cu, Mg, I, etc. Están constituidas por polímeros de
aminoácidos. Una sola molécula proteica puede contener de 50 a 3000 unidades de
aminoácidos. También pueden haber diferentes tipos de aminoácidos, aunque no todas
las proteínas tienen los 20 aminoácidos distintos.

Cada célula del cuerpo contiene 2000 proteína diferentes y algunas varían de alguna
persona a otra. En efecto podemos decir que algunas proteínas nos dan la característica
de humanos mientras otras nos hacen individuos.

Las proteínas poseen propiedades como son las de ser solubles generalmente en el agua
y algunas en otras sustancias como el alcohol. Las proteínas por ser altamente complejas
tienen distintas formas, las proteínas estructurales forman las estructuras celulares; así
mismo, también constituyen estructuras dinámicas (enzimas, hormonas, etc.), que
juegan un papel importante en el ser vivo. Entre las funciones de las proteínas tenemos:
estructurales, de transporte, enzimáticas, hormonales, homeostáticos, inmunológicos,
contráctiles, etc.

Las enzimas son proteínas que catalizan reacciones biológicas. Algunas de ellas son
proteínas sencillas, otras son proteínas conjugadas; estas últimas pueden descomponerse
en una porción proteica y otro componente orgánico no proteico complejo (el grupo
prostético); en cada caso la reacción catalizada enzimáticamente depende de una
combinación transitoria entre la enzima y el sustrato, o el complejo cuya reactividad es
acelerada por la enzima. Esta combinación transitoria se denomina COMPLEJO-
ENZIMA-SUSTRATO.

Se pueden deducir que la velocidad de una reacción catalizada enzimáticamente

dependerá del número de combinaciones por unidad de tiempo entre la enzima y el
sustrato. Los factores que afectan a la reactividad de los centros activos de la
combinación influirán también en la velocidad de reacción. Al igual en todas las
reacciones químicas también existirá una dependencia de la temperatura y el pH. Las
enzimas son altamente específicas gracias a su estructura proteica.

Entre los vertebrados y muchos invertebrados la digestión es totalmente un proceso

extracelular en que los materiales alimenticios complejos se reducen a unidades
orgánicas simples apropiadas para la absorción. Las enzimas digestivas en el tracto
digestivo de un vertebrado y de un invertebrado están localizadas en forma bastante
precisa a lo largo de este tubo.

OBJETIVOS
 Reconocer las propiedades físicas y químicas de las proteínas.
 Reconocimiento cualitativo de las proteínas.
 Comprobar la acción hidrolítica de la amilasa salival.
 Reconocer la reacción de la enzima catalasa en tejidos animales y vegetales.
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Dr. Julio César Chávez Galarza
M.Sc. Carlos Enrique Condemarin Montealegre
M.Sc. Wilder Aurelio Abad Vilchez
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MATERIAL Y MÉTODOS

Proporcionado por el laboratorio:

10 tubos de ensayo
01 mecheros
01 pinza
01 gradilla
Baño maría
Agua destilada
Sacarosa al 1%
NaOH al 20%
CuSO4 al 1%
Acetato de plomo al 5%
HCl al 75%
NaCl al 20%
HNO3 concentrado
Reactivo de Fehling (Sol A y Sol B)
Lugol

Proporcionado por el alumno:

Albúmina (huevo) o suero
Hígado de pollo
Manzana
Papa
Amilasa Salival al 1%
Agua oxigenada

Procedimiento:

Reconocimiento de Proteínas

Desnaturalización de las Proteínas

COMPONENTES Tubos de Ensayo

I II III IV V VI
Sol. Albúmina 3 ml 3 ml 3 ml 3ml 3ml 3 ml
Acetona 4 ml
HCl al 75% 2 ml
NaCl al 20% 2 ml
NaOH al 20% 2 ml
Agua destilada 2ml
El tubo I se calienta suavemente y poco a poco, a la llama del mechero registrando la
temperatura al momento de la coagulación.
Observar y compare todos los tubos y anote los resultados obtenidos.

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Reacción de Biuret
Material a usar:
Albumina

Hidróxido de sodio

Sulfato cúprico

Pasos
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 Añada en un tubo de ensayo unos 3 ml de albúmina de huevo diluida en agua

destilada.

 Añada 2ml de solución de NaOH al 20%.

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 Agregue 4 ó 5 gotas de solución de sulfato cúprico al 1%.

 Observar (coloración violácea o rosácea) es positivo.

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Fundamento
Se hizo la mezcla y se observo que se torna un color violeta, coloración característica de
una reacción positiva en la identificación de proteínas en el reactivo de biuret
Pero si se torna color azul es una reacción negativa sin identificación de proteínas
La prueba de biuret se fundamenta en detectar los enlaces peptídicos, la prueba se da en
medio alcalino la muestra debe contener al menos dos enlaces peptídicos para que se
pueda formar un complejo de color violeta-purpura
Reacción Xantoproteica
 Coloque 2 ml de solución de albúmina.

 Añadir 1 ml de HNO3 concentrado.

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 Caliente en baño maría a 100ºC o en mechero hasta la aparición de un color

amarillo.

 Enfrie el tubo a chorro de agua fría.

 Agregar 6 a 8 de gotas de NaOH 20%.

Reacción de la Cistina
 Añada 2 ml de solución de albúmina.
 Añadir 2 ml de solución de NaOH al 20%.
 Añadir 10 gotas de acetato de plomo al 5%.
 Calentar hasta ebullición.
 Observar la formación de un color pardo oscuro (reacción positiva).

Demonstración de la Actividad Enzimática

*Obtener un extracto enzimático por enjuagues bucales con agua tibia.

COMPONENTES Tubos de Ensayo
I II III IV V VI
Sol. Almidón 4 ml 4 ml 4 ml 4 ml 4 ml 4 ml
HCl 2 ml 2 ml
Ext. Enzimático normal 4 ml 4 ml 4 ml 4 ml
Ext. Enzimático hervido 4 ml 4 ml
Incubar a 38ºC 30 min 30 min 30 min
Incubar al medio ambiente 30 min 30 min 30 min
*Pasados los 30 minutos preparar otros 6 tubos con el reactivo de Fehling (Sol A + Sol
B) y calentar hasta un hervor para evitar la autoreducción.
*Colocar la mitad del volumen de cada tubo problema en los tubos con reactivo de
Fehling.
*Calentar y observar la coloración.
*En los tubos problemas con volumen restante agregar 5 gotas de lugol.
*Observar la coloración.

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Demostración de la Especificidad de las Enzimas

 Preparar un tubo con reactivo de Fehling (Sol A + Sol B) y calentar hasta un

primer hervor. Añada 2 ml de solución de sacarosa y seguir calentando. Deje el
tubo en una gradilla y observe si hay cambio en el color.

 Luego en otro tubo añada 1 ml de solución de sacarosa. Luego agregue 2 ml de

saliva y colocar en baño maría a 38ºC por 30 min. Después de este tiempo
realica la reacción de Fehling, como en el paso anterior.

Reconocimiento de la Catalasa
 Coloque en un tubo de ensayo unos trocitos de hígado, en otro tubo trocitos de
papa y en otra manzana.
 Coloque 5 ml de agua oxigenada a cada tubo.
 Se observará un intenso burbujeo debido al desprendimiento de oxígeno.

Desnaturalización de la Catalasa
 Coloque en un tubo varios trocitos de hígado.
 Añadir agua y hervir unos minutos.
 Retirar el agua sobrante.
 Añadir 5 ml de agua oxigenada.
 Observar el resultado.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
 CHAMOCHUMBI, M. J. 2006. Manual de Prácticas de Biología. Facultad de Ciencias
Biológicas. Universidad Nacional de Trujillo. 50 pg.
 REYES, W. Y CAMPOVERDE, L. 2007. Manual de Prácticas de Biología. Facultad de
Ciencias. Universidad nacional del Santa. 47pag.
 SOLOMON, E.P.; R. BERG; D. MARTIN. 1998. Biología. 4ta. edic. Edit. Mc Graw-Hill
Interamericana editores, S.A. México, D.F.

Cuestionario:
 ¿Cuál es el fundamento de la reacción de Biuret?
 ¿Cuál es el fundamento de la reacción de Xantoproteica?
 Qué significa cada uno de los siguientes términos: floculación,
desnaturalización, y coagulación de proteínas.
 ¿La desnaturalización s un proceso reversible? Porqué?
 ¿Sobre que sustancia actúa la amilasa salival?
 ¿Qué color muestran los tubos en los cuales hay actividad enzimática, después
de agregar lugol y porqué?
 ¿Qué significa especificidad enzimática?
 ¿Qué tipos de enzimas presentes en los vegetrales ensayados actúan sobre el
peróxido de hidrógeno? Escriba la ecuación.

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EXTRACCIÓN DE ADN

INTRODUCCIÓN
Los ácidos nucleicos son macromoléculas, polímeros formados por la repetición de
monómeros llamados nucleótidos, unidos mediante enlaces fosfodiéster. Se forman, así,
largas cadenas o polinucleótidos, lo que hace que algunas de estas moléculas lleguen a
alcanzar tamaños gigantes (de millones de nucleótidos de largo). El descubrimiento de
los ácidos nucleicos se debe a Friedrich Miescher, quien en el año 1869 aisló de los
núcleos de las células una sustancia ácida a la que llamó nucleína, nombre que
posteriormente se cambió a ácido nucleico.

La estructura de la doble hélice del ADN fue descrita por James Watson y Francis Crick
en 1953. Dicho descubrimiento ha supuesto un hito en la historia de la biología y su
modelo propuesto ha sido ampliamente confirmado. Según, este modelo, Las unidades
que forman los ácidos nucleicos son los nucleótidos. Cada nucleótido es una molécula
compuesta por la unión de tres unidades: un monosacárido de cinco carbonos (una
pentosa, ribosa en el ARN y desoxirribosa en el ADN), una base nitrogenada purínica
(adenina, guanina) o pirimidínica (citosina, timina o uracilo) y uno o varios grupos
fosfato (ácido fosfórico). Tanto la base nitrogenada como los grupos fosfato están
unidos a la pentosa. Los nucleótidos se enlazan entre sí a través del grupo fosfato
formando larguísimas cadenas. La estructura fosfato-pentosa recorre el esqueleto de la
hélice, mientras que las bases se disponen formando un ángulo recto con el eje de la
misma. Las dos cadenas de polinucleótidos que constituyen una molécula de ADN se
mantienen unidas entre sí gracias a la formación de puentes de hidrógeno entre las bases
nitrogenadas complementarias de ambas cadenas que quedan enfrentadas (dos puentes
de hidrógeno entre A y T, y tres puentes de hidrógeno entre G y C). La estructura de un
determinado ADN está definida por la ordenación o “secuencia” de las bases
nitrogenadas en la cadena de polinucleótidos, residiendo precisamente en esta secuencia
de bases la información genética del ADN. La estructura en doble hélice del ADN, con
el apareamiento de bases (A-T; G-C), implica que el orden o secuencia de bases de una
de las cadenas determinas automáticamente la orden de la otra, por ello se dice que las
cadenas son complementarias.

OBJETIVO
 Utilizar una técnica sencilla para poder extraer el ADN de un tejido animal o
vegetal y por el aspecto que presenta, confirmar su estructura fibrilar.

MATERIAL Y MÉTODOS

Proporcionado por el laboratorio:

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04 tubos de ensayo
02 Vasos de precipitación de 50 ml
01 mecheros
01 pinza
01 gradilla
02 mortero
Agua destilada
Orceína acética
Palito de madera de 30cm o bagueta

Proporcionado por el alumno:

Tomates
Detergente líquido de vajillas.
Alcohol 95% (helado)
Sal de mesa
Bicarbonato de sodio
Cucharita
01 paquete de gaza
02 elástico
Procedimiento:

 Licuar un tomate con un poco de agua fría.

 Colocar el alcohol a 96% en el congelador.
 El tomate licuado colarlo en frio (emplear hielo).
 En un vaso de precipitación colocar según la cantidad de tomate licuado, una o
dos cucharitas de sal y dos a tres cucharitas de bicarbonato de sodio, disolver.
 A la solución de sal, agregar lavavajillas o detergente entre tres a cuatro
cucharadas y completar hasta el doble de volumen del licuado.
 Mezclar el licuado de tomate con la solución salina más detergente por 10 a 20
minutos.
 Colocar 10 mL a más de la mezcla licuado-sal-detergente en un vaso de
precipitación o tubos falcón.
 Añadir por las paredes del tubo el alcohol 96% helado con la finalidad de formar
dos capas y esperar 5 minutos.
 Introducir la el palito de madera o bagueta e ir removiendo en la misma
dirección. Hasta que se adhiera unas fibras blancas, visibles a simple vista que se
encontraran entre la fase las dos fases.
 Complementar con tinción específica de ADN (Orceína acética).

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
 AUDERSIK, T.; G. AUDERSIK y B. E. BYERS. 2003. Biología: La vida en la tierra. 6ta. Edic.
Edit. Pearson Educación, S. A. México.
 KIMBALL, A. 1982. Biología. Fondo Educativo. Interamericano, S.A. México.
 REYES, W. Y CAMPOVERDE, L. 2007. Manual de Prácticas de Biología. Facultad de
Ciencias. Universidad nacional del Santa. 47pag.
 SOLOMON, E.P.; R. BERG; D. MARTIN. 1998. Biología. 4ta. edic. Edit. Mc Graw-Hill
Interamericana editores, S.A. México, D.F.

Cuestionario:

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 Si todos los organismos tienen ADN en sus células, ¿qué es lo que los hace
diferente?
 ¿Poseen todas las células de un mismo individuo los mismos tipos de ARN?
 ¿A qué se debe el hecho que en los espermatozoides el ADN es más compacto?
 ¿Cuál es la función de la sal, bicarbonato, detergente y alcohol en el proceso de
extracción?

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