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Clase dictada por:

Prof. Ángel Maldonado

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 Unidad 1: Microscopía
Ingreso a Medicina |Carreras científicas afines

Microscopio
Es una herramienta que permite observar objetos que son
demasiado pequeños para ser observados a simple vista. El tipo
La palabra microscopio proviene
más común y el primero que fue inventado es el microscopio
del griego μικρός (micros),
óptico. Se trata de un instrumento que contiene dos lentes que
‘pequeño’, y σκοπέω (scopéo), permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que
‘mirar’). Izquierda: Zacarías funciona por refracción. La ciencia que investiga los objetos
Janssen. Derecha: Hans pequeños utilizando este instrumento se llama microscopía.
Lippershey. Considerados los
inventores del microscopio.
HISTORIA DE LA MICROSCOPIA

1590 Zacharias Janssen inventa el primer microscopio.

1609 Galileo Galilei inventa un microscopio compuesto

de una lente cóncava y una lente convexa.

Cornelius Drebbel, presenta en Londres un

1619 microscopio formado por dos lentes convexas.

¿Cómo creen que hubiera sido

posible observar las células si no
hubiesen existidos los 1665 Robert Hooke, entrega una descripción precisa
microscopios? ¿Hubiese del microscopio compuesto, el mismo observa
afectado esto en el avance por primera vez células (muertas) en láminas de corcho.
tecnológico y medico?

Antonie van Leeuwenhoek, inventa el

1674 microscopio simple. Descubre y estudia los
protozoos en 1674.

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 Se lograron objetivos acromáticos obtenidos por
1740 H. M. Hall y mejorados por John Dollond.

Anton van Leeuwenhoek, fue

comerciantes de telas, pero sus Ernst Abbe publicó su teoría del microscopio y,
aportes a la microscopia y la mejoró la microscopía de inmersión
Biología lo posicionaron como 1877 sustituyendo el agua por aceite de cedro, lo que
precursor de la biología permite obtener aumentos de 2000.
experimental, de la biología
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celular y de la microbiología.
Microscopio de Leeuwenhoek.
1933 Ernst Ruska y Max Knoll inventan el microscopio
electrónico, que utiliza electrones en lugar de
luz visible (fotones) para obtener imágenes de
objetos pequeñísimos.

Manfred Von Ardenne inventa el microscopio

1937 electrónico de barrido, con el que conseguía
mejorar la resolución del microscopio de
transmisión.

1982 Primer microscopio de efecto túnel inventado

por los alemanes Gerd Binning y Heinrich Rohrer.

Investiga: Luego de la creación

Primer microscopio de fuerza atómica
del microscopio de fuerza
atómica. ¿Qué otros avances en
1987 inventado por Gerd Binnig y H. Rohrer,
la microscopia se produjeron? Christoph Gerber y Calvin.
Menciona brevemente.

La historia de la microscopia sigue avanzando, y en la actualidad

los microscopios que se mencionan se volvieron más
sofisticados, permitiendo una mayor y mejor comprensión de
Los microscopios también se
este mundo microscópico. Estos avances ayudaron a mejor
pueden clasificar según el nº de
desde productos alimenticios hasta productos tecnológicos
lentes, la transmisión de luz o el
sistema de iluminación, la
clasificación presentada es solo
uno de los tantos tipos, ej.: Lupa
binocular.

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 Tipos de Microscopios
Los Microscopios se pueden clasificar teniendo en cuenta ciertos
aspectos como el nº de lentes, composición de estos y si son
electrónicos o no. Se clasifican principalmente teniendo en
cuenta los avances de la microscopia en microscopia óptica y
electrónica.

Investiga: ¿Qué tipos de MICROSCOPIA OPTICA

microscopios son utilizados con A) MICROSCOPIOS SIMPLES:
mayor frecuencia para el estudio  Lupas monoculares
de las ciencias médicas?  Lupas binoculares

B) MICROSCOPIOS COMPUESTOS:
 Estereomicroscopios.
 De luz ultravioleta.
 De Fluorescencia.
 De contraste de fases.
 De campo oscuro.
 De polarización.
 Microscopia por luz reflejada.

MICROSCOPIA ELECTRONICA
 De Barrido (MEB).
 De Transmisión (TEM).
 Microscopio confocal de barrido laser
Los microscopios se denominan
compuestos porque la imagen se MICROSCOPIO OPTICO SIMPLE
forma mediante la utilización de El microscopio simple o lupa es un instrumento de amplificación
tres sistemas de lentes, cada uno de imágenes que consiste en la utilización de una o más lentes
de ellos constituidos por lentes convergentes en un solo sistema óptico. Dependiendo de la
convergentes y divergentes. curvatura de la superficie de la(s) lente(s) las lupas pueden
ampliar las imágenes de los objetos desde 5, 8,10, 12, 20 y hasta
50 veces. Forman una imagen de mayor tamaño, derecha y
virtual. En la imagen observamos una lupa clásica.

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 MICROSCOPIO FOTONICO COMPUESTO
que se emplean actualmente tienen sus antecesores en los
instrumentos ópticos desarrollados, en el periodo comprendido
Investiga: ¿Qué son los porta entre 1590 y 1610, por Hans (padre) y Zacarías (hijo) Janssen;
objetos y cubre objetos? ¿Qué
quienes mediante el tallado cuidadoso de lentes biconvexas
función tiene?
construyeron los primeros microscopios compuestos. partir de
esa época, el microscopio es el instrumento más utilizado en el
estudio de células y tejidos. Los sistemas de lentes son el
condensador, los objetivos y los oculares. En la actualidad, el
microscopio fotónico es un instrumento de uso cotidiano en los
laboratorios de investigación y de diagnóstico, así como en las
aulas de enseñanza de Biología, Embriología, Histología,
Microbiología y Patología.

COMPONENTES DEL MICROSCOPIO FOTONICO

COMPONENTES MECÁNICOS:
Son aquellos que sirven de sostén, movimiento y sujeción de los
sistemas ópticos y de iluminación, así como de los objetos que
se van a observar.
a) Base o pie: Es un soporte metálico, amplio y sólido en donde
se apoyan y sostienen los otros componentes del
microscopio.
b) Brazo, estativo o columna: Permite la sujeción y traslado del
El tornillo macrométrico microscopio. Soporta al tubo óptico, a la platina y el
produce desplazamientos revólver.
evidentes y rápidos de la platina, c) Platina: Superficie plana de posición horizontal que posee
en cambio el tornillo una perforación circular central. En ella se apoya la
micrométrico produce preparación (lámina portaobjetos que contiene a la muestra
movimientos imperceptibles de que se va a examinar) que se sujeta a la platina mediante
la platina y sirve para efectuar el pinzas o con un carrito o charriot que, mediante mandos
enfoque fino y definitivo de la
especiales facilitan el movimiento de la preparación de
imagen
derecha a izquierda y de adelante hacia atrás.
d) Tubo óptico. Consiste en un cilindro metálico que suele
medir 160mm o 170 mm de longitud (dependiendo del
fabricante del microscopio) el cual, en un extremo, está
conectado al revolver o porta objetivos y en el otro se
relaciona con el (los) ocular(es).
e) Revolver o portaobjetivos: Es un componente que gira
alrededor de un eje con la finalidad que los objetivos que
sostiene coincidan de manera perpendicular con la
perforación central de la platina. En su superficie inferior
posee varios agujeros donde se atornillan los objetivos.

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 f) Tornillos macrométrico y micrométrico: Generalmente
están situados en la parte inferior del brazo o columna.
Pueden estar separados (en los microscopios antiguos) o el
Investiga: ¿Qué significa que los
tornillo micrométrico está incorporado en la circunferencia
objetivos sean secos o de
del tornillo macrométrico (microscopios actuales). Ambos
inmersión? ¿Modifica el
funcionamiento o la
tornillos permiten el desplazamiento de la platina hacia
visualización de la imagen? arriba y hacia abajo con la finalidad de acercar o alejar la
preparación hacia los objetivos y así conseguir un enfoque
óptimo de la imagen.
g) Engranajes y cremallera: Constituyen mecanismos de
desplazamientos de las diferentes partes del microscopio.
h) Cabezal. Es un componente situado en relación con el tubo
del microscopio que alberga principalmente prismas o
espejos que sirven para acondicionar en él dos o más
oculares, o sistemas mecánicos que soportan cámaras
fotográficas, de vídeo o sistemas de proyección de la imagen
El condensador es el
componente óptico que tiene COMPONENTES ÓPTICOS:
como función principal a) Objetivos: Están constituidos también por un juego de
concentrar y regular los rayos lentes, en este caso, convergente y divergente, para
luminosos que provienen de la eliminar, en la medida de lo posible, una serie de
fuente luminosa aberraciones que afectarían la calidad de las imágenes
formadas. Los objetivos se fabrican para ampliar las
imágenes de los objetos observados en diversos
aumentos; así se tienen objetivos con aumentos propios
de 3.5 x, 4x, 10x, 25x, 40x, 65x y 100x. Pueden ser secos
o de inmersión.

Investiga: ¿Qué significarán esas b) Ocular: Es otro componente óptico del microscopio, debe
bandas de colores alrededor de su nombre porque la imagen final se observa a través de
los objetivos? él acercando el ojo a la lente “ocular” del componente.
Es el encargado de formar una segunda imagen a partir
de la imagen primaria que forma el objetivo. La imagen

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 del ocular es de mayor tamaño, virtual y derecho. Esta
imagen únicamente amplía un número determinado de
veces (5x, 8x, 10x, 12x) a la imagen formada por el
El microscopio óptico permite
objetivo. No añade, por más aumentos propios que
aumentar las imágenes de las
posea, ningún detalle a los generados por el objetivo. La
células hasta 1.000 veces y
resolver detalles de tan solo 0,2
lente posterior, en contacto estrecho con el ojo del
m (una limitación impuesta por observador, se denomina lente “ocular” y es la
el carácter ondulatorio de la luz, responsable de aumentar nuevamente la imagen y
no por la calidad de las lentes). orientarla hacia el ojo del observador
Imagen de células de cebolla.
SISTEMA DE ILUMINACION:
Se consideran dentro de este grupo a los instrumentos que
proporcionan energía luminosa al microscopio. Las fuentes de
energía luminosa son de dos tipos natural y artificial.
a) La luz natural: Emitida por el sol, se obtiene de manera
indirecta mediante un espejo que posee una superficie
plana y otra cóncava. El espejo está situado en la
superficie superior de la base o pie. Un mecanismo
especial permite orientarlo hacia un lugar iluminado
indirectamente por el sol (una ventana, por ejemplo) y
luego dirigir el haz luminoso hacia la lente del
condensador.

Investiga: ¿Qué tipos de

lámparas usan los microscopios
ópticos compuestos?

b) La luz artificial: Se genera a través de una lámpara de

bajo voltaje (generalmente de 6 voltios) que, mediante

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 un termostato regula la emisión y la intensidad de luz. Al
igual que el espejo, este sistema de iluminación se
inserta en la base o pie del microscopio.
c) Lámpara: Es la fuente de luz utilizada para producir la
Los microscopios electrónicos
iluminación.
están formados por una pistola
de e- (produce y acelera e-),
d) Sistema de focalización: Es el conjunto de lentes y
lentes magnéticas (enfoca el haz espejos que dirigen los rayos de la lámpara al
de e-), lente de objetivo y un condensador y que regulan la cantidad de luz que llega a
sistema de vacío (evita el choque este.
de e-con el aire).
Se requieren tres elementos para visualizar células en un
microscopio óptico. Primero, se debe enfocar una luz brillante
sobre el espécimen mediante las lentes del condensador,
segundo, el espécimen debe estar cuidadosamente preparado
para permitir que la luz lo atraviese y tercero, se debe alinear un
sistema apropiado de lentes (objetivo y ocular) para enfocar una
imagen del espécimen en el ojo.
Investiga:
a) ¿Qué son los fotones? MICROSCOPIO COMPUESTO DE FLUORESCENCIA
b) ¿Qué es la fluorescencia? Los colorantes fluorescentes utilizados para teñir las células se
c) ¿Cuáles son las moléculas detectan con la ayuda de un microscopio de fluorescencia. Éste
fluorocromaticas y fluoróforas? es similar a un microscopio óptico, excepto que la luz atraviesa
Responde brevemente. dos sistemas de filtros. El primero filtra la luz antes de que
alcance el espécimen y sólo deja pasar las longitudes de onda
que excitan al colorante fluorescente usado. El segundo bloquea
esta luz y sólo deja pasar las longitudes de onda emitidas por el
colorante fluorescente. Los objetos teñidos se ven de color
brillante sobre un fondo oscuro.
La microscopía de fluorescencia se utiliza para detectar
sustancias con autofluorescencia como la vitamina A o
sustancias marcadas con fluorocromos. Además, permite
determinar la distribución de una solo especie de molécula, su
cantidad y ubicación en el interior de la célula. Se pueden
realizar estudios de localización e interacción, así como observar
las concentraciones de iones y procesos intra y extracelulares
como la endocitosis y exocitosis.

PRINCIPIO DE FLUOROSCENCIA
La fluorescencia es uno de los fenómenos físicos más utilizados
en microscopía biológica y analítica, principalmente por su alta

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 sensibilidad y especificidad. La fluorescencia es un fenómeno de
luminiscencia de vida corta, y es la propiedad que tienen ciertas
moléculas denominadas fluorocromos y fluoróforos.
El MEB genera imágenes
llamativas de objetos
MICROSCOPIA ELECTRONICA
tridimensionales con gran
La microscopia electrónica es una técnica que utiliza un haz de
profundidad de foco y puede
electrones acelerados para iluminar y para producir imágenes de
resolver detalles en un rango de
2 a 20 nm, lo que depende del especímenes. Estos permiten a científicos estudiar el pequeño
aparato detalle de los especímenes y observar la ultraestructura de
células, de microorganismos, de cristales y de metales, por
ejemplo.

MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO (MEB)

Es una técnica de microscopía electrónica capaz de producir
imágenes de alta resolución de la superficie de una muestra
utilizando las interacciones electrón-materia. Utiliza un haz de
electrones en lugar de un haz de luz para formar una imagen. Los
MEB poseen una gran profundidad de campo, que permite
enfocar a la vez gran parte de la muestra. También producen
imágenes de alta resolución, de forma que las características
más ínfimas de la muestra pueden ser examinadas con gran
amplificación. La preparación de las muestras es relativamente
Reflexiona: ¿El MEB podrían ser fácil ya que la mayoría de los MEB sólo requieren que estas sean
utilizados para observar el conductoras. La muestra generalmente se recubre con una capa
proceso de fisión binaria de las de carbono o una capa delgada de un metal, como el oro, para
bacterias? Justifica
darle carácter conductor. Posteriormente, se barre la superficie
con electrones acelerados que viajan a través del cañón. Un
detector formado por lentes basadas en electroimanes, mide la
cantidad e intensidad de los electrones que devuelve la muestra,
siendo capaz de mostrar figuras en tres dimensiones mediante
imagen digital.
El MEB utilizan ampliamente en
la biología celular. Aunque
permite una menor capacidad
de aumento que el microscopio
electrónico de transmisión.

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En el microscopio electrónico de barrido es necesario acelerar

los electrones en un campo eléctrico, para aprovechar de esta
manera su comportamiento ondulatorio. Los electrones
acelerados salen del cañón, y se enfocan mediante las lentes
condensadora y objetiva, cuya función es reducir la imagen del
filamento, de manera que incida en la muestra un haz de
electrones lo más pequeño posible (para así tener una mejor
resolución). Con las bobinas deflectoras barren este fino haz de
electrones sobre la muestra, punto por punto y línea por línea.
Cuando el haz incide sobre la muestra, se producen muchas
interacciones entre los electrones del mismo haz y los átomos
de la muestra; puede haber, por ejemplo, electrones que
reboten como las bolas de billar.
Este instrumento permite la observación y caracterización
superficial de materiales inorgánicos y orgánicos, entregando
información morfológica del material analizado. A partir de él se
El MET tiene un aumento útil de
producen distintos tipos de señal que se generan desde la
hasta un millón de veces y, en
muestra y se utilizan para examinar muchas de sus
muestras biológicas, puede
resolver detalles de tan solo características. Con él se pueden observar los aspectos
alrededor de 2 nm. morfológicos de zonas microscópicas de diversos materiales,
Microfotografía de un Complejo además del procesamiento y análisis de las imágenes obtenidas.
de Golgi.
MICROSCOPIO ELECTRONICO DE TRANSMICION (MET)
Es un microscopio que utiliza un haz de electrones para visualizar
un objeto, debido a que la potencia amplificadora de un
microscopio óptico está limitada por la longitud de onda de la
luz visible. Lo característico de este microscopio es el uso de una
muestra ultrafina y que la imagen se obtenga de los electrones
que atraviesan la muestra. Los microscopios electrónicos de

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 transmisión pueden aumentar un objeto hasta un millón de
veces. Debido a que los electrones tienen una longitud de onda
mucho menor que la de la luz visible, pueden mostrar
estructuras mucho más pequeñas.
El microscopio electrónico de transmisión emite un haz de
electrones dirigido hacia el objeto que se desea aumentar. Una
parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y
otros lo atraviesan formando una imagen aumentada de la
muestra. Para utilizar un microscopio electrónico de transmisión
debe cortarse la muestra en capas finas, no mayores de un par
Indica como mínimo cinco de miles de ángstroms. Los microscopios electrónicos de
diferencias y semejanzas entre transmisión pueden aumentar un objeto hasta un millón de
el MEB y el MET. veces.
La principal función del microscopio electrónico de transmisión
es estudio de los metales y minerales y el estudio de las células
a nivel molecular. Siendo así un papel muy importante en la
industria de la metalurgia. A su vez se utiliza en la microbiología,
para observar la estructura de los virus. También es usado en la
anatomía patológica, para diagnosticar partiendo de la
ultraestructura celular.

Una de las ventajas del

microscopio confocal es que se
trata de un método de
naturaleza no invasiva y la
muestra conserva sus
características originales. Se
observan mitocondrias (en rojo),
núcleos (en azul) y microtúbulos
(en verde).

El microscopio electrónico de transmisión (MET) es, en principio,

similar a un microscopio óptico, pero emplea un haz de
electrones en lugar de un haz de luz, y bobinas magnéticas para
enfocar el haz en lugar de lentes de cristal. El espécimen, que se
coloca en el vacío, debe ser muy delgado. Por lo general, el
contraste se introduce tiñendo el espécimen con metales
pesados electrodensos que absorben o dispersan localmente

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 electrones y los eliminan del haz cuando éste atraviesa la
muestra.

MICROSCOPIO CONFOCAL LASER DE BARRIDO

Combina el microscopio de fluorescencia con la imagen
electrónica y puntos de luz suministrados, que nos permite
obtener imágenes en tres dimensiones sobre el objeto deseado.
La herramienta de Microscopía Confocal de Barrido Láser es
valiosa para: obtener imágenes de alta resolución, para la
reconstrucción 3D de estructuras biológicas marcadas con
fluorocromos y para el estudio de especímenes donde es de
interés mostrar la superficie. Permite obtener imágenes de
mayor calidad mediante técnicas de filtrado que eliminan la luz
Investiga: que proviene de planos fuera de foco. Esto permite controlar la
¿Qué usos tienen los profundidad de campo y, además, obtener series de imágenes
microscopios con focales laser
del espécimen cambiando el plano del foco. Son visibles las
de barrido? Describe
regiones que quedan enfocadas, el resto del preparado aparece
brevemente.
negro. Por lo tanto, la aplicación de este tipo de microscopía no
está limitada a muestras delgadas.
El microscopio confocal es un tipo especializado de microscopio
de fluorescencia que construye una imagen por barrido del
espécimen con un haz láser. El haz se enfoca en un solo punto a
una profundidad determinada del espécimen, y un orificio en el
detector permite que sólo la fluorescencia emitida desde este
mismo punto sea incluida en la imagen. El barrido del haz por el
espécimen genera una imagen definida del plano del foco: un
El índice de refracción se obtiene
corte óptico. Una serie de cortes ópticos a diferentes
utilizando la siguiente formula:
𝒗𝒆𝒍𝒐𝒄𝒊𝒅𝒂𝒅 𝒅𝒆 𝒍𝒂 𝒍𝒖𝒛𝒂𝒊𝒓𝒆 profundidades permite construir una imagen tridimensional.
𝑰𝑹 =
𝒗𝒆𝒍𝒐𝒄𝒊𝒅𝒂𝒅 𝒅𝒆 𝒍𝒂 𝒍𝒖𝒛𝒎𝒆𝒅𝒊𝒐

Resuelve: Si la velocidad de la luz

es de 300,000 Km/s en el aire y
al atravesar el lente del Formación de Imágenes
microscopio se reduce a
200, 000 km./s. ¿cuál será su IR? La capacidad que tienen los objetivos de formar imágenes en
donde se distingan más detalles del objeto examinado depende

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 de una serie de factores como los que se mencionan a
continuación:
1) ÍNDICE DE REFRACCION
Se denomina así a la relación existente entre la velocidad de la
luz en el aire y su velocidad en el medio transparente utilizado.
De la misma manera, se pueden obtener los índices de
refracción de una serie de sustancias que se utilizan en la
La apertura numérica de un construcción y tallado de las lentes de los objetivos.
objetivo guarda una relación
directamente proporcional con 2) ANGULO DE APERTURA:
el aumento propio del objetivo y Es la capacidad de un objetivo de captar los rayos luminosos
también con la capacidad que refractados cuando éstos atraviesan un medio transparente.
tiene de mostrar mayores Cuanto mayor sea este ángulo, la lente frontal del objetivo
detalles. aceptará una mayor cantidad de ellos. Dependiendo del índice
de refracción del material transparente que forma la lente del
condensador, o la interfase (aire o sustancia de inmersión) que
exista entre el objeto y la lente frontal del objetivo, el ángulo de
apertura será mayor o menor

A la mitad del ángulo de apertura se le denomina alfa, por

Reflexiona: Si la apertura ejemplo, si el ángulo de apertura de un objetivo es de 50º, su
numérica da un valor elevado, se valor alfa será de 25º. Este valor es importante pues permitirá
observarán pocos detalles. ¿Esto calcular un factor que tiene que ver directamente con la
es correcto? Justifica capacidad del objetivo para formar imágenes que muestren más
detalles, es decir mejor resueltas.

3) APERTURA NUMERICA (NA)

Es una medida que indica la capacidad del objetivo de poder
captar los rayos refractados por las estructuras finas de las
cuales está constituido el objeto que se observa. Esta capacidad
se traduce en el poder del microscopio de formar imágenes que
muestren al observador una serie de detalles del objeto que se
está examinando. Cuanto mayor sea la apertura numérica de un
objetivo, éste tendrá una mayor capacidad de mostrar detalles

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Comparación de los diferentes finos en la imagen que forma. La apertura numérica de un
poderes de resolución objetivo se calcula empleando la fórmula matemática siguiente
𝑵𝑨 = 𝒏. 𝒔𝒆𝒏 𝜶
Donde n representa el índice de refracción de la interfase que
separa el cubreobjeto de la muestra examinada y la lente frontal
del objetivo y α es la mitad del ángulo de apertura.

4) AUMENTO DE UN OBJETIVO
Es la capacidad que posee un objetivo de ampliar la imagen del
objeto observado. Se define como la relación entre el tamaño de
la imagen y el objeto, en valores lineales (largo y ancho). En la
relación anterior, un objetivo que tiene grabado en la camiseta
la cifra 10x aumentará 10 veces el tamaño de la imagen del
objeto examinado.

5) PODER DE RESOLUCION
El poder resolutivo es la capacidad que tiene un microscopio (o
el ojo humano, etc.) de percibir por separado dos puntos
Reflexiona: pequeños, adyacentes y cercanos. Vale decir, es la capacidad
“Si el poder de resolución es
para percibir detalles.
alto, el límite de resolución será
El poder resolutivo del microscopio no guarda relación alguna
bajo, pero si el límite de
con el aumento del mismo. Depende principalmente de la
resolución es alto, el poder de
resolución será bajo”. ¿Esto es V apertura numérica de la lente y de la longitud de onda de la luz
o F? Justifica. utilizada. Podemos decir que es un valor determinado, entre
otras cosas, por el diámetro de la lente. La calidad de una
imagen, en la que se observe la claridad, nitidez y la riqueza de
detalles, depende del poder de resolución del objetivo. A mayor
poder de resolución, mayor calidad de imagen

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 FORMULA DEL PODER DE RESOLUCION
El poder de resolución (PR) de un objetivo depende de la
longitud de onda (λ) del rayo luminoso utilizado y la apertura
numérica del sistema óptico del objetivo.
El límite de resolución es la
menor distancia que debe existir
entre dos objetos para que
puedan visualizarse por
separado. A mayor PR menor
límite de resolución.
𝝀
𝑬=
𝑨𝑵
Donde  es la longitud de onda
de la luz, y AN la apertura
numérica del objetivo.

Esto significa que si empleamos un objetivo de AN = 1.25 con

una longitud de onda de 560nm, el poder de resolución será de
273nm, la cifra obtenida nos indica que el objetivo será capaz de
distinguir o resolver la imagen de dos puntos que en el objeto
están separados entre sí por 273nm. Si la separación de ellos es
menor a esta cifra el objetivo no podrá distinguirlos como dos
Resuelve:
puntos separados. La cifra resultante de aplicar la fórmula se
Si un microscopio tiene un límite
denomina límite de resolución.
de resolución de 200nn, ¿podrá
observar una estructura que Un cálculo más exacto del poder de resolución se obtiene
tenga 0,1 micrones de tamaño? cuando en la fórmula se añade la apertura numérica del
condensador, tal como se observa en la fórmula (b). Cuando se
efectúa correctamente la iluminación del objeto utilizando
(adecuar la distancia apropiada del condensador y la regulación
de captación de la luz abriendo o cerrando el diafragma iris del
mismo) la apertura numérica del condensador, la imagen que
forma el objetivo logra mostrar el máximo poder de resolución.
Por ejemplo, si se emplea el mismo objetivo del caso anterior
(de AN = 1.25), el mismo tipo de luz (λ = 560nm) y se ilumina la
muestra con un condensador de AN = 80 es posible comprobar
lo mencionado anteriormente.
Al realizar los cálculos correspondientes resulta que el poder de
resolución del objetivo, sin tomar en cuenta la AN del
condensador, es de 273nm. En cambio, cuando se incluye la
apertura numérica del condensador el resultado es de 166nm.
Estas cifras nos demuestran que cuando se realiza la iluminación

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del objeto mediante el uso adecuado del condensador, la
capacidad del objetivo de resolver detalles mejora casi en un
60% más.
El máximo poder de resolución que se puede obtener es de 0.2
micrones aproximadamente, para lo cual se requiere que el
microscopio proporcione una imagen de un aumento total de
1000x a 1400x.

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