GUÍA DE PRÁCTICA EN

SEG-REG-003
LABORATORIO

Carrera: Bioquímica y Farmacia Asignatura: BROMATOLOGIA

Código: BFM - 227 Nivel: 5to año

ALBUMINA
VERDE DE BROMOCRESOL
FUNDAMENTO DEL MÉTODO
La albúmina presente en la muestra reacciona con el verde de bromocresol en medio
ácido, originando un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometría.

COMPOSICIÓN
A. Reactivo. 5 x 50 mL. Tampón acetato 100 mmol/L, verde de bromocresol 0,27
mmol/L, detergente, pH 4,1.
CONSERVACIÓN
Reactivo (A): Conservar a 2-8ºC.

El Reactivo es estable hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, siempre

que se conserve bien cerrado y se evite la contaminación durante su uso.

Indicaciones de deterioro:

– Reactivo: Presencia de partículas, turbidez, absorbancia del blanco superior al límite

indicado en "Parámetros del ensayo".
PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
Tanto el Reactivo como el Patrón están listos para su uso.

REACTIVOS AUXILIARES
Calibrador de Bioquímica (BioSystems cod. 18011) o Calibrador de Bioquímica
Humano (BioSystems cod. 18044).
EQUIPO ADICIONAL
− Analizador, espectrofotómetro o fotómetro para lecturas a 545 ± 20 nm.
MUESTRAS
MUESTRAS
Suero o plasma (EDTA, heparina o citrato) recogido mediante procedimientos
estándar. La albúmina en suero es estable durante 3 días a 2-8ºC.
Muestras con presencia de ALBUMINA
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Carrera: Bioquímica y Farmacia Asignatura: BROMATOLOGIA

Código: BFM - 227 Nivel: 5to año

PROCEDIMIENTO
1. Pipetear en tubos de ensayo:

Blanco Patrón Muestra

Agua destilada 10 µL — —
Patrón (S) — 10 µL —
Muestra — — 10 µL

Reactivo (A) 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL

2. Agitar bien y dejar los tubos durante 5 minutos a temperatura ambiente.

3. Leer la absorbancia (A) del Patrón y de la Muestra frente al Blanco a 545 nm. El color
es estable durante al menos 2 horas.
CÁLCULOS
La concentración de proteína en la muestra se calcula a partir de la siguiente fórmula
general:

A Muestra
x C Patrón = C Muestra
A Patrón
Estos valores se dan únicamente a título orientativo; es recomendable que cada
laboratorio establezca sus propios intervalos de referencia.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda el uso de los Sueros Control Bioquímica niveles I (cod. 18005, 18009 y
18042) y II (cod. 18007, 18010 y 18043), para verificar la funcionalidad del
procedimiento de medida.
Cada laboratorio debe establecer su propio programa de Control de Calidad interno,
así como procedimientos de corrección en el caso de que los controles no cumplan
con las tolerancias aceptables.
CARACTERÍSTICAS METROLÓGICAS
− Límite de detección: 1,1 g/L
− Límite de linealidad: 70 g/L. Cuando se obtengan valores superiores, diluir la
muestra 1/2 con agua destilada y repetir la medición.
− Repetibilidad (intraserie):
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− Sensibilidad: 5 mA⋅L/g
− Veracidad: Los resultados obtenidos con estos reactivos no muestran diferencias
sistemáticas significativas al ser comparados con reactivos de referencia. Los
detalles del estudio comparativo están disponibles bajo solicitud.
La albúmina es la proteína más abundante en el plasma humano. Tiene tres funciones
principales: contribuye en el mantenimiento de la presión osmótica del plasma, actúa
como transportador no específico para muchos componentes apolares y es una
fuente endógena de aminoácidos.
BIBLIOGRAFÍA
1. Gornall AG, Bardawill CS, David MM. Determination of serum proteins by
means of the Biuret reaction. J Biol Chem 1949; 177: 751-766.
2. Tietz NW. Clinical guide to laboratory tests, 3rd ed. Saunders Co, 1999.
3. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 4th ed. AACC Press, 1995.
4. Friedman and Young. Effects of disease on clinical laboratory tests, 3th ed.
AACC Press, 1997.
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SIGLO XX

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DETERMINACIÓN DE LAS CENIZAS TOTALES

EN HARINA
I. OBJETIVOS.

• Determinación de las cenizas totales en harina por el método de calcinación.

II. MARCO TEÓRICO.
Las cenizas de un alimento son un término analítico equivalente al residuo
inorgánico que queda después de quemar la materia orgánica. Las cenizas
normalmente, no son las mismas sustancias inorgánicas presentes en el alimento
original debido a las pérdidas por volatilización o a las interacciones químicas entre
los constituyentes.
El valor principal de las determinaciones de cenizas
(y también de las cenizas solubles en agua, la
alcalinidad de las cenizas y las cenizas insolubles
en ácidos) es que supone un método sencillo para
determinar la calidad de ciertos alimentos, por
ejemplo, en las especias y gelatinas es un
inconveniente unalto contenido en cenizas.
Las cenizas de los alimentos, deberán estar
comprendidos entre ciertos valores, lo cual facilitará en parte su identificación.
Además, tanto el azúcar como la harina se pueden clasificar según su contenido en
cenizas.
Las cenizas suelen determinarse por calcinación, pero en ciertos casos como
en el azúcar pueden determinarse a partir de la conductividad eléctricade su
solución.
La prueba de cenizas se utiliza para medir el grado de extracción de la harina
porque el endospermo puro contiene muy pocas cenizas, mientras el salvado, capa
aleurona y germen contienen mucho más. Esta prueba se ha utilizado durante
mucho tiempo como una medida importante de la calidad de la harina. En este
método se incinera la harina en una mufla a una temperatura de 400-600°C durante
6 horas. Al finalizar este tiempo se pesan y se calcula como porcentaje de materia
original. (Repo-Carrasco, 1998).

III. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

3.1. Equipos y Materiales:
• Balanza Analítica
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• Horno Mufla
• Desecador
• Crisol de Porcelana
• Luna de Reloj
• Espátula
• Pinza
3.2. Muestra: Harina
3.3 Procedimiento:
DETERMINACIÓN DE LAS CENIZAS TOTALES POR CALCINACIÓN
• Colocar el crisol de porcelana dentro de una mufla a 550 °C, por una media
hora, luego trasladarlo a un desecador para que enfríe y posteriormente
pesarlo.
• Pesar en el crisol 2 g de harina con aproximación al 0,0001 g.
• Pasar crisol y contenido a una mufla, elevando la temperatura lentamente
hasta alcanzar los 550ºC, sin que se formen flamas.
• Calcinar hasta obtener cenizas de color blanco o grisáceo.
• De persistir carbón, añadir a las cenizas en el crisol unas cuantas gotas
de agua secar a 150-200ºC y luego calcinar nuevamente.
• Luego de obtener las cenizas blancas o grisáceas retirar el crisol, taparlo
con su tapa y trasladarlo a desecador para que enfríe y luego pesar.
• Determinar el % de cenizas totales.

IV. PRESENTACION Y ANALISIS DE MUESTRA

4.1. Datos de la muestra:
• Muestra:

• Procedencia:

• Análisis:

• Método:

• Expresión de resultados:
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V. CONCLUSIONES
Cada harina tendrá su propio contenido de cenizas en función del terreno donde
se cosecha, de su clima, de los fertilizantes, y de otros factores. El porcentaje de
cenizas debe oscilar entre el 1,5 y 2
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PROTEÍNA (TOTAL) cuantitativo

BIURET
FUNDAMENTO DEL MÉTODO
La proteína presente en la muestra reacciona con los iones cobre (II) en medio
alcalino, originando un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometría1.

COMPOSICIÓN
A. Reactivo. Acetato de cobre (II) 6 mmol/L, ioduro de potasio 12 mmol/L, hidróxido
sódico 1,15 mol/L, detergente.
Corrosivo (C): R34: Provoca quemaduras. S26-45: En caso de contacto con los ojos,
lávense inmediata y abundantemente con agua y acúdase a un médico. En caso de
accidente o malestar, acuda inmediatamente al médico.
S. Patrón de Proteína. Albúmina bovina. La concentración viene indicada en la etiqueta
del vial. El valor de concentración es trazable al Material de Referencia Certificado 927
(National Institute of Standards and Technology, USA).
CONSERVACIÓN
Reactivo (A): Conservar a 15-30ºC.
Patrón de Proteína (S): Conservar a 2-8ºC, una vez abierto.
El Reactivo y el Patrón son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta,
siempre que se conserven bien cerrados y se evite la contaminación durante su uso.
Indicaciones de deterioro:
− Reactivo: Presencia de partículas, turbidez, absorbancia del blanco superior a 0,150
a 545 nm.
− Patrón: Presencia de partículas o turbidez
PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
Tanto el Reactivo como el Patrón están listos para su uso.
EQUIPO ADICIONAL
− Analizador, espectrofotómetro o fotómetro para lecturas a 545 ± 20 nm.
MUESTRAS
Suero y plasma heparinizado recogido mediante procedimientos estándar.. Estable
8 días a 2-8ºC.
Los anticoagulantes quelantes interfieren.
Muestras con presencia de proteínas
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Código: BFM - 227 Nivel: 5to año

PROCEDIMIENTO
1. Pipetear en tubos de ensayo:

Blanco Patrón Muestra

Agua destilada 20 µL — —
Patrón Proteína (S) — 20 µL —
Muestra — — 20 µL

Reactivo (A) 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL

2. Agitar bien y dejar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente.

3. Leer la absorbancia (A) del Patrón y de la Muestra frente al Blanco a 545 nm. El color
es estable durante al menos 2 horas.
CÁLCULOS
La concentración de proteína en la muestra se calcula a partir de la siguiente fórmula
general:

A Muestra
x C Patrón = C Muestra
A Patrón
Estos valores se dan únicamente a título orientativo; es recomendable que cada
laboratorio establezca sus propios intervalos de referencia.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda el uso de los Sueros Control Bioquímica niveles I (cod. 18005, 18009 y
18042) y II (cod. 18007, 18010 y 18043), para verificar la funcionalidad del
procedimiento de medida.
Cada laboratorio debe establecer su propio programa de Control de Calidad interno,
así como procedimientos de corrección en el caso de que los controles no cumplan
con las tolerancias aceptables.
CARACTERÍSTICAS METROLÓGICAS
− Límite de detección: 4,6 g/L
− Límite de linealidad: 150 g/L. Cuando se obtengan valores superiores, diluir la
muestra 1/2 con agua destilada y repetir la medición.
− Repetibilidad (intraserie):
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Carrera: Bioquímica y Farmacia Asignatura: BROMATOLOGIA

Código: BFM - 227 Nivel: 5to año

− Sensibilidad: 5 mA⋅L/g
− Veracidad: Los resultados obtenidos con estos reactivos no muestran diferencias
sistemáticas significativas al ser comparados con reactivos de referencia. Los
detalles del estudio comparativo están disponibles bajo solicitud.
Estos datos han sido obtenidos utilizando un analizador. Los resultados pueden variar
al cambiar de instrumento o realizar el procedimiento manualmente.
BIBLIOGRAFÍA
1. Gornall AG, Bardawill CS, David MM. Determination of serum proteins by
means of the Biuret reaction. J Biol Chem 1949; 177: 751-766.
2. Tietz NW. Clinical guide to laboratory tests, 3rd ed. Saunders Co, 1999.
3. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 4th ed. AACC Press, 1995.
4. Friedman and Young. Effects of disease on clinical laboratory tests, 3th ed.
AACC Press, 1997.