UNIVERSIDAD NACIONAL JOSÉ FAUSTINO SÁNCHEZ CARRIÓN

FACULTAD DE INGENIERÍA AGRÓNOMA, INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

Y AMBIENTAL

ESCUELA DE INGENIERÍA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

CURSO:

MICROBIOLOGÍA GENERAL

PRÁCTICA N°4:

“RECUENTO DE MICROORGANISMOS EN PLACAS”

PRESENTADO POR: GRUPO N° 6

MARTELL MACEDO, VALENTINA

MENDEZ DOLORES, CRISTIAN

MIGUEL HINOSTROZA, KIMBERLYN

QUIÑONES CARHUAZ, DAMARIS

TABOADA SALVATIERRA, ISMAEL

VIDAL PACHECO, JOSE

VILLAFANA CÁNTARO, RIKY

DOCENTE:
ING. EDSON MAX CARO DEGOLLAR

HUACHO – 2023
ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA UNJFSC

PRÁCTICA DE LABORATORIO N° 04

RECUENTO DE MICROORGANISMOS EN PLACA

1. INTRODUCCIÓN

En el campo de la microbiología, la cuantificación de microorganismos es un

aspecto fundamental para comprender la presencia de estos seres diminutos
en diversas muestras. En este informe de laboratorio, se abordará el proceso
de cuantificación de microorganismos viables mediante el método de
recuento en placa. Este método permite estimar el número de Unidades
Formadoras de Colonias (UFC) en una muestra, lo que es esencial en la
investigación y control de calidad en la industria alimentaria.

Además se describirán detalladamente los procedimientos para la

preparación de diluciones seriales, la siembra en placas y el posterior conteo
de colonias, así como la elección de medios de cultivo específicos para
diversos tipos de microorganismos.

Los datos recopilados en este informe no sólo tienen relevancia en el aula,

sino que están intrínsecamente conectados con los desafíos que
enfrentaremos en nuestra futura carrera. Al emplear estas técnicas,
podremos tomar decisiones informadas, contribuyendo al desarrollo de
productos inocuos.

2. OBJETIVOS

● Aplicar técnicas de homogeneización y dilución de muestras para ser

analizadas microbiológicamente.
● Emplear técnicas de siembra de microorganismos en diferentes tipos
de medios de cultivo.
● Realizar cuantificación de microorganismos mediante las técnicas de
recuento en placa.

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ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA UNJFSC

3. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

3.1. PREPARACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO Y MATERIALES

Se llevó a cabo la esterilización de los medios de cultivo y todos los

instrumentos esenciales para el proceso.

Es crucial, ya que cualquier contaminación podría comprometer la precisión

de nuestros resultados.

3.2. SELECCIÓN DE LA MUESTRA

Nuestro grupo optó por analizar carne molida. Esta elección se basa en la
importancia de evaluar la presencia y cantidad de microorganismos en un
producto alimenticio tan común y ampliamente consumido, recolectando un
mínimo de 15 g de carne molida y obtener resultados en la cuantificación de
microorganismos.

3.3. PREPARACIÓN DE HOMOGENEIZACIÓN Y DILUCIONES

● Pesamos 10 g de la muestra (carne molida).

● Diluimos la muestra en 90 mL de solución salina peptonada, agitando
por 5 minutos.
● Dejamos reposar 10 minutos para permitir la liberación de los
microorganismos a la solución diluyente. (Dilución 1:10 (10-1)).
● De la dilución 1:10 (10-1) tomamos 1 ml (con la micropipeta y punta
estéril) y depositamos en 1 tubo que contenga 9 ml de diluyente para
obtener la dilución 1:100 (10-2).
● De la dilución 1:100 (10-2) tomar 1 ml y depositarlo en otro tubo que
contiene 9 ml de diluyente para obtener la dilución 1:1000 (10-3).
● Y así continuamos las diluciones sucesivamente hasta la dilución
1:100000 (10-5).
● Luego de preparar las diluciones no debe pasar más de 20 min antes
de estar sembradas.

3.4. SIEMBRA EN PROFUNDIDAD (MESÓFILOS)

● Rotulamos las placas y los tubos con el número del equipo de trabajo y
dilución.
● Tomar con pipeta estéril alícuotas de 1 ml de cada una de las
diluciones (empezando de la más diluida a la más concentrada) y
depositarlo en la base de una de las cajas de Petri estéril previamente
marcadas.
● Inmediatamente vertemos en cada caja de 12 a 15 ml de agar a 45ºC y
mezclamos el inóculo con el agar imprimiendo movimientos de vaivén
a la placa sobre el mesón.
● Incubamos a 30°C por 72 horas.

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ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA UNJFSC

● Después de la incubación contamos el número de colonias en las

diluciones donde hayan crecido entre 30 UFC y 300 UFC.
● Obtenemos la concentración de bacterias en la solución de acuerdo
con la siguiente fórmula:

𝐶𝐵 = 𝑍 ∗ 𝑅
Donde:
● CB = Concentración de bacterias (UFC/mL o g)
● Z = valor promedio de UFC en dos cajas de Petri (solo en caso de
haber sembrado dos cajas Petri por dilución)
● R = Factor de dilución o inverso de la dilución donde se pudo realizar el
conteo (101, 102, 103, etc)

3.5. CÁLCULO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS.

Luego de la incubación, realizamos un conteo. Observamos y consignamos

en una tabla los resultados encontrados en el crecimiento microbiano.

4. MATERIALES Y EQUIPOS:

Equipos
● 1 Autoclave de 50 L.
● 1 Horno de 25 L
● 1 Incubadora

Materiales
● 7 tubos de ensayo
● 7 placas Petri (estéril)
● 7 Pipetas de 10 mL (estéril)
● 1 Mechero
● 1 Matraz Erlenmeyer de 250 mL con torunda.
● 1 paquete de 25 bolsas reclosables transparentes

Sustancias y reactivos
● Agar Plate Count (PCA), Agar VRB, Agar Dextrosa Sabouraud
● Algodón
● 1 L Alcohol 96°
● 1 L agua estéril para inyección

Materiales de protección e higiene personal

● 1 Jabón líquido
● Guantes descartables.
● Guardapolvo
● Cofia

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ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA UNJFSC

6. RESULTADOS

Tras transcurrir las horas aceptadas siendo estas durante un día entero (72
horas), al observar en las placas Petri, se llegan a observar unas expansiones
presentes con ayuda de un reflector (linterna), llega a ser visible, gracias a
ello hemos logrado identificar la cantidad de presencia bacteriana en las
placas respectivas; en ello se logra identificar en las placas con las marcas de
10-1 y 10-2, llegan a ser incontables ya que la presencia que poseen, llegan a
ser una gran variedad las cuales no podríamos llegar a calcular la cantidad
aproximada y exacta que podrían tener en sus placas; a excepción de los
restantes como los de 10-3, 10-4 y 10-5 ya que estos si llegan a tener una
cantidad algo aproximado entre los 180 y 280 de presencia bacteriana siendo
estos ya contables con una cantidad que pueda ser él aproximada y exacto
gracias por la gran variedad de medidas en cantidades que pudieron haber
tenido en cada muestra dependiendo de su concentración.

PLACAS CON PLACAS CON

TIEMPO DE
MEDIO DE MEDIO DE
PLACAS PETRI REALIZACIÓN DEL
CULTIVO CULTIVO
MÉTODO
UTILIZADOS UTILIZADOS
−1
Placa Petri - 1 72 horas 10 Incontable
−2
Placa Petri - 2 72 horas 10 Incontable
−3
Placa Petri - 3 72 horas 10 276
−4
Placa Petri - 4 72 horas 10 258
−5
Placa Petri - 5 72 horas 10 187

PLACAS PETRI

Placa Petri - 01

5
ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA UNJFSC

Placa Petri - 2 Placa Petri - 3

Placa Petri - 4 Placa Petri - 5

7. CONCLUSIONES:

● La técnica de dilución en serie permitió obtener diferentes

concentraciones de microorganismos, facilitando el recuento en las
placas de cultivo.

● Estos hallazgos resaltan la importancia de considerar la concentración

inicial de microorganismos en muestras microbiológicas y la necesidad
de ajustar las diluciones para obtener recuentos precisos. Estos
métodos son esenciales para evaluar la presencia y la concentración
bacteriana en diversos entornos, lo que es fundamental para
aplicaciones en áreas como la industria alimentaria, la salud pública y
el control de calidad.

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ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA UNJFSC

● La esterilización meticulosa y el control estricto de contaminantes en

todo el proceso destacan la importancia de prácticas rigurosas en la
microbiología, especialmente al evaluar muestras alimenticias.

● Se observó una amplia diversidad de microorganismos en las muestras

analizadas. Las placas con diluciones menores (10-1 y 10-2)
exhibieron una cantidad significativa y diversa de microorganismos,
dificultando una cuantificación precisa debido a su alta concentración.
Por otro lado, las placas con diluciones superiores (10-3, 10-4, y 10-5)
presentaron una cantidad identificable y cuantificable de
microorganismos, con un rango estimado de 180 a 280 unidades de
presencia bacteriana.

8. DISCUSIONES:

- Como menciona “John Smith”, en su libro: "Diversidad microbiana y

métodos de recuento en placas" se debate la importancia de los
métodos de recuento en placas para evaluar la diversidad de
microorganismos en diferentes entornos. El autor John Smith
argumenta que los métodos tradicionales de recuento en placas, como
la dilución seriada y la siembra en medios específicos, son esenciales
para obtener una comprensión precisa de la diversidad microbiana en
una muestra. Además, Smith destaca la utilidad de estas técnicas para
el monitoreo de la calidad del agua y los alimentos.

- Para Ana Pérez y Juan Fernández en su libro:"Efectos de las

condiciones de cultivo en el recuento en placas" En esta discusión, se
exploran los efectos de las condiciones de cultivo en los resultados de
los recuentos en placas. Ana Pérez destaca cómo factores como la
temperatura, el pH y la composición del medio pueden influir en el
crecimiento de microorganismos y, por lo tanto, en los recuentos. Por
otro lado, Juan Fernández argumenta que es esencial estandarizar las
condiciones de cultivo para obtener datos comparables entre
laboratorios y estudios. Los autores debaten sobre la importancia de la
reproducibilidad y la consistencia en los métodos de recuento en
placas.

- Como mencionan los autores Ramírez S Julián A., Parra V John A1 y

Adalucy Alvarez-Aldana en su artículo "Análisis de técnicas de
recuento de Microorganismos" sobre la importancia del aislamiento y
obtención de cultivos puros en microbiología. Se mencionan diferentes
técnicas de recuento de microorganismos, como el recuento en placa y

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ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA UNJFSC

el recuento microscópico. También se describen los diferentes

enfoques para medir el crecimiento microbiano, ya sea a través del
aumento en el número de células, la formación de colonias o el
incremento de biomasa.
- Jenny Paola Soler Léon en su artículo "Validación secundaria del
método de número más probable y recuento en placa profunda para
coliformes totales y fecales en muestras de alimentos basada en la
norma ISO NTC 17025" presenta un estudio de validación secundaria
del método de recuento en placa profunda y número más probable
para coliformes totales y fecales en muestras de alimentos basado en
la norma ISO NTC 17025. La investigación se realizó en Biotrends
Laboratorios y se evaluaron los resultados obtenidos mediante el
análisis estadístico. El estudio concluye que el método de recuento en
placa profunda es más preciso que el método de número más probable
para el análisis de coliformes totales y fecales en alimentos.

9. INTERROGANTES ADICIONALES

a) Mediante un esquema indique cómo obtener una placa o caja de Petri

con una dilución 10-7 mediante:

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ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA UNJFSC

10. BIBLIOGRAFÍA.

Acosta Diaz, A., & Leguizamo Gonzalez, E. J. (2020). Métodos y técnicas

de cuantificación microbiana empleados en la industria de alimentos,
farmacéutica, agrícola y ambiental. Revisión sistemática de la
literatura. Pontificia Universidad Javeriana. Obtenido de
http://hdl.handle.net/10554/52072.
Barquero, S., María, L., Barrantes Jiménez, Kenia, & Araya, A. (2013).
Implementación de dos métodos de recuento en placa para la
detección de colifagos somáticos, aportes a las metodologías estándar.
Revista Peruana de Biología, 19(3), 335–340. Obtenido de
http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1727-9933
2012000300016
Corral-Lugo, A., Morales-García, Y. E., Pazos-Rojas, L. A.,
Ramírez-Valverde, A., Martínez-Contreras, R. D., & Muñoz-Rojas, J.
(2023). Cuantificación de bacterias cultivables mediante el método de
“Goteo en Placa por Sellado (o estampado) Masivo.” Revista
Colombiana de Biotecnología, 14(2), 147–156. Obtenido de
http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0123-3475
2012000200016

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ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA UNJFSC

11. ANEXOS

MATERIALES

Ilustración 1: Mechero Ilustración 2: Carne molida Ilustración 3: Matraz

Erlenmeyer con torunda

Ilustración 4: Probeta Ilustración 5: Alcohol Ilustración 6: Cuchara

Ilustración 7:Agar Plate Count Ilustración 8:Puntas de pipeta Ilustración 9:Micropipeta

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PROCEDIMIENTO

Ilustración 10: Vertimiento del agua destilada

Ilustración 11: Tarar la balanza
Ilustración 12: Pesar 10 g de la muestra

Ilustración 13: Muestra pesadas

Ilustración 14: Muestra diluida en agua destilada
Ilustración 15: Agitación de la muestra.

Ilustración 16: Mechero encendido en todo el procedimiento.

Ilustración 17: Materiales cerca del mechero.
Ilustración 18: Tarar la balanza.

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ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA UNJFSC

Ilustración 19: Esterilización de la cuchara

Ilustración 20: Pesar el Agar Plate Count
Ilustración 21: Separación del Agar Plate Count en el matraz.

Ilustración 22: Agregar agua destilada a la probeta.

Ilustración 23: Añadir al matraz el agua destilada de la probeta.
Ilustración 24: Agitar la disolución.

Ilustración 25: Disolución del el Agar Plate Count

Ilustración 26: Colocar la disolución en el autoclave.
Ilustración 27: Uso del autoclave por un tiempo determinado.

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ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA UNJFSC

Ilustración 28: Tubos de ensayo y placas petri.

Ilustración 29: Siembra de la disolución en las placas detri
Ilustración 30: Vertimiento del agar en las placas petri.

Ilustración 31: Agar mezclado con la disolución.

Ilustración 32: Reposo del agar cerca del mechero.
Ilustración 33: Incubación.
RESULTADOS

−1
Ilustración 34: Dilución 10 con el medio de cultivo Agar Plate Count
−2
Ilustración 35: Dilución 10 con el medio de cultivo Agar Plate Count
−3
Ilustración 36: Dilución 10 con el medio de cultivo Agar Plate Count
−4
Ilustración 37: Dilución 10 con el medio de cultivo Agar Plate Count
−5
Ilustración 38: Dilución 10 con el medio de cultivo Agar Plate Count

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