Uva Roja

UNIVERSIDAD DEL VALLE DE MÉXICO

Desarrollo analitico
Fecha de entrega: 13/11/22

Scarlet Alejandra Quijano Barrera

Hannia Ailed Solis Rinconi
Maria de Lourdes Chávez Juárez
 UVAS ROJAS
● Nombre común: Uva
● Nombre científico: Vitis vinifera
● Tipo de planta: Enredadera
● Acción medicinal: Antioxidante,
Cardioprotector
● Principios activos: Resveratrol,
antocianinas, salicilatos
● Formas de consumo: Cápsulas,
Extractos líquidos, Alimento, Jugo,
Polvo, Aceite esencial, Seco
 UVAS ROJAS
Las uvas contienen una gran variedad de substancias antioxidantes,
pectina, y taninos inmunoprotectores, que juegan un papel importante
en la aglutinación de proteínas para proteger al cuerpo de agentes
patógenos.

El resveratrol es un compuesto antioxidante que se encuentra en

grandes cantidades en la piel de las uvas de color morado oscuro, y
tiene un efecto protector sobre las funciones cerebrales, el corazón y el
sistema inmunológico.
 PRINCIPIO ACTIVO
Resveratrol
El resveratrol es un estilbenoide, un
Existe como dos isómeros geométricos:
tipo de fenol natural, y una fitoalexina
cis-(Z) y trans-(E), resveratrol. El
que se produce de manera natural la
resveratrol trans y cis puede estar libre
piel de la uva roja.
o unido a la glucosa.
En las uvas, el trans-resveratrol es una
fitoalexina producida como protección
contra el crecimiento de hongos
patógenos. Su presencia en la uva Vitis
vinifera también es constitutivo, con la
acumulación de resveratroles unidos y
libres en las bayas maduras de
diferentes niveles, de acuerdo con el
genotipo.
También se encuentra presente en el
vino tinto, el jugo de uva morada, las FIGURA 1. Estructura química del
moras y en una menor cantidad en los resveratrol cis y trans.
cacahuetes. Se usa como un
medicamento.
 PROPIEDADES
Tanto la planta de la vid como su fruto, la uva, han sido ampliamente investigadas
por la ciencia moderna, y se han realizado miles de estudios sobre los mecanismos
de acción de sus compuestos. Las propiedades de la uva han probado ser útiles,
principalmente, para:

● Promover la salud cardiovascular. El consumo de uva contribuye a mejorar la

circulación y disminuir el riesgo de enfermedades cardiovasculares.
● Retrasar el envejecimiento. Las uvas son ricas en compuestos antioxidantes, los
cuales prolongan la vida de las células, demorando la aparición de signos
visibles de envejecimiento (como arrugas).
● Desinfectar heridas. Las uvas de parra tienen propiedades antiinflamatorias y
han sido tradicionalmente usadas para detener el sangrado en heridas
superficiales.
● Tratar la diarrea. Las propiedades astringentes de las uvas de parra se han
usado durante siglos para detener la diarrea.
 USOS
1. Protege el cerebro
8. Extensión de vida
2. Ayuda a prevenir la artritis
9. Disminuye la grasa en la sangre
3. Ayuda a combatir el cáncer
10. Previene infecciones
4. Disminuye el acné

5. Disminuye la presión sanguínea

6. Antienvejecimiento

7. Regula los niveles de azúcar

 TÉCNICA
ANALITICA
 Principio activo a separar
La determinación de trans-resveratrol usualmente es realizada por
una extracción líquido/líquido, seguida de una rota-evaporación,
hasta la obtención de un residuo sólido. Por una disolución, los
extractos pueden ser analizados por cromatografía líquida,
espectrometría de resonancia magnética nuclear y espectroscopia en
la región IR

Para hallar los niveles de trans-resveratrol, es necesario realizar:

● Optimización de condiciones cromatográficas
● Validación de técnica analítica
● Determinación cuantitativa de trans-resveratrol por HPLC.
 ● Equipos de cromatografía y espectrometría usados

Figura 2. sistema cromatográfico HPLC-DAD Figura 3. cromatógrafo líquido Agilent 1100

de WatersTM 600 con bomba binaria
 Condiciones de operación
● Para la cuantificación del trans-resveratrol, se construyó la curva de
. calibración con el estándar trans-resveratrol, en las concentraciones de 0,5;
1,5; 2,5; 3,5; y 4,5 mg/L, a partir de una solución stock de 1000 mg/L

● La solución stock se preparó, pesando 10,30 mg de estándar de trans

resveratrol en una fiola de 10 mL, usando metanol como disolvente,,
obteniendo 1000 mg/L como concentración.

● La preparación del estándar, debe ser lo más similar posible a la muestra,

Figura 3. Condiciones cromatográficas establecidas
Se proponen métodos para el análisis de resveratrol y su
glucósido empleando el mecanismo de reparto en fase
inversa con un régimen de elución por gradiente,
utilizando como fase móvil disoluciones de sales de
amonio o de ácidos, fundamentalmente ácido acético o
fórmico y como modificador orgánico metanol o
acetonitrilo. Estas condiciones se tomaron como punto
de partida para encontrar las condiciones óptimas de
determinación de resveratrol.
 VENTAJAS

La bioproducción in-vitro de resveratrol tiene varias ventajas respecto a la extracción a partir

de los tejidos vegetales:

• Independencia en el suministro vegetal

• No es necesario almacenar material fresco.

• los cultivos celulares se pueden mejorar más rápido y barato que los tradicionales vegetales

• El escalado en la producción de resveratrol se puede hacer de modo continuo o por lotes.

• tecnología respetuosa con el medioambiente

• Los procesos biológicos tienen mejor imagen social que los químicos.
Método de preparación del principio activo
Extracción de resveratrol y derivados del medio extracelular de suspensiones celulares de
Monastrell elicitadas con ciclodextrinas metiladas al azar y/o jasmonato de metilo

La extracción de los compuestos presentes en los medios de cultivo de Monastrell se

realizó mediante una partición de fases con
➔ acetato de etilo (1:1, v/v)
➔ Con la finalidad de obtener una clara separación de fases se añadió
directamente al medio extracelular NaHCO3 al 3% (p/v) y 10% de NaCl (p/v).

1. Transcurrida una hora la fase orgánica se recogió.

2. Se realizó una segunda extracción de la fase acuosa durante una hora más con el
fin de recoger todos los estilbenos presentes en el medio extracelular.
3. Pasado ese tiempo se recogió la fase orgánica (acetato de etilo)
4. Se evaporó en un rotavapor a 40 ºC a vacío
5. El residuo seco se resuspendió en 1mL de metanol para su posterior análisis
cromatográfico con un HPLC-DAD
Extracción de resveratrol y derivados intracelulares de suspensiones celulares de Monastrell
elicitadas con ciclodextrinas metiladas al azar y/o jasmonato de metilo

La extracción de los metabolitos celulares se realizó homogeneizando las células de

Monastrell con
➔ metanol 70 % (1:2, peso/volumen)
➔ Dejando el homogenado durante 24 horas a 4ºC en la oscuridad.

A continuación,
1. Se separaron las células por filtración y el sobrenadante se llevó a sequedad con
N2.
2. El residuo seco fue extraído por partición de fases con acetato de etilo y agua
(1:10) durante un periodo de tres horas.
3. Transcurrido ese tiempo se recogió la fase orgánica (acetato de etilo)
4. Se evaporó en un rotavapor a 40 ºC a vacío; el residuo seco se resuspendió en 1
mL de metanol para su posterior análisis por HPLC.
Reactivos

Como fase móvil se utilizaron

➔ ácido acético
➔ acetonitrilo grado HPLC

Las fases acuosas se filtraron a vacío mediante filtros de 45 m.

Para la identificación del t-R se utilizó un patrón comercial de t-R con una
pureza >99%
 RESULTADOS
Caracterización de la producción extracelular de trans-resveratrol en suspensiones
celulares de Monastrell

Estudio comparativo de los distintos tipos de ciclodextrinas para incrementar la

producción de trans-resveratrol en suspensiones celulares de Monastrell.

➔ El efecto de diferentes tipos de CD, tanto de origen natural como sintéticas, para
estimular la producción de t-R en suspensiones celulares de vid se muestra.
➔ La concentración de CD que se empleó para este ensayo fue de 50 mM con la
finalidad de que actuasen como inductoras y secuestradoras de t-R, excepto en el
caso de la CD natural, que se utilizó a una concentración de 15 mM debido a que
su máxima solubilidad en agua a 25ºC es 18 mM.

CDM : ciclodextrinas metiladas al azar

CD : ciclodextrina(s)
CDH: ciclodextrinas hidroxipropiladas al azar
MJ: jasmonato de metilo
TABLA 1. Capacidad de los diferentes tipos de CD para inducir la producción de t-R en
suspensiones celulares de vid. Nd: no detectado. *CD natural que se utilizó a una
concentración de 15 mM.

➔ Las CDM fueron las que dieron lugar a los valores de producción de t-R más altos tanto
en el cv Monastrell como en Gamay, en comparación con los datos de producción
obtenidos con CDH. Sin embargo, no se observaron diferencias significativas en ambas
líneas celulares con ninguno de los tratamientos.
➔ Por otra parte, la CD natural ramificada G2-CD también fue capaz de inducir la síntesis
de t-R aunque en menor medida que las sintéticas CDM y CDH. Por último, la sulfo-CD
resultó ser tóxica para las células a la concentración ensayada (50 mM).
En las dos líneas celulares se detectó como producto mayoritario el t-R y la aparición
del isómero c-R se produjo en la línea celular Gamay ya que en la línea Monastrell se
acumulaba sólo el isómero trans.

★ Este hecho se debe a que la enzima responsable de la síntesis del resveratrol

(estilbeno sintasa) da lugar al isómero trans y su transformación en cis se
debe a un proceso de fotoisomerización (Bru et al. 2006).

★ Por tanto, la aparición de formas cis en el cultivar Gamay se debe a que su

crecimiento se realiza en condiciones de fotoperíodo mientras que la línea
celular Monastrell se crece en oscuridad.
FIGURA 1. Acumulación extracelular de t-R a lo largo del tiempo en suspensiones celulares de
Monastrell elicitadas con distintas concentraciones de CDM (5, 10, 25, 50 mM). Control:
triángulos negros; CDM 5 mM: cuadrados blancos; CDM 10 mM: círculos negros; CDM 25 mM:
triángulos blancos; CDM 50 mM: cuadrados negros.
 Estudio temporal de la producción de trans-resveratrol en
suspensiones celulares de Monastrell elicitadas con ciclodextrinas
metiladas al azar y/o jasmonato de metilo
Estudio temporal de la producción de trans-resveratrol en suspensiones celulares de
Monastrell elicitadas con ciclodextrinas metiladas al azar y/o jasmonato de metilo

FIGURA 2. Cromatograma de
los estilbenoides procedentes
del medio extracelular de
suspensiones celulares de
Monastrell. Se ha
representado tanto el
tratamiento control (negro)
como en las elicitadas con MJ
(blanco), CDM (rojo) y CDM+MJ
(verde), transcurridas 168 h de
tratamiento.
 Referencias
Frémont, L. (2000). Biological effects of resveratrol. Life sciences, 66(8), 663-673.
Patel, K. R., Scott, E., Brown, V. A., Gescher, A. J., Steward, W. P., & Brown, K. (2011). Clinical trials
of resveratrol. Annals of the New York Academy of Sciences, 1215(1), 161-169.
Walle, T. (2011). Bioavailability of resveratrol. Annals of the new York Academy of Sciences,
1215(1), 9-15.
Kulkarni, S. S., & Cantó, C. (2015). The molecular targets of resveratrol. Biochimica et
Biophysica Acta (BBA)-Molecular Basis of Disease, 1852(6), 1114-1123.