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UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTOBAL DE HUAMANGA
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
ESCULA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA
MICROBIOLOGIA CLÍNICA BM-544
PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO PARA

SUSCEPTIBILIDAD A ANTIMICROBIANOS
DOCENTE:
Dr. Ango Aguilar, Homero
ESTUDIANTE:
Asto Huamán, Deybi
GRUPO DE PRÁCTICA
Miércoles 10-1pm
AYACUCHO-PERÚ
2021
LABORATORIOS INNOVA CÓDIGO LAB-LI-POESA
POE
VERSIÓN 01
PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDARIZADO DE PÁGINA 1 de 24

SUSCEPTIBILIDAD ANTIMICROBIANA
LABORATORIO
INNOVA
Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:

Asto Huamán, Deybi Dr. Homero Ango Aguilar Fecha de aprobación:
Dr. Homero Ango Aguilar
16/06/2021
SE PROHIBE LA REPRODUCCIÓN TOTAL O PARCIAL DE LA PRESENTE GUÍA DE

USO EXCLUSIVO DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA CLÍNICO.
POE
VERSIÓN 01

1. OBJETIVOS
Describir los procedimientos para determinación de la susceptibilidad antimicrobiana mediante

el método de disco difusión (Kirby – Bauer).
2. CAMPO DE APLICACIÓN
Comprende la determinación de la susceptibilidad antibiótica mediante el método de disco

difusión (Kirby – Bauer) e interpretación de los resultados, de las bacterias que a continuación
se señalan:
• Staphylococcus spp
• Enterococcus spp
• Pseudomonas aeruginosa
• Acinetobacter spp
• Enterobacterias
• Streptococcus pneumoniae
• Streptococcus spp
• Haemophilus spp
3. RESPONSABILIDADES
Los responsables del laboratorio “INNOVA”, son responsables de autorizar el aprovisionamiento

de recursos necesarios para el cumplimiento del presente manual de procedimientos, así como
designar al personal idóneo y calificado para realizar las disposiciones contenidas en el mismo.
El personal del laboratorio “INNOVA”, es responsable de planificar las acciones, organizar,

controlar y capacitar al personal para cumplir las disposiciones contenidas en el presente
Manual.

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VERSIÓN 01

Los jefes o responsables de los laboratorios, deben asegurar el control interno de la calidad, la
idoneidad del personal, equipos, materiales, reactivos e instalaciones.
El personal médico, técnico y operativo, es responsable de seguir las especificaciones contenidas

en el presente Manual y aplicar los procedimientos específicos indicados.
4. DOCUMENTOS DE REFERENCIA
• Instituto Nacional de Salud. MANUAL DE NORMAS DE BIOSEGURIDAD. Serie de

Normas Técnicas Nº 18. diciembre de 1997.
• NCCLS. Performance standards for antimicrobial disk Susceptibility Test: Approved
Standard. Seventh Edition M2-A7. Vol. 20 N°1 2000.
• NCCLS. Performance standards for Antimicrobial Susceptibility Testing; Eleventh
Informational Supplement M100-S11. Vol. 21 N°1 January 2001.
• Comité de l’antibiogramme de la Societé Française de Microbiologie. Communiqué
2000 – 2001.
• Recomendaciones de la Mesa Española de Normalización de la Sensibilidad y
Resistencia a los Antimicrobianos (MENSURA). 2000
5. DEFINICIONES Y ABREVIATURAS
Para los propósitos del presente manual de procedimientos se aplican las siguientes
definiciones:
ANTIBIÓTICO: Agente biológico o químico que inhibe el crecimiento de los microorganismos.
ATCC: American Type Culture Collection.
BIOSEGURIDAD: Conjunto de medidas preventivas para proteger la salud y la seguridad humana
y del ambiente, frente a diferentes riesgos producidos por agentes biológicos, físicos, químicos
o mecánico.
CEPA: Cultivo puro formado por bacterias descendientes de un solo aislamiento.

LABORATORIOS INNOVA CÓDIGO LAB-LSJ-POELSJ
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VERSIÓN 01

COLONIA: Crecimiento visible bacteriano, generalmente en medios sólidos, originada por la

multiplicación de una sola bacteria preexistente.
CONCENTRACIÓN INHIBITORIA MÍNIMA (CIM): Corresponde a la concentración más débil de
un antibiótico capaz de inhibir el crecimiento visible de una cepa bacteriana al cabo de 18 – 24
horas de incubación.
CRIOCONSERVACIÓN: Congelamiento y almacenamiento de células vivas a muy bajas
temperaturas.
DISCO DE SENSIBILIDAD: Discos impregnados con algún antimicrobiano usados para determinar
la susceptibilidad antimicrobiana por disco difusión.
INÓCULO: Alícuota de un cultivo bacteriano transferida a un medio de cultivo.
INTERMEDIO (I): Categoría clínica definida para las pruebas de susceptibilidad in vitro. Esta
categoría incluye las cepas bacterianas que pueden ser inhibidas por concentraciones del
antibiótico superiores a las obtenidas con las dosis habituales, siempre y cuando se puedan
aumentar las dosis empleadas y/o que el antibiótico se concentre fisiológicamente en el tejido
o lugar infectado.
MEDIO DE CULTIVO: Medio artificial de sustancias nutritivas, que puede ser sólido, semisólido
o líquido, necesarias para el crecimiento y multiplicación bacteriana in vitro.
MICROAEROFÍLICO: Organismo que crece y se reproduce mejor en la presencia de una tensión
de 5% de oxígeno, 10% de anhídrido carbónico y 85% de nitrógeno.
RECONSTITUIR: Restablecer la forma original de una sustancia previamente alterada para su
conservación y almacenamiento, mediante la combinación con un líquido adecuado.
REGISTRO: Documento que provee evidencias objetivas de las actividades efectuadas o de los
resultados obtenidos.
RESISTENTE (R): Categoría clínica definida para las pruebas de susceptibilidad in vitro. Las cepas
bacterianas incluidas en esta categoría no son inhibidas por las concentraciones séricas del
antibiótico normalmente alcanzadas con las dosis habituales del mismo, poseen comúnmente
mecanismos específicos de resistencia bacteriana o la eficacia clínica del antibiótico frente a la
bacteria no ha sido comprobada.

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VERSIÓN 01

SENSIBLE (S): Categoría clínica definida para las pruebas de susceptibilidad in vitro. Implica que
una infección debida a la cepa bacteriana estudiada puede ser tratada
apropiadamente con la dosis de antibiótico recomendada para el tipo de infección y la especie
infectante, a menos que existan contraindicaciones.
UFC: Unidad formadora de colonias
6. FASE PRE ANALÍTICA

6.1. PROCEDIMIENTO DE CATEGORIZACIÓN
Para los principales antibióticos, los valores críticos de las concentraciones bajas (c) y altas (C) y
de sus diámetros correspondientes (d, D), permiten la categorización según los siguientes
criterios (Tabla 1):
Tabla 1. Categorización
Categorías Concentración inhibitoria Diámetro del halo de
mínima (mg/L) inhibición (mm)
S CIM £ c DHI ³ D
R CIM > C DHI < d
I c < CIM £ C d £ DHI < D
6.2. MATERIALES Y EQUIPOS

Todos los equipos utilizados en el procesamiento de las muestras clínicas deben estar en
condiciones óptimas. El correcto funcionamiento de los instrumentos y equipos nos asegura la
garantía de la calidad, así como el mantenimiento de buenas prácticas de seguridad tiene una
importante influencia sobre el trabajo y productividad global del laboratorio, pues si un equipo
o instrumental se daña por algún motivo puede haber una interrupción del ritmo de trabajo y
una demora en la emisión de los resultados.

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VERSIÓN 01

6.2.1. Equipos
• Potenciómetro pH – metros
• Incubadoras
• Refrigeradores
• Autoclave
• Cabinas de bioseguridad
• Baño maría
• Espectrofotómetro o Fotocolorímetro
• Vortex (digitador para tubos)
6.2.2. Materiales
• Vernier o Regla
• Termómetros
• Pinza punta plana
• Placas Petri
• Erlenmeyer
• Hisopos de Algodón
• Tubos con Tapa Rosca
• Pipetas
6.3. MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS

6.3.1. Medios de cultivo y reactivos necesarios para la prueba
• Agar Mueller Hinton
• Caldo Mueller Hinton
• Agar Mueller Hinton con 5% de sangre de carnero
• Haemophilus test medium (HTM)

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• Discos de sensibilidad antibiótica

• Cloruro de Bario (BaCl2)
6.3.2. Preparación del Agar Mueller Hinton
Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las indicaciones del fabricante.
Autoclavar y dejar enfriar en baño de agua hasta que alcance los 45°C - 50°C.
Una vez esterilizado y solidificado, medir el pH del agar. El valor del mismo debe encontrarse
entre 7,2 y 7,4 a temperatura ambiente. Esta medición puede realizarse:
Utilizando un electrodo de superficie.

Macerando el medio en agua destilada y utilizando un electrodo de inmersión.
Solidificando el agar con el electrodo del potenciómetro.
Repartir el medio en placas petri (60 ml – 70 ml o 25 ml – 30 ml, para placas de 150 mm o 100
mm de diámetro interno respectivamente), de manera que el grosor del agar en la placa sea de
4 mm.
Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton, incubando una o dos placas
de cada lote a 30°C – 35°C durante 24 horas o más. Estas placas utilizadas deben ser, luego,
descartadas.
6.3.4. Preparación del estándar (0,5 Mc. Farland) para el inóculo

Para estandarizar la densidad del inóculo se usa una suspensión de sulfato de bario (0,5 de la
escala de Mac Farland) como estándar.
Preparación del estándar de turbidez.
Agregar 0,5 ml de una solución de BaCl2 0,048 M (BaCl22H2O al 1,175% P/V) a 99,5 mL de una
solución de H2SO4 0,18 M (0,36 N) (1% V/V) en constante movimiento para mantener la
suspensión.
Verificar la densidad correcta del estándar usando un fotocolorímetro ó espectrofotómetro,
cuya absorbancia a 625 nm es 0,08 a 0,10 para el estándar 0,5 de Mc. Farland.

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Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapón de jebe, similares a los que se usarán
para preparar el inóculo.
Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura ambiente y anotar
la fecha de preparación.
Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estándar de preferencia, en un agitador
mecánico.
Verificar mensualmente la densidad de los estándares de sulfato de bario, y reemplazarlo
cuando sea necesario
6.3.5. Selección de los discos de sensibilidad antibiótica

En el presente documento se establece la relación de los discos de antibióticos que deberán ser
utilizados en los antibiogramas de rutina, según las diferentes bacterias o grupos bacterianos,
así como la modalidad del reporte de los mismos por parte de los laboratorios de Microbiología.
La selección de los antibióticos que figuran en esta relación ha sido realizada teniendo en cuenta
los siguientes criterios:
Eficacia clínica documentada.
Representatividad de una familia de antibióticos.
Disponibilidad de criterios técnicos fiables para la determinación in vitro de su eficacia clínica.
Estabilidad de la molécula en los discos para antibiograma.
Presencia en el mercado nacional.
Importancia para la vigilancia de la resistencia bacteriana.
6.4. INOCULACIÓN
6.4.1. Preparación del inóculo
Puede realizarse de dos formas:
 Método de desarrollo previo

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VERSIÓN 01

Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas, del mismo tipo morfológico, de un cultivo en
placa.
Tocar la superficie de cada colonia con un asa de siembra y transferirlo a un tubo que contiene
de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej. Caldo Tripticasa soya).
Incubar el caldo a una temperatura entre 35°C a 37°C, hasta que alcance o exceda la turbidez
del estándar 0,5 de la escala de Mc. Farland (por lo general de 2 a 6 horas). Ajustar la turbidez
del inóculo con solución salina o caldo apropiado hasta el tubo 0.5 de la escala de Mc. Farland,
por comparación visual con el estándar. Para realizar este paso correctamente usar una luz
apropiada y mirar los tubos contra un fondo blanco con líneas negras como contraste.
La suspensión preparada contendrá aproximadamente 1 a 2 x 108 UFC/mL para E. coli ATCC
25922.
 Método directo de inoculación a partir de colonias aisladas
De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h, seleccionar colonias
aisladas y preparar una suspensióm directa en solución salina ó caldo.
La suspensión debe ser inmediatamente ajustada a la escala 0,5 de Mc. Farland.
6.4.2. Inoculación de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inóculo, sumergir un hisopo
estéril en la suspensión, rotar el hisopo varias veces presionando firmemente sobre la pared
interior del tubo por encima del nivel del líquido para remover el exceso de inóculo.
Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton, estriando con el hisopo en tres
direcciones para asegurar una distribución uniforme del inóculo (Figura 1). Antes de colocar los
discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5 minutos para que cualquier
exceso de humedad superficial sea absorbido.

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VERSIÓN 01

Direcciones en el sembrado del inoculo sobre la superficie del
6.5. APLICACIÓN DE LOS DISCOS
Colocar los discos individuales o multidisco sobre la superficie del agar con la ayuda de una pinza
estéril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre cada disco para asegurar un
contacto completo con la superficie del agar.
Distribuir los discos uniformemente, de modo que estén a una distancia mínima de 25 mm uno
del otro (el diámetro de los discos según las normas de la Organización Mundial de la Salud
(OMS) debe ser de 6 mm). No deben colocarse más de 12 discos en una placa de 150 mm, ni
más de 6 en una placa de 100 mm de diámetro interno, para evitar la superposición de las zonas
de inhibición. Un disco no debe ser removido una vez que
tomó contacto con la superficie del agar debido a que algunos antibióticos se difunden
rápidamente.
6.6 INCUBACIÓN
Incubar lar placas en posición invertida a 35°C dentro de los 15 minutos posteriores a la
aplicación de los discos.
Las placas de Haemophilus spp y Streptococcus spp, deben ser incubadas en atmósfera del 5%
de CO2.
Después del tiempo recomendado de incubación (Anexo B) examinar cada placa y medir los
diámetros de los halos de inhibición alrededor de cada disco. En los casos de Staphylococcus spp

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VERSIÓN 01

y Enterococcus spp el tiempo de incubación debe prolongarse por 24 horas para una mejor
detección de la resistencia a Oxacilina y Vancomicina, respectivamente.
6.7. LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

Medir los diámetros de las zonas de inhibición completa (incluyendo el diámetro del disco),
usando una regla o calibrador. Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa Petri
con una luz reflejada localizada a unos cuantos centímetros sobre un fondo
negro. Tener la precaución de observar la placa siguiendo una vertical directa para evitar una
lectura errónea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo. En los medios
suplementados con sangre, las zonas son medidas en la parte superior de la superficie del agar
y retirando la tapa. Tener cuidado de no medir la zona de la hemólisis sino la de inhibición del
crecimiento.
Para Staphylococcus spp o Enterococcus spp, usar luz transmitida, manteniendo la placa arriba
de la luz para examinar un posible ligero crecimiento de cepas resistentes a Oxacilina/Meticilina
o Vancomicina dentro de los halos aparentes de inhibición. Cualquier desarrollo dentro de la
zona de inhibición es indicativo de resistencia a Meticilina (Oxacilina) o Vancomicina.
El punto final debe tomarse como el área que no muestra un crecimiento obvio, visible, que
puede ser detectado mediante observación visual, no incluyendo velo de
crecimiento o colonias muy pequeñas que puedan ser detectadas solo con mucha dificultad en
el borde de la zona. Sin embargo, las colonias mayores creciendo dentro de la zona clara deberán
ser subcultivadas, reidentificadas y reensayadas. Algunos Proteus spp, debido a su gran
movilidad, pueden presentar un velo de invasión o “swarming” dentro de las zonas de inhibición
de algunos antibióticos. En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento de
medir los halos de inhibición.
Cuando se prueban discos de Cotrimoxazol puede arrastrarse sustancias antagónicas que
producen un crecimiento con aspecto de niebla dentro de la zona del halo de inhibición, en estos
casos no considerar en la lectura un crecimiento del 20% o menos del desarrollo total.

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VERSIÓN 01
7. FASE ANALITICA
7.1. ANTIBIOGRAMA PARA Staphylococcus spp
7.1.2. MEDIO DE CULTIVO
Agar Mueller Hinton
7.1.3. INÓCULO
Suspensión directa de la colonia en caldo Mueller Hinton o solución salina al 0.9 % a partir de un
cultivo en agar no selectivo de 18 – 24 h de incubación. Ajustar a la turbidez equivalente al
estándar 0,5 de la escala de Mc. Farland.
7.1.4. DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIÓTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA
Grupo I:
• Oxacilina
• Penicilina
• Eritromicina
• Clindamicina
• Cotrimoxazol (Trimetoprim/Sulfametoxazol)
• Vancomicina
• Gentamicina
• Ciprofloxacina
Grupo II:
• Cloramfenicol.
• Rifampicina.
• Tetraciclina.
• Teicoplanina
• Nitrofurantoína
• Norfloxacina

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7.1.5. Resistencias Naturales
Los estafilococos son resistentes a Ácido Nalidíxico, Ácido Pipemídico y Aztreonam
Staphylococcus saprophyticus es resistente a Fosfomicina y Novobiocina
Staphylococcus cohnii y Staphylococcus xylosus son resistentes a Novobiocina y a Lincomicina
7.1.6. INCUBACIÓN
35°C
7.1.7. LECTURA
A las 16 – 18 h. A las 24 h para el disco de Oxacilina
7.1.8. INTERPRETACIÓN DE LOS DIÁMETROS CRÍTICOS
Antibióticos y diámetros críticos
7.1.9. Reglas para la lectura e interpretación del antibiograma
Disco de Penicilina:
El resultado del estudio de sensibilidad con el disco de Penicilina es válido también para
Ampicilina y Amoxicilina.
Disco de Oxacilina:
El resultado del estudio de sensibilidad con el disco de Oxacilina es válido también para
Dicloxacilina y Cloxacilina.
La resistencia a Oxacilina señala una resistencia cruzada a todas las penicilinas (asociadas o no a
inhibidores de betalactamasas), cefalosporinas de todas las generaciones y carbapenems, sin
excepción.
Las cepas resistentes a Penicilina y sensibles a Oxacilina son sensibles a las penicilinas asociadas
a los inhibidores de betalactamasas, a las cefalosporinas y a los carbapenems.
El disco de Oxacilina no debe incluirse en el antibiograma de Staphylococcus saprophyticus pues
con frecuencia al utilizar los diámetros críticos válidos para los otros estafilococos coagulasa
negativos, se le clasifica incorrectamente como resistente a este antibiótico.
Disco de Tetraciclina:

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El resultado del estudio de sensibilidad con el disco de Tetraciclina es válido también para
Doxiciclina y Minociclina.
Disco de Eritromicina:
El resultado del estudio de sensibilidad con el disco de Eritromicina es válido también para la
Azitromicina, Claritromicina y Roxitromicina.
Disco de Ciprofloxacina:
El resultado del estudio de sensibilidad con el disco de Ciprofloxacina es válido también para la
Ofloxacina y Levofloxacina.
7.2. ANTIBIOGRAMA PARA Pseudomonas aeruginosa

Agar Mueller Hinton.
7.2.2. INOCULO
Método del crecimiento o suspensión directa de la colonia. Ajustar a la turbidez equivalente al
Grupo I:
Ceftazidima
Imipenem y/o Meropenem
Gentamicina
Amikacina
Ciprofloxacina
Grupo II:
Aztreonam
Cefoperazona/sulbactam
Cefepime
Norfloxacina
Ofloxacina

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7.2.4. Resistencias Naturales:

Pseudomonas aeruginosa es resistente a Penicilina, Ampicilina, Amoxicilina, cefalosporinas de
primera y segunda generación, Cefotaxima, Ceftriaxona, Kanamicina, Tetraciclina,
Cloramfenicol, Ácido Nalidíxico y Ácido Pipemídico.
7.2.5. INCUBACIÓN
35°C
7.2.6. LECTURA
A las 16 – 18 h.
Disco de Ceftazidima:
Si la cepa tiene susceptibilidad intermedia (I) o resistente (R) a Ceftazidima debe informarse
también como intermedia (I) o resistente (R) al Aztreonam aun cuando el resultado del disco
indique sensibilidad (resistencia cruzada).
Disco de Aztreonam:
Una resistencia aislada del Aztreonam en relación con una sensibilidad conservada para los otros
betalactámicos (cefalosporinas y carbapenems) es posible y debe informarse como tal.
Discos de carbapenems:
Si una resistencia disociada entre Meropenem e Imipenem (sensible a uno y resistente al otro)
es detectada deberá verificarse la técnica y repetirse la prueba. Si la resistencia disociada se
confirma, la cepa deberá ser enviada al INS.
Una resistencia aislada a Imipenem y/o Meropenem en relación con una sensibilidad conservada
para otros betalactámicos (cefalosporinas, monobactams y combinaciones cefalosporina /
inhibidor de betalactamasas) es posible y debe informarse como tal.

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VERSIÓN 01

7.3. ANTIBIOGRAMA PARA Acinetobacter spp

Agar Mueller Hinton
7.3.2. INOCULO
Método del crecimiento o suspensión directa de la colonia. Ajustar a la turbidez equivalente al
Grupo I:
• Ceftazidima
• Imipenem o Meropenem
• Gentamicina
• Amikacina
• Ciprofloxacina.
Grupo II:
• Ampicilina/Sulbactam
• Aztreonam
• Cefotaxima o Ceftriaxona
• Cefepime
• Norfloxacina
• Ofloxacina
• Tetraciclina
• Cloramfenicol
Acinetobacter baumannii y Acinetobacter calcoaceticus son resistentes a Penicilina, Ampicilina,
Amoxicilina, cefalosporinas de primera y segunda generación y a furanos.

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VERSIÓN 01

Acinetobacter haemolyticus es resistente a Gentamicina y Amikacina.
7.3.5. INCUBACIÓN
35°C
7.3.6. LECTURA
16 – 18 h
Disco de Tetraciclina:
El resultado del estudio de sensibilidad con el disco de Tetraciclina no es necesariamente válido
para Doxiciclina y Minociclina.
Actividad del Sulbactam:
El Sulbactam, un inhibidor de betalactamasas, posee una actividad intrínseca sobre el
Acinetobacter spp.
La reciente aparición en EE.UU. de diámetros críticos para medir la actividad de
Ampicilina/Sulbactam sobre Acinetobacter spp. permite incluir esta asociación entre los
antibióticos para el antibiograma de esta especie.
Actividad de la Rifampicina:
La Rifampicina es utilizada en algunos países para el tratamiento en asociación de infecciones
ocasionadas por Acinetobacter spp multirresistente.
Sin embargo, debido a la inexistencia de diámetros críticos en el sistema norteamericano
(NCCLS) para medir la actividad de Rifampicina sobre Acinetobacter spp no hemos incluido este
antibiótico en ninguno de los dos grupos de antibióticos para esta especie.

POE
VERSIÓN 01

7.4. ANTIBIOGRAMA PARA Enterobacteriaceae

Agar Mueller Hinton
7.4.2. INOCULO
Método de crecimiento o suspensión directa de la colonia. Ajustar a la turbidez equivalente al

Grupo I:
• Ampicilina
• Cefalotina
• Ampicilina / Sulbactam o Amoxicilina / Ácido Clavulánico.
• Cefuroxima
• Gentamicina
• Amikacina
• Ácido Nalidíxico
• Norfloxacina
• Ciprofloxacina
• Nitrofurantoína
Grupo II:
• Cefoxitina
• Aztreonam
• Ceftazidima

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VERSIÓN 01

• Cefixima
• Cefoperazona/Sulbactam
• Cefepime o Cefpirome
• Imipenem o Meropenem
7.4.4. Antibióticos a utilizar en el antibiograma de Salmonella spp y Shigella spp
aisladas de coprocultivos:
Ampicilina
Cloramfenicol
Cotrimoxazol (Trimetoprim/Sulfametoxazol)
Ciprofloxacina
Cefotaxima
Las enterobacterias son resistentes a Penicilina, Oxacilina, Macrólidos, Clindamicina y
Glicopéptidos. Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas.
Citrobacter freundii, Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son resistentes a las
Aminopenicilinas, Aminopenicilinas/Inhibidores de betalactamasas, Cefalosporinas de primera
generación y Cefuroxima.
Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas, Aminopenicilinas/Inhibidores de
betalactamasas, Cefalosporinas de primera generación y Cefoxitina.
Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoína.
7.4.6. INCUBACIÓN
35°C
7.4.7. LECTURA
15-18 h

LABORATORIOS SAN JOSE CÓDIGO LAB-LSJ-POELSJ
POE
VERSIÓN 01


Disco de Ampicilina:
El resultado del estudio de sensibilidad con el disco de Ampicilina es también válido para
Amoxicilina.
Tomar en cuenta las resistencias naturales de las enterobacterias para el reporte.
Disco de Ampicilina/Sulbactam y Amoxicilina/Ácido Clavulánico:
En enterobacterias no existe una disociación de resultados para estos discos por lo que debe
utilizarse uno solo de ellos en el antibiograma.
Tomar en cuenta las resistencias naturales de las enterobacterias para el reporte.
Disco de Cefalotina:
El resultado del estudio de sensibilidad con el disco de Cefalotina es generalmente válido para
la Cefazolina. También es válido para Cefadroxilo, Cefradina, Cefalexina, Cefaclor y Loracarbef
pero únicamente de las cepas aisladas de infecciones urinarias.
En el caso de Salmonella spp y Shigella spp las Cefalosporinas de primera y segunda generación
no son eficaces clínicamente por lo que deben ser reportadas como resistentes a estos
antibióticos aúncuando se observe actividad in vitro.
7.5. ANTIBIOGRAMA DE Streptococcus pneumoniae (Neumococo)

Agar Mueller Hinton con un suplemento de 5% sangre de carnero
NOTA: No aplicar más de 9 discos en las placas de 150 mm, ni más de 5 en las placas
de 100 mm.
7.5.2. INOCULO
Suspensión directa de la colonia en caldo Mueller Hinton o solución salina al 0.9% a partir de
una placa de agar sangre de carnero de crecimiento, incubada 16 –18 horas. Ajustar a la turbidez
equivalente al estándar 0,5 de la escala de Mc. Farland.

POE
VERSIÓN 01

Grupo I:
• Oxacilina
• Eritromicina
• Cotrimoxazol (trimetoprim/sulfametoxazol)
Grupo II:
• Rifampicina
• Teicoplanina
• Levofloxacina o Esparfloxacina o Moxifloxacina.
El Neumococo es resistente a Aztreonam y Pefloxacina.
El Neumococo presenta una resistencia de bajo nivel a los aminoglucósidos.
7.5.6. INCUBACIÓN
35°C en atmósfera de 5% de CO2.
7.5.7. LECTURA
20 – 24 h
Disco de Oxacilina:
Cuando el halo de inhibición del disco de Oxacilina es igual o superior a 20 mm, la cepa de
Neumococo es sensible a Penicilina y a los siguientes antibióticos: Ampicilina, Amoxicilina,
Amoxicilina/Ácido Clavulánico, Ampicilina/Sulbactam, Cefaclor, Cefuroxima, Cefotaxima,
Ceftriaxona, Cefixima, Cefepime, Loracarbef, Imipenem y Meropenem.
Cuando el halo de inhibición del disco de Oxacilina es igual o inferior a 19 mm puede tratarse de
una cepa de Neumococo sensible, de bajo nivel de resistencia o de alto nivel de resistencia a
Penicilina.

POE
VERSIÓN 01

En estas cepas debe determinarse la CIM de la Penicilina pues no es posible categorizar al
Neumococo como resistente a este antibiótico basado únicamente en el resultado del disco de
Oxacilina.
7.6. ANTIBIOGRAMA DE Streptococcus spp
Agar Mueller Hinton con 5% sangre de carnero.
NOTA: No aplicar más de 9 discos en las placas de 150 mm, ni más de 5 en las placas de 100 mm.
7.6.2. INOCULO
Suspensión directa de la colonia (a partir de una placa de agar sangre de carnero incubada 16 –
18 horas). Ajustar a la turbidez equivalente al estándar 0,5 de la escala de Mc. Farland.
Grupo I:
• Ampicilina o Penicilina G (solo para Estreptococos betahemolíticos)
• Eritromicina
• Clindamicina
• Cloramfenicol
Grupo II:
• Levofloxacina (solo para estreptococos betahemolíticos)
• Ofloxacina (solo para estreptococos betahemolíticos)
• Cefepime
• Vancomicina
• Teicoplanina
Los Estreptococos son resistentes a Aztreonam y Pefloxacina.
Los Estreptococos presentan una resistencia de bajo nivel a los Aminoglucósidos.
7.6.5. INCUBACIÓN
35°C en atmósfera de 5% de CO2.

POE
VERSIÓN 01

7.6.6. LECTURA
20 – 24 h
Discos de Penicilina - Ampicilina:
La interpretación del resultado de estos discos es solo válida para los Streptococcus beta -
hemolíticos.
Para el estudio de la sensibilidad a Penicilina del Streptococcus viridans aislado de líquidos
normalmente estériles debe determinarse la CIM.
Las cepas sensibles a Penicilina deben ser consideradas sensibles igualmente a: Amoxicilina,
Amoxicilina/Ácido Clavulánico, Ampicilina/Sulbactam, Cefalotina, Cefaclor, Cefazolina,
Cefradina, Cefuroxima, Cefotaxima, Ceftriaxona, Loracarbef, Cefepime, Imipenem y
Meropenem.
Disco de Eritromicina:
El resultado del estudio de sensibilidad con el disco de Eritromicina es también válido para
Azitromicina, Roxitromicina y Claritromicina.
8. FASE POS ANALÍTICA

8.1. CONTROL DE CALIDAD INTERNO
Incluye la descripción de las especificaciones que se deben aplicar para verificar la validez y
confiabilidad de los resultados de las pruebas de sensibilidad.
8.2. CONTROL DE CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
8.2.1. Apariencia de los medios:
Observar cualquier signo de deterioro, como: evidencias de deshidratación, cambio de color,
escaso volumen, etc.
8.2.2. Control de calidad de desarrollo bacteriano:
Controlar el crecimiento de las bacterias a evaluar y que muestre resultados aceptables en
pruebas de sensibilidad. Utilizar cepas referenciales.

POE
VERSIÓN 01

8.2.3. Control de esterilidad:
Tomar el 5-10% del total del lote producido, e incubar en estufa de 35°C durante 48 h. Luego,
observarcualquier presencia de contaminación, si éste fuera significativo (>10% del medio
controlado) descartar el lote completo. Además, se debe descartar todo medio utilizado.
8.2.4. Control de pH:
Controlar todo lote preparado (autoclavado) ya frío y a temperatura ambiente.
Control de la profundidad del agar: Medir la profundidad introduciendo un elemento fino y
estéril, el cual tenga una marca en 3 y 5 mm de uno de sus extremos.
8.2.5. Contenido de calcio y magnesio:
Utilizar la cepa de Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853.
8.2.6. Contenido de timidina:
Realizar pruebas de sensibilidad con Enterococcus faecalis ATCC 29212 y discos de trimeoprim/
sulfametoxazol. Se debe obtener un halo ³20 mm.
8.2.7. Cepas de referencia para controles de calidad
Staphylococcus. aureus (ATCC 25923)
Escherichia coli (ATCC 25922)
Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853)
Enterococcus faecalis (ATCC 29212)
Escherichia coli (ATCC 35218)
Haemophilus influenzae (ATCC 49247)
Haemophilus influenzae (ATCC 49766)
Streptococcus pneumoniae (ATCC 49619)


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6. FASE PRE ANALÍTICA

6.2. MATERIALES Y EQUIPOS

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6.3. MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS

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• Discos de sensibilidad antibiótica

Utilizando un electrodo de superficie.

6.3.4. Preparación del estándar (0,5 Mc. Farland) para el inóculo

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6.3.5. Selección de los discos de sensibilidad antibiótica

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6.4.2. Inoculación de las Placas

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Direcciones en el sembrado del inoculo sobre la superficie del

6.5. APLICACIÓN DE LOS DISCOS

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6.7. LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

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7.2. ANTIBIOGRAMA PARA Pseudomonas aeruginosa

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7.2.4. Resistencias Naturales:

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7.3. ANTIBIOGRAMA PARA Acinetobacter spp

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