Qué es un análisis bioquímico

Un análisis bioquímico, también llamado rutina de bioquímica, es una prueba de una muestra de
sangre que se realiza para medir la cantidad de diferentes sustancias químicas en el cuerpo. Estas
sustancias incluyen electrolitos (como sodio, potasio y cloruro), grasas, proteínas, glucosa (azúcar) y
enzimas.
Es una de las técnicas que aprenden a realizar nuestros alumnos y alumnas de Laboratorio Clínico y
Biomédico.
¿Por qué se realiza un análisis bioquímico?
Cuando se realiza un análisis bioquímico es con el fin de estudiar varios parámetros en la sangre y
comprobar qué grado de concentración tienen diferentes sustancias químicas que tenemos en la
sangre. El por qué realizamos estos análisis es porque sirven a los médicos para:
Poder confirmar un diagnóstico en un paciente que tienen síntomas de una enfermedad determinada.
Llevar un control de la respuesta que un paciente está teniendo al tratamiento de su enfermedad.
Para diagnosticar con antelación enfermedades a personas que no tienen síntomas de una
enfermedad, pero que pueden tener algún factor de riesgo para padecerla.
Normalmente estos parámetros nos dan información sobre el hígado, el riñón, enfermedades como la
diabetes, etc.
Principales parámetros bioquímicos y sus valores normales
Conoce qué indica cada valor que aparece en los resultados de un análisis bioquímico y qué indica el
hecho de que sus niveles sean alto, bajo o normales:
VALORES NORMALES DE LOS PARÁMETROS BIOQUÍMICOS MÁS FRECUENTES
PARÁMETROS BIOQUÍMICOS VALORES NORMALES
Glucosa en sangre 70 y 105 mg por decilitro
(en niños 40 a 100 mg/dl)
Ácido úrico hombres adultos: 4 y 8,5 mg/dl
Mujeres adultas: 2,5 a 7,5 mg/dl
(niños: 2,5 a 5 mg/dl)
Urea 7 y 20 mg por decilitro
(niños: 5 a 18 mg/dl)
Creatinina hombres adultos: 0,7 y 1,3 mg/dl
Mujeres adultas: 0,5 y 1,2 mg/dl
(niños 0,2 y 1 mg/dl)
Bilirrubina directa 0,1 a 0,3 mg/100 ml
Bilirrubina total 0,3 a 1,0 mg/100 ml
Bilirrubina indirecta menor de 1,0 mg/ml
Fosfatasa alcalina 30 a 120 U/L
Gamma GT Hombres: 8 a 38 U/L
Mujeres: 5 a 27 U/L
GOT 5 a 32 mU/ml
GPT 7 a 33 mU/ml
Colesterol 100 a 200 mg/100ml
HDL Hombres: mayor de 45 mg/100ml
Mujeres: mayor de 55 mg/100ml
LDL 60 y 180 mg/100ml
Proteínas totales 6,4 a 8,3 gr/dl
Albúmina 3,5 a 5 gr/dl
Calcio 8,5 a 10,5 mg/100ml
Potasio3,5 a 5 mmol/L
Sodio 135 a 145 mEQ/L
Fósforo 2,9 a 5,0 mg/100 ml
Técnica para realizar un análisis bioquímico
Antes de realizar un análisis bioquímico el paciente debe haber estado en ayunas al menos 6 horas.
Ingerir alimentos podría alterar varios parámetros bioquímicos como puede ser la glucosa, el
colesterol, los triglicéridos y el ácido úrico. El análisis los podemos realizar en un hospital, clínico o
consulta aunque cuando es necesario se lleva a cabo en el domicilio del paciente.
En primer lugar debemos localizar una vena que sea apropiada. Normalmente son venas que se
sitúan en la parte de la flexura del codo. No debemos olvidar llevar guantes sanitarios, una aguja
(con una jeringa o tubo de extracción).
Pondremos un tortor (cinta de goma-látex) en el brazo para que las venas sean más visibles y más
accesibles al retener más sangre.
Limpiamos la zona del pinchazo con un antiséptico y realizamos una palpación con el fin de localizar
la vena apropiada y llegar a ella con la aguja. Soltaremos el tortor.
Cuando la sangre comience a fluir, por la aguja realizaremos una aspiración (mediante la jeringa o
mediante la aplicación de un tubo con vacío).
Una vez hemos terminado la extracción, debemos extraer la aguja y presionaremos esa zona con
algodón o similar con el fin de conseguir que se coagule. El paciente deberá flexionar el brazo y
mantener la zona presionada con un esparadrapo durante unas horas.
La sangre que hemos extraído debe ser trasladada al laboratorio de análisis en un tubo especial para
bioquímica, con un producto anticoagulante. Normalmente para una batería estándar de parámetros
bioquímicos, no suelen ser necesarios más de 10 mililitros de sangre.
(Fuente: www.tuotromedico.com)

Pruebas bioquímicas de identificación de bacterias

Prueba de la Catalasa
La catalasa es una enzima que cataliza la descomposición del peróxido de hidrógeno en agua y
oxígeno. La prueba se utiliza para comprobar la presencia de la enzima catalasa que se encuentra en
la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen el citocromo oxidasa. La
principal excepción son los estreptococos (Streptococcus). Originariamente, esta prueba era utilizada
para diferenciar entre los siguientes géneros:
Streptococcus (catalasa -) de Micrococcus (catalasa +) y/o Staphylococcus (catalasa +). Bacillus (+)
de Clostridium (-). Lysteria monocytogenes (+) y/o Corynebacterium (+, con las excepciones de las
especies C. pyogenes y C. haemolyticum, ambas -) de Erysipelothrix (-)

Material

Agua oxigenada al 30%, cultivo bacteriano y portaobjetos o tubo de ensayo.

Procedimiento

Normalmente hay dos tipos de pruebas:

Método del portaobjetos:

Es una prueba de rutina de la catalasa a temperatura ambiente.

Procedimiento

En un portaobjetos se depositan una o dos gotas de agua oxigenada al 30% y se pone en contacto con
ella una colonia de los microorganismos a estudiar. La muestra se recoge con el asa de siembra y se
toma preferentemente el centro de una colonia pura de 18-24 horas.

Revelado

Observar la formación inmediata de una efervescencia rápida con desprendimiento de burbujas

(resultado positivo). Desechar el portaobjetos en un recipiente con desinfectante. Si se invierte el
orden del método (extender la colonia sobre el agua oxigenada) pueden producirse falsos positivos.
Precauciones: Si se utilizan para esta prueba cultivos procedentes de agar sangre, se debe tener la
precaución de no retirar algo de agar con el asa al retirar la colonia ya que los eritrocitos del medio
contienen catalasa y su presencia dará un falso resultado positivo

Método del tubo de ensayo

Agregar 1 ml de H2O2 al 3% directamente a un cultivo de agar densamente inoculado. Observar la

formación inmediata de burbujas (resultado positivo).

Prueba del Citrato

Esta prueba sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como única fuente de
carbono y compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno en su metabolismo, provocando
una alcalinización del medio. Entre las enterobacterias estas características se dan en los siguientes
géneros: Enterobacter, Klebsiella, Serratia, Citrobacter y algunas especies de Salmonella. Sin
embargo, Escherichia, Shigella, Salmonella typhi y Salmonella paratyphi son incapaces de crecer con
esos nutrientes.

Se cultiva el microorganismo en a¡”r citrato de Simmons. Este me-

Dio contiene citrato de sodio y fosfato de amonio como fuentes de carbono y de nitrógeno
respectivamente, y azul de bromotimol, como indicador de pH. Sólo las bacterias capaces de
metabolizar el citrato podrán multiplicarse en este medio y liberarán iones amonio lo que, junto con
la eliminación del citrato (ácido), generará una fuerte alcalinización del medio que será aparente por
un cambio de color del indicador de pH, de verde a azul.

Material

Un tubo con medio agar citrato Simmons y un cultivo bacteriano

Procedimiento
Sembrar con un asa de siembra en la superficie inclinada del medio e incubar a 37 ºC durante 24-48
horas.

Revelado

Las bacterias capaces de usar el citrato provocarán el cambio de color del medio de verde a azul
intenso, por viraje del indicador de pH, azul de bromotimol, a la vez que se observa crecimiento en la
superficie.

Prueba de la Fenilalanina Desaminasa

Esta prueba determina la capacidad de un organismo para desaminar el aminoácido fenilalanina en

ácido fenilpirúvico por la actividad de la enzima fenilalanina desaminasa, con la consiguiente acidez
resultante. Esta actividad enzimática es característica de todas las especies del género Proteus y del
grupo Providencia por lo que se usa para separar ambos géneros de otras enterobacterias. El ácido
fenilpirúvico puede detectarse por la adición de un reactivo (cloruro férrico al 10%)

Se cultiva el microorganismo en agar fenilalanina sembrando la superficie del slant con abundante
inóculo e incubando durante 24 horas a.37 ºC. Seguidamente se añade 4-5 gotas de la solución de
cloruro férrico al 10% de manera que inunde to-

Do el medio inclinado. La presencia de ácido fenilpirúvico (prueba positiva) se manifiesta por la

aparición de un color característico verde oscuro o verde-azulado.

El indol es uno de los productos de degradación del aminoácido triptófano. La presencia de la

enzima triptofanasa en la bacteria provoca la hidrólisis del aminoácido y su desaminación,
produciendo indol, ácido pirúvico y amoníaco.

Material

Medio de cultivo con peptona, cultivo bacteriano y reactivo de Kovacs.

Procedimiento
Inocular el caldo con el microorganismo e incubar a 37 ºC durante 2448 horas. Transcurrido ese
tiempo añadir 4 o 5 gotas de reactivo Kovacs, resbalando por la pared del tubo sin agitar.

Para la realización de esta prueba la bacteria se cultiva durante 24-48 horas en un caldo de triptona
con NaCl al 0,5% (la triptona presenta abundante triptófano). Para la posterior detección del indol se
usa el reactivo de Kovacs que se puede preparar con los siguientes ingredientes

Alcohol amílico o isoamílico (puede sustituirse por alcohol butílico)…………..150 ml p-

dimetilaminobenzaldehído…………………………………………………………………….10 g
HCl
concentrdo………………………………………………………………………………………..50 ml

Se disuelve primero el aldehído en el alcohol y después se agrega lentamente a esta mezcla el ácido.
Para el control de calidad del reactivo se pueden utilizar cultivos conocidos. Las más convenientes
son Escherichia coli (indol +) y todas las especies de Klebsiella (indol -).

Revelado

Si la bacteria posee la enzima triptofanasa, al añadir al medio las gotas del reactivo de Kovacs, se
producirá un anillo de color rojo cereza en la superficie del caldo y la prueba será considerada
positiva. Si esto ocurre después de 24 horas, la prueba se considera completa, pero si es negativo
deberá incubarse otras 24 horas y repetirse la prueba. Por ello es conveniente hacer siempre la prueba
no en el tubo incubado sino en una porción de unos 2 ml que se retira de él asépticamente

Prueba de la Lactosa

Esta prueba se usa para diferenciar entre las enterobacterias en general y el grupo de los coliformes.
Se trata por tanto de una prueba de gran importancia debido a que los coliformes se utilizan como
organismos indicadores de contaminación fecal en análisis, sobre todo, de aguas. En bacteriología se
define el grupo de organismos coliformes como los “bacilos Gram negativos, aerobios y anaerobios
facultativos, no formadores de esporas y que fermentan la lactosa con formación de gas a 37 ºC en 48
horas”. No se trata de un grupo taxonómico e incluye una gran variedad de bacterias, la mayoría de
ellas de origen intestinal.

Una manera sencilla de realizar la prueba de la fermentación de la lactosa en enterobacterias es

sembrar el microorganismo en agar McConkey, ya que este medio, además de selectivo frente a
bacterias no entéricas, es diferencial ya que contiene lactosa y un indicador de pH (rojo neutro).
En agar McConkey las bacterias Gram positivas ven inhibido su crecimiento debido a la presencia de
sales biliares y cristal violeta y sólo crecerán las enterobacterias, pero entre ellas las que fermenten la
lactosa (coliformes) liberarán productos ácidos que producirán un cambio de pH que se detectará
gracias al rojo neutro. Las colonias lactosa (+) aparecerán de color rojo o violeta contrastando con la
coloración amarillenta de las colonias lactosa (-).

Manitol-Movilidad-Nitratos

Se incluyen en este apartado 3 pruebas bioquímicas debido a que se pueden realizar cultivando el
microorganismo en un único medio, el Manitol movilidad, que se prepara en tubo con agar recto y se
siembra en picadura, incubándose a 37 ºC durante 24 horas. También existe la posibilidad de hacer
las pruebas en otros medios y por separado

1. Prueba del Manitol

Sirve para detectar si los gérmenes son capaces de fermentar el manitol liberando productos ácidos
que serán detectados gracias al indicador rojo de fenol que cambiará a color amarillo. Para esta
prueba el medio manitol movilidad incluye 7,5 g/l de D-Manita. Bacterias manitol (-) son, dentro de
las enterobacterias, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris y Shigella dysenteriae. Entre las bacterias de
importancia clínica, la prueba del manitol sirve para diferenciar Staphylococcus aureus (+) de
Staphylococcus epidermidis (-).

2. Prueba de la Movilidad

Sirve para determinar si un organismo es móvil o inmóvil. Las bacterias tienen movilidad por medio
de sus flagelos que se encuentran principalmente entre los bacilos aunque existen algunas formas de
cocos móviles.

El medio manitol movilidad permite la realización de esta prueba gracias a ser semisólido ya que
presenta solamente 3,5 g/l de agar. En estas condiciones, las bacterias móviles producirán un
enturbiamiento homogéneo del medio debido a la distribución aleatoria de los microorganismos. Por
el contrario, las bacterias inmóviles permanecerán en la misma línea de la picadura en que se
sembraron.
Entre las enterobacterias, la movilidad nos permite diferenciar el género Klebsiella (-) de las
restantes que suelen ser movilidad (+).

Dentro del género Bacillus, nos permite diferenciar B. anthracis (-) de otras especies generalmente
(+).

3. Prueba de la reducción de nitratos

Sirve para determinar la capacidad de un organismo de reducir el nitrato en nitritos. Para ello, el
medio manitol movilidad incorpora 1 g/l de nitrato potásico y para revelar la presencia de nitritos
después de su incubación se añaden los reactivos A y B de Griess-Ilosvay en cantidades iguales (1ml
aprox.). Un cambio de color (rojo) dentro de los 30 seg indica prueba completa con resultado
positivo. Si no cambia de color, se agrega directamente al tubo una pizca (unos 20 mg) de polvo de
cinc purísimo, totalmente exento de nitratos o nitritos, y se observa el cambio de color durante otros
30 seg, al cabo de los cuales se realiza la interpretación final.

Las enterobacterias son generalmente nitratos (+). Esta prueba se utiliza principalmente para
diferenciar entre sí determinadas bacterias de los géneros Haemophylus y Neisseria.

Prueba de la Oxidasa

Esta prueba sirve para determinar la presencia de enzimas oxidasas. La reacción de la oxidasa se
debe a la presencia de un sistema citocromo oxidasa. Los citocromos son enzimas que forman parte
de la cadena de transporte de electrones en la respiración aeróbica, transfiriendo electrones al
oxígeno, con la formación de agua. Por lo general, el sistema citocromo oxidasa sólo se encuentra en
los organismos aerobios, algunos anaerobios facultativos y, excepcionalmente, en algún
microaerófilo (Vibrio fetus), pero los anaerobios estrictos carecen de actividad oxidasa. Asimismo, la
presencia de oxidasa va ligada a la producción de catalasa, ya que ésta degrada el peróxido de
hidrógeno que se produce como consecuencia de la reducción del oxígeno y cuya acumulación es
tóxica.

La prueba de la oxidasa se usa sobre todo para: Identificar todas las especies de Neisseria (+), y
diferenciar Pseudomonas de los miembros oxidasa negativos de las enterobacterias.

El reactivo de la oxidasa más recomendado es la solución acuosa al 1% de diclorhidrato de

tetrametil-p-fenilendiamina (reactivo de Kovacs). Es menos tóxico y mucho más sensible que el
correspondiente compuesto dimetilo (reactivo de Gordon y McLeod), pero es más caro. Este reactivo
tiñe las colonias oxidasa positivas de color lavanda que vira gradualmente a púrpura-negruzco
intenso.

Procedimientos:

Método en placa directa.

Agregar directamente 2-3 gotas de reactivo a algunas colonias. No inundar toda la placa y no
invertirla. Observar los cambios de color. Con el reactivo de Kovacs la reacción se produce en unos
10-15 segundos, mientras que con el de Gordon y McLeod es dentro de los 10-30 minutos.

Método indirecto sobre papel

Colocar un trozo de papel de filtro de 3x3cm aproximadamente en una placa de Petri. Agregar 2-3
gotas del reactivo de Kovacs en el centro del papel. Extender con el asa de siembra una colonia sobre
el papel impregnado. La reacción de color positiva se produce a los 5-10 segundos.

Revelado

Cambio de color a púrpura y negro en 10-20 segundos, como consecuencia de que el reactivo se
oxida en presencia del citocromo oxidasa formándose azul de Wuster. En caso negativo no hay
cambio de color.

Prueba del Rojo de Metilo/y Voges-Proskauer

Estas dos pruebas forman parte del IMViC de las colimetrías y permiten la diferenciación dentro de
las enterobacterias del grupo coli y aerógenes. Las enterobacterias son anaerobios facultativos que
utilizarán la glucosa en dos fases: primero la metabolizarán aeróbicamente, consumiendo
rápidamente el oxígeno del medio, para, en segundo lugar, continuar metabolizándola por vía
anaerobia (fermentación). Ésta puede ser de dos tipos:
Fermentación ácido mixta: La realizan las bacterias del grupo de E. coli y los productos finales son
ácidos orgánicos (ácidos fórmico, acético, láctico y succínico) que provocan un fuerte descenso del
pH inicial del medio. Puede detectarse por el viraje del indicador de rojo de metilo que permanece
amarillo por encima de pH 5,1 y rojo por debajo de 4,4.

Fermentación butilén glicólica: La realizan las bacterias del grupo KlebsiellaEnterobacter (antiguo
aerógenes). Los productos finales son compuestos neutros como el butanodiol y el etanol,
produciéndose acetoína como intermediario que podrá ser detectada añadiendo al medio KOH
(reactivo A de Voges-Proskauer) y α-naftol (reactivo B de Voges-Proskauer) que reaccionarán con
este compuesto produciendo un color rojo característico.

La prueba consiste en comprobar si el microorganismo en estudio fermenta la glucosa con

producción de ácidos o vía ácido mixta.

Para la realización de estas dos pruebas se cultiva el microorganismo en caldo RM-VP (medio de
Clark y Lubs) y se incuba a 37 º C durante un periodo 24-48 horas. Pasado este tiempo, se separa el
cultivo en dos porciones de unos 2 a 5 ml que servirán para cada uno de los dos ensayos:

Rojo de Metilo: A uno de los tubos se le añade unas gotas (4-5) de solución indicadora de Rojo de
Metilo. Se agita ligeramente para homogeneizar y se observa la coloración. Se considera positiva si
vira al rojo y negativa si permanece amarillo.

Voges-Proskauer: A la otra porción de cultivo se le añade:

0,6 ml del Reactivo A de Voges-Proskauer (α-naftol al 5% en alcohol etílico absoluto). El medio

adquiere un aspecto lechoso.

0,2 ml del Reactivo B de Voges-Proskauer (KOH 40%). Desaparece el aspecto lechoso y se agita
fuertemente.

Si la prueba es positiva, transcurridos 10 minutos desde la adición de los reactivos, aparecerá un

color rosado-violáceo, más o menos intenso, que se inicia en la parte superior del tubo. El cambio de
color nos indica que la acetoína se ha oxidado pasando a diacetilo. Si la prueba es negativa no
aparece coloración alguna.
Prueba de la Ureasa

Determina la capacidad de un organismo de desdoblar la urea formando una molécula de dióxido de

carbono y dos moléculas de amoniaco por acción de la enzima ureasa. Esta actividad enzimática es
característica de todas las especies de Proteus y se usa sobre todo para diferenciar este género de
otras enterobacterias que dan negativo o positivo retardado.

Se cultiva el microorganismo en slant en agar urea de Christensen. Este medio se complementa

después del autoclavado con 50 ml/l de urea. Ésta será degradada por aquellos microorganismos
capaces de producir la enzima ureasa. Esta degradación produce

Amoniaco que hará variar el color del indicador de amarillo a rojo, poniéndose así de manifiesto la
actividad ureasa.

Procedimiento

Inocular el medio de cultivo mediante estría en la superficie inclinada e incubara 37 ºC durante 24

horas.

Revelado

Para revelar el resultado de esta prueba es importante tener en cuenta el tiempo de incubación ya que
especies de Proteus vuelven alcalino el medio poco después de la inoculación y sus resultados deben
ser leídos en las primeras 2-6 horas, mientras que Citrobacter freundii y Klebsiella pneumoniae
tienen actividad ureasa dentro de las 24-48 horas de incubación.

Las bacterias que hidrolizan la urea hacen que el medio de cultivo tome color fucsia, debido a la
alcalinización del mismo por producción de amonio, que manidfiesta por un viraje del indicador de
pH (rojo de fenol).

Prueba movilidad ornitina

Se usa para determinar la movilidad bacteriana. Además, permite determinar la capacidad microbiana
de descarboxilar al aminoácido ornitina.
Procedimiento

Se toma una colonia con un asa en hilo y se siembra el medio preparado en tubo recto. Se incuba a
37 ºC durante 18-24 horas.
Revelado

Las bacterias móviles darán lugar a una difusión lateral de la estría por picadura central de la
siembra.
Las enterobacterias que fermentan la glucosa producirán una acidificación del medio lo que originará
un cambio de color de violáceo a amarillo. En estos casos la ornitin descarboxilasa (ODC) es
negativa. Si el fondo del tubo queda sin cambio de color (queda violáceo), se tratará de ODC
positivo, habiendo utilizado la bacteria la ornitina y alcalinizando el medio.