CALCIO

MÉTODO CON O-CRESOLFTALEÍNA

Para la determinación “in vitro” de calcio en suero, plasma u orina

PRINCIPIO PROCEDIMIENTO
En medio alcalino el calcio sérico forma un complejo coloreado con la
o-cresolftaleína. La presencia de 8-hidroxiquinoleína en el reactivo evita la
Técnica BL mL ST mL PR mL
interferencia por el magnesio.
Muestra -- -- 0,01
UTILIDAD DIAGNÓSTICA
El calcio es el catión más abundante en el cuerpo humano (99%) y se distribuye Estándar -- 0,01 --
mayoritariamente en los huesos. Reactivo de trabajo 1,00 1,00 1,00
Se encuentran niveles altos de calcio sérico en el hiperparatiroidismo primario
y terciario, enfermedades oncológicas (carcinoma metástico de mama, riñón o
Mezclar bien e incubar 5 min. a temperatura ambiente (20-25ºC).
pulmón, leucemias, mieloma múltiple), intoxicación por vitamina D, aumento de
la retención renal, sarcoidosis, osteoporosis, tirotoxicosis.
Lectura
Niveles bajos de calcio pueden atribuirse a insuficiencia renal, hipoparatiroidismo,
Longitud de onda: 565 nm.
déficit de vitamina D, malnutrición o malabsorción.
Blanco: el contenido del tubo BL.
Una única prueba de laboratorio no permite establecer un diagnóstico. Los
Estabilidad del color: un mínimo de 1 hora.
resultados se han de evaluar en el contexto de todos los datos clínicos y de
laboratorio obtenidos. CÁLCULOS
Abs. PR
REACTIVOS x 10 = mg de calcio / dL
Abs. ST
Kit 2 x 100 mL. (Ref. 99 59 36). Contiene:
A. 1 x 100 mL o-Cresolftaleína Ref. 99 99 36
B. 1 x 100 mL Revelador de color Ref. 99 47 42 Abs. PR
x 10 x 2 x vol(dL) orina/24h = mg de calcio / 24h (orina)
C. 1 x 5 mL Estándar Ref. 99 19 21 Abs. ST

Donde:
PREPARACIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO Abs. PR: Absorción de la muestra
Mezclar volúmenes iguales de los dos reactivos (A y B). Abs. ST: Absorción del Standard
El estándar está listo para su uso.
Unidades SI
(mg/100 mL) x 0,2495 = mmol/L
COMPOSICIÓN DEL REACTIVO DE TRABAJO
Las concentraciones en la disolución reactiva son: VALORES DE REFERENCIA
2-amino-2-metil-1-propanol 0,35 M Suero:
o-cresolftaleína 0,04 mM Recién nacidos: 8,0 - 13,0 mg/dL
8-hidroxiquinoleína 12 mM Niños: 8,8 – 12,0 mg/dL
HCl 2,5 mM Adultos: 8,8 - 10,5 mg/dL
Conservantes y estabilizantes Orina: 100 - 300 mg/24 h

Estándar: Disolución acuosa de calcio, equivalente a 10 mg/dL (2,49 mmol/L). Estos valores son orientativos. Se recomienda que cada laboratorio establezca
sus propios valores de referencia.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Los componentes del kit, mantenidos a 2 - 8ºC, son estables hasta la fecha de PRESTACIONES. CARACTERÍSTICAS DE FUNCIONAMIENTO
caducidad indicada en la etiqueta. Las características de funcionamiento de un producto dependen tanto del
El reactivo de trabajo es estable 3 días a temperatura ambiente (≤ 25ºC) reactivo como del sistema de lectura empleado.
y 15 días a 2-8ºC. Los resultados siguientes se han obtenido de forma manual.

Indicaciones de alteración de los reactivos: Sensibilidad, como límite de detección: 0,9mg/dL

Presencia de partículas o turbidez. Blanco del reactivo de trabajo > 0,300. Linealidad: Hasta 20 mg/dL. (4,99 mmol/L). Para concentraciones superiores,
diluir la muestra con agua desionizada. Multiplicar el resultado final por el factor
MATERIAL NECESARIO NO SUMINISTRADO de dilución.
Material común de laboratorio. Exactitud, como % de recuperación: 96,8%
Espectrofotómetro, analizador automático o fotómetro. Precisión en la serie, como CV%: 2,44%
Precisión entre series, como CV%: 2,72%
MUESTRA Veracidad. Los resultados obtenidos con el reactivo no presentan diferencias
Suero, plasma heparinizado u orina. El calcio en suero es estable 10 días significativas al compararlo con el reactivo considerado de referencia.
a 2-8ºC. Se aconseja acidificar las muestras de orina de 24 h para evitar la Los datos detallados del estudio de las prestaciones del reactivo están
precipitación del calcio y diluir con agua desionizada (1+1) antes de proceder a disponibles bajo demanda.
la determinación . Multiplicar el resultado final por 2.
INTERFERENCIAS
PRECAUCIONES Concentraciones de bilirrubina superiores a 20 mg/dL y de fosfatos superiores a
Las indicaciones de seguridad se encuentran en la etiqueta de los productos. 40 mg/dL, interfieren en la reacción. La presencia de magnesio hasta 10 veces
Manipular con precaución. su concentración normal en la sangre, no influye en los resultados.
Se aconseja consultar la ficha de datos de seguridad antes de la manipulación No pueden utilizarse para la determinación del calcio plasmas obtenidos con
del reactivo. La eliminación de residuos debe hacerse según la normativa legal anticoagulantes que actúen como secuestrantes: EDTA, fluoruros, oxalatos;
vigente. etc.
Se recomienda el uso de material desechable para evitar contaminaciones.
CONTROL DE CALIDAD
Es recomendable la inclusión de sueros control, Seriscann Normal (Ref. 99 41 BIBLIOGRAFÍA
48) y Seriscann Anormal (Ref. 99 46 85), en cada proceso de medida para Kessler, G.,Wolfman, M. (1964) Clin. Chem.,10, 686- 703.
verificar los resultados. Connerty, H.V., Briggs, A.R. (1965) Am. J. Clin. Pathol., 45, 290 - 296.
Se aconseja que cada laboratorio establezca su propio programa de control de Gitelman, H. J., 1967) Anal. Biochem., 18, 521 - 531.
calidad y los procedimientos de corrección de las desviaciones en las medidas. Biggs, H. G., Moorehead, W. R. (1974). Clin. Chem., 20, 1458 - 1460.
Tiezt, NW., Textbook of Clinical Chemistry 5th Edition, W.B. Saunders,
AUTOANALIZADORES Philadelphia (2012).
Adaptaciones a distintos analizadores automáticos, disponibles bajo demanda.

QUIMICA CLINICA APLICADA S.A.

Empresa Certificada ISO 9001 / ISO 13485
A 7 Km 1081 – P.O. Box 20 - E43870 AMPOSTA / SPAIN
Tel. ++ 34 (977) 70. 62. 30 Fax ++ 34 (977) 70. 30. 40
Revisión: 10.2017 PRO4-9_CA_5
CALCIUM
O-CRESOLPHTHALEIN METHOD
For “in vitro” determination of calcium in serum, plasma or urine

PRINCIPLE PROCEDURE
At alkaline pH values, serum calcium forms a coloured complex with
Technique BL mL ST mL SA mL
o-cresolphthalein, 8-hydroxyquinolein is included in the reagent as a
chelating agent of magnesium ions which can interfere with the reaction. Sample -- -- 0.01
DIAGNOSTIC USE Standard -- 0.01 --
Calcium is the most abundant cation in the human body (99%) and is distributed
Working reagent 1.00 1.00 1.00
mainly in the bones.
High calcium levels are found in the primary and tertiary hyperparathyroidism,
Mix well and incubate at room temperature (20-25ºC) for 5 min.
cancer diseases (metastatic breast carcinoma, kidney or lung, leukemia,
multiple myeloma), vitamin D intoxication, increased renal retention, sarcoidosis, Reading
osteoporosis, thyrotoxicosis. Wavelength: 565 nm
Low calcium levels can be attributed to renal failure, hypoparathyroidism, Blank: BL contents
vitamin D deficiency, malnutrition or malabsorption. Colour stability: a minimum of 1 hour
Single test result could not be used to make a clinical diagnosis. It should CALCULATIONS
integrate clinical and laboratory data.
SA Abs
x 10 = mg de calcium / dL
REAGENTS ST Abs
Kit 2 x 100 mL. (Ref. 99 59 36). Contents:
A. 1 x 100 mL o-Cresolphthalein Ref. 99 99 36 SA Abs
x 10 x 2 x vol(dL) urine/24h = mg de calcio / 24h (urine)
B. 1 x 100 mL Colour developer Ref. 99 47 42 ST Abs
C. 1 x 5 mL Standard. Ref. 99 19 21 Where:
SA Abs: Sample Absorbance
WORKING REAGENT PREPARATION ST Abs: Standard Absorbance
Mix equal volumes of each reagent (A and B).
Standard is ready to use. SI Units
(mg/dL) x 0.2495 = mmol/L
WORKING REAGENT COMPOSITION
The reagent composition is as follows: REFERENCE VALUES
2-amino-2-methyl-1-propanol 0.35 M Serum
o-cresolphthalein 0.04 mM Newborn: 8.0 – 13.0 mg/dL
8-hydroxyquinolein 12 mM Children: 8.8 – 12.0 mg/dL
HCl 2.5 mM Adults: 8.8 – 10.5 mg/dL
Preservatives and stabilizers Urine: 100 - 300 mg/24 h

Standard: Aqueous solution of calcium equivalent to 10 mg/dL (2.49 mmol/L). The stated values are for guidance. Each particular laboratory should establish
its own normal range, using its own instrumentation, blood collection methods
STORAGE AND STABILITY and test procedures
The components of the kit, when stored at 2 - 8ºC, will remain stable until the
expiration date stated on the label. PERFORMANCE CHARACTERISTICS
The working reagent will remain stable 3 days at room temperature (≤ 25ºC) and The performance characteristics depend on the method used. It is recommended
15 days at 2-8ºC to calculate these data for each particular test protocol. These results have been
obtained using a manual method.
Signs of reagent deterioration:
Presence of particles or turbidity in the reagent. Working reagent blank >0.300.
Sensitivity, as detection limit: 0.9 mg/dL
Linearity:20 mg/dL (4.99 mmol/L).Samples that give higher concentration should
ADDITIONAL EQUIPMENT
be diluted in deionised water and the final result has to be multiplied by the
General laboratory equipment.
dilution factor.
Spectrophotometer, photometer or automated analyzer.
Accuracy: 96.8%
SAMPLE Repetitivity, as CV%: 2.44%
Serum or plasma with heparin or urine. Serum calcium remains unchanged for Reproducibility, as CV%: 2.72%
10 days at 2-8ºC. Trueness: Results obtained with this reagent did not show systematic differences
It is advisable acidifying the samples of 24 hr urine to avoid precipitation of when compared with reference reagent.
calcium and dilute with deionized water (1+1) prior to the determination. Multiply
the final result by 2. Details of the performance studies are available on request.

CAUTION INTERFERENCES
The safety statements are on the label. Handle the reagent with care. Bilirubin concentrations higher than 20 mg/dL, and phosphates higher than
It is advisable to look at the MSDS before using the reagent. 40 mg/dL, will interfere with the assay.
The disposal of the residues has to be made according to legal local regulations. Magnesium ions up to tenfold their normal upper limit in blood will not disturb
the final results.
QUALITY CONTROL Those anticoagulants which can behave as chelating agents shall never be
Control serum, Seriscann Normal (Ref. 99 41 48) and Seriscann Abnormal (Ref. used with this test (EDTA, fluoride, oxalate...).
99 46 85) should be included in each test series. Each particular laboratory To avoid undesirable contaminations it is expressly recommended the use of
should establish its own control program. disposal plasticware.

AUTOANALYZERS REFERENCES
Adaptations to different autoanalyzers are available on request. Kessler, G.,Wolfman, M. (1964) Clin. Chem.,10, 686- 703.
Connerty, H.V., Briggs, A.R. (1965) Am. J. Clin. Pathol., 45, 290 - 296.
Gitelman, H. J., 1967) Anal. Biochem., 18, 521 - 531.
Biggs, H.G., Moorehead, W.R. (1974). Clin. Chem., 20, 1458 - 1460.
Tiezt, NW., Textbook of Clinical Chemistry 5th Edition, W.B. Saunders,
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CALCIUM
MÉTHODE UTILISANT L’O-CRÉSOLPHTALÉINE
Pour la détermination in vitro du calcium dans le sérum, le plasma ou l’urine

PRINCIPE TECHNIQUE
En milieu alcalin, le calcium sérique forme un complexe coloré avec l’o-
Technique BL mL ÉTALON mL ESSAI mL
crésolphtaléine. La présence de la 8-hydroxyquinoléine dans le réactif évite
l’interférence due au magnésium. Échantillon -- -- 0,01
UTILITÉ DE DIAGNOSTIC Étalon -- 0,01 --
Le calcium est le cation le plus abondant dans le corps humain (99 %) et on le
retrouve principalement dans les os. Réactif de travail 1,00 1,00 1,00
Des taux élevés de calcium sérique sont observés lors d’hyperparathyroïdies Bien mélanger puis incuber 5 minutes à température ambiante (20 - 25ºC).
primaires et tertiaires, de maladies oncologiques (carcinomes métastatiques du
sein, des reins ou des poumons, leucémies, myélome multiple), d’intoxication Lecture
à la vitamine D, d’augmentation de la rétention rénale, de sarcoïdose, Longueur d’onde: 565 nm
d’ostéoporose, ou d’hyperthyroïdie. Blanc: le contenu du tube BL
Des taux faibles de calcium peuvent être attribués à une insuffisance rénale, Stabilité de la coloration: 1 heure minimum
une hypoparathyroïdie, une carence en vitamine D, une malnutrition ou une
malabsorption. CALCULS
Un test de laboratoire unique ne peut pas établir un diagnostic. Les résultats
Abs. ESSAI
doivent être évalués dans le contexte de toutes les données cliniques et de x 10 = mg de calcium/dL
laboratoire obtenus. Abs. ÉTALON

RÉACTIFS
Abs. ESSAI
Kit 2 x 100 mL. (Réf. 99 59 36). Contenu: x 10 x 2 x vol(dL) urine/24h = mg de calcio / 24h (urine)
A. 1 x 100 mL o-Crésolphtaléine Réf. 99 99 36 Abs. ÉTALON
B. 1 x 100 mL Révélateur de couleur Réf. 99 47 42 Où:
C. 1 x 5 mL Étalon Réf. 99 19 21 Abs. ESSAI : Absorption de l’échantillon
Abs. ÉTALON: Absorption de l’étalon
PRÉPARATION DU RÉACTIF DE TRAVAIL
Mélanger des volumes égaux des deux réactifs (A et B). Unités SI
L’étalon est prêt à l’emploi. (mg/dL) x 0,2495 = mmol/L

COMPOSITION DU RÉACTIF DE TRAVAIL VALEURS DE RÉFÉRENCE

Les concentrations dans la solution réactive sont les suivantes: Sérum:
2-amino-2-méthyl-1-propanol 0,35 M Nouveau-nés: 8,0 - 13,0 mg/dL
o-crésolphtaléine 0,04 mM Enfants: 8,8 – 12,0 mg/dL
8-hydroxyquinoléine 12 mM Adultes: 8,8 - 10,5 mg/dL
HCl 2,5 mM Urine: 100 - 300 mg/24 h
Conservateurs et stabilisants
Étalon: Solution aqueuse de calcium équivalent à 10 mg/dL (2,49 mmol/L). Ces valeurs sont indicatives. Il est recommandé que chaque laboratoire
établisse ses propres valeurs de référence.
CONSERVATION ET STABILITÉ
Conservés à une température comprise entre 2 et 8ºC, les réactifs sont stables PERFORMANCE. CARACTÉRISTIQUES DE FONCTIONNEMENT
jusqu’à la date de péremption indiquée sur l’étiquette. Le fonctionnement du produit dépend tant du réactif que du système de lecture
Le réactif de travail est stable pendant 3 jours à température ambiante (≤ 25ºC) manuel ou automatique utilisé. Les résultats suivants ont été obtenus avec une
et 15 jours entre 2 et 8ºC. méthode manuelle.
Les réactifs seront altérés si:
Il existe une présence de particules ou de turbidité. Sensibilité comme limite de détection: 0,9 mg/dL
Blanc réactif de travail >0,300. Linéarité: L’essai est linéaire jusqu’à 20 mg/dL (4,99 mmol/L). Pour des
concentrations supérieures, diluer l’échantillon avec de l’eau déionisée.
MATÉRIEL NÉCESSAIRE MAIS NON FOURNI Multiplier le résultat final par le facteur de dilution.
Matériel courant de laboratoire. Exactitude: le pourcentage de récupération est de 96,8%.
Spectrophotomètre, analyseur automatique ou photomètre. Coefficient de variation dans la série: 2,44 %
Coefficient de variation entre les séries: 2,72 %
ÉCHANTILLON Justesse. Les résultats obtenus avec le réactif ne sont pas significativement
Sérum, plasma héparinisé ou urine. Le calcium est stable dans le sérum pendant différents par rapport au réactif de référence considéré.
10 jours entre 2 et 8ºC. L’étude détaillée de la performance du réactif est disponible sur demande.
Nous suggérons acidifier les urines de 24h pour éviter la précipitation de calcium.
Diluer l’échantillon avec de l’eau désionisée (1+1) avant l’essai. Multipliez le INTERFÉRENCES
résultat par 2. Des concentrations de bilirubine supérieures à 20 mg/dL et de phosphates
supérieures à 40 mg/dL interfèrent avec la réaction. La présence de
PRÉCAUTIONS D’EMPLOI magnésium jusqu’à 10 fois sa concentration normale dans le sang
Les avertissements de sécurité sont indiqués sur l’étiquette. Manipuler avec n’interfère pas avec les résultats.
précaution. On conseille de consulter la fiche des données de sécurité avant de Pour la détermination du calcium, ne pas utiliser les plasmas obtenus avec des
manipuler le réactif. L’élimination des déchets doit être effectuée conformément anticoagulants agissant comme des agents séquestrants, tels que l’EDTA, les
aux normes en vigueur. fluorures, les oxalates, etc.
L’utilisation de matériel jetable est recommandée afin d’éviter des
CONTRÔLE DE QUALITÉ contaminations.
Nous recommandons l’inclusion de sérums de contrôle Seriscann normale (Réf.
99 41 48) et Seriscann anormale (Réf 99 46 85) dans chaque processus de BIBLIOGRAPHIE
mesure pour vérifier les résultats. Kessler, G.,Wolfman, M. (1964) Clin. Chem.,10, 686- 703.
Nous suggérons que chaque laboratoire d’établir son propre programme et les Connerty, H.V., Briggs, A.R. (1965) Am. J. Clin. Pathol., 45, 290 - 296.
procédures de correction des écarts dans les mesures de contrôle qualité. Gitelman, H. J., 1967) Anal. Biochem., 18, 521 - 531.
Biggs, H. G., Moorehead, W. R. (1974). Clin. Chem., 20, 1458 - 1460.
ANALYSEURS AUTOMATIQUES Tiezt, NW., Textbook of Clinical Chemistry 5th Edition, W.B. Saunders,
Des adaptations à différents analyseurs automatiques sont disponibles sur Philadelphia (2012).
demande.

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