Grado en Biotecnología Grupo C

Operaciones de separación Universidad de Cádiz

ENTREGABLE OPERACIONES DE SEPARACIÓN 3º GRADO EN BIOTECNOLOGÍA

El objetivo es diseñar un proceso para la obtención de penicilina a partir de Penicillium notatum.

INTRODUCCIÓN

La obtención de penicilina a partir de Penicillium notatum es un proceso fundamental en la historia de

la medicina y la microbiología, que revolucionó el tratamiento de las infecciones bacterianas en el
siglo XX. Esta investigación se centra en el estudio de cómo Alexander Fleming, un científico
escocés, descubrió casualmente las propiedades antibacterianas de la penicilina en 1928, al
observar que una colonia de Penicillium notatum había inhibido el crecimiento de bacterias
circundantes. Este hallazgo marcó el comienzo de una búsqueda para desarrollar un método eficaz
de producción de penicilina a gran escala.

Para ello, contamos con un biorreactor inicial en el que se ha realizado la fermentación.

Supondremos este tanque como un cilindro cuya base tendrá un diámetro de 0,6m y su altura será
de 1,77m (respetando así la proporción 1:3 recomendable en este tipo de biorreactores)[1]

FILTRACIÓN MEDIANTE TAMBOR ROTATORIO

Tras obtener en el fermentador el caldo de cultivo, debemos separar el micelio del líquido (en el cual
se encuentra la penicilina de interés). Realizaremos la filtración con un filtro a vacío, sobre la
superficie de un tambor que gira sobre un eje: el filtro trabaja en continuo y el producto a filtrar llega
de forma continua a la cuba del filtro. Un agitador pendular en la misma cuba impide que los sólidos
en suspensión lleguen a sedimentar. El tambor que gira en la cuba es el elemento filtrante, este
posee en su exterior celdas cubiertas por la tela filtrante, que, a medida que vaya acumulando
micelio, será lavada para evitar pérdidas de penicilina atrapada. De esta superficie, un cierto
porcentaje está sumergida en la solución a filtrar.

El vacío producido da lugar a la absorción del líquido a través de la tela filtrante y el sólido se
deposita sobre esta misma. Así, forma una capa uniforme sobre el tambor. Una vez la celda del
tambor ha pasado por la zona de filtración de lavado y del secado de la torta, esta se descarga
mediante el uso de unas rasquetas. Los filtros rotatorios de vacío poseen ventajas: son continuos, la
velocidad de giro se puede ajustar y la torta puede ser lavada a presión.

El filtro adoptará la forma de un típico tambor rotatorio: un cilindro dispuesto en posición horizontal,
con una determinada inmersión de éste en el medio a filtrar y unas rasquetas que vayan eliminando
el exceso de torta para así agilizar el proceso.

MODO DE OPERACIÓN:
En este caso, trabajaremos a presión constante durante el proceso, la velocidad de filtración y, por
tanto, el caudal del líquido filtrado y el volumen de filtrado irán disminuyendo con el tiempo debido al
aumento del espesor de la torta, y con ello, la resistencia de la filtración.
Para el estudio de la filtración es estas condiciones, partiendo de la ecuación general para la filtración
por torta, separando variable e integrando teniendo en cuenta que para t=0 el volumen filtrado V=0 se
llega a:
𝑡 𝑎
𝑉
= 2
·𝑉+𝑏
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donde :
µ·α·𝑤 µ·α·𝑤·𝑉𝑒
𝑎= 2 𝑏= 2
𝑆 ·∆𝑃 𝑆 ·∆𝑃
a: pendiente
b: ordenada en el origen
µ: viscosidad del fluido
α: resistencia específica de la torta
w: retención de la torta
S: sección
∆𝑃: pérdida de carga total
𝑉𝑒: volumen de filtrado necesario para formar
una torta hipotética que tuviera la misma resistencia del medio filtrante

DIMENSIONES
mediante la siguiente fórmula obtenemos el volumen del tambor
2 2
𝐷 (0,6)
𝑉=𝐿· π· 4
= 1, 77 · π · 4
= 500𝐿

El resultado obtenido es de 500L. Este resultado se asemeja bastante al valor de la capacidad del
biorreactor dado.

Tomando el biorreactor como un cilindro perfecto, supondremos que la biomasa saldrá de este por
una tubería inferior de 15 cm de diámetro. Supondremos la base del cilindro ligeramente elíptica, de
modo que evitaremos acumulación de biomasa en el fondo que después no podamos recuperar
(despreciamos este volumen). Supondremos que tenemos una concentración de 0,1m de Penicillium
notatum. Con todo esto, el caudal que saldría del biorreactor, y que en consecuencia llegaría al filtro
sería:

1 2 1 2
𝑃1 + 2
ρ · 𝑣1 + ρ · 𝑔 · ℎ1 = 𝑃2 + 2
ρ · 𝑣2 + ρ · 𝑔 · ℎ2
1 2
𝑃𝑎𝑡𝑚 + 0 + 1000 · 9, 81 · 1, 77 = 1000 · 9, 81 · 1, 77 + 2
· 1000 · 𝑣2 + 0
2
101325 + 17363, 7 = 17363, 7 + 500 · 𝑣2
2
101325 = 500 · 𝑣2
𝑚
𝑣2 = 202, 65 = 14, 24 𝑠
𝑄= 𝑣· 𝑆
2 3
𝑄 = 14, 24 · π · (0, 075) = 0, 25 𝑚 /𝑠

Características de la torta:
➔ Espesor de la torta.
En los filtros rotatorios de vacío el espesor de la torta oscila entre 3 y 100mm. Este espesor
dependerá de la velocidad de rotación del tambor, cuanto mayor sea la velocidad, menor será el
espesor de la torta. En nuestro caso, como la velocidad de rotación del tambor es muy pequeña, de
0,1 rpm, el espesor de la torta oscilará entre los 90mm.

➔ Inmersión del filtro

Supondremos un porcentaje de inmersión del filtro en el medio filtrado de un 25% (los valores
óptimos están entre un 20-30%) ya que un valor superior aumentaría los costes energéticos.[2]
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➔ Retención
𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑠ó𝑙𝑖𝑑𝑜𝑠 𝑟𝑒𝑡𝑒𝑛𝑖𝑑𝑜𝑠 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑡𝑜𝑟𝑡𝑎 𝑀 𝐶 0,1 3
𝑤= 𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑓𝑖𝑙𝑡𝑟𝑎𝑑𝑜
= 𝑉
= 1−𝐶
ρ= 0,9
× 1000 = 111, 1𝐾𝑔/𝑚

➔ Área
2
𝐴 = π · 2𝑟 · 𝐿 = 3, 33𝑚

➔ Resistencia específica

α·µ·𝑤·𝑉
𝑅𝑇 = 𝑆
2
𝑅𝑇·𝑆 (1−ε)·𝑎𝑣·𝑘
α= µ·𝑤·𝑉
= 3 [𝑚/𝑘𝑔]
ε ·ρ𝑝

Recurriendo a la experimentación de ensayos a presión constante con filtro de superficie conocida,

determinamos a y b y por tanto α y 𝑉𝑒a partir de estos datos,𝑅𝑡 y 𝑅𝑓. Para llegar a estos valores
debemos realizar una regresión lineal donde, con respecto a la ecuación general, relacionamos t/v
frente a v.[2]

➔ Velocidad de rotación
Supondremos una velocidad de rotación del tambor de 0,1 rpm, ya que estos filtros suelen trabajar
entre 0,1-0,2 rpm. Este valor lo hemos obtenido de una bibliografía revisada[1].

➔ Presión de trabajo
Tomaremos unos valores de presión de 700000 Pa (0,69 atm) (los valores óptimos están entre
700000-800000 Pa)[1].

DISRUPCIÓN CELULAR

Tras la eliminación del micelio, es necesario separar la penicilina del resto de componentes
presentes en el caldo de cultivo, para ello recurrimos a la extracción líquido-líquido. Se almacena el
caldo, proveniente de la cuba del filtro, ya enfriado en un intercambiador de calor a 5ºC y se procede
a su purificación. Este proceso es una operación de disrupción celular de tipo no mecánico, en el que
usaremos un disolvente orgánico, en este caso, acetato de amilo y cloroformo. De este modo
permeabilizaremos las membranas celulares por disolución de los lípidos que la integran, provocando
que la penicilina, al tener valores de pKa ácidos, se una al disolvente orgánico (porque son muy
solubles en éstos). [3]

Una vez separada la penicilina del resto de componentes, se procede a su extracción mediante una
centrifugación por gravedad. El líquido de menor densidad (la penicilina) quedará adherido al
disolvente y se irá clarificando, mientras que los componentes de mayor densidad (resto de
componentes) se irán concentrando.
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BIBLIOGRAFÍA

[1] Planta industrial para la producción de penicilina G, Matilde Navas López, 2016
https://rodin.uca.es/handle/10498/18409

[2] Proceso mejorado para la producción fermentativa de penicilina, Pieter Theodorus

Kerkhof et al, 1998 https://patents.google.com/patent/ES2224392T5/es

[3] Applicability of a single-use bioreactor compared to a glass bioreactor for the

fermentation of filamentous fungi and evaluation of the reproducibility of growth in pellet
formWinda Soerjawinata et al, 2021
https://onlinelibrary.wiley.com/doi/epdf/10.1002/elsc.202000069?src=getftr

WEBGRAFÍA.
https://bachiller.com/es/filtro-secador-nucha/#opciones
https://www.textoscientificos.com/antibioticos/penicilina
https://www.youtube.com/watch?v=v4oRPp58YWw
https://apuntes.ceitba.org.ar/descargar/12.11/166/12.11_Trabajos-Practicos_2008_Tp-Filtracion_Oper
aciones-Unitarias-I.doc#:~:text=Los%20sectores%20del%20tambor%20que,entre%203%20y%20100
%20mm

Trabajo realizado por: Rosalía Huertas Jiménez, Raquel Moscoso González, Maryam El Mimouni,
Doha Abrami, Belén García García y Pablo Casal Barreiro.